一種具有降血壓作用的鹽酸貝那普利組合物及其製備方法

2023-07-18 11:18:16

專利名稱：一種具有降血壓作用的鹽酸貝那普利組合物及其製備方法
技術領域：
本發明涉及一種組合物，特別涉及一種具有降血壓作用的鹽酸貝那普利組合物及 其製備方法。
背景技術：
目前現代醫學對高血壓的治療藥物大體有6類1.利尿劑2. α受體阻滯劑3. β 受體阻滯劑4.鈣離子拮抗劑5.血管緊張素轉換酶抑制劑6.血管緊張素II受體拮抗劑。 近年來隨著大規模抗高血壓臨床試驗的開展和心血管分子生物學研究的進展，高血壓的傳 統認識得到了更新，循症醫學已成為共識。高血壓病不僅是血液動力學異常疾病，而且也伴 隨脂肪、糖代謝紊亂和心腦腎等靶器官的不良重塑。因此治療要在有效控制血壓水平的同 時，改善上述諸代謝紊亂、預防和逆轉靶器官的不良重塑。這是降低心血管併發症的發生和 病死率的關鍵。雖然在理論研究和臨床療效上都較以前有很大進步。但由於降壓藥物對代 謝及靶器官損害的影響尚有爭論，而且大多都存在著一定的副作用，部分限制了其臨床應 用。使高血壓的控制不能盡人所願。

發明內容
本發明的一個目的在於公開一種鹽酸貝那普利組合物；本發明的另一個目的在於 公開一種具有降血壓作用的鹽酸貝那普利組合物的製備方法。本發明目的是通過如下技術方案實現的本發明鹽酸貝那普利組合物由如下固體發酵方法製備斜面菌種培養選麴黴CICC 2436進行菌種培養，將瓊脂加入4度的麥芽汁，制 得Ph 6-8的培養基，使得每體積份培養基含瓊脂0. 02-0. 1重量份；在100-12(TC條件下 滅菌，滅菌後冷卻，常規方法製得斜面並接種，在20°C --40°C條件下培養3-7天，作為斜 面菌種；固體發酵培養將麩皮與麥芽汁按照重量體積比為1 0.5-2的比例混和，混勻 後在100-12(TC條件下，滅菌20-40分鐘，滅菌後冷卻，接入斜面菌種，使得斜面菌種體積 佔培養基體積的5-10%，在20-40°C，培養1-5天，在培養好的麩皮中加入0. 01-0. 5M ph7 Pbs緩衝液浸泡過夜，得固體發酵培養液；粗酶液的製備固體發酵培養液中加入硫酸銨至 飽和，攪拌均勻至完全溶解，在4°C條件下放置過夜，離心取沉澱，透析，離心取上清液作為 粗酶液；底物的製備用水溶液溶解鹽酸貝那普利，製成的溶液每體積份含鹽酸貝那普利 0. 03-0. 2重量份，經微孔濾膜無菌過濾後作為底物；酶轉化反應將粗酶液與底物以體積 比為1 1. 5-8混合，在轉化溫度為20-40°C，轉化反應時間為12-48小時，即得組合物。本發明鹽酸貝那普利的組合物固體發酵方法優選為斜面菌種培養選麴黴CICC 2436進行菌種培養，將瓊脂加入4度的麥芽汁，製得 Ph是7的培養基，使得每體積份培養基含瓊脂0. 05重量份；在110°C條件下滅菌，滅菌後冷 卻，製得斜面並接種，在30°c條件下培養5天，作為斜面菌種；固體發酵培養將麩皮與麥芽 汁按照重量體積比為1 1的比例混和，混勻後在110°c條件下，滅菌30分鐘，滅菌後冷卻，接入斜面菌種，使得斜面菌種體積佔培養基的8%，在30°C，培養3天，在培養好的麩皮中加 入0. 3M ph7pbs緩衝液浸泡過夜，得固體發酵培養液；粗酶液的製備固體發酵培養液中加 入硫酸銨至飽和，攪拌均勻至完全溶解，在4°C條件下放置過夜，離心取沉澱，透析，離心取 上清液作為粗酶液；底物的製備用水溶液溶解鹽酸貝那普利，製成的溶液每體積份含鹽 酸貝那普利0. 1重量份，經微孔濾膜無菌過濾後作為底物；酶轉化反應將粗酶液與底物以 體積比為1 4混合，在轉化溫度為30°C，轉化反應時間為24小時，即得組合物。本發明鹽酸貝那普利組合物還可以由如下液體發酵方法製備斜面菌種培養選麴黴CICC 2436進行菌種培養，將瓊脂加入4度的麥芽汁，制 得Ph是6-8的培養基，使得每體積份培養基含瓊脂0. 02-0. 1重量份；在100-12(TC條件 下滅菌，滅菌後冷卻，製得斜面並接種，在20°C --40°C條件下培養3-7天，作為斜面菌種； 液體發酵將葡萄糖，牛肉膏，蛋白腖，硝酸銨，硫酸鎂加入水中製得PH為6-8的培養基，使 得每體積份培養基含葡萄糖0. 01-0. 1重量份，牛肉膏0. 01-0. 1重量份，蛋白腖0. 01-0. 06 重量份，硝酸銨0. 01-0. 05重量份，硫酸鎂0. 01-0. 08重量份；20-100體積份的培養基，在 100-120°C條件下，滅菌20-40分鐘，滅菌後冷卻，接入斜面菌種，使得斜面菌種體積佔培養 基的5-10%，在20-40°C，轉速100-250r/min條件下進行發酵，培養1_5天，作為液體發酵 培養液；底物的製備用水溶液溶解鹽酸貝那普利，製成的溶液每體積份含鹽酸貝那普利 0. 03-0. 2重量份，經微孔濾膜無菌過濾後作為底物；酶反應利用液體發酵培養液作為酶 源，將底物添加到液體發酵培養液中，至每體積份發酵培養液中含底物0. 00003-0. 0001重 量份，在轉化溫度為20-40°C，轉化時間為5-48小時，即得組合物。本發明鹽酸貝那普利組合物液體發酵方法優選為斜面菌種培養選麴黴CICC 2436進行菌種培養，將瓊脂加入4度的麥芽汁，製得 Ph是7的培養基，使得每體積份培養基含瓊脂0. 05重量份；在110°C條件下滅菌，滅菌後 冷卻，製得斜面並接種，在30°c條件下培養5天，作為斜面菌種；液體發酵將葡萄糖，牛肉 膏，蛋白腖，硝酸銨，硫酸鎂加入水中製得PH為7的培養基，使得每體積份培養基含葡萄糖 0. 05重量份，牛肉膏0. 05重量份，蛋白腖0. 04重量份，硝酸銨0. 03重量份，硫酸鎂0. 04重 量份；50體積份的培養基，在110°C條件下，滅菌30分鐘，滅菌後冷卻，接入斜面菌種，使得 斜面菌種體積佔培養基的8%，在30°C，轉速150r/min條件下進行發酵，培養3天，作為液 體發酵培養液；底物的製備用水溶液溶解鹽酸貝那普利，製成的溶液每體積份含鹽酸貝 那普利0. 1重量份，經微孔濾膜無菌過濾後作為底物；酶反應利用液體發酵培養液作為酶 源，將底物添加到液體發酵培養液中，至每體積份發酵培養液中含底物0. 00008重量份，在 轉化溫度為30°C，轉化時間為28小時，即得組合物。上述重量份與體積份的關係為克與毫升的關係，即g/ml。利用麴黴CICC 2436產酶水解鹽酸貝那普利，其中部分鹽酸貝那普利的結構發生 了改變，即鹽酸貝那普利的結構類似物。原鹽酸貝那普利在酶的作用下形成含鹽酸貝那普 利和鹽酸貝那普利結構類似物的組合物，該組合物降血壓水平優於同濃度鹽酸貝那普利。


