大環肽作為C型肝炎病毒抑制劑的製作方法

2023-07-14 17:59:56 2

專利名稱：大環肽作為C型肝炎病毒抑制劑的製作方法
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本申請要求美國臨時申請序列號60/866,120(2006年11月16日申請)的權益。
本公開通常涉及抗病毒化合物，且更具體涉及可抑制由C型肝炎病毒(HCV)編碼的NS3蛋白酶(本文還指的是「絲氨酸蛋白酶」)功能的化合物，包含這種化合物的組合物和抑制NS3蛋白酶的功能的方法。
HCV是主要人類病原體，在世界範圍內，估計感染1.7億人，是1型愛滋病毒所感染數目的大致5倍。大部分這些HCV感染的個體形成嚴重的漸進性肝病，包括肝硬化和肝細胞癌。
目前，最有效的HCV治療使用α幹擾素和利巴韋林的組合，可在40％的患者中引起持續效果。最新的臨床結果表明，作為單療法，PEG化的α幹擾素優於未修飾的α幹擾素。然而，對於包括PEG化的α幹擾素和利巴韋林的聯用藥的實驗性治療方案，大部分患者的病毒載量不會持續降低。由此，對於治療HCV感染的有效療法，還有明顯和未滿足的需要。
HCV是正鏈RNA病毒。基於推斷的胺基酸序列和在5′非翻譯區的廣泛相似性的對比，已經將HCV分類為黃病毒科中的獨立種類。黃病毒科的所有成員具有包膜的病毒體，該病毒體含有正鏈RNA基因組，通過單個連續的開放讀框的轉譯，該基因組編碼所有已知的病毒特異性蛋白。
在核苷酸內和整個HCV基因組的編碼胺基酸序列中，發現了相當多的異質性。已經表徵了六個主要基因型，並且已經描述了50個以上的亞型。HCV的主要基因型在世界範圍內的分布是不同的，HCV的遺傳異質性的臨床意義仍然是難以捉摸的，儘管對於基因型在致病性和治療方面的可能效果進行了許多研究。
單鏈HCV RNA基因組的長度大約為9500個核苷酸，並且具有單個開放讀框(ORF)，其編碼大約3000個胺基酸的單個大的多蛋白。在受感染細胞中，這種多蛋白在許多位點被細胞和病毒蛋白酶裂解，產生結構和非結構(NS)性蛋白。就HCV來說，成熟型非結構蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)的產生受到兩種病毒蛋白酶的影響。第一個在NS2-NS3接合點裂解；第二個是包含在NS3的N-末端區域內的絲氨酸蛋白酶，並且介導在NS3下遊的所有隨後的裂解，在NS3-NS4A裂解位點兩者是以順式形式，對於剩餘的NS4A-NS4B NS4B-NS5A、NS5A-NS5B位點，是以反式形式。NS4A蛋白似乎可提供許多功能，充當NS3蛋白酶的輔因子，並且可能幫助NS3及其它病毒複製酶組分的膜定位。NS3蛋白與NS4A形成複合物對於有效的多蛋白加工是必不可少的，可以在所有位點提高分解蛋白的裂解。NS3蛋白還顯示出核苷三磷酸酶和RNA解旋酶活性。NS5B是依賴於RNA的RNA聚合酶，其涉及在HCV的複製中。
本公開提供了例如在與NS4A蛋白酶的組合中可抑制NS3蛋白酶的功能的肽化合物。進一步的，本公開描述了給予患者組合治療，使得按照本公開的化合物(其可有效抑制HCV NS3蛋白酶)可以與一或兩種具有抗HCV活性的其它化合物一起給予。
在第一個方面，本公開提供了式(I)的化合物
或其可藥用鹽，其中 R1選自烷氧基、羥基和-NHSO2R7； R2a和R2b獨立地選自氫和甲基； R3選自烯基，烷基，芳基，芳烷基，環烷基，(環烷基)烷基，雜環基和雜環基烷基；條件是，當R4是氫時，則R3不是雜環基； R4選自氫和羥基； R5選自氫、烷基和環烷基； R6選自氫，烷基，烷氧羰基，烷胺基羰基，烷基羰基，氨基羰基，芳氧羰基，環烷基氧基羰基，二烷胺基羰基，滷代烷氧基羰基，滷代烷基，滷代烷基羰基，雜環基氧基羰基和(NRaRb)磺醯基； R7選自烷基，芳基，環烷基，(環烷基)烷基，雜環基和-NRaRb；其中環烷基和(環烷基)烷基的環烷基部分任選被一個、兩個或三個獨立選自下列的基團取代烯基，烷氧基，烷氧基烷基，烷基，芳烷基，芳基羰基，氰基，環烯基，(環烷基)烷基，滷素，滷代烷氧基，滷代烷基和(NReRf)羰基；和其中Ra和Rb獨立地選自氫，烷氧基，烷基，芳基，芳烷基，環烷基，(環烷基)烷基，滷代烷基，雜環基和雜環基烷基；和其中Re和Rf獨立地選自氫，烷基，芳基，芳烷基和雜環基；其中芳基、芳烷基的芳基部分和雜環基任選被一或兩個獨立地選自烷氧基、烷基和滷素的取代基取代；和 Q是C3-9飽和或不飽和鏈，任選包含一個至三個獨立地選自O、S(O)m和NR9的雜原子，其中m是0、1或2，和R9選自氫，烷氧基，烷氧羰基，烷基，烷基羰基，烷基磺醯基，氨基羰基，芳基磺醯基，環烷基，(環烷基)烷基，環烷基氧基，二烷胺基羰基，二烷胺基羰基烷基，滷代烷基和雜環基羰基。
在第一個方面的第一個實施方案中，本公開提供了式(I)的化合物或其可藥用鹽，其中R4是羥基。
在第一個方面的第二個實施方案中，本公開提供了式(I)的化合物或其可藥用鹽，其中R1是-NHSO2R7。在第一個方面的第三個實施方案中，R7是環烷基。
在第一個方面的第四個實施方案中，本公開提供了式(I)的化合物或其可藥用鹽，其中R2a和R2b是氫。
在第一個方面的第五個實施方案中，本公開提供了式(I)的化合物或其可藥用鹽，其中Q是包含零個雜原子的C5-7不飽和鏈。在第一個方面的第六個實施方案中，Q是包含零個雜原子的C6不飽和鏈。
在第二個方面，本公開提供了式(II)的化合物
或其可藥用鹽，其中 R1是-NHSO2R7； R2a和R2b是氫； R3選自烯基，烷基，芳基，芳烷基，環烷基，(環烷基)烷基，雜環基和雜環基烷基；條件是，當R4是氫時，則R3不是雜環基； R4選自氫和羥基； R5是氫； R6是烷氧羰基； R7選自烷基，芳基，環烷基，(環烷基)烷基，雜環基和-NRaRb；其中Ra和Rb獨立地選自氫，烷氧基，烷基，芳基，芳烷基，環烷基，(環烷基)烷基，滷代烷基，雜環基和雜環基烷基；和 Q是C3-9飽和或不飽和鏈，任選包含一個至三個獨立地選自O、S(O)m和NR9的雜原子，其中m是0、1或2，和R9選自氫，烷氧基，烷氧羰基，烷基，烷基羰基，烷基磺醯基，氨基羰基，芳基磺醯基，環烷基，(環烷基)烷基，環烷基氧基，二烷胺基羰基，二烷胺基羰基烷基，滷代烷基和雜環基羰基。
在第二個方面的第一個實施方案中，本公開提供了式(II)的化合物或其可藥用鹽，其中R4是羥基。
在第二個方面的第二個實施方案中，本公開提供了式(II)的化合物或其可藥用鹽，其中R7是環烷基。
在第二個方面的第三個實施方案中，本公開提供了式(II)的化合物或其可藥用鹽，其中Q是包含零個雜原子的C6不飽和鏈。
在第三個方面，本公開提供了選自下列的化合物
或其可藥用鹽。
在第四個方面，本公開提供了包含式(I)化合物或其可藥用鹽和可藥用載體的組合物。在第四方面的第一個實施方案中，組合物進一步包含至少一種具有抗HCV活性的其它化合物。在第四個方面的第二個實施方案中，其它化合物的至少一種是幹擾素或利巴韋林。在第四個方面的第三個實施方案中，幹擾素選自幹擾素α2B、PEG化的幹擾素α、複合(consensus)幹擾素、幹擾素α2A和淋巴樣幹擾素tau。
在第四個方面的第四個實施方案中，本公開提供了組合物，該組合物包含式(I)的化合物或其可藥用鹽、可藥用載體和至少一種具有抗HCV活性的其它化合物，其中其它化合物的至少一種選自白細胞間介素2、白細胞間介素6、白細胞間介素12、可增加1型輔助性T細胞響應形成的化合物、幹擾性的RNA、反義RNA、咪奎莫特、利巴韋林、次黃嘌呤核苷5′-一磷酸脫氫酶抑制劑、金剛烷胺和金剛烷乙胺。
在第四個方面的第五個實施方案中，本公開提供了組合物，該組合物包含式(I)的化合物或其可藥用鹽、可藥用載體和至少一種具有抗HCV活性的其它化合物，其中其它化合物的至少一種可有效抑制靶向的功能，用於治療HCV感染，靶向選自HCV金屬蛋白酶、HCV絲氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解螺旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV入口、HCV組裝、HCV出口、HCV NS5A蛋白和IMPDH。
在第五個方面，本公開提供了治療患者HCV感染的方法，該方法包括給予患者治療有效量的式(I)化合物或其可藥用鹽。在第五個方面的第一個實施方案中，該方法進一步包括給予至少一種具有抗HCV活性的其它化合物，其它化合物在給予式(I)化合物或其可藥用鹽之前、之後或與其同時給予。在第二個實施方案中，其它化合物中的至少一種是幹擾素或利巴韋林。在第三個實施方案中，幹擾素選自幹擾素α2B、PEG化的幹擾素α、複合幹擾素、幹擾素α2A和成淋巴細胞幹擾素tau。
在第五個方面的第四個實施方案中，本公開提供了治療患者HCV感染的方法，該方法包括給予患者治療有效量的式(I)化合物或其可藥用鹽和至少一種具有抗HCV活性的其它化合物，其中其它化合物的至少一種在給予式(I)化合物或其可藥用鹽之前、之後或與其同時給予，至少一種其它化合物選自白細胞間介素2、白細胞間介素6、白細胞間介素12、可增加1型輔助性T細胞響應形成的化合物、幹擾性的RNA、反義RNA、咪奎莫特、利巴韋林、次黃嘌呤核苷5′-一磷酸脫氫酶抑制劑、金剛烷胺和金剛烷乙胺。
在第五個方面的第五個實施方案中，本公開提供了治療患者HCV感染的方法，該方法包括給予患者治療有效量的式(I)化合物或其可藥用鹽和至少一種具有抗HCV活性的其它化合物，其中至少一種其它化合物在給予式(I)化合物或其可藥用鹽之前、之後或與其同時給予，其中至少一種其它化合物可有效抑制靶向的功能，對於治療HCV感染，靶向選自HCV金屬蛋白酶、HCV絲氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解螺旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV入口、HCV組裝、HCV出口、HCV NS5A蛋白和IMPDH。
在第六個方面，本公開提供了組合物，其包含式(I)的化合物或其可藥用鹽、具有抗HCV活性的一種、兩種、三種、四種或五種其它化合物和可藥用載體。在第六個方面的第一個實施方案中，該組合物包含三或四種具有抗HCV活性的其它化合物。在第六個方面的第二個實施方案中，該組合物包含一或兩種具有抗HCV活性的其它化合物。
在第七個方面，本公開提供了治療患者HCV感染的方法，該方法包括給予患者治療有效量的式(I)化合物或其可藥用鹽和具有抗HCV活性的一種、兩種、三種、四種或五種其它化合物，其它化合物在給予式(I)化合物或其可藥用鹽之前、之後或與其同時給予。在第七個方面的第一個實施方案中，該方法包括給予三或四種具有抗HCV活性的其它化合物。在第七個方面的第二個實施方案中，該方法包括給予一或兩種具有抗HCV活性的其它化合物。
本公開的其它方面可以包括本文所公開實施方案的合適組合。
其它方面和實施方案可以在本文提供的說明書中得到。
應該將本公開的說明書視為與法律和化學鍵合原理相一致。在有些情況下，可能需要除去氫原子，以便在任何給定位置容納取代基。
應該理解，本公開所涵蓋的化合物是可合適穩定地用作藥物試劑的那些化合物。
說明書中引用的所有專利、專利申請和參考文獻在本文中以其整體引入作為參考。在不一致的情況下，以本公開(包括定義)為準。
在本說明書中使用的下列術語具有指明的含義 本文使用的術語「烯基」是指含有至少一個碳-碳雙鍵的2至6個碳原子的直鏈或支鏈基。
本文使用的術語「烷氧基」是指通過氧原子與母體分子部分連接的烷基。
本文使用的術語「烷氧基烷基」是指被一個、兩個或三個烷氧基取代的烷基。
本文使用的術語「烷氧羰基」是指通過羰基與母體分子部分連接的烷氧基。
本文使用的術語「烷基」是指衍生自含有1至6個碳原子的直鏈或支鏈飽和烴的基團。
本文使用的術語「烷基氨基」是指-NHR，其中R是烷基。
本文使用的術語「烷胺基羰基」是指通過羰基與母體分子部分連接的烷基氨基。
本文使用的術語「烷基羰基」是指通過羰基與母體分子部分連接的烷基。
本文使用的術語「烷基磺醯基」是指通過磺醯基與母體分子部分連接的烷基。
本文使用的術語「氨基」是指-NH2。
本文使用的術語「氨基羰基」是指通過羰基與母體分子部分連接的氨基。
本文使用的術語「芳基」是指苯基或其中一個或兩個環是苯基的雙環稠環系統。雙環稠環系統由與4至6元芳香或非芳香碳環稠合的苯基組成。本公開的芳基可以通過基團中的任何可取代的碳原子與母體分子部分相連接。芳基的代表性例子包括但不局限於茚滿基、茚基、萘基、苯基和四氫萘基。本公開的芳基可以任選被一個、兩個、三個、四個或五個獨立選自下列的取代基取代烯基，烷氧基，烷氧羰基，烷基，第二個芳基，芳烷基，芳氧基，氰基，氰基烷基，滷素，滷代烷氧基，滷代烷基，雜環基，雜環基烷基，硝基和氧代；其中第二個芳基、芳烷基和芳氧基的芳基部分、雜環基和雜環基烷基的雜環基部分可以進一步任選被一個、兩個、三個、四個或五個獨立選自下列的取代基取代烯基，烷氧基，烷基，氰基，滷素，滷代烷氧基，滷代烷基，硝基和氧代。
本文使用的術語「芳烷基」是指被一個、兩個或三個芳基取代的烷基。
本文使用的術語「芳基羰基」是指通過羰基與母體分子部分連接的芳基。
本文使用的術語「芳氧基」是指通過氧原子與母體分子部分連接的芳基。
本文使用的術語「芳氧羰基」是指通過羰基與母體分子部分連接的芳氧基。
本文使用的術語「芳基磺醯基」是指通過磺醯基與母體分子部分連接的芳基。
本文使用的術語「羰基」是指-C(O)-。
本文使用的術語「氰基」是指-CN。
本文使用的術語「氰基烷基」是指被一個、兩個或三個氰基取代的烷基。
本文使用的術語「環烯基」是指具有三個至十四個碳原子和零個雜原子的非芳香化的、部分不飽和單環的、雙環的或三環系統。環烯基的代表性的例子包括但不局限於環己烯基、八氫萘基和降冰片烯基。
本文使用的術語「環烷基」是指具有三個至十四個碳原子和零個雜原子的飽和單環、雙環或三環烴環系統。環烷基的代表性的例子包括但不局限於環丙基、環戊基、二環[3.1.1]庚基和金剛烷基。
本文使用的術語「環烷基氧基」是指通過氧原子與母體分子部分連接的環烷基。
本文使用的術語「環烷基氧基羰基」是指通過羰基與母體分子部分連接的環烷基氧基。
本文使用的術語「(環烷基)烷基」是指被一個、兩個或三個環烷基取代的烷基。
本文使用的術語「二烷基氨基」是指-NR2，其中每個R是烷基。兩個R基團可以相同或不同。
本文使用的術語「二烷胺基羰基」是指通過羰基與母體分子部分連接的二烷基氨基。
本文使用的術語「二烷胺基羰基烷基」是指被一個、兩個或三個二烷胺基羰基取代的烷基。
本文使用的術語「滷素」和「滷代」是指F、Cl、Br或I。
本文使用的術語「滷代烷氧基」是指通過氧原子與母體分子部分連接的滷代烷基。
本文使用的術語「滷代烷氧基烷基」是指被一個、兩個或三個滷代烷氧基取代的烷基。
本文使用的術語「滷代烷氧基羰基」是指通過羰基與母體分子部分連接的滷代烷氧基。
本文使用的術語「滷代烷基」是指被一個、兩個、三個或四個滷素原子取代的烷基。
本文使用的術語「滷代烷基羰基」是指通過羰基與母體分子部分連接的滷代烷基。
本文使用的術語「雜環基」是指含有一個、兩個或三個獨立地選自氮、氧和硫雜原子的5、6或7元環。五員環具有零至兩個雙鍵，六和七元環具有零至三個雙鍵。術語「雜環基」還包括雙環基團，其中雜環基環與4至7元(優選4至6元)芳香或非芳香化碳環或另一個單環雜環基稠合。本公開的雜環基可以通過基團中的碳原子或氮原子與母體分子部分相連接。雜環基的例子包括但不局限於苯並噻吩基，呋喃基，咪唑基，二氫吲哚基，吲哚基，異噻唑基，異噁唑基，嗎啉基，噁唑基，哌嗪基，哌啶基，吡唑基，吡啶基，吡咯烷基，吡咯並吡啶基，吡咯基，噻唑基，噻吩基和硫嗎啉基。本公開的雜環基可以任選被一個、兩個、三個、四個或五個獨立選自下列的取代基取代烯基，烷氧基，烷氧羰基，烷基，芳基，芳烷基，芳氧基，氰基，氰基烷基，滷素，滷代烷氧基，滷代烷基，第二個雜環基，雜環基烷基，硝基和氧代；其中芳基、芳烷基和芳氧基的芳基部分、第二個雜環基和雜環基烷基的雜環基部分可以進一步任選被一個、兩個、三個、四個或五個獨立選自下列的取代基取代烯基，烷氧基，烷基，氰基，滷素，滷代烷氧基，滷代烷基，硝基和氧代。
本文使用的術語「雜環基烷基」是指被一個、兩個或三個雜環基取代的烷基。
本文使用的術語「雜環基羰基」是指通過羰基與母體分子部分連接的雜環基。
本文使用的術語「雜環基氧基」是指通過氧原子與母體分子部分連接的雜環基。
本文使用的術語「雜環基氧基羰基」是指通過羰基與母體分子部分連接的雜環基氧基。
本文使用的術語「羥基」是指-OH。
本文使用的術語「硝基」是指-NO2。
本文使用的術語「-NRaRb」是指通過氮原子與母體分子部分連接的兩個基團Ra和Rb。Ra和Rb獨立地選自氫，烷氧基，烷基，芳基，芳烷基，環烷基，(環烷基)烷基，滷代烷基，雜環基和雜環基烷基。
本文使用的術語「(NRaRb)磺醯基」是指通過磺醯基與母體分子部分連接的-NRaRb。
本文使用的術語「-NReRf」是指通過氮原子與母體分子部分連接的兩個基團Re和Rf。Re和Rf獨立地選自氫、烷基、芳基、芳烷基和雜環基；其中芳基、芳烷基的芳基部分和雜環基任選被一或兩個獨立地選自烷氧基、烷基和滷素的取代基取代。
本文使用的術語「(NReRf)羰基」是指通過羰基與母體分子部分連接的-NReRf。
本文使用的術語「氧代」是指＝O。
本文使用的術語「磺醯基」是指SO2。
本公開的化合物可以以前體藥物形式存在。本文使用的術語「前體藥物」表示可通過在血液中水解而快速體內轉化為母體化合物的化合物。本公開的前體藥物包括母體分子上的羥基的酯、母體分子上的羧基的酯和母體分子上的胺的醯胺。
本公開的化合物可以以可藥用鹽形式存在。本文使用的術語「可藥用鹽」表示本公開化合物的鹽或兩性離子形式，其是水或油溶的或可分散的，在可靠的醫學判斷範圍內，其適合於接觸患者的組織，沒有過量的毒性、刺激性、變態反應或其它問題或併發症，與合理的益處/危險比例相稱，並且對於它們的預定用途是有效的。鹽可以在化合物的最終分離和純化期間製備，或通過合適鹼性官能團與合適酸的反應來單獨製備。代表性的酸加成鹽包括乙酸鹽，己二酸鹽，海藻酸鹽，檸檬酸鹽，天冬氨酸鹽，苯甲酸鹽，苯磺酸鹽，硫酸氫鹽，丁酸鹽，樟腦酸鹽，樟腦磺酸鹽；二葡糖酸鹽，甘油磷酸鹽，半硫酸鹽，庚酸鹽，己酸鹽，甲酸鹽，富馬酸鹽，鹽酸鹽，氫溴酸鹽，氫碘酸鹽，2-羥基乙磺酸鹽，乳酸鹽，馬來酸鹽，均三甲苯磺酸鹽，甲磺酸鹽，亞萘基磺酸鹽，煙酸鹽，2-萘磺酸鹽，草酸鹽，棕櫚酸鹽，果膠酯酸鹽，過硫酸鹽，3-苯基丙酸鹽，苦味酸鹽，特戊酸鹽，丙酸鹽，琥珀酸鹽，酒石酸鹽，三氯乙酸鹽，三氟乙酸鹽，磷酸鹽，穀氨酸鹽，碳酸氫鹽，對甲苯磺酸鹽和十一烷酸鹽。可以用於形成可藥用加成鹽的酸的例子包括無機酸例如鹽酸、氫溴酸、硫酸和磷酸，和有機酸例如草酸、馬來酸、琥珀酸和檸檬酸。
鹼加成鹽可以在化合物的最終分離和純化期間製備，通過酸性基團與合適鹼例如氫氧化物、金屬陽離子的碳酸鹽或碳酸氫鹽進行反應，或與氨或有機伯、仲或叔胺反應。可藥用鹽的陽離子包括鋰、鈉、鉀、鈣、鎂和鋁陽離子，以及非毒性的季胺陽離子，例如銨，四甲銨，四乙銨，甲胺，二甲胺，三甲胺，三乙胺，二乙胺，乙胺，三丁基胺，吡啶，N，N-二甲苯胺，N-甲基哌啶，N-甲基嗎啉，二環己基胺，普魯卡因，二苄胺，N，N-二苄基苯乙胺和N，N′-二苄基乙二胺。可用於形成鹼加成鹽的其它代表性的有機胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶和哌嗪。
本文使用的術語「抗HCV活性」是指化合物可有效治療HCV病毒。
術語「本公開的化合物」和等效表達是指式(I)的化合物和其可藥用對映體、非對映體和鹽。同樣，對於中間體，在上下文中容許的情況下其含義包括它們的鹽。
術語「患者」包括人及其它哺乳動物。
術語「藥物組合物」是指一種組合物，其包含本公開的化合物與至少一種其它藥物載體的組合，載體即助劑、賦形劑或載體，例如稀釋劑，防腐劑，填料，流動調節劑，崩解劑，溼潤劑，乳化劑，懸浮劑，甜味劑，調味劑，香料，抗菌劑，抗真菌劑，潤滑劑和分配劑，這取決於給藥模式和劑型。可以使用例如列於Remington′s Pharmaceutical Sciences，18th ed.，Mack Publishing Company，Easton，PA(1999)中的組分。
本文使用的短語「藥學可接受的」指的是那些化合物、物質、組合物和/或劑型，在可靠的醫學判斷範圍內，其適合與患者的組織接觸，沒有過分的毒性、刺激性、變態反應或其它問題或併發症，與合理的危險/益處比例相稱。
術語「治療有效量」是指足以顯示有意義的患者益處例如病毒載量持續減少的各個活性組分的總量。當單獨給予應用於單一活性組分時，該術語是指單獨的組分。當應用於組合中時，該術語是指可引起治療效果的活性組分的組合數量，不論組合給予、連續給予或同時給予。
術語「治療」是指(i)防止疾病、障礙或病症在患者中出現，其可能被預示患該疾病、障礙和/或病症，但還沒有確診；(ii)抑制疾病、障礙或病症，即延滯其發展；和/或(iii)減輕疾病、障礙或病症，即引起疾病、障礙和/或病症的衰退。
在用於命名本公開化合物的情況下，本文使用的符號P1′、P1、P2、P2*、P3和P4標記蛋白酶抑制劑結合的胺基酸殘基的相對位置(相對於天然肽裂解基質的結合位置)。裂解發生在天然基質的P1和P1′之間，其中非主要位置表示從肽天然裂解位點的C-末端起始向N-末端延伸的胺基酸；而主要位置從裂解位點標識的N-末端發出向C-末端延伸。例如，P1′是指離開裂解位點的C-末端的右手端的第一個位置(即N-末端第一個位置)；而P1從C-末端裂解位點的左側開始編號，P2從C-末端起始的第二個位置，等等)。(參見Berger A.& Schechter I.，Transactions ofthe Royal Society London series(1970)，B257，249-264]。
不對稱中心存在於本公開的化合物中。例如，化合物可以包括下式的P1環丙基單元
其中C1和C2各自表示環丙基環的1和2位置處的不對稱碳原子。

