一種生物抗菌劑及其製備方法與應用的製作方法

2023-07-19 01:22:16 1

專利名稱：一種生物抗菌劑及其製備方法與應用的製作方法
技術領域：
本發明屬於生物材料領域，尤其涉及一種生物抗菌劑及其製備方法與應用。
背景技術：
抗生素是由微生物或高等動植物在生活代謝中所產生的具有抗病原體或其它活性的一類次級代謝產物，是一類在很低濃度下可以殺死、抑制或幹擾其他微生物的化學物質。同時，抗生素也是一類特殊的化學製劑，自從1929年發現第一種抗生素青黴素以來，至今已找到約一萬種新抗生素。我國是抗生素使用大國，據2006-2007年度衛生部全國細菌耐藥監測結果顯示，我國醫院抗菌藥物年使用率高達74%。而在美英等發達國家，醫院的抗生素使用率僅為22%-25%。進一步的研究表明，中國感染性疾病佔全部疾病總發病數的49%，其中細菌感染性疾病僅佔20%左右，然而，現今70%的患者在住院期間都使用過至少一 種抗生素，其中外科患者幾乎人人都用抗生素，比例高達97%，也就是說絕大部分病例都存在濫用抗生素的問題。這種近乎畸形的抗生素使用率使得各種耐藥菌種層出不窮，許多菌株對於青黴素的耐藥性接近100%。這使中國成為世界上濫用抗生素問題最為普遍，也最為嚴重的國家之一，每年超過8萬人直接或間接死於濫用抗生素。此外，傳統的抗生素療法雖然對於特定菌株有選擇性，但對於體內的具體的作用位置並不具有靶向性，每經過一次抗生素療程，都有可能改變體內所有器官的菌落體系，並由此導致各種難以預計的嚴重後果。針對這一問題，一個可行的解決途徑是利用複合納米材料進行體內特定區域的定位抗菌治療。一些低毒性的微/納米尺度的材料，如氧化鋅，銀等，可以作為現有抗生素療法的輔助療法，對抗多種細菌感染，從而降低、甚至避免一系列由抗生素療法導致的副作用，如發燒、頭暈、噁心和過敏性等。然而，儘管目前已有一定篇幅的運用各種納米顆粒進行體內定位治療的報導，但很少有報導深入研究過如何提高這些體內抗菌劑的使用效率。許多納米抗菌劑雖然可以精確固定在指定區域，卻不能得到有效的分散，因而難以和致病菌充分接觸，在這種情況下，為了保證抗菌效率，就只能增加納米抗菌劑的投入量。如此一來，不僅增加了患者的痛苦和開銷，對其代謝系統也是一份額外的負擔。因此，有必要開發一種即可以精確固定在指定區域、又能夠在體內長時間保持分散狀態的高效生物抗菌劑。

發明內容
有鑑於此，本發明的目的在於針對現有技術的缺陷，提供一種既可以精確固定在指定區域又能夠在體內長時間保持分散狀態的高效生物抗菌劑及其製備方法與應用。為實現本發明的目的，本發明採用如下技術方案一種生物抗菌劑，由乳酸菌、Ag納米顆粒和磁性Fe3O4納米顆粒組成，其中，Ag納米顆粒包覆在磁性Fe3O4納米顆粒表面組成Ag/Fe304複合納米顆粒,Ag/Fe304複合納米顆粒通過氫鍵負載在乳酸菌表面。本發明所述生物抗菌劑由乳酸菌、Ag納米顆粒和磁性Fe3O4納米顆粒組成。