圖1固體發酵對照品一圖2固體發酵對照品二
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圖3固體發酵麴黴CICC 2436圖4固體發酵無新生物產生圖5液體發酵對照品一圖6液體發酵對照品二圖7液體發酵麴黴CICC 2436圖8液體發酵無新生物產生下面實驗和實施例用於進一步說明但不限於本發明。實驗例1菌種篩選(固體發酵)本發明的關鍵在於篩選到對鹽酸貝那普利有轉化作用的菌種，篩選實驗的過程 為篩選菌種為 CICC 3093，CICC 2203，CICC3005, CICC 2436供試品製備將瓊脂加入4度的麥芽汁，製得Ph是7的培養基，使得每體積份培養 基含瓊脂0.05g ；在110°C條件下滅菌，滅菌後冷卻，製得斜面並接種，在30°C條件下培養5 天，作為斜面菌種；固體發酵培養將麩皮與麥芽汁按照重量體積比為1 1的比例混和， 混勻後在iio°c條件下，滅菌30分鐘，滅菌後冷卻，接入斜面菌種，使得斜面菌種體積佔培 養基的8%，在30°C，培養3天，在培養好的麩皮中加入0. 3M ph7pbs緩衝液浸泡過夜，得固 體發酵培養液；粗酶液的製備固體發酵培養液中加入硫酸銨至飽和，攪拌均勻至完全溶 解，在4°C條件下放置過夜，離心取沉澱，透析，離心取上清液作為粗酶液；底物的製備用 水溶液溶解鹽酸貝那普利，製成的溶液每ml含鹽酸貝那普利0. lg，經微孔濾膜無菌過濾後 作為底物；酶轉化反應將粗酶液與底物以體積比為1 4混合，在轉化溫度為30°C，轉化 反應時間為24小時，即得組合物。對照品一製備用水溶液溶解鹽酸貝那普利，製成的溶液每ml含鹽酸貝那普利 0. Ig,經微孔濾膜無菌過濾後，取濾液0. 5ml，加0. 25ml水，20_40°C反應24h，即得作為對照
P _. ΡΠ O對照品二製備用4個篩選菌種分別按照供試品製備中的方法製備粗酶液，每種 粗酶液 0. 25ml 加 0. 5ml 水，20-40°C反應 24h。色譜柱色譜柱=APOLLOODS-C18 (250 X 4. 6mm, 5 μ m)，檢測器:UV (λ = 239nm)流動相A為0. 075% HAc水溶液，B為甲醇。試驗結果可知，圖一顯示鹽酸貝那普 利標品；圖二顯示4個菌分別製備的酶液對照品二，液相圖譜表明，4個菌分別製備的酶液 液相圖大體相同；圖三顯示CICC 2436與鹽酸貝那普利的酶解反應組合物即本發明組合物 的液相圖大體相同，均有新生成物出現(箭頭處)，其它菌種與鹽酸貝那普利酶轉化反應後 無新物質出現。 實驗例2菌種篩選(液體發酵)本發明的關鍵在於篩選到對鹽酸貝那普利有轉化作用的菌種，篩選實驗的過程 為篩選菌種為 CICC 3093，CICC 2203，CICC3005,，CICC 2436供試品製備斜面菌種培養將瓊脂加入4度的麥芽汁，製得Ph是7的培養基， 使得每體積份培養基含瓊脂ο. 05g;在iio°c條件下滅菌，滅菌後冷卻，製得斜面並接種，在 30°C條件下培養5天，作為斜面菌種；液體發酵將葡萄糖，牛肉膏，蛋白腖，硝酸銨，硫酸鎂 加入水中製得PH為7的培養基，使得每體積份培養基含葡萄糖0. 05g，牛肉膏0. 05g，蛋白 腖0. 04g，硝酸銨0. 03g，硫酸鎂0. 04g ；在250ml的三腳瓶中裝入50ml的培養基，在110°C條件下，滅菌30分鐘，滅菌後冷卻，接入斜面菌種，使得斜面菌種體積佔培養基的8%，在 30°C，搖瓶轉速150r/min條件下進行搖瓶發酵，培養3天，作為液體發酵培養液；底物的制 備用水溶液溶解鹽酸貝那普利，製成的溶液每ml含鹽酸貝那普利0. lg，經微孔濾膜無菌 過濾後作為底物；酶反應液體發酵培養液作為酶源，將底物添加到液體發酵培養液中，至 每ml發酵培養液中含底物0. 00008g，在轉化溫度為30°C，轉化時間為28小時，即得組合 物。對照品一製備用水溶液溶解鹽酸貝那普利，製成的溶液每ml含鹽酸貝那普利 0. Ig,經微孔濾膜無菌過濾後，取濾液0. 5ml，加0. 25ml水，20_40°C反應24h，即得作為對照
P _. ΡΠ O對照品二製備用4個篩選菌種分別按照供試品製備中的方法製備粗酶液，每種 粗酶液 0. 25ml 加 0. 5ml 水，20-40°C反應 24h。色譜柱色譜柱=APOLLOODS-C18 (250 X 4. 6mm, 5 μ m)，檢測器:UV (λ = 239nm)流 動相A為0. 075% HAc水溶液，B為甲醇。試驗結果可知，圖四顯示鹽酸貝那普利標品；圖6液體發酵顯示4個菌分別製備的 酶液對照品二，液相圖譜表明，4個菌分別製備的酶液液相圖大體相同；圖7液體發酵顯示 CICC 2436與鹽酸貝那普利的酶解反應組合物即本發明組合物的液相圖大體相同，均有新 生成物出現(箭頭處)，其它菌種與鹽酸貝那普利酶轉化反應後無新物質出現。實驗例3藥效學實驗採用體外血管緊張素轉換酶抑制劑的抑制作用比較試驗，比較同一濃度本發明組 合物(實施例1製備)對大鼠降脂能力的對比實驗，血管緊張素轉換酶抑制劑主要的藥理 作用是抑制血管緊張素轉換酶活性，減少血管緊張素II的生成，減少緩激肽的水解，導致 血管舒張，血容量減少血壓下降。試驗方法見《藥理學實驗指南-新藥發現和藥理學評價》 Α. 1. 1. 101、試驗動物雄性SD大鼠，體重180 220g。試驗動物由北京維通利華實驗動物 技術有限公司提供。2、試驗藥物A、鹽酸貝那普利底物加酶液培養12_48h後的混合物(實施例1組合物)B、與A同濃度鹽酸貝那普利底物加與酶液體積相同的水培養12_48h的混合物)實驗結果如下表(A組B組給藥量相同，按體積算)表IA和B降血壓水平比較試驗
_血管緊張素轉換酶抑制作用%_A75 8082 78 83