R2與羰基同側R2與羰基同側
R2與醯胺基同側 R2與醯胺基同側 應該理解，本公開包括具有抑制HCV蛋白酶能力的所有立體化學形式或其混合物。
本公開的某些化合物還可以存在不同的穩定構造形式，這種形式是可以分離的。扭轉不對稱性是由於非對稱單鍵周圍的阻旋作用，例如由於空間位阻或環張力，可以分離不同的構象異構體。本公開包括這些化合物的每個構象異構體和其混合物。
本公開的某些化合物可以存在兩性離子形式，並且本公開包括這些化合物的每種兩性離子形式和其混合物。
當用於治療時，可以以原始化學製劑形式給予治療有效量的式(I)化合物以及其可藥用鹽，這可以提供藥物組合物的活性組分。相應地，本公開進一步提供了藥物組合物，其包含治療有效量的式(I)化合物或其可藥用鹽和一或多種可藥用載體、稀釋劑或賦形劑。式(I)的化合物和其可藥用鹽如上所述。載體、稀釋劑或賦形劑必須是可接受的，與製劑的其它組分不矛盾，並且對其接受者無害。按照本公開的另一個方面，提供了製備藥物製劑的方法，該方法包括將式(I)的化合物或其可藥用鹽與一或多種可藥用載體、稀釋劑或賦形劑混合。
藥物製劑可以以單位劑量形式提供，每單位劑量含有預先確定數量的活性組分。對於預防和治療HCV介導的疾病，典型的單療法是每天給予大約0.01和大約250毫克每千克(「mg/kg」)體重之間的劑量水平的本公開化合物，優選在每天大約0.05和大約100mg/kg體重之間。典型地，本公開的藥物組合物每天可以給予大約1至大約5次，或者連續輸液。這種給藥形式可以用作慢性或急性治療。可以與載體物質組合來製備單一劑型的活性組分量可以變化，這取決於所治療病症、病症的嚴重程度、給藥時間、給藥途徑、所使用化合物的排洩速度、治療持續時間和患者的年齡、性別、重量和病症。優選的單位劑量製劑是含有本文上面列舉的活性組分的日劑量或亞劑量、或其合適部分的那些製劑。通常，用基本上小於化合物的最佳劑量的小劑量來開始治療。而後，少量地增加劑量，直到在這種情況下達到最佳效果為止。通常，最優選，以通常得到抗病毒有效結果而不引起任何不良或有害副作用的濃度水平給予化合物。
當本公開的組合物包含本公開化合物與一或多種其它治療或預防性藥劑的組合時，化合物和其它藥劑兩者通常以單療法方案中通常劑量的大約10至150％之間的劑量水平存在，且更優選在大約10和80％之間。
藥物製劑可以適合於任何合適途徑給藥，例如口服(包括口腔或舌下)、直腸、鼻部、局部(包括面頰、舌下、或透皮)、陰道或腸胃外(包括皮下、皮內、肌注、關節內、滑膜內、胸骨內、鞘內、病灶內、靜脈內或皮內注射或輸液)途徑。這種製劑可以通過藥學領域已知的任何方法製備，例如使活性組分與載體或賦形劑組合。
適合於口服的藥物製劑可以以離散單元形式提供，例如膠囊或片劑；粉末或顆粒；在水或非水液體中的溶液或懸浮液；食用泡沫或whips；或水包油型液體乳膠或油包水乳化液。
例如，對於片劑或膠囊形式的口服給藥，可以將活性藥物組份與口服、無毒的可藥用惰性載體例如乙醇、丙三醇、水等等結合。粉末是如下製備的將化合物磨碎至合適大小的粉末，與類似磨碎的藥學載體例如食用碳水化合物例如澱粉或甘露糖醇混合。還可以存在調味劑、防腐劑、分散和著色劑。
膠囊可以如下製備製備如上所述的粉末混合物，並填充到成形的凝膠殼中。可以將助流劑和潤滑劑例如膠態矽石、滑石粉、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣或固體聚乙二醇加入到粉末混合物中，而後進行填充。當攝取膠囊時，還可以加入崩解或增溶劑例如瓊脂、碳酸鈣或碳酸鈉，以提高藥物的利用率。
此外，當要求或需要時，還可以將合適結合劑、潤滑劑、崩解劑和著色劑結合進混合物中。合適的結合劑包括澱粉，凝膠，天然糖例如葡糖或β-乳糖，玉米甜味劑，天然和合成樹膠例如阿拉伯膠、黃芪膠或海藻酸鈉，羧甲纖維素，聚乙二醇等等。用於這些劑型中的潤滑劑包括油酸鈉、氯化鈉等等。崩解劑包括但不限於澱粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤土、黃原膠等等。如下配製片劑例如製備粉末混合物，造粒或製成棒條，加入潤滑劑和崩解劑，並擠壓成為片劑。如下製備粉末混合物將合適粉碎的化合物與如上所述的稀釋劑或基質混合，任選與下列混合結合劑例如羧甲纖維素、藻酸、凝膠或聚乙烯吡咯烷酮，溶液阻滯劑例如石蠟烴、再吸收促進劑例如季鹽和/或吸收劑例如膨潤土、高嶺土或磷酸氫鈣。可以將粉末混合物如下進行造粒用結合劑例如糖漿、澱粉糊、acadia膠漿或纖維素或聚合物質的溶液溼潤，並迫使其通過篩。作為造粒的替代性方法，可以使粉末混合物流過壓片機，結果是，不完全成形的棒條被分裂成顆粒。藉助於加入硬脂酸、硬脂酸鹽、滑石粉或礦物油，可以將顆粒潤滑，以防止粘住片劑胎模。然後將潤滑的混合物壓縮成片劑。還可以將本公開的化合物與易流動的惰性載體結合，並直接壓縮成片劑，不用經歷造粒或形成棒條步驟。可以提供清潔的或不透明防護塗層(由密封的片膠層、糖塗層或聚合材料塗層和石蠟的拋光塗層組成)。可以將染料加入到這些塗層中，以區別不同的單位劑量。
可以製備劑量單位形式的口服液體例如溶液、糖漿和酏劑，以使給定數量包含預定數量的化合物。可以通過將化合物溶解在合適調味的水溶液中來製備糖漿，而酏劑是通過使用無毒的賦形劑來製備的。還可以加入增溶劑和乳化劑(例如乙氧基化異十八烷醇和聚氧乙烯山梨糖醇醚)、防腐劑、調味添加劑(例如薄荷油或天然甜味料或糖精或其它人工甜味料)，等等。
如果合適的話，口服劑量單位製劑可以是微囊密封的。還可以製備延長或持續釋放的製劑，例如，通過在聚合物、石蠟等等中塗漬或嵌入顆粒性物質。
還可以以脂質體遞送系統的形式給予式(I)的化合物和其可藥用鹽，例如小單層脂質體、大單層脂質體和多層氣泡。脂質體可以由各種磷脂例如膽固醇、十八烷胺硬脂胺或磷脂醯膽鹼形成。
式(I)的化合物和其可藥用鹽也可以利用化合物分子結合的單一載體形式的單克隆抗體來遞送。本化合物也可以與作為目標藥物載體的可溶性聚合物結合。這種聚合物可以包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羥基丙基甲基丙烯醯基醯胺酚、聚羥基乙基天冬醯胺酚或被棕櫚醯殘基取代的聚環氧乙烷聚賴氨酸。此外，本化合物可以與可生物降解的聚合物結合，用於實現藥物的控制釋放，例如聚乳酸、聚ε己內酯(polepsilon caprolactone)、聚羥基丁酸、聚原酸酯、聚乙縮醛、聚二氫吡喃、聚氰基丙烯酸酯和交聯的或兩親性的水凝膠的嵌段共聚物。
可以以離散貼片形式(預定保持與接受者的表皮密切接觸延長的一段時間)提供適合於透皮給藥的藥物製劑。例如，利用通常在Pharmaceutical Research，3(6)，318(1986)中描述的離子電滲療法，活性組分可以從貼片中遞送。
可以將適合於局部給藥的藥物製劑配製為油膏、乳膏、懸浮液、洗劑、粉末、溶液、軟膏、凝膠劑、噴霧劑、氣霧劑或油。
對於治療眼睛或其它外部組織，例如口腔和皮膚，優選，以局部油膏或乳膏的形式施用製劑。當配製油膏時，活性組分可以與石蠟或水可互溶的軟膏基質一起使用。或者，可以將活性組分與水包油型膏用底物或油包水型基質一起配製為乳膏。
適合於局部給予眼睛的藥物製劑包括滴眼劑，其中活性組分溶解或懸浮在合適載體中，尤其是水溶劑。
適合於局部給予口腔的藥物製劑包括糖錠、軟錠劑和漱口劑。
適合於直腸給予的藥物製劑可以以栓劑或灌腸劑形式提供。
適合於鼻部給藥的藥物製劑(其中載體是固體)包括具有例如20至500微米範圍粒徑的粗粉，其是採用鼻吸的方式給予，即從接近鼻子的粉末容器中快速吸入通過鼻腔。對於鼻噴入或滴鼻劑形式的合適製劑(其中載體是液體)，包括活性組分的水或油溶液。
適合於吸入給藥的藥物製劑包括細粒或霧劑，其可以利用各種型式的可計量的、劑量加壓的噴霧器、霧化器或吹入器來產生。
適合於陰道給藥的藥物製劑可以以陰道栓、塞、乳膏、凝膠劑、軟膏、泡沫或噴霧劑的形式提供。
適於腸胃外給藥的藥物製劑包括含水和無水無菌注射液，其可以含有抗氧化劑、緩衝液、抑菌劑和溶質，使製劑與預定接受者的血液等滲壓；和可以包含懸浮劑和增稠劑的含水和非水無菌的懸浮液。製劑還可以提供在單位劑量或多劑量容器中，例如密封的安瓿和管瓶，並且可以保存在冷凍乾燥(凍幹)條件下，在使用之前，只需要加入無菌的液體載體，例如水，用於立刻注射。臨時的注射液和懸浮液可以用無菌粉末、顆粒和片劑製備。
應該理解，除了上面特別提及的組分之外，製劑可以包含本領域對於所述製劑類型慣用的其它藥劑，例如適合於口服的那些製劑可以包含調味劑。
下面表1列出了可以與本公開化合物一起給予的化合物的一些說明性例子。在組合治療中，本公開的化合物可以與其它抗HCV活性化合物一起給予，可以聯合或單獨給予，或通過將化合物組合為組合物來給予。
表1 本公開的化合物還可以用作實驗室試劑。對於病毒複製試驗的設計、動物試驗系統的驗證和結構生物學研究，該化合物可以有助於提供研究工具，從而增加對HCV疾病機理的認識。進一步的，本公開的化合物可有效用於建立或確定其它抗病毒化合物的結合位點，例如，利用競爭性抑制。
本公開的化合物還可以用於治療或預防物質的病毒汙染，因此可降低接觸到這種物質的實驗室或醫務人員或患者的病毒感染危險，這種物質例如血液、組織、手術器械和服裝、實驗儀器和服裝、和血液收集或輸液裝置和材料。
當通過合成方法或通過代謝過程(包括存在於人或動物體中的那些(體內)或體外存在的過程)製備時，本公開包括具有式(I)的化合物。
通常用於鑑別本文所公開化合物的化學縮寫包括Bn苄基；Boc叔丁氧羰基{Me3COC(O)}；BSA牛血清白蛋白；CDI羰二咪唑；DBU1，8-二氮雜雙環[5.4.0]-十一-7-烯；CH2Cl2＝DCM二氯甲烷；TBME叔丁基甲醚；DEAD偶氮二羧酸二乙酯；DIAD二異丙基偶氮基二羧酸酯；DIEA二異丙基乙胺；DIPEA二異丙基乙胺；4-DMAP4-二甲基氨基吡啶；DCC1，3-二環己基碳二亞胺；DMF二甲基甲醯胺；DMSO二甲亞碸；DPPA二苯基膦醯基疊氮化物；Et乙基；EtOH乙醇；EtOAc乙酸乙酯；Et2O二乙醚；Grubb′s催化劑雙(三環己基膦)亞苄基二氯化釕(IV)；Grubb′s二代催化劑三環己基膦[1，3-雙(2，4，6-三甲基苯基)-4，5-二氫咪唑-2-亞基][亞苄基]二氯化釕(IV)；HATU[O-(7-氮雜苯並三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸鹽；HBTU[O-(1H-苯並三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸鹽；HOBT，1-羥基苯並三唑；HOAT1-羥基-7-氮雜苯並三唑；HPLC高效液相色譜；MS質譜；Me甲基；MeOH甲醇；NMMN-甲基嗎啉；NMPN-甲基吡咯烷；Pr丙基；PPA多磷酸；TBAF四-正丁基銨氟化物；1，2-DCE或DCE1，2-二氯乙烷；TFA三氟乙酸；THF四氫呋喃。
用於合成本公開化合物的起始原料為本領域技術人員所知，並且可以容易地製備或可商購。
下面列出的下列方法為說明性目的而提供，不是用來限制權利要求的範圍。應該認識到，在製備這種化合物時，必需使用慣用的保護基來保護官能團，然後除去保護基，提供本公開的化合物。有關按照本公開的使用保護基的細節為本領域技術人員所知。
如反應路線1所示，可以使用本公開的中間體例如二肽(1)，製備式(I)的化合物。在該方法的第一步中，使用酸例如HCl，在溶劑例如醚中，將(1)的Boc保護的氮脫保護，提供相應的游離胺2。隨後使用偶合劑例如HATU，在溶劑例如二氯甲烷中，胺(2)可以與胺基酸(3)偶合，提供三肽中間體(4)。應注意，在某些情況下，中間體例如(3)是可商購的，或者這種化合物可以容易地通過本領域已知的方法、以外消旋或手性方式製備。在式(I)化合物的結構中，關鍵轉化是大環化過程，其中通用結構(4)的中間體轉變為通用結構(5)的中間體。在引用的常規實施例中，中間體(4)轉化為(5)可能受分子內部的烯烴易位反應的影響。這種類別的反應在本領域已被充分確立，因此，已經開發了許多烯烴易位催化劑，並且可商購。例如，二烯(4)轉化為大環(5)可能受到用足夠數量Grubb′s第一代烯烴易位催化劑的處理的影響(在溶劑例如二氯甲烷或二氯乙烷中)。在(4)至(5)的轉化的某些例子中，可能需要加熱反應混合物，以便實現這種環化過程。然後，通過兩步方法，中間體(5)轉變為式(I)的化合物例如(7)。在這種方法的第一步中，中間體(5)的酯官能團水解為相應的羧酸(6)。這種轉化可以通過皂化反應實現，其中在THF、甲醇和水的混合物中用鹼例如氫氧化鋰處理(5)。通過所示的與磺醯胺的簡單偶合反應，得到的酸(6)可以轉變為式(I)的化合物。例如，本領域沿用已久的是，在溶劑例如二氯甲烷中，用CDI處理羧酸例如(6)，原位產生活性中間體，當用磺醯胺處理該活性中間體時，提供(7)，即式(I)的化合物。
反應路線1
如果在上述最後的偶合過程即在(6)至(7)的轉化中，R7SO2NH2本體是磺醯胺衍生物，例如RaRbNSO2NH2，那麼可以使用其它偶合方法。在其中，使用鹼例如雙六甲基乙矽烷鋰(在溶劑例如THF中)，磺醯胺中間體(1)(反應路線2)首先去質子化。然後將得到的磺醯胺陰離子(2)的THF溶液加入到含有活化羧酸的上述反應混合物中。然後將該反應混合物攪拌幾小時，提供需要的醯基磺醯胺(7)。
反應路線2
式(I)的化合物還可以轉變為其它的式I化合物，如本文所描述。這種方法的例子示於反應路線3中，其中式I的化合物(1)(其在P4位置攜帶Boc基團)轉變為式I的化合物(3)(其中所述化合物在P4位置攜帶脲基團)。(1)至(3)的轉化可以用兩步方法進行，首先，在溶劑例如二氯甲烷中，用酸例如TFA處理(1)，(1)轉化為胺(2)。在一當量鹼的存在下，可以用異氰酸酯處理得到的胺TFA鹽，提供式I的化合物(3)，其中P3部分用脲封端。如先前所注釋，本領域技術人員可以認識到，中間體(2)可以用作製備式(I)化合物的起始原料，其中P3基團用醯胺或氨基甲酸酯封端。使用由胺形成所述P4官能團的標準條件，可以獲得所述式(I)化合物的結構。
反應路線3
製備P2中間體和式(I)化合物的非限制性方法示於下面反應路線中。在具體實施例中給出的所述中間體、反應條件和方法廣泛地適用於其它取代型式的化合物。例如，在反應路線4的式(I)化合物中找到的P2單元的合成，可以按照所定義的合成路徑來製備。在其中，用有機金屬試劑例如格氏試劑(或者烷基或芳基鋰物種，或者烷基或芳基鋅物種)處理可商購的N-Boc-4-氧代-L-脯氨酸，提供中間體(2)，其中脯氨酸的C4位置攜帶R3取代基和游離的三級羥基。然後中間體(2)轉變為式(I)的化合物。
反應路線4
式(I)的化合物(其中R4是氫)可以由相應的式(I)化合物(其中R4是羥基)合成。或者，式(I)的化合物(其中R4是氫)可以由用於製備式(I)化合物(其中R4是羥基)的任何中間體合成。例如，其中R4是氫的式(I)化合物可以如反應路線5所示來製備。所述化合物(3)可以由相應的羥基類似物(1)製備。由化合物例如(1)形成化合物例如(3)的方法要求脯氨酸C4羥基的還原或脫氧。對於醇的還原和/或脫氧，特別是叔醇，有相當多的確定技術可以提供由化合物例如(1)形成化合物例如(3)。例如，在下列參考文獻中，已經報導了醇直接還原為相應的烷烴(反應路線5的方法1)J.Org.Chem.2001，66，7741。在其中描述了醇還原為烷烴，其中在溶劑例如二氯乙烷中用氯代二苯基矽烷和催化數量的三氯化銦處理所述醇，提供相應的烷烴。所述反應可以在室溫下進行，但在某些情況下可能要求加熱。由式(I)化合物(其中R4是羥基)形成式(I)化合物(其中R4是氫)的其它方法如反應路線5的方法2所顯示。在其中，化合物例如(1)首先轉變為活化醇(2)，和這些中間體還原為相應的烷烴(例如使用Barton脫氧方法)。或者，如(2)所示的活化醇可以還原成相應的烷烴，例如使用還原劑。在反應路線5中的(1)至(3)的轉化的這些方法對於本領域技術人員來說是眾所周知的。
反應路線5
