一種防治人胃部疾病的卵黃免疫球蛋白IgY的漂浮片製劑的製作方法

2023-07-18 23:02:06

專利名稱：：一種防治人胃部疾病的卵黃免疫球蛋白IgY的漂浮片製劑的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種能夠防治人類胃部疾病的生物製劑一抗幽門螺桿菌的特異性卵黃免疫球蛋白(抗HP-IgY)製劑，尤其涉及其新劑型——胃內漂浮片劑，屬於生物醫藥
技術領域：
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背景技術：
：胃部疾病或稱胃病，實際上是許多病的統稱。它們有相似的症狀，如上腹胃脘部不適、疼痛、飯後飽脹、返酸，甚至噁心、嘔吐等等。臨床上常見的胃病有急性胃炎、慢性胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、胃十二指腸複合潰瘍以及胃的良性、惡性腫瘤等。1982年澳大利亞學者巴裡馬歇爾和羅賓沃倫發現了幽門螺桿菌(Helicobacterpylori,以下簡稱Hp)，並證明該細菌感染胃部會導致胃炎、胃潰瘍和十二指腸潰瘍等胃部疾病。據估計，全世界約50%的人胃部都「藏」有幽門螺桿菌。幽門螺旋桿菌Hp是引起慢性胃炎和消化性潰瘍等胃腸疾病的病原菌，感染率極高，也是世界衛生組織(WHO)認定的胃癌致病因子。統計表明，在潰瘍患者中Hp的感染率為80%，健康人群為60%，60歲以上人群為70%。臨床研究證明，Hp不僅與慢性胃炎和潰瘍的發生有密切關係，而且Hp的感染還是誘發胃癌的主要因素之一，嚴重危害人類健康。目前對Hp感染的常規治療方法是抗生素三聯或四聯療法，即同時使用三種或四種抗生素治療。由於Hp深藏於胃與腸接合部的幽門處，抗生素很難達到幽門發揮作用；更嚴重的是，Hp耐藥性菌株和細胞缺陷L型的出現造成臨床上因Hp感染引起的胃部疾病極易復發。到目前為止，針對Hp感染還沒有理想的治療方法。現有文獻報導，用某種特定的抗原(如幽門螺桿菌Hp)免疫母雞，受免疫刺激，母雞發生免疫反應，在血液中產生免疫球蛋白IgG;在輸卵管內卵黃成熟期，血液中IgG可被選擇性地轉移到卵黃中，而且是卵黃中唯一的免疫球蛋白類，也即特異性抗體IgY。IgY也即卵黃免疫球蛋白或卵黃抗體。這種IgY具有很強的針對性，能夠特異性地殺死幽門螺桿菌Hp，對胃中幽門螺桿菌Hp感染具有很好的治療作用。特異性卵黃抗體IgY對病原體感染的防禦無動物種屬的差異，這為IgY防治人類疾病的應用奠定了基礎。抗Hp-IgY是治療幽門螺桿菌Hp的一個新方向，近年日益受到關注。目前有將這種抗Hp-IgY製成濃縮液或凍乾粉，但使用不便，針對性不強，治療效果欠佳。有關防治人類胃部疾病的卵黃免疫球蛋白(抗HP-IgY)胃內漂浮片製劑的文獻還未見報導。
發明內容本發明的目的旨在提供一種治療效果好、針對性強、能夠防治人類胃部疾病的抗幽門螺桿菌的特異性卵黃免疫球蛋白(抗HP-IgY)胃內漂浮片製劑，適用於工業化生產。研究表明，位於幽門螺桿菌Hp細胞膜表面存在一種專門負責調節胞質內尿酶產生的蛋白質toel，toel起「質子通道」作用，可控制進入細胞的胃酸量。研究表明，治療幽門螺桿菌Hp感染的特異性IgY可破壞toel，使幽門螺桿菌Hp菌體失去酶保護膜，無法在胃中強酸環境下存活，從而有效殺滅幽門螺桿菌Hp。由於抗幽門螺桿菌的特異性卵黃免疫球蛋白(抗HP-IgY)只特異性地與幽門螺桿菌Hp結合併使菌體死亡，而且起作用的部位只在胃部，因而如何保持抗HP-IgY在胃部的滯留時間而不是很短時間內被胃內食物卷帶至腸道，以及如何保持抗HP-IgY持續的生物活性，成為影響抗HP-IgY實際應用的關鍵所在。而將抗HP-IgY製備成胃內漂浮片，可以使上述問題迎刃而解。本發明即是通過將抗HP-IgY製備成胃內漂浮片實現本發明目的。胃漂浮片(floatingtablets)，也稱懸浮片，是指口服後能保持自身密度小於胃內容物密度而在胃液中呈漂浮狀態的製劑，主要是指根據流體動力學平衡體系設計的漂浮製劑。這種製劑能滯留於胃中，延長藥物釋放時間，改善藥物的吸收，提高藥物的生物利用度。