B60 5561 51 53實驗動物共5組，每組10隻小鼠，造模及試驗方法見《藥理學實驗指南_新藥發現 和藥理學評價》Α. 1. 1. 10 ；上表表明對血管緊張素轉換酶的抑制作用比較試驗中，A組比B 組的抑制率更高些，所以本發明組合物降壓能力高於鹽酸貝那普利。實驗例4藥效學實驗
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同實驗例3的實驗方法，試驗藥物A為鹽酸貝那普利底物加酶液培養12_48h後的 混合物(實施例6組合物)，實驗數據表明A組的降血壓的能力要高於B組，這表明A組中 酶轉化鹽酸貝那普利後得到的鹽酸貝那普利的結構類似物體內降血壓的能力要優於鹽酸 貝那普利。表2A和B降血壓水平比較試驗
_血管緊張素轉換酶抑制作用%_ 應用微生物酶或微生物細胞進行的合成技術被稱為微生物轉化，它們在迅猛發展 的化合物的合成和轉化方面扮演著越來越重要的角色，而且微生物酶轉化技術普遍具有環 境友好，作用條件溫和等優勢；此外，生物催化劑具有高度的選擇性，包括化學選擇性，區域 選擇性，對映體選擇性和非對映體選擇性；微生物轉化較化學手段轉化有以下優點條件 溫和，設備簡單，公害少，反應速率較快，比較環保。下述實施例均能實現本發明所述實驗例的效果。
具體實施例方式實施例1 鹽酸貝那普利的組合物固體發酵斜面菌種培養選麴黴CICC 2436進行菌種培養，將瓊脂加入4度的麥芽汁，製得 Ph是7的培養基，使得每ml培養基含瓊脂0. 05g ；在110°C條件下滅菌，滅菌後冷卻，製得 斜面並接種，在30°C條件下培養5天，作為斜面菌種；固體發酵培養將麩皮與麥芽汁按照 重量體積比為1 1的比例混和，混勻後在110°C條件下，滅菌30分鐘，滅菌後冷卻，接入斜 面菌種，使得斜面菌種體積佔培養基的8%，在30°C，培養3天，在培養好的麩皮中加入0. 3M ph7pbs緩衝液浸泡過夜，得固體發酵培養液；粗酶液的製備固體發酵培養液中加入硫酸 銨至飽和，攪拌均勻至完全溶解，在4°C條件下放置過夜，離心取沉澱，透析，離心取上清液 作為粗酶液；底物的製備用水溶液溶解鹽酸貝那普利，製成的溶液每ml含鹽酸貝那普利 O.lg，經微孔濾膜無菌過濾後作為底物；酶轉化反應將粗酶液與底物以體積比為1 4混 合，在轉化溫度為30°C，轉化反應時間為24小時，即得組合物。實施例2 鹽酸貝那普利的組合物固體發酵斜面菌種培養選麴黴CICC 2436進行菌種培養，將瓊脂加入4度的麥芽汁，製得 Ph 6的培養基，使得每ml培養基含瓊脂0. 03g ；在105°C條件下滅菌，滅菌後冷卻，常規方 法製得斜面並接種，在35°C條件下培養4天，作為斜面菌種；固體發酵培養將麩皮與麥芽 汁按照重量體積比為1 1.5的比例混和，混勻後在105°C條件下，滅菌35分鐘，滅菌後冷 卻，接入斜面菌種，使得斜面菌種體積佔培養基體積的6%，在35°C，培養2天，在培養好的 麩皮中加入0. 5M ph7pbs緩衝液浸泡過夜，得固體發酵培養液；粗酶液的製備固體發酵 培養液中加入硫酸銨至飽和，攪拌均勻至完全溶解，在4°C條件下放置過夜，離心取沉澱，透 析，離心取上清液作為粗酶液；底物的製備用水溶液溶解鹽酸貝那普利，製成的溶液每ml 含鹽酸貝那普利0. 04g，經微孔濾膜無菌過濾後作為底物；酶轉化反應將粗酶液與底物以 體積比為1 7混合，在轉化溫度為25°C，轉化反應時間為40小時，即得組合物。實施例3 鹽酸貝那普利的組合物固體發酵
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斜面菌種培養選麴黴CICC 2436進行菌種培養，將瓊脂加入4度的麥芽汁，製得 Ph 7的培養基，使得每ml培養基含瓊脂0. 08g ；在115°C條件下滅菌，滅菌後冷卻，常規方 法製得斜面並接種，在25°C條件下培養6天，作為斜面菌種；固體發酵培養將麩皮與麥芽 汁按照重量體積比為1 1. 8的比例混和，混勻後在120°C條件下，滅菌25分鐘，滅菌後冷 卻，接入斜面菌種，使得斜面菌種體積佔培養基體積的9%，在25°C，培養2天，在培養好的 麩皮中加入0. 4M ph7pbs緩衝液浸泡過夜，得固體發酵培養液；粗酶液的製備固體發酵 培養液中加入硫酸銨至飽和，攪拌均勻至完全溶解，在4°C條件下放置過夜，離心取沉澱，透 析，離心取上清液作為粗酶液；底物的製備用水溶液溶解鹽酸貝那普利，製成的溶液每ml 含鹽酸貝那普利0. 09g，經微孔濾膜無菌過濾後作為底物；酶轉化反應將粗酶液與底物以 體積比為1 3混合，在轉化溫度為25°C，轉化反應時間為18小時，即得組合物。實施例4 鹽酸貝那普利的組合物固體發酵斜面菌種培養選麴黴CICC 2436進行菌種培養，將瓊脂加入4度的麥芽汁，製得 Ph 8的培養基，使得每ml培養基含瓊脂0. Ig ；在104°C條件下滅菌，滅菌後冷卻，常規方法 製得斜面並接種，在38°C條件下培養4天，作為斜面菌種；固體發酵培養將麩皮與麥芽汁 按照重量體積比為1 0.7的比例混和，混勻後在117°C條件下，滅菌32分鐘，滅菌後冷卻， 接入斜面菌種，使得斜面菌種體積佔培養基體積的6%，在38°C，培養3天，在培養好的麩皮 中加入0. 07M ph7pbs緩衝液浸泡過夜，得固體發酵培養液；粗酶液的製備固體發酵培養 液中加入硫酸銨至飽和，攪拌均勻至完全溶解，在4°C條件下放置過夜，離心取沉澱，透析， 離心取上清液作為粗酶液；底物的製備用水溶液溶解鹽酸貝那普利，製成的溶液每ml含 鹽酸貝那普利0. lg，經微孔濾膜無菌過濾後作為底物；酶轉化反應將粗酶液與底物以體 積比為1 3混合，在轉化溫度為28°C，轉化反應時間為38小時，即得組合物。實施例5 鹽酸貝那普利的組合物固體發酵斜面菌種培養選麴黴CICC 2436進行菌種培養，將瓊脂加入4度的麥芽汁，製得 Ph 8的培養基，使得每ml培養基含瓊脂0. Ig ；在104°C條件下滅菌，滅菌後冷卻，常規方法 製得斜面並接種，在38°C條件下培養4天，作為斜面菌種；固體發酵培養將麩皮與麥芽汁 按照重量體積比為1 0.7的比例混和，混勻後在117°C條件下，滅菌32分鐘，滅菌後冷卻， 接入斜面菌種，使得斜面菌種體積佔培養基體積的6%，在38C，培養3天，在培養好的麩皮 中加入0. 