其中，乳酸菌作為載體本身密度較低，Ag/Fe304複合納米顆粒與乳酸菌結合之後使原本密度較高的磁性Ag/Fe304複合納米顆粒平均密度降低，與含有致病菌的溶液的密度相當，使乳酸菌所負載的磁性Ag/Fe304複合納米顆粒可以在無需額外分散處理(如震動、攪拌、超聲等)的條件下長時間的漂浮在含有致病菌的溶液內，從而與在溶液中漂浮的致病菌充分接觸，充分發揮其抑菌、抗菌能力，極大的提高生物抗菌劑對含有致病菌的溶液處理的實際操作中使用的便利性、經濟性和普適性。本發明所述乳酸菌表面負載有Ag/Fe304複合納米顆粒，其中的磁性Fe3O4納米顆粒可以在磁性作用下自由移動，因此提高了乳酸菌吸附抑菌體系即本發明所述負載有Ag/Fe3O4納米顆粒的乳酸菌液相移動能力，可以快速有效的集中在選定區域，有利於體內致病菌的緊急、高效處理。小尺寸的銀顆粒負載在尺寸較大的四氧化三 鐵磁性納米顆粒表面，使銀顆粒與外界的接觸面積得以放大。相較於相似尺寸的純銀納米顆粒，這種Ag/Fe304複合納米顆粒的排布方式，在保證抗菌性能的同時，大大減少了銀的用量，不僅降低了體系的製備成本，而且減少了由銀導致的可能的副作用的出現概率。此外，磁性Fe3O4納米顆粒表面的Ag納米顆粒的點綴不僅有利於複合納米顆粒在菌體表面的固定，更顯著提升了該體系的抗菌活性，使之在含致病菌的溶液中贏得生存競爭，充分發揮其抗菌、抑菌能力。本發明還提供了所述生物抗菌劑的製備方法為利用反向膠束法在磁性Fe3O4納米顆粒表面包覆一層銀納米顆粒，形成黑色的Ag/Fe304複合納米顆粒，利用3-氨基丙基三乙氧基矽烷在Ag/Fe304複合納米顆粒表面覆蓋氨基化基團，然後與乳酸菌發酵溶液充分接觸，使乳酸菌表面負載Ag/Fe304複合納米顆粒。本發明所述製備方法以磁性Fe3O4納米顆粒為基體製備複合納米顆粒，所述磁性Fe3O4納米顆粒的可以通過商業渠道獲得或採用現有技術公開的共沉澱法、沉澱氧化法、微乳液法、水熱法、機械研磨法、凝聚法、溶膠法等方法製備得到。在一個具體實施方案，本發明所述磁性Fe3O4納米顆粒為採用共沉澱法，以Fe2+、Fe3+和氨水為主要原料製得。在一個具體實施方案中,所述共沉澱法製備磁性Fe3O4納米顆粒包括如下步驟a、在氮氣保護下，將氨水加入到Fe2+與Fe3+的混合溶液中，使溶液pH值會10，在85 °C下快速攪拌；b、待反應溶液顏色變深後繼續攪拌100分鐘；C、在外磁場作用下磁力收集溶液中的黑色Fe3O4沉澱，重蒸水洗滌至中性，乾燥即得。共沉澱法製備磁性Fe3O4納米顆粒時，Fe2+與Fe3+的摩爾比直接影響產物的晶體結構。反應的理論摩爾比為Fe2+ :Fe3+=l: 2，但由於二價鐵離子容易氧化成三價鐵離子，而且還有許多複雜的中間反應和副產物，所以二價鐵離子應適當過量，因此，所述Fe2+與Fe3+的混合溶液中Fe2+與Fe3+的摩爾比優選為1:1. 75 2。本發明所述Fe2+和Fe3+可以來源於鐵的氯化物、硝酸鹽、醋酸鹽或硫酸鹽。在一個具體實施方案中，Fe2+和Fe3+分別來源FeCl2 4H20和FeCl3 6H20。本發明所述製備方法利用反向膠束法在磁性Fe3O4納米顆粒表面包覆銀納米顆粒。在具體實施方案中，本發明所述利用反向膠束法在磁性Fe3O4納米顆粒表面包覆一層銀納米顆粒包括如下步驟