應注意，有機金屬試劑對脯氨酸衍生物1的酮部分進行加成(反應路線6)在本領域是充分確立的。例如，Hruby和同事(J.Org.Chem.2001，66，3593)描述了苯基溴化鎂對反應路線6的通用結構(1)的中間體進行加成。這些發現提供了下列證據當使用叔丁基酯基作為C2羧基部分的保護基時，獲得所需要的1，2加成物((2)，反應路線6)的最佳產率。此外，在關於加成反應的立體化學結果的X-射線晶體衍射形式中，該工作提供了明顯的證據。具體地說，由於上述格氏試劑對酮(1)加成，獲得單一產物，其中C4羥基和C2羧基假定為五元環周圍的順式相對取向。由此結構測定可推斷，在反應路線6的結構(1)的條件下，R3M對(1)的酮進行加成的表面選擇性是α。即，有機金屬對(1)中羰基的反面(底面)有選擇地加成，可以提供具有所顯示立體化學的相應叔醇(2)。
反應路線6
Hruby的上述工作描述了具體格氏試劑對(1)的衍生物的加成(反應路線6)。然而，各種格氏試劑對脯氨酸(1)的加成包括在本公開中。在本領域，描述有機金屬試劑(包括格氏試劑)對酮進行加成的文獻是相當多的，並且概括在綜述中，例如Comprehensive Organic FunctionalGroup Transformations.2卷SynthesisCarbon with one heteroatomattached by a single bond.Alan.R.Katritzky等人主編，1995年，2.02章，37頁。這種類別的反應還描述在Comprehensive Organic Synthesis中。Barry M Trost主編，1卷Additions to C-X pi-bonds(1部分)，1991年。
本領域最新的研究提供了進一步優化格氏試劑在對酮的加成反應中的條件，並且這些工作可以在本公開中使用。例如，Ishihara和同事(Org.Lett.2005，7卷，No.4,573)最近描述了鎂鹽Ate型複合物的形成和應用性。鎂鹽Ate型複合物R3MgLi源自于格氏試劑和烷基鋰。如Ishihara所描述，在對酮的反應中，這些複合物提供了1，2加成物的出色產率。在一個單獨研究中，Knochel和同事(Angew.Chem Int.Ed.2006，45，497)描述了在與有機鎂試劑的結合中使用可溶性鑭系鹽例如LnCl3。這些鑭系鹽的存在可導致對於羰基化合物的1，2加成反應的效率提高。在對羰基化合物的簡單加成中，這些工作和在其中引用的參考文獻形成了優化格氏反應的現有技術，並且在本公開中充當重要的資料來源。
也應注意，大量有機金屬化合物可參與對酮的加成反應。包括在該工作中的是試劑例如芳基鋰、烷基鋰和雜芳基鋰試劑，其在對羰基部分進行1，2方式加成是眾所周知的。例如，在Dondoni和同事的最近研究(J.Org.Chem.2005，70，9257)中，使用BuLi將苯並噻唑鋰化，並且將得到的C2-鋰物種以1，2方式對內酯進行加成。利用類似鋰化的苯並噻唑，可以預料以1，2方式對反應路線6的酮(1)進行加成，提供中間體例如(2a)。
本領域技術人員可以認識到，衍生自雜環例如噁唑和噻唑和咪唑的有機金屬化合物也可以參與對酮(1)的1，2加成反應。有相當多的文獻定義了對於這些雜環系統中的每一個所使用的獨特條件，並且這種信息本領域技術人員可容易地得到。例如，在對酮的加成反應中，使用衍生自苯並噁唑或噁唑的有機金屬試劑，要求使用鋰鎂鹽。Bayh和同事的這些最新研究的具體內容描述在J.Org.Chem.，2005，70，5190中。苯並噁唑對反應路線6的酮(1)的加成可以提供中間體例如(2b)。
有大量文獻描述了使用各類衍生自雜環的有機金屬試劑對酮進行加成。例如，Behinda和同事的工作(Tet.Lett.42，2001，647)描述了鋰化苯並咪唑的形成和其對簡單內酯的加成。同樣，在對反應路線6的酮(1)的加成反應中，使用這種鋰化的苯並咪唑可以提供中間體例如(2c)。此外，Kawasaki和同事的最近研究(Bioorganic and Medicinal Chem.Lett.13，2003，87)描述了一系列鋰化的芳香雜環化合物的形成和它們對於活化醯胺的加成反應。同樣，在對反應路線6的酮(1)的加成反應中，使用這些鋰化的雜芳環中間體可以提供中間體(2d-2k)。
在對酮(1)的1，2加成反應中，使用衍生自聯芳或雜芳基-芳基系統的有機金屬化合物也與本公開有關。這種類別的有機金屬試劑對酮(1)的加成可以提供中間體例如(2l)和(2m)。應注意，在本公開的範例中，可能需要合成聯芳或雜芳基有機金屬化合物，隨後在對反應路線6的酮(1)的加成反應中使用。本領域技術人員可以了解描述這種類型的有機金屬化合物和其前體物製備的大量文獻。例如，Chinchilla和同事的最新綜述(Chem.Rev.2004，104，2667)描述了金屬化雜環的製備和它們的應用性。製備聯芳或雜芳基-芳基系統的基礎化學常常使用Suzuki類偶合反應。Gregory Fu發表的一系列文獻描述了這種偶合反應的目前工藝水平，這些參考文獻進一步參考文獻如下JACS 2004，126，1340；JACS，2002，124，13662；Angew.Chem.Int.Ed.2002，41，No.11,1945；Angew.Chem.Int.Ed.2002，41，No.20,3910；JACS 2002，122，4020；JACS2001，123，10099；Org.Lett.2001，Vol.3，No.26,4295；Angew.Chem.Int.Ed.1998，37，No.24,3387。除了這一系列著作之外，該領域的關鍵性綜述是容易獲得的，例如Rossi在Synthesis 2004，No.15,2419中的綜述。
實施例 現在與一些實施方案結合來描述本公開，這些實施方案不限制本公開的範圍。相反，本公開包括可以包含在權利要求書範圍內的所有的替換、改進和等效內容。由此，包括具體實施方案的下列實施例可以舉例說明本公開的一個實踐，當然，這些實施例是為了舉例說明某些實施方案的目的，並且提供其過程和概念方面的最有用和容易理解的說明。
溶液百分數表達重量與體積關係，溶液比例表達體積與體積關係，除非另有說明。在Bruker 300、400或500MHz波譜儀上記錄核磁共振(NMR)譜；以百萬分之一報導化學位移(δ)。按照Still′s快速色譜技術(J.Org.Chem.1978，43，2923)，在矽膠(SiO2)上進行快速色譜。
實施例1 磺醯胺的製備
向氯代異氰酸磺醯酯(1當量)的THF冷(-20℃)攪拌溶液中加入水(1當量)(在THF中)，並將得到的溶液升溫至0℃，製備中間體氨磺醯基氯。向此溶液中加入無水Et3N(1當量)，而後加入必要的仲胺(1當量)。將反應混合物加熱至室溫，然後過濾，旋轉蒸發濾液，得到所需要的磺醯胺。然後使所述磺醯胺與羧酸偶合，提供所需要的醯基磺醯胺。
實施例2 製備醯基磺醯胺中間體的具體方法
向(1R，2S)1-叔丁氧羰基氨基-2-乙烯基-環丙烷羧酸(217mg，1.194mmol)的THF(5mL)溶液中加入CDI(290mg，1.791mmol)，並將反應混合物回流加熱45分鐘。在另一個圓底燒瓶中，將LiHMDS(1.0M溶液，在己烷中，2.4mL，2.4mmol)加入到N-乙基甲基磺醯胺(330mg，2.388mmol)的THF(5mL)溶液中，在室溫下攪拌反應混合物1小時。將兩個反應混合物合在一起，在室溫下攪拌2小時。加入水，以猝滅反應，用EtOAc提取反應溶液。分離有機相，用MgSO4乾燥。蒸發溶劑，得到粗品，將其用製備HPLC純化，得到所需要的N-醯基磺醯胺。然後將N-醯基磺醯胺溶於4N HCl的二噁烷(2mL)溶液中，在室溫攪拌4小時。蒸發溶液，得到淡褐色的油形式的HCl鹽。(112mg，33％產率)。1HNMR(400Mz，CD3OD)δ1.16(t，J＝7.21Hz，3H)，1.68(dd，J＝10.03，7.83Hz，1H)，2.15(m，1H)，2.37(m，1H)，2.89(s，3H)，3.30(m，2H)，5.31(d，J＝10.27Hz，1H)，5.42(d，J＝17.12Hz，3H)，5.68(m，1H)..LC-MS(保留時間0.883min.)，MS m/z 270(M+Na+)。
實施例3 外消旋(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽的製備(方法A和方法B)
利用下列的方法A和B中的每一個製備外消旋的所命名化合物。
方法A 甘氨酸乙酯的N-苄基亞胺的製備
將甘氨酸乙酯鹽酸鹽(303.8g，2.16mole)懸浮在叔丁基甲基醚(1.6L)中。加入苯甲醛(231g，2.16mole)和無水硫酸鈉(154.6g，1.09mole)，使用冰水浴將混合物冷卻至0℃。用30分鐘逐滴加入三乙胺(455mL，3.26mole)，在室溫攪拌混合物48小時。然後通過加入冰凍水(1L)來猝滅反應，分離有機層。用叔丁基甲基醚(0.5L)提取水相，用飽和NaHCO3水溶液(1L)和鹽水(1L)的混合物洗滌合併的有機相。用MgSO4乾燥溶液，真空濃縮，得到392.4g N-苄基亞胺產物濃黃色油，其可直接在下一步使用。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ1.32(t，J＝7.1Hz，3H)，4.24(q，J＝7.1Hz，2H)，4.41(d，J＝1.1Hz，2H)，7.39-7.47(m，3H)，7.78-7.81(m，2H)，8.31(s，1H)。
外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環丙烷羧酸乙酯的製備
用60分鐘向叔丁醇鋰(84.06g，1.05mol)的無水甲苯(1.2L)懸浮液中逐滴加入甘氨酸乙酯的N-苄基亞胺(100.4g，0.526mol)和反式-1，4-二溴-2-丁烯(107.0g，0.500mol)的無水甲苯(0.6L)的混合物。加入完畢後，通過加入水(1L)和叔丁基甲基醚(TBME，1L)來猝滅深紅混合物。分離水相，再次用TBME(1L)提取。合併有機相，加入1N HCl(1L)，在室溫下攪拌混合物2小時。分離有機相，用水(0.8L)提取。然後合併水相，用鹽(700g)飽和，加入TBME(1L)，將混合物冷卻至0℃。然後通過逐滴加入10N NaOH，將攪拌混合物鹼化至pH值14，分離有機層，用TBME(2x500mL)提取水相。將合併的有機提取物乾燥(MgSO4)，濃縮至1L體積。向此游離胺溶液中加入BOC2O或二碳酸二叔丁基酯(131.0g，0.6mol)，在室溫攪拌混合物4天。將額外的二碳酸二叔丁基酯(50g，0.23mol)加入到反應中，回流混合物3小時，然後冷卻至室溫過夜。將反應混合物用MgSO4乾燥，真空濃縮，得到80g粗品。通過快速色譜(2.5Kg SiO2，用1％至2％MeOH/CH2Cl2洗脫)純化殘餘物，得到57g(53％)外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環丙烷羧酸乙酯黃色油，當在冰箱中靜置時，其凝固1H NMR(CDCl3，300MHz)δ1.26(t，J＝7.1Hz，3H)，1.46(s，9H)，1.43-1.49(m，1H)，1.76-1.82(br m，1H)，2.14(q，J＝8.6Hz，1H)，4.18(q，J＝7.2Hz，2H)，5.12(dd J＝10.3，1.7Hz，1H)，5.25(br s，1H)，5.29(dd，J＝17.6，1.7Hz，1H)，5.77(ddd，J＝17.6，10.3，8.9Hz，1H)；MS m/z254.16(M-1)。
外消旋(1R，2S)/(1S，2R)1-氨基-2-乙烯基環丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽的製備
將N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環丙烷羧酸乙酯(9.39g，36.8mmol)溶於4N HCl/二噁烷(90mL，360mmol)中，在室溫攪拌2小時。濃縮反應混合物，提供(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽，定量產率(7g，100％)。1H NMR(甲醇-d4)δ1.32(t，J＝7.1，3H)，1.72(dd，J＝10.2，6.6Hz，1H)，1.81(dd，J＝8.3，6.6Hz，1H)，2.38(q，J＝8.3Hz，1H)，4.26-4.34(m，2H)，5.24(dd，10.3，1.3Hz，1H)5.40(d，J＝17.2，1H)，5.69-5.81(m，1H)。
方法B 外消旋N-Boc-1-氨基-2-乙烯基環丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽的製備
在-78℃，向叔丁醇鉀(11.55g，102.9mmol)的THF(450mL)溶液中加入商購的甘氨酸乙酯的N，N-二苄基亞胺(25.0g，93.53mmol)的THF(112mL)溶液中。將反應混合物加熱至0℃，攪拌40分鐘，然後冷卻到-78℃。向此溶液中加入反式-1，4-二溴-2-丁烯(20.0g，93.50mmol)，在0℃攪拌混合物1小時，冷卻到-78℃。加入叔丁醇鉀(11.55g，102.9mmol)，將混合物立即加熱至0℃，再攪拌一小時，而後真空濃縮。將粗品接納在Et2O(530mL)中，加入1N HCl水溶液(106mL，106mmol)，在室溫將得到的雙相混合物攪拌3.5小時。分離各層，用Et2O(2x)洗滌水層，用飽和NaHCO3水溶液鹼化。用Et2O(3x)提取所需要的胺，將合併的有機提取物用鹽水洗滌，乾燥(MgSO4)，真空濃縮，獲得游離胺。將該物質用4N HCl的二噁烷溶液(100mL，400mmol)處理，濃縮，得到(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽褐色半固體(5.3g，34％產率)，其與方法A獲得的物質相同，只不過存在少量未鑑別的芳香雜質(8％)。
實施例4 N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環丙烷羧酸乙酯的拆分
拆分A 向磷酸鈉緩衝液的水溶液(0.1M，4.25升(「L」)，pH值8)(放在12升夾套反應器中，在39℃保持，以300rpm進行攪拌)中加入511克Alcalase 2.4L(大約425mL)(Novozymes North America Inc.)。當混合物的溫度達到39℃時，通過加入50％NaOH/水，將pH值調節至8.0。然後在40分鐘期間內加入外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環丙烷羧酸乙酯(85g)的850mL DMSO溶液。然後將反應溫度在40℃保持24.5小時，在此期間，使用50％NaOH/水，在1.5小時和19.5小時的時點將混合物的pH值調節至8.0。24.5小時之後，測定酯的對映過量是97.2％，將反應冷卻至室溫(26℃)，攪拌過夜(16小時)，而後測定酯的對映過量是100％。然後用50％NaOH將反應混合物的pH值調節至8.5，並將得到的混合物用MTBE(2x2L)提取。然後將合併的MTBE提取物用5％NaHCO3(3x100mL)、水(3x100mL)洗滌，真空蒸發，得到對映體純的N-Boc-(1R，2S)/-1-氨基-2-乙烯基環丙烷羧酸乙酯淺黃色固體(42.55g；純度97％@210納摩爾(「nM」)，不包含酸；100％對映體過量(「ee」)。
然後用50％H2SO4將得自於提取過程的水層酸化至pH值2，用MTBE(2x2L)提取。用水(3x100mL)洗滌MTBE提取物，蒸發，得到酸淺黃色固體(42.74g；純度99％@210nM，不包含酯)。