當片劑與胃液接觸時水化而形成凝膠，體積膨脹、比重變小而漂浮於胃液之上，在胃排空時，不至於與胃內食物一起排至小腸。其原理是將藥物成分與親水性和疏水性高分子輔料混合，利用親水性輔料HPMC控制藥物釋放速度，疏水性輔料十八醇質輕，根據用量調節片劑比重(使其比胃液比重輕)，延長片劑在胃內滯留時間，使藥物在胃內釋放完全。本發明具體技術實施方案如下1、抗幽門螺桿菌的特異性卵黃免疫球蛋白(抗HP-IgY)製備採用幽門螺桿菌標準菌株，經滅活、加佐劑乳化後免疫健康母雞而獲得抗幽門螺桿菌的特異性卵黃免疫球蛋白(抗HP-IgY)。1)對產卵母雞的免疫A、基礎免疫選用產卵母雞(健康)隔離飼養。進行雞皮下多點注射上述疫苗，0.5ml/只。B、強化免疫基礎免疫7—15天後，進行強化免疫，注射抗原0.5ml/只。C、超強化免疫10天後需超強化免疫13次，注射量1aiil/只，以保持抗體滴度。於710天後開始收集雞蛋，4°C儲存備用。2)抗幽門螺桿菌的特異性卵黃免疫球蛋白的提取根據相關參考文獻(劉灝等，2005年，雞卵黃抗幽門螺桿菌-IgY的特性研究，中華消化雜誌，第25卷第4期；王子軾等，2008年，抗幽門螺桿菌特異卵黃抗體的製備及其理化特性檢測，揚州大學學報，第四卷第2期)，經膜分離或硫酸胺鹽析等常規製備工藝，提取抗幽門螺桿菌的特異性免疫球蛋白抗HP-IgY。抗HP-IgY的來源除雞外，也可以是鴨、鵝、鴿、鵪鶉、火雞、雉雞、鴕鳥、孔雀等野生或飼養的其它禽鳥類。2、該抗HP-IgY胃漂浮片每片由如下組份(以重量計)組成抗HP-IgY5-40mg乳糖(乾燥)60-70mg甘露醇20-30mg羧甲基纖維素鈉85-130mg羥丙基甲基纖維素50_65mg聚乙烯吡咯烷酮10-20mg甲基纖維素(1723cps)65-80mg單硬脂酸甘油酯20-35mg滑石粉5_15mg硬脂酸鎂I-IOmg。該抗HP-IgY胃漂浮片每片優選如下組份(以重量計)抗HP-IgY20mg乳糖(乾燥)eang甘露醇24mg羧甲基纖維素鈉105mg羥丙基甲基纖維素55mg聚乙烯吡咯烷酮15mg甲基纖維素(1723cps)75.6mg單硬脂酸甘油酯29.4mg滑石粉ang硬脂酸鎂5mg。該抗HP-IgY胃漂浮片製備工藝如下按上述配比計量稱重各組分，將輔料乳糖、甘露醇、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纖維素、單硬脂酸甘油酯、滑石粉粉碎過80目篩，混合均勻，於4050°C烘乾；主藥抗HP-IgY為凍乾粉末，主輔料混均；加入粘合劑羧甲基纖維素鈉、羥丙基甲基纖維素，制軟材；加入硬脂酸鎂，混勻，用IOmm淺凹衝模壓片；片劑硬度控制在0.53kg/cm2。服用說明每天1-3片。本發明胃漂浮製劑設計成敗的關鍵在於其在胃中是否能達到預期的漂浮效果，能否延長胃內滯留時間，如果不能呈漂浮狀態，只相當於一個普通的緩釋骨架片。因此材料的選擇、製備工藝等均能影響製劑的漂浮性能。輔料選擇原理首先是親水性骨架材料的選擇，胃漂浮片的骨架材料密度必須小於1，並能保持相當長的一段時間，而且儘量選擇能採用全粉末直接壓片的材料，因此在選擇親水性骨架材料的時候，應充分考慮材料的理化性質和用量。一般認為粘度高的骨架材料的水化速率低於粘度低的骨架材料，然而前者的密度小，膨脹體積松大，漂浮性能好，有利於片劑在胃中滯留，製劑處方中常常混合使用不同粘度的骨架材料，以控制水化作用的快慢、漂浮能力及保持製劑凝膠屏障膜狀態的時間長短。目前常用的親水凝膠有羥丙基甲基纖維素(HPMC)、甲基纖維素(MC)、羥丙基纖維素(HPC)、羧甲基纖維素(CMC)、羥乙基纖維素(HEC)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、卡波姆等。其中應用最廣泛的是HPMC，用量在50%左右，它的粘度範圍廣，能緩慢溶解於冷水中，在熱水中發生溶脹，利用高低粘度的HPMC適當調節，可控制水化作用的快慢及保持凝膠時間的長短。為了增加漂浮力，在處方中添加疏水性而相對密度小的脂肪醇類、酯類、脂肪酸類等作為助漂劑，從而使漂浮片在水化膨脹之前即開始漂浮。為了調節藥物的緩釋速率，在處方中加入適量乳糖、甘露醇、丙烯酸樹脂等。