I、將Fe3O4納米顆粒與含有Triton X-100、正己醇和環己烷的油包水微乳液相混合，再摻入硝酸銀溶液，反應30分鐘；II、加入硼氫化鈉溶液，並在室溫下攪拌3-8小時，然後加入過量丙酮使溶液中的產物沉澱；III、收集步驟2所得沉澱，乙醇和水洗滌，外置磁場收集黑色沉澱即得。其中，所述含有Triton X-100、正己醇和環己烷的油包水微乳液是指油包水微乳液中含有Triton X-100、正己醇和環己燒三種物質。所述Fe3O4納米顆粒與Triton X-100、正己醇和環己烷的摩爾比優選為1:14:14:75，所述Fe3O4納米顆粒與硝酸銀的摩爾比優選為 1:12. 5。本發明所述油包水微乳液的使用可以控制最終產物的尺寸大小。在一個具 體實施方案中，所述在磁性Fe3O4納米顆粒表面包覆一層銀納米顆粒的方法具體為通過機械攪拌的方式，將1001^、401111的四氧化三鐵納米顆粒與含有1.41^ Triton X-100、I. 4mL正己醇和7. 5mL環己烷的油包水微乳液相混合，20分鐘後，加入200 y L的0. IM的硝酸銀溶液，繼續攪拌30分鐘。然後加入250 ii L 0.20M的硼氫化鈉，在室溫下攪拌3-8小時，然後加入過量丙酮使溶液中的產物沉澱，所得沉澱經乙醇和水反覆洗滌，通過外置磁場收集即得Ag/Fe3O4複合納米顆粒。本發明所述製備方法利用3-氨基丙基三乙氧基矽烷在Ag/Fe304複合納米顆粒表面覆蓋氨基化基團。在具體實施方案中，本發明所述利用3-氨基丙基三乙氧基矽烷在Ag/Fe304複合納米顆粒表面覆蓋氨基化基團的方法具體為將Ag/Fe304複合納米顆粒與乙醇溶液混合，攪拌2-12h後用水和乙醇洗滌，外置磁場收集即得，其中，所述乙醇溶液含5v/v%3-氨基丙基三乙氧基矽烷和5v/v%水。其中，按g/mL計，所述Ag/Fe304複合納米顆粒與乙醇溶液的重量體積比優選為I 10。即所述含5v/v%3-氨基丙基三乙氧基矽烷和5v/v%水的乙醇溶液的加入量為每IgAg/Fe3O4 加入 10mL。本發明所述製備方法將氨基修飾的Ag/Fe304複合納米顆粒與乳酸菌發酵溶液充分接觸，氨基修飾的Ag/Fe304複合納米顆粒表面的氨基同乳酸菌表面的羧化物基團相結合形成氫鍵，通過Ag/Fe304複合納米顆粒與乳酸菌之間形成氫鍵可以使乳酸菌表面負載Ag/Fe3O4複合納米顆粒。另一方面，乳酸菌表面是一層帶負電的半透膜，容易與帶正電的Ag/Fe3O4複合納米顆粒相結合。因此，當氨基修飾的Ag/Fe304複合納米顆粒和與乳酸菌發酵溶液充分接觸，就可以使乳酸菌表面負載Ag/Fe304複合納米顆粒，得到表面負載有Ag/Fe304複合納米顆粒的乳酸菌。在一個具體實施方案中每25mL的乳酸菌發酵溶液中加入2mL濃度為0. 01 g/mL的氨基修飾的Ag/Fe304複合納米顆粒的水溶液。為避免氨基修飾的Ag/Fe304複合納米顆粒在發酵液中沉積，優選為在速度為200rpm的搖床中進行，且反應時間不少於半小時。本發明通過掃描電鏡觀察本發明所述製備方法製得的生物抗菌劑，可見乳酸菌的表面負載有許多直徑約為150nm的顆粒，通過透射電鏡觀察乳酸菌的表面負載的顆粒平均直徑約為150nm，且顆粒之間的尺寸均一性較好。此外，每個顆粒外部都有一圈顏色較淺的膜狀物質，其密度明顯低於顆粒中心的金屬內核，高分辨電鏡檢測顆粒金屬內核中包含有Fe和Ag兩種元素的晶格條紋，結合之前描述的實驗方案，可推斷該內核為Ag/Fe304複合納米顆粒。進一步進行相應的XRD分析，根據XRD圖譜中Fe和Ag元素對應峰的位置和強度，可知內核中的銀元素主要以零價的單質銀形式存在，而Fe3O4則在內核中的含量佔主導地位。