拆分B 在24孔平皿的孔(容積10ml/孔)中，向0.5mL 100毫摩爾(「mM」)Heps·Na緩衝液(pH值8.5)中加入0.1mL Savinase 16.0L(蛋白酶，得自於Bacillus clausii)(Novozymes North America Inc.)和外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環丙烷羧酸乙酯(10mg)的0.1mL DMSO溶液。將平皿密封，在40℃、在250rpm下培養。18小時之後，如下測定酯的對映過量是44.3％除去0.1mL反應混合物，並與1mL乙醇較好地混合；離心之後，用手性HPLC分析10微升(「μl」)上清液。向剩餘的反應混合物中加入0.1mL DMSO，在40℃、在250rpm下額外培養平皿3天，而後將4mL乙醇加入到孔中。離心之後，用手性HPLC分析10μl上清液，測定酯的對映過量是100％。
拆分C 在24孔平皿的孔(容積10ml/孔)中，向0.5mL 100mM Heps·Na緩衝液(pH值8.5)中加入0.1mL Esperase 8.0L(蛋白酶，得自於Bacillushalodurans(Novozymes North America Inc.)和外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環丙烷羧酸乙酯(10mg)的0.1mL DMSO溶液。將平皿密封，在40℃、在250rpm下培養。18小時之後，如下測定酯的對映過量是39.6％除去0.1mL反應混合物，並與1mL乙醇較好地混合；離心之後，用手性HPLC分析10微升上清液。向剩餘的反應混合物中加入0.1mL DMSO，在40℃、在250rpm下額外培養平皿3天，而後將4mL乙醇加入到孔中。離心之後，用手性HPLC分析10μl上清液，測定酯的對映過量是100％。
用下面的方式進行樣品分析 1)樣品製備大約0.5mL反應混合物與10體積的EtOH較好地混合。離心之後，將10μl上清液注射到HPLC柱上。
2)轉化測定 柱YMC ODS A，4.6x50毫米(「mm」)，S-5μm 溶劑A，1mM HCl/水；B，MeCN 梯度30％B，1min；30％至45％B，0.5min；45％B，1.5min；45％至30％B，0.5min。
流速2ml/min UV檢測210nM 保留時間酸，1.2min；酯，2.8min。
3)酯的對映過量測定 柱CHIRACEL OD-RH，4.6x150mm，S-5μm 流動相MeCN/50mM HClO4/水(67/33) 流速0.75ml/min。
UV檢測210nM。
保留時間 (1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環丙烷羧酸，5.2min； 消旋體(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環丙烷羧酸乙酯，18.5min和20.0min； (1R，2S)-1-氨基-2-乙烯基環丙烷羧酸乙酯，18.5min。
拆分D 在20升夾套反應器中，將5L 0.3M磷酸鈉緩衝液(pH值8)保持在38℃，在130rpm下攪拌。將4升Alcalase 2.4L(Novozymes North AmericaInc.)和1升DI水加入到反應器中。當混合物的溫度接近38℃時，用10NNaOH將pH值調節至7.8。在1小時期間內，通過加入漏鬥將外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環丙烷羧酸乙酯(500克)的5升DMSO溶液加入到反應器中。然後將反應溫度調節至48℃。21小時之後，酯的對映過量達到99.3％。在24小時處停止加熱，將反應慢慢地冷卻至室溫(大約25℃)，攪拌過夜。然後用10N NaOH將反應混合物的pH值調節至8.5，並將混合物用MTBE(2x4L)提取。用5％NaHCO3(3x400mL)和水(3x400mL)洗滌合併的MTBE提取物，蒸發，得到對映體純的N-Boc-(1R，2S)/-1-氨基-2-乙烯基環丙烷羧酸乙酯淺黃色結晶(259g；純度96.9％@210nM，不包含酸；100％ee)。
拆分E 在20升夾套反應器中，將10L 0.1M磷酸鈉緩衝液(pH值8)保持在40℃，在360rpm下攪拌。將1.5升Alcalase 2.4L(Novozymes NorthAmerica Inc.)加入到反應器中。當混合物的溫度接近38℃時，用10NNaOH將pH值調節至8.0。在1小時期間內，通過加入漏鬥將外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環丙烷羧酸乙酯(200克)的2升DMSO溶液加入到反應器中。然後將反應溫度調節至40℃。3小時之後，用10N NaOH將pH值調節至8.0。21小時之後，將反應冷卻至25℃。用10N NaOH將反應混合物的pH值調節至8.5，並將混合物用MTBE(2x5L)提取。用5％NaHCO3(3x500mL)和水(3x200mL)洗滌合併的MTBE提取物，得到110克黃色油。將油在真空條件下、在室溫下放置，得到對映體純N-Boc-(1R，2S)/-1-氨基-2-乙烯基環丙烷羧酸乙酯無色長棒結晶(101g；純度97.9％@210nM，不包含酸；100％ee)。
晶體結構對映體純的N-Boc-(1R，2S)/-1-氨基-2-乙烯基環丙烷羧酸乙酯以單晶分析為特徵(X射線NB#52795-093，編號634592N1)。沒有形成絕對構型，因缺乏已知的手性中心或較重原子。通過醯胺基和羰基氧原子之間的分子間氫鍵，沿著結晶的a-軸心形成鏈結構(N...O 3.159