07M ph7pbs緩衝液浸泡過夜，得固體發酵培養液；粗酶液的製備固體發酵培養 液中加入硫酸銨至飽和，攪拌均勻至完全溶解，在4°C條件下放置過夜，離心取沉澱，透析， 離心取上清液作為粗酶液；底物的製備用水溶液溶解鹽酸貝那普利，製成的溶液每ml含 鹽酸貝那普利0. lg，經微孔濾膜無菌過濾後作為底物；酶轉化反應將粗酶液與底物以體 積比為1 3混合，在轉化溫度為28°C，轉化反應時間為38小時，即得組合物。實施例6 鹽酸貝那普利的組合物液體發酵斜面菌種培養選麴黴CICC 2436進行菌種培養，將瓊脂加入4度的麥芽汁，製得 Ph是7的培養基，使得每ml培養基含瓊脂0. 05g ；在110°C條件下滅菌，滅菌後冷卻，製得 斜面並接種，在30°C條件下培養5天，作為斜面菌種；液體發酵將葡萄糖，牛肉膏，蛋白腖， 硝酸銨，硫酸鎂加入水中製得PH為7的培養基，使得每ml培養基含葡萄糖0. 05g，牛肉膏 0. 05g，蛋白腖0. 04g，硝酸銨0. 03g，硫酸鎂0. 04g ；50ml的培養基，在110°C條件下，滅菌30 分鐘，滅菌後冷卻，接入斜面菌種，使得斜面菌種體積佔培養基的8%，在30°C，轉速150r/min條件下進行發酵，培養3天，作為液體發酵培養液；底物的製備用水溶液溶解鹽酸貝那 普利，製成的溶液每ml含鹽酸貝那普利0. lg，經微孔濾膜無菌過濾後作為底物；酶反應利 用液體發酵培養液作為酶源，將底物添加到液體發酵培養液中，至每ml發酵培養液中含底 物0. 00008g，在轉化溫度為30°C，轉化時間為28小時，即得組合物。實施例7 鹽酸貝那普利的組合物液體發酵斜面菌種培養選麴黴CICC 2436進行菌種培養，將瓊脂加入4度的麥芽汁，製得 Ph是6. 5的培養基，使得每ml培養基含瓊脂0. 09g ；在110°C條件下滅菌，滅菌後冷卻，製得 斜面並接種，在22°C條件下培養6天，作為斜面菌種；液體發酵將葡萄糖，牛肉膏，蛋白腖， 硝酸銨，硫酸鎂加入水中製得PH為6. 5的培養基，使得每ml培養基含葡萄糖0. 02g，牛肉膏 0. 9g，蛋白腖0. 04g,硝酸銨0. 02g，硫酸鎂0. 07g ；60ml的培養基，在102°C條件下，滅菌38 分鐘，滅菌後冷卻，接入斜面菌種，使得斜面菌種體積佔培養基的7 %，在24°C，轉速220r/ min條件下進行發酵，培養3天，作為液體發酵培養液；底物的製備用水溶液溶解鹽酸貝那 普利，製成的溶液每ml含鹽酸貝那普利0. 05g，經微孔濾膜無菌過濾後作為底物；酶反應 利用液體發酵培養液作為酶源，將底物添加到液體發酵培養液中，至每ml發酵培養液中含 底物0. 00008g，在轉化溫度為29°C，轉化時間為9小時，即得組合物。實施例8 鹽酸貝那普利的組合物液體發酵斜面菌種培養選麴黴CICC 2436進行菌種培養，將瓊脂加入4度的麥芽汁，製得 Ph是6. 5的培養基，使得每ml培養基含瓊脂0. 09g ；在110°C條件下滅菌，滅菌後冷卻，製得 斜面並接種，在22°C條件下培養6天，作為斜面菌種；液體發酵將葡萄糖，牛肉膏，蛋白腖， 硝酸銨，硫酸鎂加入水中製得pH為6. 5的培養基，使得每ml培養基含葡萄糖0. 02g，牛肉膏 0. 9g，蛋白腖0. 04g,硝酸銨0. 02g，硫酸鎂0. 07g ；60ml的培養基，在102°C條件下，滅菌38 分鐘，滅菌後冷卻，接入斜面菌種，使得斜面菌種體積佔培養基的7 %，在24°C，轉速220r/ min條件下進行發酵，培養3天，作為液體發酵培養液；底物的製備用水溶液溶解鹽酸貝那 普利，製成的溶液每ml含鹽酸貝那普利0. 05g，經微孔濾膜無菌過濾後作為底物；酶反應 利用液體發酵培養液作為酶源，將底物添加到液體發酵培養液中，至每ml發酵培養液中含 底物0. 00008g，在轉化溫度為29°C，轉化時間為9小時，即得組合物。實施例9 鹽酸貝那普利的組合物液體發酵斜面菌種培養選麴黴CICC 2436進行菌種培養，將瓊脂加入4度的麥芽汁，製得 Ph是7. 5的培養基，使得每ml培養基含瓊脂0. 04g ；在108°C條件下滅菌，滅菌後冷卻，製得 斜面並接種，在37°C條件下培養4天，作為斜面菌種；液體發酵將葡萄糖，牛肉膏，蛋白腖， 硝酸銨，硫酸鎂加入水中製得pH為7. 5的培養基，使得每ml培養基含葡萄糖0. 08g，牛肉膏 0. 05g，蛋白腖0. 03g，硝酸銨0. 04g，硫酸鎂0. 02g ；70ml的培養基，在117°C條件下，滅菌24 分鐘，滅菌後冷卻，接入斜面菌種，使得斜面菌種體積佔培養基的7%，在36°C，轉速105r/ min條件下進行發酵，培養3天，作為液體發酵培養液；底物的製備用水溶液溶解鹽酸貝那 普利，製成的溶液每ml含鹽酸貝那普利0. lg，經微孔濾膜無菌過濾後作為底物；酶反應利 用液體發酵培養液作為酶源，將底物添加到液體發酵培養液中，至每ml發酵培養液中含底 物0. 00004g，在轉化溫度為34°C，轉化時間為43小時，即得組合物。實施例10 鹽酸貝那普利的組合物液體發酵斜面菌種培養選麴黴CICC 2436進行菌種培養，將瓊脂加入4度的麥芽汁，製得Ph是7的培養基，使得每ml培養基含瓊脂0. 04g ；在116°C條件下滅菌，滅菌後冷卻，制 得斜面並接種，在34°C條件下培養3天，作為斜面菌種；液體發酵將葡萄糖，牛肉膏，蛋白 腖，硝酸銨，硫酸鎂加入水中製得PH為8的培養基，使得每ml培養基含葡萄糖0. 05g，牛肉 膏0. Olg，蛋白腖0. 06g，硝酸銨0. 04g，硫酸鎂0. 02g ；IOOml的培養基，在108°C條件下，滅 菌21分鐘，滅菌後冷卻，接入斜面菌種，使得斜面菌種體積佔培養基的10 %，在30°C，轉速 105r/min條件下進行發酵，培養5天，作為液體發酵培養液；底物的製備用水溶液溶解鹽 酸貝那普利，製成的溶液每ml含鹽酸貝那普利0. lg，經微孔濾膜無菌過濾後作為底物；酶 反應利用液體發酵培養液作為酶源，將底物添加到液體發酵培養液中，至每ml發酵培養 液中含底物0. 00004g，在轉化溫度為40°C，轉化時間為25小時，即得組合物。
權利要求