由此可判定乳酸菌表面所負載的顆粒為Ag/Fe304複合納米顆粒。本發明還提供了上述製備方法製備的生物抗菌劑。本發明所述生物抗菌劑是一種整合有抗菌活性和磁力靶向能力的多功能體系。Ag納米顆粒的點綴可以提升該體系的抗菌活性；乳酸菌作為載體本身密度較低可以使結合磁性Ag/Fe304複合納米顆粒平均密度降低，使乳酸菌所負載的磁性Ag/Fe304複合納米顆粒可以在無需額外分散處理的條件下長時間的漂浮在含有致病菌的溶液內，從而與在溶液中漂浮的致病菌充分接觸，可以精確固定在指定區域、又能夠在體內長時間保持分散狀態，充分發揮其抑菌、抗菌能力。實驗表明，本發明所述生物抗菌劑可以長時間的懸浮在較高密度的含致病菌的模擬人體體內複雜且粘稠的混合溶液中，並和溶液中的致病菌充分接觸，抗菌活性要明顯強於對照組。因此，本發明提供了所述生物抗菌劑在抑制致病菌中的應用。優選的，所述致病菌 為大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、幽門螺桿菌或枯草桿菌。


圖I示本發明所述氨基修飾的Ag/Fe304複合納米顆粒的透射電鏡圖和X射線衍射圖及本發明所述生物抗菌劑掃描電鏡圖，其中，(a)為本發明所述氨基修飾的Ag/Fe304複合納米顆粒的掃描電鏡圖，其內插圖為內核部分的高分辨透射電鏡晶格表徵；(b)為(a)圖所示的本發明所述氨基修飾的Ag/Fe304複合納米顆粒的X射線衍射圖，橫坐標為2 9，縱坐標為X射線的強度；(C)為(b)圖所示的本發明所述生物抗菌劑的掃描電鏡圖；圖2示Ag/Fe304複合納米顆粒(I號燒杯)和本發明所述生物抗菌劑(2號燒杯)在含金黃色葡萄球菌的混合溶液中的分散能力對比圖，其中，a d為不同時間的分散情況，e和f為在外界磁場的作用下，Ag/Fe304複合納米顆粒和本發明所述生物抗菌劑的分散情況；圖3示用Ag/Fe304複合納米顆粒和本發明所述生物抗菌劑處理金黃色葡萄球菌的透射電鏡圖，其中(a)為用Ag/Fe304複合納米顆粒處理4小時後的金黃色葡萄球菌(30mL)的透射電鏡圖，(b)用半量的本發明所述生物抗菌劑處理2小時後的金黃色葡萄球菌(30mL)的透射電鏡圖，紅色箭頭指向為已經破損的金黃色葡萄球菌，內插圖為所選的放大圖；圖4示經過Ag/Fe304複合納米顆粒或本發明所述生物抗菌劑處理後的大腸桿菌(E. coli),金黃色葡萄球菌(S. aureus),幽門螺桿菌(H. pylori)以及枯草桿菌(B. subtilis)的存活率統計圖，其中，對照組為用Ag/Fe304複合納米顆粒處理4小時後存活率統計圖，試驗組為用半量的本發明所述生物抗菌劑處理2小時後存活率統計圖，每項實驗至少重複三次，圖表數據表示為平均值及其相對偏差。