)。
N-Boc-(1R，2S)-1-氨基-2-乙烯基環丙烷羧酸乙酯的結構
N-Boc-(1R，2S)-1-氨基-2-乙烯基環丙烷羧酸乙酯的結構
結晶數據實驗性的 化學式C13H21N1O4結晶 晶系正交晶 結晶來源MTBE 空間群P212121 結晶說明無色棒狀 a＝5.2902(1)

α＝90° 晶體大小(mm)0.12X 0.26X 0.30 b＝13.8946(2)

β＝90° 數據收集 c＝19.9768(3)

γ＝90° 溫度(K)293 V＝1468.40(4)

θmax(°)65.2(Cu Kα) Z＝4dx＝1.155g cm-3 所測定的反射值7518 晶胞參數的反射值6817獨立反射的值2390(Rint＝0.0776) 晶胞參數的範圍(°)2.2-65.2 觀測的反射值(I≥22284 吸收係數(mm-1)0.700 吸收修正(Tmin-Tmax)0.688-1.000 拆分F 在20升夾套反應器中，將5L 0.2M硼酸鈉緩衝液(pH值8)保持在45℃，在400rpm下攪拌。將3升DI水和4升Savinase 16L(EX類型)(Novozymes North America Inc.)加入到反應器中。當混合物的溫度接近45℃時，用10N NaOH將pH值調節至8.5。在40分鐘期間內，通過加入漏鬥將外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環丙烷羧酸乙酯(200克)的2升DMSO溶液加入到反應器中。然後將反應溫度調節至48℃。2小時之後，用10N NaOH將pH值調節至9.0。在18小時，酯的對映過量達到72％，用10N NaOH將pH值調節至9.0。在24小時，將溫度降低至35℃。在42小時，將溫度升至48℃，用10N NaOH將pH值調節至9.0。在48小時處停止加熱，將反應慢慢地冷卻至室溫(大約25℃)，攪拌過夜。在66小時，反應混合物的pH值是8.6。用MTBE(2x4L)提取混合物。用5％NaHCO3(3x300mL)和水(3x300mL)洗滌合併的MTBE提取物，蒸發，得到對映體純的N-Boc-(1R，2S)/-1-氨基-2-乙烯基環丙烷羧酸乙酯淺黃色結晶(101A g；純度95.9％@210nM，不包含酸；98.6％ee)。
實施例5 步驟11(R)-氨基-2(S)-乙烯基環丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽的製備
在N2氛圍中，在室溫，將1(R)-叔丁氧羰基氨基-2(S)-乙烯基環丙烷羧酸乙酯(8.5g，33.3mmol)與200mL 4N HCl/二噁烷(Aldrich)一起攪拌3小時。減壓除去溶劑，保持溫度低於40℃。得到6.57g(～100％)1(R)-氨基-2(S)-乙烯基環丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽淡褐色的固體。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ1.31(t，J＝7.0Hz，3H)，1.69-1.82(m，2H)，2.38(q，J＝8.8Hz，1H)，4.29(q，J＝7.0Hz，2H)，5.22(d，J＝10.3Hz，1H)，5.40(d，J＝17.2Hz，1H)，5.69-5.81(m，1H)..MS m/z 156(M++1)。
步驟21(R)-[1-叔丁氧羰基-4(R)-羥基吡咯烷-2(S)-羧醯胺]-2(S)-乙烯基環丙烷羧酸乙酯的製備
將Boc-L-4-羥脯氨酸(N-Boc(2S，4R)-羥脯氨酸)(10g，43.3mmol)的400mL二氯甲烷攪拌漿液用N-甲基嗎啉(9.3mL，84.7mmol)、HATU(19.5g，51.3mmol)和1(R)-氨基-2(S)-乙烯基環丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽(9.1g，47.5mmol)順序處理。將該金黃色均勻溶液在室溫、在N2氛圍中攪拌18小時，而後真空濃縮，得到棕色油。將其在乙酸乙酯和飽和NaHCO3水溶液之間分配。用鹽水洗滌有機相，乾燥(MgSO4)，真空濃縮，得到15g(94％)1(R)-[1-叔丁氧羰基-4(R)-羥基吡咯烷-2(S)-羧醯胺]-2(S)-乙烯基環丙烷羧酸乙酯類白色固體LC-MS(Xterra HPLC柱3.0x50mm長度。梯度100％溶劑A/0％溶劑B至0％溶劑A/100％溶劑B。梯度時間3min。停留時間(Hold time)1min。流速5mL/min。檢測器波長220nM。溶劑A10％MeOH/90％H2O/0.1％TFA。溶劑B10％H2O/90％MeOH/0.1％TFA)(保留時間2.09min)，MS m/z369(M++1)。
步驟31(R)-[4(R)-羥基吡咯烷-2(S)-羧醯胺]-2(S)-乙烯基環丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽的製備。

將1(R)-[1-叔丁氧羰基-4(R)-羥基吡咯烷-2(S)-羧醯胺]-2(S)-乙烯基環丙烷羧酸乙酯(5.0g，13.6mmol)的攪拌漿液用4N HCl/二噁烷(20mL)處理3小時。真空濃縮反應混合物，得到4.5g(97％)1(R)-[4(R)-羥基吡咯烷-2(S)-羧醯胺]-2(S)-乙烯基環丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽白色固體1HNMR(300MHz，CD3OD)δ1.26(t，J＝7.14Hz，3H)，1.46(dd，J＝9.70，5.31Hz，1H)，1.80(dd，J＝8.23，5.31Hz，1H)，2.00-2.15(m，1H)，2.18-2.30(m，1H)，2.45(dd，J＝13.36，7.50Hz，1H)，3.36-3.48(m，1H)，4.11-4.24(m，2H)，4.44(dd，J＝10.25，7.68Hz，1H)，4.58-4.65(m，1H)，4.84-4.94(m，1H)，5.17(d，J＝1.83Hz，1H)，5.27-5.42(m，1H)，5.67-5.89(m，1H)。
實施例6 環丙基磺醯胺的製備，方法A和B 方法A
向100mL冷卻至0℃的THF溶液中鼓入氣態氨，直到達到飽和為止。向此溶液中加入5g(28.45mmol)環丙基磺醯基氯(從Array Biopharma購買)的50mL THF溶液，將溶液加熱至室溫過夜，額外攪拌一天。濃縮混合物，直到溶劑剩餘1-2mL為止，施加到30g SiO2塞上(用30％至60％EtOAc/己烷洗脫)，得到3.45g(100％)環丙基磺醯胺白色固體。1HNMR(甲醇-d4)δ0.94-1.07(m，4H)，2.52-2.60(m，1H)；13C NMR(甲醇-d4)δ5.92，33.01。
方法B 步驟1N-叔丁基-(3-氯代)丙基磺醯胺的製備
將叔丁胺(3.0mol，315.3mL)溶於THF(2.5L)中。將溶液冷卻至-20℃。慢慢地加入3-氯丙烷磺醯氯(1.5mol，182.4mL)。將反應混合物升溫至室溫，攪拌24小時。過濾混合物，真空濃縮濾液。將殘餘物溶於CH2Cl2(2.0L)中。將得到的溶液用1N HCl(1.0L)、水(1.0L)、鹽水(1.0L)洗滌，用Na2SO4乾燥。過濾，真空濃縮，得到淡黃色固體，將其用己烷結晶，得到產物白色固體(316.0g，99％)。
1H NMR(CDCl3)δ1.38(s，9H)，2.30-2.27(m，2H)，3.22(t，J＝7.35Hz，2H)，3.68(t，J＝6.2Hz，2H)，4.35(b，1H)。
步驟2環丙烷磺酸叔丁基醯胺的製備
在-78℃，向N-叔丁基-(3-氯代)丙基磺醯胺(2.14g，10.0mmol)的THF(100mL)溶液中加入n-BuLi(2.5M，在己烷中，8.0mL，20.0mmol)。用1小時使反應混合物溫熱至室溫。真空除去揮發物。將殘餘物在EtOAC和水(200mL，200mL)之間分配。分離有機相，用鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥，過濾，真空濃縮。用己烷將殘餘物重結晶，得到所需要的產物白色固體(1.0g，56％)。
1H NMR(CDCl3)δ0.98-1.00(m，2H)，1.18-1.19(m，2H)，1.39(s，9H)，2.48-2.51(m，1H)，4.19(b，1H)。
步驟3環丙基磺醯胺的製備
將環丙烷磺酸叔丁基醯胺(110.0g，0.62mol)的TFA(500mL)溶液在室溫下攪拌16小時。真空除去揮發物。用EtOAC/己烷(60mL/240mL)將殘餘物重結晶，得到所需要的產物白色固體(68.5g，91％)。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.84-0.88(m，2H)，0.95-0.98(m，2H)，2.41-2.58(m，1H)，6.56(b，2H)。
實施例7 N-叔丁基-(1-甲基)環丙基磺醯胺的製備。

步驟1aN-叔丁基-(3-氯代)丙基磺醯胺的製備。

如上所述。
步驟1bN-叔丁基-(1-甲基)環丙基磺醯胺的製備。

將N-叔丁基-(3-氯代)丙基磺醯胺(4.3g，20mmol)溶於無水THF(100mL)中，並冷卻至-78℃。向此溶液中慢慢地加入n-BuLi(17.6mL，44mmol，2.5M，在己烷中)。除去乾冰浴，在1.5小時期間內將反應混合物升溫至室溫。然後將混合物冷卻至-78℃，加入n-BuLi溶液(20mmol，8mL，2.5M，在己烷中)。將反應混合物加熱至室溫，在2小時期間內再冷卻至-78℃，加入純的甲基碘(5.68g，40mmol)溶液。使反應混合物升溫至室溫過夜，在室溫用飽和NH4Cl(100mL)淬滅。用EtOAc(100mL)提取。用鹽水(100mL)洗滌有機相，乾燥(MgSO4)，真空濃縮，得到黃色油，將其用己烷結晶，得到產物淡黃色固體(3.1g，81％)1HNMR(CDCl3)δ0.79(m，2H)，1.36(s，9H)，1.52(m，2H)，1.62(s，3H)，4.10(bs，1H)。
步驟1c1-甲基環丙基磺醯胺的製備
將N-叔丁基-(1-甲基)環丙基磺醯胺(1.91g，10mmol)溶液溶於TFA(30mL)中，在室溫攪拌反應混合物16小時。真空除去溶劑，得到黃色油，將其用EtOAc/己烷(1∶4，40mL)結晶，得到實施例3，1-甲基環丙基磺醯胺白色固體(1.25g，96％)1H NMR(CDCl3)δ0.84(m，2H)，1.41(m，2H)，1.58(s，3H)，4.65(bs，2H).C4H9NO2S的分析計算值C，35.54；H，6.71；N，10.36。實測值C，35.67；H，6.80；N，10.40。
實施例9 1-丙基環丙基磺醯胺的製備
步驟1bN-叔丁基-(1-苄基)環丙基-磺醯胺的製備。

使用製備1-甲基環丙基磺醯胺所描述的方法，製備該化合物，只是在該方法的第二步中使用丙基滷來代替甲基碘。
實施例10 N-叔丁基-(1-烯丙基)環丙基磺醯胺的製備。

按照合成N-叔丁基-(1-甲基)環丙基磺醯胺中所描述的方法，只是用1.25當量的烯丙基溴作親電試劑，以97％產率獲得該化合物N-叔丁基-(1-烯丙基)環丙基磺醯胺。該化合物不用純化就可以直接在下一個反應中採用1H NMR(CDCl3)δ0.83(m，2H)，1.34(s，9H)，1.37(m，2H)，2.64(d，J＝7.3Hz，2H)，4.25(bs，1H)，5.07-5.10(m，2H)，6.70-6.85(m，1H)。
1-烯丙基環丙基磺醯胺的製備。