一種具有降血壓作用的鹽酸貝那普利組合物，其特徵在於由如下固體發酵方法製備斜面菌種培養選麴黴CICC 2436進行菌種培養，將瓊脂加入4度的麥芽汁，製得Ph 6 8的培養基，使得每體積份培養基含瓊脂0.02 0.1重量份；在100 120℃條件下滅菌，滅菌後冷卻，常規方法製得斜面並接種，在20℃ 40℃條件下培養3 7天，作為斜面菌種；固體發酵培養將麩皮與麥芽汁按照重量體積比為1∶0.5 2的比例混和，混勻後在100 120℃條件下，滅菌20 40分鐘，滅菌後冷卻，接入斜面菌種，使得斜面菌種體積佔培養基體積的5 10％，在20 40℃，培養1 5天，在培養好的麩皮中加入0.01 0.5M ph7pbs緩衝液浸泡過夜，得固體發酵培養液；粗酶液的製備固體發酵培養液中加入硫酸銨至飽和，攪拌均勻至完全溶解，在4℃條件下放置過夜，離心取沉澱，透析，離心取上清液作為粗酶液；底物的製備用水溶液溶解鹽酸貝那普利，製成的溶液每體積份含鹽酸貝那普利0.03 0.2重量份，經微孔濾膜無菌過濾後作為底物；酶轉化反應將粗酶液與底物以體積比為1∶1.5 8混合，在轉化溫度為20 40℃，轉化反應時間為12 48小時，即得組合物。
2.如權利要求1所述的鹽酸貝那普利組合物，其特徵在於由如下固體發酵方法製備 斜面菌種培養選麴黴CICC 2436進行菌種培養，將瓊脂加入4度的麥芽汁，製得Ph是7的培養基，使得每體積份培養基含瓊脂0. 05重量份；在110°C條件下滅菌，滅菌後冷卻，制 得斜面並接種，在30°C條件下培養5天，作為斜面菌種；固體發酵培養將麩皮與麥芽汁按 照重量體積比為1 1的比例混和，混勻後在110°C條件下，滅菌30分鐘，滅菌後冷卻，接 入斜面菌種，使得斜面菌種體積佔培養基的8%，在30°C，培養3天，在培養好的麩皮中加入 0. 3M ph7pbs緩衝液浸泡過夜，得固體發酵培養液；粗酶液的製備固體發酵培養液中加入 硫酸銨至飽和，攪拌均勻至完全溶解，在4°C條件下放置過夜，離心取沉澱，透析，離心取上 清液作為粗酶液；底物的製備用水溶液溶解鹽酸貝那普利，製成的溶液每體積份含鹽酸 貝那普利0. 1重量份，經微孔濾膜無菌過濾後作為底物；酶轉化反應將粗酶液與底物以體 積比為1 4混合，在轉化溫度為30°C，轉化反應時間為24小時，即得組合物。
3.如權利要求1所述的鹽酸貝那普利組合物，其特徵在於由如下固體發酵方法製備 斜面菌種培養選麴黴CICC 2436進行菌種培養，將瓊脂加入4度的麥芽汁，製得Ph 6的培養基，使得每體積份培養基含瓊脂0. 03重量份；在105°C條件下滅菌，滅菌後冷卻，常 規方法製得斜面並接種，在35°C條件下培養4天，作為斜面菌種；固體發酵培養將麩皮與 麥芽汁按照重量體積比為1 1.5的比例混和，混勻後在105°C條件下，滅菌35分鐘，滅菌 後冷卻，接入斜面菌種，使得斜面菌種體積佔培養基體積的6%，在35°C，培養2天，在培養 好的麩皮中加入0. 5M ph7pbs緩衝液浸泡過夜，得固體發酵培養液；粗酶液的製備固體發 酵培養液中加入硫酸銨至飽和，攪拌均勻至完全溶解，在4°C條件下放置過夜，離心取沉澱， 透析，離心取上清液作為粗酶液；底物的製備用水溶液溶解鹽酸貝那普利，製成的溶液每 體積份含鹽酸貝那普利0. 04重量份，經微孔濾膜無菌過濾後作為底物；酶轉化反應將粗 酶液與底物以體積比為1 7混合，在轉化溫度為25°C，轉化反應時間為40小時，即得組合 物。
4.如權利要求1所述的鹽酸貝那普利組合物，其特徵在於由如下固體發酵方法製備 斜面菌種培養選麴黴CICC 2436進行菌種培養，將瓊脂加入4度的麥芽汁，製得Ph 7的培養基，使得每體積份培養基含瓊脂0. 08重量份；在115°C條件下滅菌，滅菌後冷卻，常規方法製得斜面並接種，在25°C條件下培養6天，作為斜面菌種；固體發酵培養將麩皮與 麥芽汁按照重量體積比為1 1.8的比例混和，混勻後在120°C條件下，滅菌25分鐘，滅菌 後冷卻，接入斜面菌種，使得斜面菌種體積佔培養基體積的9%，在25°C，培養2天，在培養 好的麩皮中加入0. 4M ph7pbs緩衝液浸泡過夜，得固體發酵培養液；粗酶液的製備固體發 酵培養液中加入硫酸銨至飽和，攪拌均勻至完全溶解，在4°C條件下放置過夜，離心取沉澱， 透析，離心取上清液作為粗酶液；底物的製備用水溶液溶解鹽酸貝那普利，製成的溶液每 體積份含鹽酸貝那普利0. 09重量份，經微孔濾膜無菌過濾後作為底物；酶轉化反應將粗 酶液與底物以體積比為1 3混合，在轉化溫度為25°C，轉化反應時間為18小時，即得組合 物。
5.如權利要求1所述的鹽酸貝那普利組合物，其特徵在於由如下固體發酵方法製備 斜面菌種培養選麴黴CICC 2436進行菌種培養，將瓊脂加入4度的麥芽汁，製得Ph 8的培養基，使得每體積份培養基含瓊脂0. 1重量份；在104°C條件下滅菌，滅菌後冷卻，常規 方法製得斜面並接種，在38°C條件下培養4天，作為斜面菌種；固體發酵培養將麩皮與麥 芽汁按照重量體積比為1 0.7的比例混和，混勻後在117°C條件下，滅菌32分鐘，滅菌後 冷卻，接入斜面菌種，使得斜面菌種體積佔培養基體積的6%，在38°C，培養3天，在培養好 的麩皮中加入0. 07M ph7pbs緩衝液浸泡過夜，得固體發酵培養液；粗酶液的製備固體發 酵培養液中加入硫酸銨至飽和，攪拌均勻至完全溶解，在4°C條件下放置過夜，離心取沉澱， 透析，離心取上清液作為粗酶液；底物的製備用水溶液溶解鹽酸貝那普利，製成的溶液每 體積份含鹽酸貝那普利0. 1重量份，經微孔濾膜無菌過濾後作為底物；酶轉化反應將粗酶 液與底物以體積比為1 3混合，在轉化溫度為28°C，轉化反應時間為38小時，即得組合 物。