具體實施例方式本發明實施例公開了一種生物抗菌劑及其製備方法與應用。本領域技術人員可以借鑑本文內容，適當改進工藝參數實現。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發明。本發明已經通過較佳實施例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本發明內容、精神和範圍內對本文所述的產品、方法和應用進行改動或適當變更與組合，來實現和應用本發明技術。為實現本發明的目的，本發明採用如下技術方案一種生物抗菌劑，由乳酸菌、Ag納米顆粒和磁性Fe3O4納米顆粒組成，其中，Ag納米顆粒包覆在磁性Fe3O4納米顆粒表面組成Ag/Fe304複合納米顆粒,Ag/Fe304複合納米顆粒通過氫鍵負載在乳酸菌表面。本發明所述生物抗菌劑的製備方法，包括如下步驟I、在氮氣保護下，將氨水加入到Fe2+與Fe3+的混合溶液中，使溶液pH值會10，在85°C下快速攪拌，待反應溶液顏色變深後繼續攪拌100分鐘，然後在外磁場作用下磁力收集溶液中的黑色Fe3O4沉澱，重蒸水洗滌至中性，乾燥製得磁性Fe3O4納米顆粒；
2、將步驟I所得的磁性Fe3O4納米顆粒與含有Triton X-100，正己醇以及環己烷的油包水(W/0)微乳液相混合，再加入硝酸銀溶液反應30分鐘，加入硼氫化鈉溶液在室溫下攪拌3-8個小時，隨後加入過量丙酮使溶液中的產物沉澱，經離心分離後，用乙醇和重蒸水反覆進行洗滌，最後在外磁場作用下磁力收集溶液中的黑色沉澱，重蒸水洗滌，乾燥製得Ag/Fe304複合納米顆粒；3、將步驟2所得的Ag/Fe304複合納米顆粒與含5v/v%3_氨基丙基三乙氧基矽烷和5v/v%水的乙醇溶液混合6小時後用二次水和乙醇分別進行洗滌，在外磁場作用下磁力收集氨基修飾的Ag/Fe304複合納米顆粒；4、在乳酸菌發酵溶液中加入步驟3所得的氨基修飾的Ag/Fe304複合納米顆粒在200rpm的搖床中培養半小時以上即得。為了進一步理解本發明，下面結合實施例對本發明進行詳細說明。實施例I :本發明所述生物抗菌劑的製備取43. IOmLl. 00mol/LFeCl2 4H20 溶液和 43. IOmL I. 75mol/LFeCl3 6H20 溶液混合，在氮氣保護下，加入25mL的25%氨水，在85°C下快速攪拌，反應溶液顏色變深，有棕色顆粒生成，繼續攪拌100分鐘。用強磁鐵來沉降顆粒分離上層清液，用蒸餾水反覆洗滌沉澱物，至洗滌的溶液pH為7左右。收集沉澱物置於真空乾燥箱中，在75°C真空乾燥5h得磁性Fe3O4納米顆粒。將ImL濃度為40mM的磁性Fe3O4納米顆粒與含有14mL Triton X-100,14mL正己醇以及75mL環己烷的油包水(W/0)微乳液相混合，再加入5mL濃度為0. IM的硝酸銀溶液反應30分鐘。加入2mL濃度為0. 2M的硼氫化鈉溶液，在室溫下攪拌3 8個小時。隨後加入過量丙酮使溶液中的產物沉澱，經離心分離後，用乙醇和重蒸水各洗滌兩次，最後在外磁場作用下磁力收集溶液中的黑色沉澱，重蒸水洗滌2次，收集沉澱物置於真空乾燥箱中，在75°C真空乾燥5h製得Ag/Fe304複合納米顆粒；取Ig製得的Ag/Fe304複合納米顆粒加入到IOmL含5v/v%APTES和5v/v%水的乙醇溶液中，充分攪拌6小時，用乙醇和重蒸水各洗滌兩次，然後在外磁場作用下磁力收集溶液中的黑色沉澱，重蒸水洗滌2次，收集沉澱物置於真空乾燥箱中，在75°C真空乾燥5h製得氨基修飾的Ag/Fe304複合納米顆粒；用注射器將製得的氨基修飾的Ag/Fe304複合納米顆粒分散加入到乳酸菌發酵溶液中，在200rpm的搖床中培養40min即得。