按照1-甲基環丙基磺醯胺的合成中所描述的方法，由N-叔丁基-(1-烯丙基)環丙基磺醯胺獲得該化合物1-烯丙基環丙基磺醯胺，產率40％。用SiO2柱色譜純化化合物，使用2％MeOH/CH2Cl2作為洗脫液1HNMR(CDCl3)δ0.88(m，2H)，1.37(m，2H)，2.66(d，J＝7.0Hz，2H)，4.80(s，2H)，5.16(m，2H)，5.82(m，1H)；13C NMR(CDCl3)δ11.2，35.6，40.7，119.0，133.6。
實施例15 環丙基磺醯基胺叔丁基氨基甲酸酯(製備C1-取代的環丙基磺醯胺中的關鍵中間體)的製備
步驟13-氯丙基磺醯胺的製備
將3-氯丙烷磺醯氯(55g，310.7mmol)溶液溶於THF(200mL)中，並用30分鐘逐滴加入到冷卻至0℃的NH4OH溶液(200mL)中。將反應混合物加熱到室溫，攪拌1小時，用二氯甲烷(4x500mL)多次分配水層。用1N HCl(150mL)、水(150mL)洗滌合併的二氯甲烷層，用MgSO4乾燥，過濾，真空濃縮。用最低量的二氯甲烷/己烷重結晶粗品固體，得到3-氯丙基磺醯胺白色固體(45.3g，93％)。1H NMR(CDCl3)δ2.34(m，2H)，3.32(t，J＝7.3Hz，2H)，3.70(t，J＝6.2Hz，2H)，4.83(s，2H)；13CNMR(CDCl3)δ27.10，42.63，52.57。
步驟23-氯丙基磺醯基氨基甲酸叔丁基酯的製備
用30分鐘向冷卻到0℃的3-氯丙基磺醯胺(30.2g，191.5mmol)、三乙胺(30.2mL，217.0mmol)和4-DMAP(2.40g，19.6mmol)的二氯甲烷(350mL)溶液中慢慢地逐滴加入二碳酸二叔丁基酯(47.2g，216.9mmol)的二氯甲烷(250mL)溶液。使反應混合物升溫至室溫，額外攪拌3小時，用1N HCl(300mL)、水(300mL)、鹽水(300mL)分配，用MgSO4乾燥，過濾，真空濃縮，得到粗品。用70mL 5％二氯甲烷/己烷研磨該物質，得到3-氯丙基磺醯基氨基甲酸叔丁基酯灰白色固體(47.2g，96％)1HNMR(CDCl3)δ1.51(s，9H)，2.33(m，2H)，3.60(t，J＝7.3Hz，2H)，3.68(t，J＝6.21Hz，2H)；13C NMR(CDCl3)δ26.50，27.95，42.37，50.40，84.76，149.53。
步驟3環丙基磺醯基氨基甲酸叔丁基酯的製備
在氬氣氛中，將正丁基鋰(74.7mL，119.5mmol，1.6M，在己烷中)溶液溶於無水THF(105mL)中，並冷卻至-78℃。用20-30分鐘，向此溶液中逐滴加入3-氯丙基磺醯基氨基甲酸叔丁基酯(14g，54.3mmol)的無水THF溶液(105mL)。除去乾冰浴，在2小時期間內將反應混合物升溫至室溫。用冰醋酸(3.4mL)淬滅反應混合物，真空濃縮，在二氯甲烷(100mL)和水(100mL)之間分配。用鹽水(100mL)洗滌有機相，乾燥(MgSO4)，過濾，真空濃縮，得到環丙基磺醯基氨基甲酸叔丁基酯蠟狀的類白色固體(12.08g，100％)1H NMR(CDCl3)δ1.10(m，2H)，1.34(m，2H)，1.50(s，9H)，2.88(m，1H)，7.43(s，1H)..13C NMR(CDCl3)δ6.21，28.00，31.13，84.07，149.82。
實施例16 1-甲氧基-甲基環丙基磺醯胺的製備
步驟11-甲氧基甲基環丙基磺醯基氨基甲酸叔丁基酯的製備
向冷卻至-78℃、溶於THF(30mL)的環丙基磺醯基氨基甲酸叔丁基酯(1.0g，4.5mmol)溶液中加入正丁基鋰(6.4mL，10.2mmol，1.6M，在己烷中)，並攪拌反應混合物1小時。向此溶液中加入氯甲甲醚的純溶液(0.40mL，5.24mmol)，慢慢地使混合物升溫至室溫過夜。使用1N HCl水溶液將溶液pH值調節至3，然後用乙酸乙酯(4x50mL份額)提取。將合併的提取物乾燥(MgSO4)，過濾，濃縮，得到1-甲氧基甲基環丙基磺醯基氨基甲酸叔丁基酯蠟狀的固體(1.20g，100％)，其不用進一步純化就可以在下一個反應中直接採用1H NMR(CDCl3)δ1.03(m，2H)，1.52(s，9H)，1.66(m，2H)，3.38(s，3H)，3.68(s，2H)，7.54(s，1H)；13CNMR(CDCl3)δ11.37，28.29，40.38，58.94，73.43，83.61，149.57。
步驟21-甲氧基甲基環丙基磺醯胺的製備
將1-甲氧基甲基環丙基磺醯基氨基甲酸叔丁基酯(1.14g，4.30mmol)溶液溶於50％TFA/二氯甲烷(30mL)溶液中，在室溫下攪拌16小時。真空除去溶劑，將殘餘物用80g SiO2色譜分離(用0％至60％乙酸乙酯/己烷洗脫)，得到1-甲氧基甲基環丙基磺醯胺白色固體(0.55g，77％，兩步)1H NMR(CDCl3)δ0.95(m，2H)，1.44(m，2H)，3.36(s，3H)，3.65(s，2H)，4.85(s，2H)；13C NMR(CDCl3)δ11.17，40.87，59.23，74.80；LRMS m/z183(M++NH4)。
實施例17 1-環丙基甲基環丙基磺醯胺的製備
步驟11-環丙基甲基環丙基磺醯基氨基甲酸叔丁基酯的製備
按照合成1-甲氧基甲基環丙基磺醯基氨基甲酸叔丁基酯中所描述的方法，只是用1.10當量的環丙基甲基溴作親電試劑，以92％產率獲得1-環丙基甲基環丙基磺醯基氨基甲酸叔丁基酯。該化合物不用純化就可以直接在下一個反應中採用1H NMR(CDCl3)δ0.10(m，2H)，0.51(m，2H)，0.67(m，1H)，1.10(m，2H)，1.49(s，9H)，1.62(m，2H)，1.87(d，J＝7.0Hz，2H)。
步驟21-環丙基甲基環丙基磺醯胺的製備
按照1-甲氧基甲基環丙基磺醯胺的合成中所描述的方法，由1-環丙基甲基環丙基磺醯基氨基甲酸叔丁基酯獲得該化合物，產率65％。用SiO2柱色譜純化化合物，使用0％至60％乙酸乙酯/己烷作為洗脫液1HNMR(CDCl3)δ0.15(m，2H)，0.51(m，2H)，1.01(m，2H)，1.34(m，3H)，1.86(d，J＝7.0Hz，2H)，4.83(s，2H)；13C NMR(CDCl3)δ4.65，7.74，11.26，35.62，41.21；LRMS m/z 193(M++NH4)。
實施例19 1-(3，5-二甲基異噁唑-4-基)氨基甲醯基環丙烷磺醯胺的製備
步驟11-(3，5-二甲基異噁唑-4-基)氨基甲醯基環丙烷磺醯基氨基甲酸叔丁基酯的製備
按照合成1-甲氧基甲基環丙基磺醯基氨基甲酸叔丁基酯中所描述的方法，只不過用1.20當量的3，5-二甲基異噁唑-4-異氰酸酯作親電試劑，以100％產率獲得粗品化合物。該化合物不用純化就可以直接在下一個反應中採用。
步驟21-(3，5-二甲基異噁唑-4-基)氨基甲醯基環丙烷磺醯胺的製備
由1.62g(4.52mmol)1-(3，5-二甲基異噁唑-4-基)氨基甲醯基環丙烷磺醯胺叔丁基氨基甲酸酯，使用30mL(120mmol)的4N HCl/二噁烷，攪拌過夜，濃縮，用Biotage 40M柱色層分離(用0％至5％甲醇/二氯甲烷洗脫)，以50％產率(580mg)獲得該化合物1H NMR(甲醇-d4)δ1.57(m，2H)，1.61(m 2H)，2.15(s，3H)，2.30(s，3H)，4.84(s，3H)；13C NMR(甲醇-d4)δ9.65，10.94，15.01，46.11，114.82，159.45，165.55，168.15；LRMS m/z260(M++H)。
實施例20 由環丁基溴製備環丁基磺醯胺
向冷卻至-78℃的5.0g(37.0mmol)環丁基溴的30mL無水二乙醚(Et2O)溶液中加入44mL(74.8mmol)1.7M叔丁基鋰的戊烷溶液，將溶液用1.5小時慢慢地加熱至-35℃。將該混合物通過導管慢慢地加入到5.0g(37.0mmol)新蒸餾的磺醯氯的100mL己烷溶液(冷卻至-40℃)中，用1小時加熱至0℃，小心地真空濃縮。將該混合物再溶解在Et2O中，用一些冰凍水洗滌一次，乾燥(MgSO4)，小心地濃縮。將該混合物再溶解在20mL THF中，逐滴加入到500mL飽和NH3/THF中，攪拌過夜。真空濃縮混合物，得到粗品黃色固體，用最低量的CH2Cl2/己烷(含有1-2滴MeOH)重結晶，得到1.90g(38％)環丁基磺醯胺白色固體。1HNMR(CDCl3)δ1.95-2.06(m，2H)，2.30-2.54(m，4H)，3.86(p，J＝8Hz，1H)，4.75(brs，2H)；13C NMR(CDCl3)δ16.43，23.93，56.29.HRMSm/z(M-H)-C4H8NSO2的計算值134.0276，實測值134.0282。
實施例21 環戊基磺醯胺的製備
將18.5mL(37.0mmol)2M環戊基-氯化鎂的醚溶液逐滴加入到3.0mL(37.0mmol)新蒸餾的磺醯氯(得自於Aldrich)的100mL己烷溶液(冷卻到-78℃)中。用1小時將混合物加熱到0℃，然後小心地真空濃縮。將該混合物再溶解在Et2O(200mL)中，用一些冰凍水(200mL)洗滌一次，乾燥(MgSO4)，小心地濃縮。將該混合物再溶解在35mL THF中，逐滴加入到500mL飽和NH3/THF中，攪拌過夜。真空濃縮混合物，得到粗品黃色固體，通過50g矽膠過濾殘餘物，使用70％EtOAc-己烷作為洗脫液，然後濃縮溶液。用最低量的CH2Cl2/己烷(含有1-2滴MeOH)將殘餘物重結晶，得到2.49g(41％)環戊基磺醯胺白色固體。1H NMR(CDCl3)δ1.58-1.72(m，2H)，1.74-1.88(m，2H)，1.94-2.14(m，4H)，3.48-3.59(m，1H)，4.80(bs，2H)；13C NMR(CDCl3)δ25.90，28.33，63.54；MS m/e148(M-H)-。
實施例22 環己基磺醯胺的製備
將18.5mL(37.0mmol)2M環己基氯化鎂(TCI Americas)的醚溶液逐滴加入到3.0mL(37.0mmol)新蒸餾的磺醯氯的100mL己烷溶液(冷卻到-78℃)中。用1小時將混合物加熱到0℃，然後小心地真空濃縮。將該混合物再溶解在Et2O(200mL)中，用一些冰凍水(200mL)洗滌一次，乾燥(MgSO4)，小心地濃縮。將該混合物再溶解在35mL THF中，逐滴加入到500mL飽和NH3/THF中，攪拌過夜。真空濃縮混合物，得到粗品黃色固體，通過50g矽膠過濾殘餘物，使用70％EtOAc-己烷作為洗脫液，然後濃縮。用最低量的CH2Cl2/己烷(含有1-2滴MeOH)將殘餘物重結晶，得到1.66g(30％)環己基磺醯胺白色固體1H NMR(CDCl3)δ1.11-1.37(m，3H)，1.43-1.56(m，2H)，1.67-1.76(m，1H)，1.86-1.96(m，2H)，2.18-2.28(m，2H)，2.91(tt，J＝12，3.5Hz，1H)，4.70(bs，2H)；13CNMR(CDCl3)δ25.04，25.04，26.56，62.74；MS m/e 162(M-1)-。
實施例23 新戊基磺醯胺的製備
按照製備環己基磺醯胺的方法，將49mL(37mmol)0.75M新戊基氯化鎂(Alfa)(在二乙醚中)轉變為1.52g(27％)的新戊基磺醯胺白色固體。1H NMR(CDCl3)δ1.17(s，9H)，3.12(s，2H)，4.74(brs，2H)；13CNMR(CDCl3)δ29.46，31.51，67.38；MS m/e 150(M-1)-。
實施例24 環丁基甲磺醯胺的製備
將12.3g(83mmol)環丁基甲基溴(Aldrich)和13.7g(91mmol)碘化鈉的150mL丙酮溶液回流過夜，而後冷卻至室溫。濾出無機固體，分別在環境溫度和150torr、在80℃蒸餾出丙酮和環丙基甲基碘(8.41g，46％)。
將冷卻至-78℃的4.0g(21.98mmol)環丁基甲基碘的30mL無水二乙醚(二乙醚)溶液通過導管加入到17mL(21.98mmol)1.3M仲丁基鋰的環己烷溶液中，攪拌該溶液5分鐘。向該混合物中通過導管加入冷卻至-78℃的3.0g(21.98mmol)新蒸餾的磺醯氯的110mL己烷溶液，用1小時將該混合物加熱至室溫，然後小心地真空濃縮。將該混合物再溶解在二乙醚中，用一些冰凍水洗滌一次，乾燥(MgSO4)，過濾，小心地濃縮。將該混合物再溶解在30mL THF中，逐滴加入到500mL飽和NH3/THF中，攪拌過夜。真空濃縮混合物，得到粗品黃色固體，用最低量的二氯甲烷/己烷(含有1-2滴甲醇)重結晶，得到1.39g(42％)環丁基甲基磺醯胺白色固體。1H NMR(CDCl3)δ1.81-2.03(m，4H)，2.14-2.28(m，2H)，2.81-2.92(m，1H)，3.22(d，J＝7Hz，2H)，4.74(brs，2H)；13C NMR(CDCl3)δ19.10，28.21，30.64，60.93；MS m/e 148(M-1)-。
實施例25 環丙基代甲基磺醯胺的製備
使用製備環丁基甲基磺醯胺的方法，由環丙基代甲基溴(Aldrich)製備環丙基代甲基磺醯胺(參見JACS 1981，p.442-445)。1H NMR(CDCl3)δ0.39-0.44(m，2H)，0.67-0.76(m，2H)，1.13-1.27(m，1H)，3.03(d，J＝7.3Hz，2H)，4.74(brs，2H)；13C NMR(CDCl3)δ4.33，5.61，59.93；MS m/e134(M-1)。
實施例26 2-噻吩基磺醯胺的製備
使用Justus Liebigs Ann.Chem.，501，1933，p.174-182的方法，由2-噻吩基磺醯氯(從Aldrich購買)製備。
實施例27 4-溴苯磺醯胺的製備
用飽和氨/THF處理商購的4-溴磺醯氯，製備4-溴苯基磺醯胺。
實施例28 環丙烷磺酸(1-(R)-氨基-2-(S)-乙烯基-環丙烷羰基)醯胺HCl鹽的製備
步驟11(R)-叔丁氧羰基氨基-2(S)-乙烯基-環丙烷羧酸的製備
向1(R)-叔丁氧羰基氨基-2(S)-乙烯基-環丙烷羧酸乙酯(3.28g，13.2mmol)的THF(7mL)和甲醇(7mL)溶液中加入LiOH(1.27g，53.0mmol)的水(14mL)懸浮液。在室溫下攪拌混合物過夜，用1N NaOH(15mL)和水(20mL)淬滅。用乙酸乙酯(20mL)洗滌得到的混合物，用20mL 0.5NNaOH提取有機相。用1N HCl酸化合併的水溶液相，直到pH值4為止，用乙酸乙酯(3x40mL)提取。用鹽水洗滌合併的有機提取物，乾燥(MgSO4)，過濾，濃縮，得到標題化合物白色固體(2.62g，87％)。1HNMR(DMSO-d6)δ1.22-1.26(m，1H)，1.37(s，9H)，1.50-1.52(m，1H)，2.05(q，J＝9Hz，1H)，5.04(d，J＝10Hz，1H)，5.22(d，J＝17Hz，1H)，5.64-5.71(m，1H)，7.18，7.53(s，NH(旋轉異構體)，12.4(br s，1H))；MS m/z228(M++H)。
步驟2環丙烷磺酸(1-(R)-叔丁氧羰基氨基-2-(S)-乙烯基環丙烷羰基)-醯胺的製備
在氮氣氛圍中，將步驟1產物(2.62g，11.5mmol)和CDI(2.43g，15.0mmol)的THF(40mL)溶液回流加熱50分鐘。將該溶液冷卻至室溫，通過套管轉移到環丙基磺醯胺(1.82g，15.0mmol)的THF(10mL)溶液中。向得到的溶液中加入DBU(2.40mL，16.1mmol)，繼續攪拌20小時。用1N HCl淬滅混合物，至pH值1，真空濃縮THF。用乙酸乙酯(2x50mL)提取懸浮液，乾燥(Na2SO4)合併的有機提取物，過濾，濃縮。通過用己烷-乙酸乙酯(1∶1)再結晶來進行純化，得到標題化合物(2.4g)白色固體。通過Biotage 40S柱純化母液(9％丙酮/二氯甲烷洗脫)，得到第二批標題化合物(1.1g)。合併兩個批料(總收率92％)。1H NMR(DMSO-d6)δ0.96-1.10(m，4H)，1.22(dd，J＝5.5，9.5Hz，1H)，1.39(s，9H)，1.70(t，J＝5.5Hz，1H)，2.19-2.24(m，1H)，2.90(m，1H)，5.08(d，J＝10Hz，1H)，5.23(d，J＝17Hz，1H)，5.45(m，1H)，6.85，7.22(s，NH(旋轉異構體)；MS m/z 331(M++H)。
步驟3環丙烷磺酸(1-(R)-氨基-2-(S)-乙烯基-環丙烷羰基)醯胺HCl鹽的製備
將步驟2產物(3.5g，10.6mmol)的二氯甲烷(35mL)和TFA(32mL)溶液在室溫下攪拌1.5小時。真空除去揮發物，將殘餘物懸浮在1N HCl/二乙醚(20mL)中，真空濃縮。這種方法重複一次。用戊烷研磨得到的混合物，過濾，得到標題化合物吸溼性的類白色固體(2.60g，92％)。1HNMR(DMSO-d6)δ1.01-1.15(m，4H)，1.69-1.73(m，1H)，1.99-2.02(m，1H)，2.38(q，J＝9Hz，1H)，2.92-2.97(m，1H)，5.20(d，J＝11Hz，1H)，5.33(d，J＝17Hz，1H)，5.52-5.59(m，1H)，9.17(br s，3H)；MS m/z 231(M++H)。
實施例29 (1S，4R，6S，14S，18R)-7-順式-14-叔丁氧羰基氨基-18-羥基-2，15-二氧代-3，16-二氮雜三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸的製備，實施例29
步驟11-(2(S)-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯醯)-4(R)-羥基-吡咯烷-2(S)-羧酸甲基酯的製備
將2(S)-叔丁氧羰基氨基-8-壬烯酸(從RSP Amino Acids購買)(3.5g，12.9mmol)的200mL DCM溶液用4(R)-羥基吡咯烷-2(S)-羧酸甲基酯鹽酸鹽(2.15g，11.8mmol)、N-甲基嗎啉(4.25mL，38.6mmol)和HATU(5.37g，14.1mmol)順序處理。在室溫、在N2氛圍中攪拌反應混合物3天，而後真空濃縮。將殘餘物在乙酸乙酯和pH值4的緩衝液(苯二甲酸氫鹽)之間分配。用飽和NaHCO3水溶液洗滌有機相，乾燥(MgSO4)，真空濃縮，得到粗品。進行快速色譜(50％乙酸乙酯/己烷至100％乙酸乙酯)，得到4.7g(～100％)的1-(2(S)-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯醯)-4(R)-羥基-吡咯烷-2(S)-羧酸甲基酯無色油1H NMR(500MHz，CD3OD)δ1.33-1.50(m，8H)，1.46(s，9H)，1.57(m，1H)，1.72(m，1H)2.08(m，2H)，2.28(m，1H)，3.72(s，3H，)3.75-3.87(m，2H)，4.36(m，1H)，4.51(bs，1H)，4.57(t，J＝8.2Hz，1H)，4.95(d，J＝10.4Hz，1H)，5.01(m，1H)，5.83(m，1H)；MS m/z399(M++1)。
步驟21-{[1-(2(S)-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯醯)-4(R)-羥基-吡咯烷-2(S)羰基]-(1R)-氨基}-2(S)-乙烯基-環丙烷羧酸乙酯的製備