胃漂浮片的製備工藝基本與普通片相同，但要考慮其成型後應具有漂浮性能和滯留作用，儘量採用幹法制粒壓片或乾粉末直接壓片，溼法制粒壓片不利於片劑應用時的水化、滯留。另外，壓片力的大小也會對片劑的漂浮性能產生影響，壓力太大，使製劑的密度增大，則片劑的漂浮性受到影響。51、通過如下實驗對本發明胃漂浮片進行了漂浮性能測定採用介質為人工胃液900mL，37士1°C恆溫。以該片劑在人工胃液中的起漂時間和漂浮滯留時間作為漂浮性能指標，考察不同組分配比對漂浮性能的影響。將上述胃漂浮片放入盛有37°C人工胃液的燒杯中進行觀察，結果片劑硬度小於Ikg的投入後不下沉，硬度為23kg時先下沉後漂浮，硬度大於3kg時則不易漂浮。片劑硬度小於或等於Ikg時，漂浮片在胃內的滯留時間可達67小時。對照實驗表明，同樣規格和硬度(小於Ikg)的抗HP-IgY普通片，放入人工胃液後則立即沉底。2、緩釋性能測定採用中國藥典(2000年版)轉籃法測定，轉速為lOOr/min，溶出介質為人工胃液9001^，37士1°〇恆溫；分別測定第1、2、4、6、8小時時的釋放(溶出)濃度。經測定，本發明漂浮片的T50(即半數釋放所需要的時間，單位為分鐘)為抗HP-IgY普通片劑的36倍，因而其具有十分明顯的緩釋作用。3、抗HP-IgY胃漂浮片活性觀察上述結果表明，依照上述方法製備的抗HP-IgY胃漂浮片既有漂浮性也具備緩釋性能。以下對其生物活性進行測定。1)實驗設計抗HP-IgY胃漂浮片活性測定採用介質為人工胃液900mL，37士1°C恆溫，pHl.4。分別測定第1、2、4、6、8小時時的抗HP-IgY活性。活性檢測採用ELISA間接試驗，操作方法參照常規ELISA間接法，所用Hp抗原、抗HP-IgY均按棋盤滴定法確定工作濃度，Hp抗原濃度為100μg/ml，被測抗HP-IgY每孔加樣100μ1。2)實驗結果結果見表1-1。以對照組的活性為100，其餘顯示的為不同時間段相對於對照組的比較活性。結果表明，在面對強酸環境(PHI.4)、胃蛋白酶等聯合作用下，抗HP-IgY漂浮片在8小時時依然保持89%的活性，表明抗HP-IgY漂浮片具有很強的耐酸性能和抗酶解能力，因而具有十分巨大的應用價值。表1-1抗HP-IgY漂浮片活性測定(％)權利要求1.一種防治人胃部疾病的卵黃免疫球蛋白IgY的漂浮片，其特徵在於以抗幽門螺桿菌的特異性卵黃免疫球蛋白為活性成份，將其製成胃漂浮片製劑。2.如權利要求1所述的防治人胃部疾病的卵黃免疫球蛋白IgY的漂浮片，其特徵在於該抗HP-IgY胃漂浮片每片由如下組份及含量組成抗HP-IgY5-40mg乳糖(乾燥)60-70mg甘露醇20-30mg羧甲基纖維素鈉85-130mg羥丙基甲基纖維素50-65mg聚乙烯吡咯烷酮10-20mg甲基纖維素(I723cps)65-80mg單硬脂酸甘油酯20-35mg滑石粉5-15mg硬脂酸鎂l-10mg。3.如權利要求1所述的防治人胃部疾病的卵黃免疫球蛋白IgY的漂浮片，其特徵在於該抗HP-IgY胃漂浮片每片優選如下組份及含量抗HP-IgY20mg乳糖(乾燥)6Smg甘露醇羧甲基纖維素鈉105mg羥丙基甲基纖維素55mg聚乙烯吡咯烷酮15mg甲基纖維素(1723cps)75.6mg單硬脂酸甘油酯29.4mg滑石粉8mg硬脂酸鎂5mg。全文摘要本發明公開了一種能夠防治人類胃部疾病的生物製劑——抗幽門螺桿菌的特異性卵黃免疫球蛋白(抗HP-IgY)製劑，尤其涉及其新劑型——胃內漂浮片劑，屬於生物醫藥
技術領域：
。該抗HP-IgY胃漂浮片以抗幽門螺桿菌的特異性卵黃免疫球蛋白(抗HP-IgY)為活性成份，並輔以疏水性藥用輔料和親水性藥用輔料。該胃漂浮片可延長活性成份(抗HP-IgY)在胃內的滯留時間，十分有利於抗HP-IgY殺滅由幽門處間歇性上浮的幽門螺桿菌Hp；抗HP-IgY胃漂浮片專一性強，無耐藥性，無毒副作用。此外其熱穩定性、耐酸性、抗蛋白酶的性能都很好。材料易得，製作方法簡單，便於推廣使用。文檔編號A61K39/395GK102370626SQ20101026261公開日2012年3月14日申請日期2010年8月26日優先權日2010年8月26日發明者國為民,曹吉祥申請人:國為民,曹吉祥