對製得的氨基修飾的Ag/Fe304複合納米顆粒進行透射電鏡檢測和X射線衍射檢測，對製得的生物抗菌劑進行掃描電鏡圖，結果見圖I。由圖I可見，氨基修飾的Ag/Fe304複合納米顆粒均直徑約為150nm，且顆粒之間的尺寸均一性較好。此外，每個顆粒外部都有一圈顏色較淺的膜狀物質，其密度明顯低於顆粒中心的金屬內核，結合之前敘述的製備流程，可推斷外層為Ag-Fe3O4納米顆粒表面覆蓋的氨基化有機高分子層。對顆粒金屬內核進行電鏡檢測，結果可見內核中包含有Fe和Ag兩種元素的晶格條紋，分析內核為Ag/Fe304複合納米顆粒。根據X射線衍射圖譜中Fe和Ag元素對應峰的位置和強度，分析認為內核中的銀元素主要以零價的單質銀形式存在，而Fe3O4則在內核中的含量佔主導地位。由本發明圖Ic所示生物抗菌劑的掃描電鏡圖可見，氨基修飾的Ag/Fe304複合納米顆粒均勻地負載在乳酸菌表面上，同時由於外層氨基的保護作用，內核中的銀顆粒在短時間內對作為載體的乳酸菌表面沒有太大的破壞作用。實施例2 :本發明所述生物抗菌劑的分散性和抗菌性實驗 為了證明本發明所述生物抗菌劑在體內進行靶向性抗菌的潛在優越性。選用含有牛肉蛋白腖(5g/L),葡萄糖(5g/L),瓊脂(20g/L)以及複合維生素(10mg/L)的混合水溶液(pH=7. 1，37°C )模擬人體體內複雜且粘稠的液態環境，考察在此條件下，本發明所述生物抗菌劑對於四種常見致病菌(大腸桿菌，金黃色葡萄球菌，幽門螺桿菌和枯草桿菌)的處理能力。在每30mL含菌溶液中，添加5. 4mg的實施例I製得的生物抗菌劑(其中，有效抗菌成分Ag/Fe304複合納米顆粒的含量約為0. 6mg)，並考查其抗菌活性。同時，選擇2倍有效抗菌成分含量(Ag/Fe304複合納米顆粒的含量I. 2mg)的實施例I製得的Ag/Fe304複合納米顆粒作為對照組。每組實驗至少重複三次，統計結果見圖2 4.由圖2結果可見，由於Ag/Fe304複合納米顆粒本身密度較高，即便Ag/Fe304複合納米顆粒事先均勻分散在含菌液內，也將在短時間內沉積(圖2c I號燒杯)，透射電鏡觀察其抗菌成分難以和溶液中的致病菌充分接觸(圖3a)，因此，儘管作用時間達到4個小時，但是其相應的抗菌活性並不明顯，採用Ag/Fe304複合納米顆粒處理的致病菌的存活率約為採用本發明所述生物抗菌劑處理致病菌的存活率的兩倍(圖4對照組)。而本發明所述生物抗菌劑則可以長時間的懸浮在較高密度的含菌混合溶液中(圖2d 2號燒杯)，透射電鏡觀察其有效抗菌成分可以和溶液中的致病菌充分接觸(圖3b)，因此，儘管作用時間只有2小時，且抗菌成分僅是對照組的一半，但是其相應的抗菌活性要明顯強於對照組(圖4試驗組)。而由圖2f可見在外界磁場的控制下，本發明所述生物抗菌劑同樣可以方便的進行收集與分離(圖2d 2號燒杯)，因此，相較於Ag/Fe304複合納米顆粒，本發明所述生物抗菌劑可以用於體內的靶向性抗菌。以上實施例的說明只是用於幫助理解本發明的方法及其核心思想。應當指出，對於本技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明原理的前提下，還可以對本發明進行若干改進和修飾，這些改進和修飾也落入本發明權利要求的保護範圍內。
權利要求