6.一種具有降血壓作用的鹽酸貝那普利組合物的製備方法，其特徵在於該方法為 斜面菌種培養選麴黴CICC 2436進行菌種培養，將瓊脂加入4度的麥芽汁，製得Ph6-8的培養基，使得每體積份培養基含瓊脂0. 02-0. 1重量份；在100-12(TC條件下滅菌， 滅菌後冷卻，常規方法製得斜面並接種，在20°C --40°C條件下培養3-7天，作為斜面菌 種；固體發酵培養將麩皮與麥芽汁按照重量體積比為1 0.5-2的比例混和，混勻後在 100-120°C條件下，滅菌20-40分鐘，滅菌後冷卻，接入斜面菌種，使得斜面菌種體積佔培 養基體積的5-10%，在20-40°C，培養1-5天，在培養好的麩皮中加入0. 01-0. 5M ph7pbs 緩衝液浸泡過夜，得固體發酵培養液；粗酶液的製備固體發酵培養液中加入硫酸銨至飽 和，攪拌均勻至完全溶解，在4°C條件下放置過夜，離心取沉澱，透析，離心取上清液作為 粗酶液；底物的製備用水溶液溶解鹽酸貝那普利，製成的溶液每體積份含鹽酸貝那普利 0. 03-0. 2重量份，經微孔濾膜無菌過濾後作為底物；酶轉化反應將粗酶液與底物以體積 比為1 1. 5-8混合，在轉化溫度為20-40°C，轉化反應時間為12-48小時，即得組合物。
7.如權利要求6所述的鹽酸貝那普利組合物的製備方法，其特徵在於該方法為 斜面菌種培養選麴黴CICC 2436進行菌種培養，將瓊脂加入4度的麥芽汁，製得Ph是7的培養基，使得每體積份培養基含瓊脂0. 05重量份；在110°C條件下滅菌，滅菌後冷卻，制 得斜面並接種，在30°c條件下培養5天，作為斜面菌種；固體發酵培養將麩皮與麥芽汁按 照重量體積比為1 1的比例混和，混勻後在110°C條件下，滅菌30分鐘，滅菌後冷卻，接 入斜面菌種，使得斜面菌種體積佔培養基的8%，在30°C，培養3天，在培養好的麩皮中加入0. 3M ph7pbs緩衝液浸泡過夜，得固體發酵培養液；粗酶液的製備固體發酵培養液中加入 硫酸銨至飽和，攪拌均勻至完全溶解，在4°C條件下放置過夜，離心取沉澱，透析，離心取上 清液作為粗酶液；底物的製備用水溶液溶解鹽酸貝那普利，製成的溶液每體積份含鹽酸 貝那普利0. 1重量份，經微孔濾膜無菌過濾後作為底物；酶轉化反應將粗酶液與底物以體 積比為1 4混合，在轉化溫度為30°C，轉化反應時間為24小時，即得組合物。
8.如權利要求6所述的鹽酸貝那普利組合物的製備方法，其特徵在於該方法為 斜面菌種培養選麴黴CICC 2436進行菌種培養，將瓊脂加入4度的麥芽汁，製得Ph 6的培養基，使得每體積份培養基含瓊脂0. 03重量份；在105°C條件下滅菌，滅菌後冷卻，常 規方法製得斜面並接種，在35°C條件下培養4天，作為斜面菌種；固體發酵培養將麩皮與 麥芽汁按照重量體積比為1 1.5的比例混和，混勻後在105°C條件下，滅菌35分鐘，滅菌 後冷卻，接入斜面菌種，使得斜面菌種體積佔培養基體積的6%，在35°C，培養2天，在培養 好的麩皮中加入0. 5M ph7pbs緩衝液浸泡過夜，得固體發酵培養液；粗酶液的製備固體發 酵培養液中加入硫酸銨至飽和，攪拌均勻至完全溶解，在4°C條件下放置過夜，離心取沉澱， 透析，離心取上清液作為粗酶液；底物的製備用水溶液溶解鹽酸貝那普利，製成的溶液每 體積份含鹽酸貝那普利0. 04重量份，經微孔濾膜無菌過濾後作為底物；酶轉化反應將粗 酶液與底物以體積比為1 7混合，在轉化溫度為25°C，轉化反應時間為40小時，即得組合 物。
9.如權利要求6所述的鹽酸貝那普利組合物的製備方法，其特徵在於該方法為 斜面菌種培養選麴黴CICC 2436進行菌種培養，將瓊脂加入4度的麥芽汁，製得Ph 7的培養基，使得每體積份培養基含瓊脂0. 08重量份；在115°C條件下滅菌，滅菌後冷卻，常 規方法製得斜面並接種，在25°C條件下培養6天，作為斜面菌種；固體發酵培養將麩皮與 麥芽汁按照重量體積比為1 1.8的比例混和，混勻後在120°C條件下，滅菌25分鐘，滅菌 後冷卻，接入斜面菌種，使得斜面菌種體積佔培養基體積的9%，在25°C，培養2天，在培養 好的麩皮中加入0. 4M ph7pbs緩衝液浸泡過夜，得固體發酵培養液；粗酶液的製備固體發 酵培養液中加入硫酸銨至飽和，攪拌均勻至完全溶解，在4°C條件下放置過夜，離心取沉澱， 透析，離心取上清液作為粗酶液；底物的製備用水溶液溶解鹽酸貝那普利，製成的溶液每 體積份含鹽酸貝那普利0. 09重量份，經微孔濾膜無菌過濾後作為底物；酶轉化反應將粗 酶液與底物以體積比為1 3混合，在轉化溫度為25°C，轉化反應時間為18小時，即得組合 物。
10.如權利要求6所述的鹽酸貝那普利組合物的製備方法，其特徵在於該方法為 斜面菌種培養選麴黴CICC 2436進行菌種培養，將瓊脂加入4度的麥芽汁，製得Ph 8的培養基，使得每體積份培養基含瓊脂0. 1重量份；在104°C條件下滅菌，滅菌後冷卻，常規 方法製得斜面並接種，在38°C條件下培養4天，作為斜面菌種；固體發酵培養將麩皮與麥 芽汁按照重量體積比為1 0.7的比例混和，混勻後在117°C條件下，滅菌32分鐘，滅菌後 冷卻，接入斜面菌種，使得斜面菌種體積佔培養基體積的6%，在38°C，培養3天，在培養好 的麩皮中加入0. 07M ph7pbs緩衝液浸泡過夜，得固體發酵培養液；粗酶液的製備固體發 酵培養液中加入硫酸銨至飽和，攪拌均勻至完全溶解，在4°C條件下放置過夜，離心取沉澱， 透析，離心取上清液作為粗酶液；底物的製備用水溶液溶解鹽酸貝那普利，製成的溶液每 體積份含鹽酸貝那普利0. 1重量份，經微孔濾膜無菌過濾後作為底物；酶轉化反應將粗酶液與底物以體積比為1 3混合，在轉化溫度為28°C，轉化反應時間為38小時，即得組合 物。
11.一種具有降血壓作用的鹽酸貝那普利組合物，其特徵在於由如下液體發酵方法製備斜面菌種培養選麴黴CICC 2436進行菌種培養，將瓊脂加入4度的麥芽汁，製得Ph 是6-8的培養基，使得每體積份培養基含瓊脂0. 02-0. 1重量份；在100-12(TC條件下滅 菌，滅菌後冷卻，製得斜面並接種，在20°C --40°C條件下培養3-7天，作為斜面菌種；液體 發酵將葡萄糖，牛肉膏，蛋白腖，硝酸銨，硫酸鎂加入水中製得PH為6-8的培養基，使得 每體積份培養基含葡萄糖0.01-0. 1重量份，牛肉膏0.01-0. 1重量份，蛋白腖0.01-0. 06 重量份，硝酸銨0. 01-0. 05重量份，硫酸鎂0. 01-0. 08重量份；20-100體積份的培養基，在 100-120°C條件下，滅菌20-40分鐘，滅菌後冷卻，接入斜面菌種，使得斜面菌種體積佔培養 基的5-10%，在20-40°C，轉速100-250r/min條件下進行發酵，培養1_5天，作為液體發酵 培養液；底物的製備用水溶液溶解鹽酸貝那普利，製成的溶液每體積份含鹽酸貝那普利 0. 03-0. 2重量份，經微孔濾膜無菌過濾後作為底物；酶反應利用液體發酵培養液作為酶 源，將底物添加到液體發酵培養液中，至每體積份發酵培養液中含底物0. 00003-0. 0001重 量份，在轉化溫度為20-40°C，轉化時間為5-48小時，即得組合物。