將1-(2(S)-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯醯)-4(R)-羥基-吡咯烷-2(S)-羧酸甲基酯(4.7g，11.8mmol)溶於THF(80mL)、甲醇(20mL)和水(40mL)中。加入粉末氫氧化鋰(5.6g，233mmol)。在室溫、在N2氛圍中攪拌淺黃色漿液16小時，而後真空濃縮。將殘餘物在醚和水之間分配。除去乙醚相，用1N HCl處理水相，直到pH值4為止。用EtOAc(3x)提取該酸性溶液。將合併的EtOAc提取物乾燥(MgSO4)，真空濃縮，得到4.36g(96％)1-(2(S)-叔丁氧羰基氨基-8-壬烯醯基)-4(R)-羥基-吡咯烷-2(S)-羧酸白色固體。然後將該酸溶於150mL的DMF中，加入(1R，2S)-1-氨基-2-乙烯基環丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽(2.61g，13.6mmol)、N-甲基嗎啉(2.5mL，22.6mmol)和HATU(5.2g，13.7mmol)。在室溫、在N2氛圍中攪拌反應混合物16小時，而後真空濃縮。將殘餘物在乙酸乙酯和pH值4的緩衝液(苯二甲酸氫鹽)之間分配。用飽和NaHCO3水溶液洗滌有機相，乾燥(MgSO4)，真空濃縮，得到粗品。進行快速色譜(60％-80％乙酸乙酯/己烷)，得到6.0g(98％)1-{[1-(2(S)-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯醯)-4(R)-羥基-吡咯烷-2(S)羰基]-(1R)-氨基}-2(S)-乙烯基-環丙烷羧酸乙酯白色固體1HNMR(500MHz，CD3OD)δ1.25(t，J＝7.2Hz，3H)，1.33-1.80(m，10H)，1.46(s，9H)，2.09(m，3H)，2.25(m，2H)，3.76(m，2H)，4.14(m，2H)，4.27(dd，J＝8.5，5.2Hz，1H)，4.50(m，2H)，4.94(d，J＝10.1Hz，1H)，5.01(dd，J＝17.1，1.8Hz，1H)，5.11(dd，J＝10.4，1.8Hz，1H)，5.30(d，J＝15.6Hz，1H)，5.80(m，2H)，8.57(s，1H)；MS m/z 522(M++1)。
步驟3(1S，4R，6S，14S，18R)-7-順式-14-叔丁氧羰基氨基-18-羥基-2，15-二氧代-3，16-二氮雜三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸乙酯的製備
將1-{[1-(2(S)-叔丁氧羰基-氨基-壬-8-烯醯)-4(R)-羥基-吡咯烷-2(S)羰基]-(1R)-氨基}-2(S)-乙烯基環丙烷-羧酸乙酯(800mg，1.53mmol)的2L二氯甲烷溶液用N2吹掃0.5小時。然後加入三環己基膦[1，3-雙(2，4，6-三甲基-苯基)-4，5-二氫咪唑-2-亞基][亞苄基]-二氯化釕(IV)(Strem)(64mg，0.075mmol)，用N2再吹掃混合物10分鐘。將該淡橙色均勻溶液回流2小時，得到暗橙色溶液。將反應混合物冷卻至室溫，真空濃縮，得到橙色油。進行快速色譜(乙酸乙酯)，得到460mg(61％)(1S，4R，6S，14S，18R)-7-順式-14-叔丁氧羰基氨基-18-羥基-2，15-二氧代-3，16-二氮雜三環[14.3.0.04，6]-十九-7-烯-4-羧酸乙酯灰色固體。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ1.19(t，J＝7.2Hz，3H)，1.42(s，9H)，1.22-1.8(m，8H)，1.87(m，2H)，2.03-2.22(m，4H)，2.63(m，1H)，3.65(m，1H)，4.09(m，3H)，4.45(m，1H)，4.56(s，1H)，4.82(m，1H)，5.23(m，1H)，5.51(s，1H)，7.16(s，1H)；MS m/z 494(M++1)。
步驟4(1S，4R，6S，14S，18R)-7-順式-14-叔丁氧羰基氨基-18-羥基-2，15-二氧代-3，16-二氮雜三環[14.3.0.04，6]-十九-7-烯-4-羧酸
向(1S，4R，6S，14S，18R)-7-順式-14-叔丁氧羰基氨基-18-羥基-2，15-二氧代-3，16-二氮雜三環[14.3.0.04，6]-十九-7-烯-4-羧酸乙酯(493mg，1.0mmol)的THF(4mL)、甲醇(1mL)和水(2mL)溶液中加入粉末氫氧化鋰(480mg，20mmol)，並在室溫、在N2氛圍中攪拌該淺黃色漿液16小時。然後真空濃縮混合物，並將殘餘物在醚和水之間分配。除去乙醚相，用1N HCl處理水相，直到pH值4為止。用EtOAc提取該酸性溶液三次。將合併的EtOAc提取物乾燥(MgSO4)，真空濃縮，得到460mg(98％)實施例18，(1S，4R，6S，14S，18R)-7-順式-14-叔丁氧羰基氨基-18-羥基-2，15-二氧代-3，16-二氮雜三環[14.3.0.04，6]-十九-7-烯-4-羧酸灰色固體。1HNMR(500MHz，CD3OD)δppm 1.26(t，J＝7.2Hz，3H)，1.35-1.52(m，15H)，1.57-1.68(m，3H)，1.79(m，1H)，2.04(m，1H)，2.16-2.41(m，3H)，3.80(dd，J＝10.7，4.3Hz，1H)，3.88(m，1H)，4.38(dd，J＝8.9，3.1Hz，1H)，4.55(m，2H)，5.39(t，J＝9.8Hz，1H)，5.58(m，1H)；MS m/z 466(M++1)。
實施例30 (4-環丙烷磺醯基氨基羰基-18-羥基-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基)-氨基甲酸叔丁基酯的製備
步驟11-{[1-(2-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯醯)-4-(叔丁基-二甲基-矽烷基氧基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-2-乙烯基環丙烷羧酸乙酯的製備
向1-{[1-(2(S)-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯醯)-4(R)-羥基-吡咯烷-2(S)羰基]-(1R)-氨基}-2(S)-乙烯基-環丙烷羧酸乙酯(1.5g，2.87mmol)的10mLDMF混合物中加入咪唑(0.25g，3.67mmol)和叔丁基-二甲基甲矽烷基氯(516mg，3.44mmol)。將混合物在室溫攪拌兩天。然後真空濃縮反應混合物，將殘餘物溶於乙酸乙酯中。用水洗滌此溶液，用硫酸鎂乾燥，真空濃縮，獲得粗品固體。用快速色譜純化(用20％乙酸乙酯/己烷洗脫)，得到1.43g(78％)1-{[1-(2-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯醯)-4-(叔丁基-二甲基-矽烷基氧基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-2-乙烯基環丙烷羧酸乙酯白色固體。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ0.10(s，6H)，0.89(s，9H)，1.22(m，3H)，1.31-1.48(m，16H)，1.50-1.75(m，3H)，2.06(m，3H)，2.11-2.33(m，2H)，3.70(m，2H)，4.03-4.19(m，2H)，4.21(m，1H)，4.45(t，J＝7.87Hz，1H)，4.59(m，1H)，4.91(d，J＝9.15Hz，1H)，4.98(d，J＝17.20Hz，1H)，5.08(dd，J＝10.25，1.83Hz，1H)，5.27(dd，J＝17.38，1.65Hz，1H)，5.65-5.87(m，2H)；MS m/z 636(M++1)。
步驟214-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基-二甲基-矽烷基氧基)-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸乙酯的製備
向1-{[1-(2-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯醯)-4-(叔丁基-二甲基-矽烷基氧基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-2-乙烯基-環丙烷羧酸乙酯(1.63g，2.56mmol)的640mL二氯甲烷溶液中加入215mg(0.26mmol)三環己基膦[1，3-二(2，4，6-三[亞苄基]二氯化釕(IV)。將混合物回流加熱15分鐘。真空濃縮殘餘物，而後用快速色譜純化，用30％乙酸乙酯/己烷洗脫。為了將樣品進一步脫色，再次將粗品色譜分離，用50％醚/己烷洗脫，得到1.5g(96％)14-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基-二甲基-矽烷基氧基)-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸乙酯白色固體。1HNMR(500MHz，CD3Cl)δ0.06(s，3H)，0.07(s，3H)，0.86(s，9H)，1.18-1.24(m，6H)，1.34-1.64(m，14H)，1.86-1.96(m，3H)，2.02-2.09(m，1H)，2.11-2.17(m，1H)，2.19-2.28(m，1H)，2.57-2.63(m，1H)，3.50-3.54(m，1H)，3.71(dd，J＝10.22，6.26Hz，1H)，4.06-4.17(m，2H)，4.52-4.58(m，2H)，4.75(d，J＝8.55Hz，1H)，5.21(t，J＝9.92Hz，1H)，5.35(d，J＝7.63Hz，1H)，5.45-5.50(m，1H)，6.94(s，1H)；MS m/z 608(M++1)。
步驟314-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基-二甲基-矽烷基氧基)-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸的製備
向14-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基-二甲基-矽烷基氧基)-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸乙酯(1.5g，2.47mmol)的THF(4mL)、甲醇(1mL)和水(2mL)混合溶劑系統的溶液中加入粉末氫氧化鋰一水合物(1.0g，50mmol)。在室溫、在N2氛圍中攪拌淺黃色漿液4小時。然後真空濃縮混合物，並將殘餘物在醚和水之間分配。除去乙醚相，用1N HCl處理水相，直到pH值4為止。用EtOAc提取該酸性溶液(三次)。將合併的EtOAc提取物乾燥(MgSO4)，真空濃縮，得到1.2g(84％)14-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基-二甲基-矽烷基氧基)-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸類白色固體。1H NMR(300MHz，CD3OD)0.12(s，6H)，0.89(s，9H)，1.23-1.64(m，17H)，1.70-1.87(m，1H)，1.90-2.49(m，6H)，3.70-3.80(m，1H)，3.83-3.90(m，1H)，4.28-4.36(m，1H)，4.47-4.55(m，1H)，4.65(s，1H)，5.30-5.39(m，1H)，5.53-5.62(m，1H)；MS m/z 580(M++1)。
步驟4[18-(叔丁基-二甲基-矽烷基氧基)-4-環丙烷磺醯基氨基羰基-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基]-氨基甲酸叔丁基酯的製備
將14-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基-二甲基-矽烷基氧基)-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸(500mg，0.86mmol)溶於25mL THF中，並用CDI(180mg，1.12mmol)處理。(必須小心，使用烘乾的玻璃器皿，避免溼潤，保持乾燥N2氛圍)。將反應混合物回流2小時之後，將其冷卻至室溫，用環丙基磺醯胺(135mg，1.12mmol)和DBU(170mg，1.12mmol)順序處理。將反應混合物在室溫攪拌4小時，通過旋轉蒸發除去THF。將殘餘物在乙酸乙酯和pH值4的緩衝液之間分配。乾燥(MgSO4)有機相，真空濃縮，得到粗品。然後用快速色譜純化(用33％乙酸乙酯/己烷洗脫)，得到300mg(51％)[18-(叔丁基-二甲基-矽烷基氧基)-4-環丙烷磺醯基氨基羰基-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基]-氨基甲酸叔丁基酯白色固體。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ1H 0.07(s，3H)，0.08(s，3H)，0.85(s，9H)，0.87-1.49(m，21H)，1.73-1.95(m，3H)，2.08-2.16(m，1H)，2.25-2.36(m，2H)，2.42-2.56(m，1H)，2.85-2.93(m，1H)，3.65-3.74(dd，J＝10.61，3.66Hz，1H)，3.89(d，J＝10.25Hz，1H)，4.34(m，J＝9.70，9.70Hz，1H)，4.43(t，J＝7.87Hz，1H)，4.57(s，1H)，4.94-5.01(m，1H)，5.10(d，J＝8.78Hz，1H)，5.66-5.75(m，1H)，6.55(s，1H)，10.13(s，1H)；MS m/z 683(M++1)。
步驟5實施例19，(4-環丙烷磺醯基氨基羰基-18-羥基-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基)-氨基甲酸叔丁基酯的製備
向[18-(叔丁基-二甲基矽烷基氧基)-4-環丙烷磺醯基氨基羰基-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基]-氨基甲酸叔丁基酯(330mg，0.48mmol)的25mL THF混合物中加入氟化四丁銨(150mg，0.54mmol)。將反應混合物在室溫攪拌18小時，而後通過旋轉蒸發除去THF。將殘餘物在乙酸乙酯和水之間分配。乾燥(MgSO4)有機相，真空濃縮，得到粗品。然後通過用己烷研磨來純化，得到200mg(73％)(4-環丙烷磺醯基氨基羰基-18-羥基-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基)-氨基甲酸叔丁基酯，實施例19，白色固體。1H NMR(500MHz，CD3Cl)δ1.87-1.64(m，21H)，1.70-1.98(m，3H)，2.15-2.56(m，5H)，2.85-2.94(m，1H)，3.71(d，J＝13.91Hz，1H)，4.10-4.26(m，2H)，4.51(t，J＝7.87Hz，1H)，4.62(s，1H)，4.98(m，1H)，5.06(d，J＝8.78Hz，1H)，5.64-5.71(m，1H)，6.72(s，1H)，10.24(s，1H)；MS m/z 569(M++1)。
使用實施例29和30中所描述的方法，製備下列大環的醇中間體
使用實施例29和30中所描述的方法，可以製備下列大環的醇中間體
實施例31 實施例31，2(S)-叔丁氧羰基氨基-3-戊-4-烯基硫基丙酸的製備
步驟1二在室溫，向N-Boc-半胱氨酸甲基酯(3.36g，0.014mol)的甲醇(166mL)溶液中加入三乙胺(10.8mL)和1-溴戊-4-烯(3.19g，21mmol，1.5當量)，在室溫下將得到的溶液攪拌過夜。然後真空濃縮混合物，將得到的殘餘混合物用快速色譜純化(己烷、乙酸乙酯梯度)，提供1.76g(41％)所需要的硫醚。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ1.43(s，9H)，1.64(m，2H)，2.11(m，2H)，2.51(m，2H)，2.95(m，2H)，3.75(s，3H)，4.51(m，1H)，4.95-5.03(m，2H)，5.34(m，1H)，5.80(1H，m)；MS m/z 304(M++1)。
步驟2將步驟1的硫醚產物(9.51g，31.4mmol)加入到1M LiOH/水(200mL)和THF(200mL)的混合物中，在室溫下將得到的混合物攪拌過夜。然後使用1N鹽酸將反應混合物酸化，用乙酸乙酯將得到的混合物提取若干次。合併提取物，用硫酸鎂乾燥，真空濃縮，提供所需要的酸，實施例20，其可以在下一個反應中原態使用。
實施例32 實施例32，N-叔丁氧羰基-3-(4-戊烯基硫基)-L-纈氨酸的製備
步驟1N-叔丁氧羰基-3-(4-戊烯基硫基)-L-纈氨酸甲基酯的製備
在室溫下，向7.12g(48mmol，1.0eq)L-3-巰基纈氨酸的100mL 1，4-二噁烷和25mL水的溶液中加入9.60ml(96mmol，2.0eq)10N氫氧化鈉水溶液，而後用幾分鐘逐滴加入12.00mL(101mmol，2.1eq)5-溴-1-戊烯。在室溫下將得到的混合物攪拌68小時。此時，加入12.50g(57mmol，1.2eq)二碳酸二叔丁基酯，在室溫下另外攪拌混合物6小時。真空濃縮混合物，將殘餘物溶於水中。用二乙醚洗滌含水混合物，使用1N鹽酸調節至pH值3，而後用乙酸乙酯提取。用鹽水洗滌合併的提取物，用無水硫酸鎂乾燥，過濾，真空濃縮。
將粗品(12.20g)溶於120mL無水二甲亞碸中。向此溶液中加入10.50g(76mmol)碳酸鉀和4.70mL(76mmol)碘甲烷，在室溫下將得到的混合物攪拌24小時。用水稀釋反應混合物，用乙酸乙酯提取。用水(2X)和鹽水洗滌合併的提取物，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，真空濃縮。進行矽膠柱色譜(洗脫2-10％乙酸乙酯/己烷)，提供8.54g N-叔丁氧羰基-3-(4-戊烯基硫基)-L-纈氨酸甲基酯無色油。NMR(300MHz，CDCl3)δ5.76(d of d of t，1H，J＝17.2，10.3，6.6Hz)，5.35(br d，1H，J＝9.0Hz)，5.05-4.94(m，2H)，4.27(br d，1H，J＝9.0Hz)，3.73(s，3H)，2.52(m，2H)，2.13(四重峰，2H，J＝7.3Hz)，1.61(五重峰，2H，J＝7.3Hz)，1.43(s，9H)，1.35(s，3H)，1.33(s，3H)。
步驟2實施例32，N-叔丁氧羰基-3-(4-戊烯基硫基)-L-纈氨酸的製備
在室溫下，向8.52g(25.7mmol)N-叔丁氧羰基-3-(4-戊烯基硫基)-L-纈氨酸甲基酯的200mL四氫呋喃溶液中加入1.10g(26.2mmol)氫氧化鋰一水合物的50mL水溶液。在室溫下將得到的混合物攪拌65小時。然後向反應混合物中加入28mL 1.00N鹽酸。用二乙醚稀釋混合物，用水(3X)和鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，真空濃縮，得到8.10gN-叔丁氧羰基-3-(4-戊烯基硫基)-L-纈氨酸無色油。NMR(300MHz，CDCl3)δ5.75(d of d of t，1H，J＝17.2，10.3，6.6Hz)，5.40(br s，1H)，5.05-4.94(m，2H)，4.28(br s，1H)，2.56(m，2H)，2.13(四重峰，2H，J＝7.3Hz)，1.63(五重峰，2H，J＝7.3Hz)，1.44(s，9H)，1.39(s，3H)，1.37(s，3H)。
實施例33 實施例33，5-烯丙氧基-2(S)-(叔丁氧羰基氨基)戊酸的製備
步驟1吡咯烷-5-酮-2(S)-羧酸異丙基酯的製備
使用改變的迪安-斯達克榻分離器(通過充滿4