1.一種生物抗菌劑，其特徵在於，由乳酸菌、Ag納米顆粒和磁性Fe3O4納米顆粒組成,其中,Ag納米顆粒包覆在磁性Fe3O4納米顆粒表面組成Ag/Fe304複合納米顆粒,Ag/Fe304複合納米顆粒通過氫鍵負載在乳酸菌表面。
2.一種生物抗菌劑的製備方法，其特徵在於，利用反向膠束法在磁性Fe3O4納米顆粒表面包覆一層銀納米顆粒，形成黑色的Ag/Fe304複合納米顆粒，利用3-氨基丙基三乙氧基矽烷在Ag/Fe304複合納米顆粒表面覆蓋氨基化基團，然後與乳酸菌發酵溶液充分接觸，使乳酸菌表面負載Ag/Fe304複合納米顆粒。
3.根據權利要求2所述製備方法，其特徵在於，所述磁性Fe3O4納米顆粒為採用共沉澱法以Fe2+、Fe3+和氨水為主要原料製得。
4.根據權利要求2所述製備方法，其特徵在於，所述利用反向膠束法在磁性Fe3O4納米顆粒表面包覆一層銀納米顆粒包括如下步驟 I、將Fe3O4納米顆粒與含有TritonX-100、正己醇和環己烷的油包水微乳液相混合，再摻入硝酸銀溶液，反應30分鐘； II、加入硼氫化鈉溶液，並在室溫下攪拌3-8小時，然後加入過量丙酮使溶液中的產物沉澱； III、收集步驟2所得沉澱，乙醇和水洗滌，外置磁場收集黑色沉澱即得。
5.根據權利要求4所述製備方法,其特徵在於，所述Fe3O4納米顆粒與TritonX-100、正己醇和環己燒的摩爾比為1:14:14:75。
6.根據權利要求4所述製備方法，其特徵在於，所述Fe3O4納米顆粒與硝酸銀的摩爾比為 1:12. 5。
7.根據權利要求2所述製備方法，其特徵在於，所述利用3-氨基丙基三乙氧基矽烷在Ag/Fe304複合納米顆粒表面覆蓋氨基化基團的方法具體為將Ag/Fe304複合納米顆粒與乙醇溶液混合，攪拌2-12h後用水和乙醇洗滌，外置磁場收集即得，其中，所述乙醇溶液含5v/v%3-氨基丙基三乙氧基矽烷和5v/v%水。
8.根據權利要求7所述製備方法,其特徵在於,按g/mL計,所述Ag/Fe304複合納米顆粒與乙醇溶液的重量體積比為1: 10。
9.權利要求21任意一項所述製備方法製備的生物抗菌劑。
10.權利要求I或9所述生物抗菌劑在抑制致病菌中的應用。
11.根據權利要求10所述應用，其特徵在於，所述致病菌為大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、幽門螺桿菌或枯草桿菌。
全文摘要
本發明屬於生物材料領域，公開了一種生物抗菌劑及其製備方法與應用。本發明所述生物抗菌劑由乳酸菌、Ag納米顆粒和磁性Fe3O4納米顆粒組成，其中，Ag納米顆粒包覆在磁性Fe3O4納米顆粒表面組成AgFe3O4複合納米顆粒；Ag/Fe3O4複合納米顆粒通過氫鍵負載在乳酸菌表面。Ag納米顆粒包覆在磁性Fe3O4納米顆粒表面可以提升抗菌活性，乳酸菌本身密度較低可以使乳酸菌所負載的磁性Ag/Fe3O4複合納米顆粒可以在無需額外分散處理的條件下長時間的漂浮在含有致病菌的溶液內，從而與溶液中漂浮的致病菌充分接觸，可以精確固定在指定區域、又能夠在體內長時間保持分散狀態，充分發揮其抑菌、抗菌能力。
文檔編號A01P3/00GK102697806SQ20121015412
公開日2012年10月3日 申請日期2012年5月17日 優先權日2012年5月17日
發明者楊秀榮, 王小磊 申請人:中國科學院長春應用化學研究所