12.如權利要求11所述的鹽酸貝那普利組合物，其特徵在於由如下液體發酵方法製備斜面菌種培養選麴黴CICC 2436進行菌種培養，將瓊脂加入4度的麥芽汁，製得Ph是 7的培養基，使得每體積份培養基含瓊脂0. 05重量份；在110°C條件下滅菌，滅菌後冷卻，制 得斜面並接種，在30°c條件下培養5天，作為斜面菌種；液體發酵將葡萄糖，牛肉膏，蛋白 腖，硝酸銨，硫酸鎂加入水中製得PH為7的培養基，使得每體積份培養基含葡萄糖0. 05重 量份，牛肉膏0. 05重量份，蛋白腖0. 04重量份，硝酸銨0. 03重量份，硫酸鎂0. 04重量份；50 體積份的培養基，在110°C條件下，滅菌30分鐘，滅菌後冷卻，接入斜面菌種，使得斜面菌種 體積佔培養基的8%，在30°C，轉速150r/min條件下進行發酵，培養3天，作為液體發酵培 養液；底物的製備用水溶液溶解鹽酸貝那普利，製成的溶液每體積份含鹽酸貝那普利0. 1 重量份，經微孔濾膜無菌過濾後作為底物；酶反應利用液體發酵培養液作為酶源，將底物 添加到液體發酵培養液中，至每體積份發酵培養液中含底物0. 00008重量份，在轉化溫度 為30°C，轉化時間為28小時，即得組合物。
13.如權利要求11所述的鹽酸貝那普利組合物，其特徵在於由如下液體發酵方法製備斜面菌種培養選麴黴CICC 2436進行菌種培養，將瓊脂加入4度的麥芽汁，製得Ph是 6. 5的培養基，使得每體積份培養基含瓊脂0. 09重量份；在110°C條件下滅菌，滅菌後冷卻， 製得斜面並接種，在22°C條件下培養6天，作為斜面菌種；液體發酵將葡萄糖，牛肉膏，蛋 白腖，硝酸銨，硫酸鎂加入水中製得PH為6. 5的培養基，使得每體積份培養基含葡萄糖0. 02 重量份，牛肉膏0. 9重量份，蛋白腖0. 04重量份，硝酸銨0. 02重量份，硫酸鎂0. 07重量份； 60體積份的培養基，在102°C條件下，滅菌38分鐘，滅菌後冷卻，接入斜面菌種，使得斜面菌 種體積佔培養基的7%，在24°C，轉速220r/min條件下進行發酵，培養3天，作為液體發酵 培養液；底物的製備用水溶液溶解鹽酸貝那普利，製成的溶液每體積份含鹽酸貝那普利5`0. 05重量份，經微孔濾膜無菌過濾後作為底物；酶反應利用液體發酵培養液作為酶源，將 底物添加到液體發酵培養液中，至每體積份發酵培養液中含底物`0. 00008重量份，在轉化 溫度為29°C，轉化時間為9小時，即得組合物。
14.如權利要求11所述的鹽酸貝那普利組合物，其特徵在於由如下液體發酵方法製備斜面菌種培養選麴黴CICC 2436進行菌種培養，將瓊脂加入4度的麥芽汁，製得Ph 是7. 5的培養基，使得每體積份培養基含瓊脂0. 04重量份；在108°C條件下滅菌，滅菌後冷 卻，製得斜面並接種，在37°C條件下培養4天，作為斜面菌種；液體發酵將葡萄糖，牛肉膏， 蛋白腖，硝酸銨，硫酸鎂加入水中製得PH為7. 5的培養基，使得每體積份培養基含葡萄糖 0. 08重量份，牛肉膏0. 05重量份，蛋白腖0. 03重量份，硝酸銨0. 04重量份，硫酸鎂0. 02重 量份；70體積份的培養基，在117°C條件下，滅菌24分鐘，滅菌後冷卻，接入斜面菌種，使得 斜面菌種體積佔培養基的7%，在36°C，轉速105r/min條件下進行發酵，培養3天，作為液 體發酵培養液；底物的製備用水溶液溶解鹽酸貝那普利，製成的溶液每體積份含鹽酸貝 那普利0. 1重量份，經微孔濾膜無菌過濾後作為底物；酶反應利用液體發酵培養液作為酶 源，將底物添加到液體發酵培養液中，至每體積份發酵培養液中含底物0. 00004重量份，在 轉化溫度為34°C，轉化時間為43小時，即得組合物。
15.如權利要求11所述的鹽酸貝那普利組合物，其特徵在於由如下液體發酵方法製備斜面菌種培養選麴黴CICC 2436進行菌種培養，將瓊脂加入4度的麥芽汁，製得Ph是 7的培養基，使得每體積份培養基含瓊脂0. 04重量份；在116°C條件下滅菌，滅菌後冷卻，制 得斜面並接種，在34°C條件下培養3天，作為斜面菌種；液體發酵將葡萄糖，牛肉膏，蛋白 腖，硝酸銨，硫酸鎂加入水中製得PH為8的培養基，使得每體積份培養基含葡萄糖0. 05重 量份，牛肉膏0. 01重量份，蛋白腖0. 06重量份，硝酸銨0. 04重量份，硫酸鎂0. 02重量份； 100體積份的培養基，在108°C條件下，滅菌21分鐘，滅菌後冷卻，接入斜面菌種，使得斜面 菌種體積佔培養基的10%，在30°C，轉速105r/min條件下進行發酵，培養5天，作為液體發 酵培養液；底物的製備用水溶液溶解鹽酸貝那普利，製成的溶液每體積份含鹽酸貝那普 利0. 1重量份，經微孔濾膜無菌過濾後作為底物；酶反應利用液體發酵培養液作為酶源， 將底物添加到液體發酵培養液中，至每體積份發酵培養液中含底物0. 00004重量份，在轉 化溫度為40°C，轉化時間為25小時，即得組合物。
16.一種具有降血壓作用的鹽酸貝那普利組合物的製備方法，其特徵在於該方法為 斜面菌種培養選麴黴CICC 2436進行菌種培養，將瓊脂加入4度的麥芽汁，製得Ph是6-8的培養基，使得每體積份培養基含瓊脂0. 02-0. 1重量份；在100-12(TC條件下滅 菌，滅菌後冷卻，製得斜面並接種，在20°C --40°C條件下培養3-7天，作為斜面菌種；液體 發酵將葡萄糖，牛肉膏，蛋白腖，硝酸銨，硫酸鎂加入水中製得PH為6-8的培養基，使得 每體積份培養基含葡萄糖0.01-0. 1重量份，牛肉膏0.01-0. 1重量份，蛋白腖0.01-0. 06 重量份，硝酸銨0. 01-0. 05重量份，硫酸鎂0. 01-0. 08重量份；20-100體積份的培養基，在 100-120°C條件下，滅菌20-40分鐘，滅菌後冷卻，接入斜面菌種，使得斜面菌種體積佔培養 基的5-10%，在20-40°C，轉速100-250r/min條件下進行發酵，培養1_5天，作為液體發酵 培養液；底物的製備用水溶液溶解鹽酸貝那普利，製成的溶液每體積份含鹽酸貝那普利0. 03-0. 2重量份，經微孔濾膜無菌過濾後作為底物；酶反應利用液體發酵培養液作為酶 源，將底物添加到液體發酵培養液中，至每體積份發酵培養液中含底物0. 00003-0. 0001重 量份，在轉化溫度為20-40°C，轉化時間為5-48小時，即得組合物。
17.如權利要求16所述的鹽酸貝那普利組合物的製備方法，其特徵在於該方法為 斜面菌種培養選麴黴CICC 2436進行菌種培養，將瓊脂加入4度的麥芽汁，製得Ph是7的培養基，使得每體積份培養基含瓊脂0. 05重量份；在110°C條件下滅菌，滅菌後冷卻，制 得斜面並接種，在30°c條件下培養5天，作為斜面菌種；液體發酵將葡萄糖，牛肉膏，蛋白 腖，硝酸銨，硫酸鎂加入水中製得PH為7的培養基，使得每體積份培養基含葡萄糖0. 05重 量份，牛肉膏0. 05重量份，蛋白腖0. 04重量份，硝酸銨0. 03重量份，硫酸鎂0. 04重量份；50 體積份的培養基，在110°C條件下，滅菌30分鐘，滅菌後冷卻，接入斜面菌種，使得斜面菌種 體積佔培養基的8%，在30°C，轉速150r/min條件下進行發酵，培養3天，作為液體發酵培 養液；底物的製備用水溶液溶解鹽酸貝那普利，製成的溶液每體積份含鹽酸貝那普利0. 1 重量份，經微孔濾膜無菌過濾後作為底物；酶反應利用液體發酵培養液作為酶源，將底物 添加到液體發酵培養液中，至每體積份發酵培養液中含底物0. 00008重量份，在轉化溫度 為30°C，轉化時間為28小時，即得組合物。
18.如權利要求16所述的鹽酸貝那普利組合物的製備方法，其特徵在於該方法為 斜面菌種培養選麴黴CICC 2436進行菌種培養，將瓊脂加入4度的麥芽汁，製得Ph是6. 5的培養基，使得每體積份培養基含瓊脂0. 09重量份；在110°C條件下滅菌，滅菌後冷卻， 製得斜面並接種，在22°C條件下培養6天，作為斜面菌種；液體發酵將葡萄糖，牛肉膏，蛋 白腖，硝酸銨，硫酸鎂加入水中製得PH為6. 5的培養基，使得每體積份培養基含葡萄糖0. 02 重量份，牛肉膏0. 9重量份，蛋白腖0. 04重量份，硝酸銨0. 02重量份，硫酸鎂0. 07重量份； 60體積份的培養基，在102°C條件下，滅菌38分鐘，滅菌後冷卻，接入斜面菌種，使得斜面菌 種體積佔培養基的7%，在24°C，轉速220r/min條件下進行發酵，培養3天，作為液體發酵 培養液；底物的製備用水溶液溶解鹽酸貝那普利，製成的溶液每體積份含鹽酸貝那普利 0. 05重量份，經微孔濾膜無菌過濾後作為底物；酶反應利用液體發酵培養液作為酶源，將 底物添加到液體發酵培養液中，至每體積份發酵培養液中含底物0. 00008重量份，在轉化 溫度為29°C，轉化時間為9小時，即得組合物。
19.如權利要求16所述的鹽酸貝那普利組合物的製備方法，其特徵在於該方法為 斜面菌種培養選麴黴CICC 2436進行菌種培養，將瓊脂加入4度的麥芽汁，製得Ph是7. 5的培養基，使得每體積份培養基含瓊脂0. 04重量份；在108°C條件下滅菌，滅菌後冷 卻，製得斜面並接種，在37°C條件下培養4天，作為斜面菌種；液體發酵將葡萄糖，牛肉膏， 蛋白腖，硝酸銨，硫酸鎂加入水中製得PH為7. 5的培養基，使得每體積份培養基含葡萄糖 0. 08重量份，牛肉膏0. 05重量份，蛋白腖0. 03重量份，硝酸銨0. 04重量份，硫酸鎂0. 02重 量份；70體積份的培養基，在117°C條件下，滅菌24分鐘，滅菌後冷卻，接入斜面菌種，使得 斜面菌種體積佔培養基的7%，在36°C，轉速105r/min條件下進行發酵，培養3天，作為液 體發酵培養液；底物的製備用水溶液溶解鹽酸貝那普利，製成的溶液每體積份含鹽酸貝 那普利0. 1重量份，經微孔濾膜無菌過濾後作為底物；酶反應利用液體發酵培養液作為酶 源，將底物添加到液體發酵培養液中，至每體積份發酵培養液中含底物0. 00004重量份，在 轉化溫度為34°C，轉化時間為43小時，即得組合物。
20.如權利要求16所述的鹽酸貝那普利組合物的製備方法，其特徵在於該方法為 斜面菌種培養選麴黴CICC 2436進行菌種培養，將瓊脂加入4度的麥芽汁，製得Ph是7的培養基，使得每體積份培養基含瓊脂0. 04重量份；在116°C條件下滅菌，滅菌後冷卻，制 得斜面並接種，在34°C條件下培養3天，作為斜面菌種；液體發酵將葡萄糖，牛肉膏，蛋白 腖，硝酸銨，硫酸鎂加入水中製得PH為8的培養基，使得每體積份培養基含葡萄糖0. 05重 量份，牛肉膏0. 01重量份，蛋白腖0. 06重量份，硝酸銨0. 04重量份，硫酸鎂0. 02重量份； 100體積份的培養基，在108°C條件下，滅菌21分鐘，滅菌後冷卻，接入斜面菌種，使得斜面 菌種體積佔培養基的10%，在30°C，轉速105r/min條件下進行發酵，培養5天，作為液體發 酵培養液；底物的製備用水溶液溶解鹽酸貝那普利，製成的溶液每體積份含鹽酸貝那普 利0. 1重量份，經微孔濾膜無菌過濾後作為底物；酶反應利用液體發酵培養液作為酶源， 將底物添加到液體發酵培養液中，至每體積份發酵培養液中含底物0. 00004重量份，在轉 化溫度為40°C，轉化時間為25小時，即得組合物。
21.如權利要求1-5、11-15任一所述的鹽酸貝那普利組合物在製備降血壓藥物中的應用。8
全文摘要
本發明公開了一種鹽酸貝那普利組合物及其製備方法，製備過程包括固體發酵法和液體發酵法兩種，本發明利用麴黴CICC 2436產酶水解鹽酸貝那普利，其中部分鹽酸貝那普利的結構發生了改變，即鹽酸貝那普利的結構類似物，原鹽酸貝那普利在酶的作用下形成含鹽酸貝那普利和鹽酸貝那普利結構類似物的組合物，該組合物降血壓水平優於同濃度鹽酸貝那普利。
文檔編號C12R1/66GK101899485SQ20091008511
公開日2010年12月1日 申請日期2009年5月31日 優先權日2009年5月31日
發明者劉春麗, 鞏金妹, 段震文, 薛嵐, 郭樹仁 申請人:北京北大維信生物科技有限公司