分子篩的索氏抽提器進行冷凝物回流)，在氮氣氛圍中，將L-焦穀氨酸(Aldrich，25.0g，195mmol)和對甲苯磺酸單水合物(3.71g，19.5mmol)的溶液在異丙醇(40mL)中回流6小時。冷卻至室溫後，用醚稀釋反應，用飽和碳酸氫鈉水溶液、而後飽和NaCl水溶液洗滌，乾燥(MgSO4)，蒸發，得到無色漿液。放置後結晶。在己烷中研磨晶體殘餘物，提供31.9g(96％)吡咯烷-5-酮-2(S)-羧酸異丙基酯白色稜晶1H NMR(300MHz，氯仿-D)δ6.35(br s，1H)，5.04(sept..1H，J＝6.2Hz)，4.18(dd，1H，J＝8.4，5.3Hz)，2.51-2.28(m，3H)，2.27-2.12(m，1H)，1.24(d，6H，J＝6.2Hz)..LCMS m/z 172(M+H)+。
步驟21-(叔丁氧羰基)-吡咯烷-5-酮-2(S)-羧酸異丙基酯的製備
在室溫下，在N2氛圍中，將吡咯烷-5-酮-2(S)-羧酸異丙基酯(步驟26A的產物，31.9g，188mmol)、二碳酸二叔丁基酯(48.6g，225mmol)和DMAP(2.30g，8.8mmol)的乙腈(300mL)溶液攪拌30分鐘。將反應蒸發至大約100mL，用醚稀釋，用1N HCl、然後飽和NaCl水溶液洗滌，乾燥(MgSO4)，蒸發，得到1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-5-酮-2(S)羧酸異丙基酯淺黃色油，50.1g(99％)1H NMR(300MHz，氯仿-D)δ5.06(sept.1H，J＝6.2Hz)，4.53(dd，1H，J＝9.5，2.9Hz)，2.66-2.40(m，2H)，2.36-2.22(m，1H)，2.03-1.93(m，1H)，1.47(s，9H)，1.26(d，3H，J＝6.2Hz)，1.24(d，3H，J＝6.2Hz)..LCMS m/z 272(M+H)+。
步驟32(S)-(叔丁氧羰基氨基)-5-羥基戊酸異丙基酯的製備
用1.5小時向1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-5-酮-2(S)-羧酸異丙基酯(步驟26B的產物，49.5g，183mmol)的甲醇(300mL)溶液中加入～1g份額的硼氫化鈉(10.0g，263mmol)。在氮氣氛圍中另外攪拌反應10分鐘。用水稀釋，用醚提取，用飽和NaCl水溶液洗滌合併的有機餾份，乾燥(MgSO4)，蒸發，得到淺黃色油。進行快速色譜(矽膠，20-30％乙酸乙酯/己烷)，得到31.8g(64％)2(S)-(叔丁氧羰基氨基)-5-羥基戊酸異丙基酯無色漿液1H NMR(300MHz，氯仿-D)δ5.16(br d，1H，J＝7.3Hz)，5.03(sept.，1H，J＝6.2Hz)，4.28(br d，1H，J＝6.2Hz)，3.67(br dd，J＝10.2，5.5Hz)，1.94-1.79(m，2H)，1.76-1.67(m，1H)，1.66-1.56(m，2H)，1.43(s，9H)，1.25(d，3H，J＝6.2Hz)，1.23(d，3H，J＝6.2Hz).LCMS m/z276(M+H)+。
步驟4異丙基-5-烯丙氧基-2(S)-(叔丁氧羰基氨基)戊酸酯的製備
在氮氣氛圍中，將2(S)-(叔丁氧羰基氨基)-5-羥基戊酸異丙基酯(步驟26C的產物，17.6g，63.9mmol)、烯丙基甲基碳酸酯(24.0mL，213mmol)、Pd2(dba)3(1.62g，1.78mmol)和BINAP(4.42g，7.10mmol)的THF(150mL)脫氣混合物回流3小時。冷卻至室溫後，用醚稀釋反應，通過硅藻土過濾，蒸發，得到暗褐色漿液。對殘餘物進行快速色譜(矽膠，30％醚/己烷)，得到5-烯丙氧基-2(S)-(叔丁氧羰基氨基)戊酸異丙基酯粘稠的無色油，16.3g(81％)1H NMR(300MHz，氯仿-D)δ5.88(ddt，1H，17.4，10.4，5.5)，5.28(m，1H)，5.22-5.11(m，1H)，5.02(sept.，1H，J＝6.2Hz)，4.21(br t，1H，J＝6.7Hz)，3.94(dt，2H，J＝5.9，1.5Hz)，3.42(t，2H，J＝5.9Hz)，1.90 1.82(m，1H)，1.751.57(m，3H)，1.42(s，9H)，1.21(d，3H，J＝6.2Hz)，1.19(d，3H，J＝6.2Hz)..LCMS m/z 316(M+H)+。
步驟5實施例33，5-烯丙氧基-2(S)-(叔丁氧羰基氨基)戊酸的製備
在室溫下，在氮氣氛圍中，將5-烯丙氧基-2(S)-(叔丁氧羰基氨基)戊酸異丙基酯(步驟26D的產物，16.1g，51.1mmol)和氫氧化鋰水合物(4.19g，102mmol)的混合物在THF/水(100mL/20mL)中攪拌16小時。用水稀釋反應，用醚洗滌，將水溶液餾份的pH值調節至～4，用醚提取，用飽和NaCl洗滌合併的有機餾份，乾燥(MgSO4)，蒸發，得到5-烯丙氧基-2(S)-(叔丁氧羰基氨基)戊酸淺黃色漿液1H NMR(300MHz，氯仿-D)δ5.89(ddt，1H，J＝17.4，10.4，5.5)，5.25(dd，1H，J＝17.4，1.6Hz)，5.17(dd，1H，J＝10.4，1.6Hz)，4.30(br d，1H，J＝6.2)，3.96(dt，2H，J＝5.9，1.5Hz)，3.46(t，2H，J＝5.9Hz)，1.961.86(m，1H)，1.851.77(m，1H)，1.751.64(m，2H)，1.43(s，9H)..LCMS m/z 274(M+H)+。
實施例34 製備實施例34的一般方法
如下製備實施例23將N-三苯甲基保護的蘇氨酸的DMF溶液加入到氫化鈉的DMF溶液(冷卻至-15℃)中。在-15℃攪拌反應混合物30分鐘，而後加入5-溴-1-戊烯，將得到的混合物加熱至-5℃。在-5℃保持反應混合物3天，而後通過加入1N HCl水溶液來猝滅反應，使用如上所述的標準提取方法進行後處理。利用標準色譜方法，獲得純式的實施例23。
實施例35 實施例35，N-叔丁氧羰基-O-(4-戊烯基)-L-絲氨酸的製備
步驟1N-叔丁氧羰基-O-(4-戊烯基)-L-絲氨酸甲基酯的製備
在室溫下，向10.26g(50mmol，1.0eq)N-叔丁氧羰基-L-絲氨酸的500mL無水二甲亞碸溶液中加入2.00g(50mmol，1.0eq)60％氫化鈉/礦物油。在室溫下攪拌該混合物0.5小時，直到停止放出氣體為止。向得到的溶液中加入6.00mL(50mmol，1.0eq)5-溴-1-戊烯，接著立即加入另外2.00g(50mmol，1.0eq)60％氫化鈉/礦物油。然後將反應混合物在室溫下攪拌16小時。用2000mL水稀釋混合物，通過加入50mL 1.00N鹽酸將pH值調節至3-4，用乙酸乙酯提取。用水(2X)和鹽水洗滌有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，真空濃縮。除去殘餘礦物油，將得到的物質溶於稀氫氧化鈉水溶液中。用己烷洗滌水溶液，而後使用鹽酸調節至pH值4，用乙酸乙酯提取。用水(2X)和鹽水洗滌提取物，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，真空濃縮。
將粗品(7.70g)溶於100mL無水二甲亞碸中。向此溶液中加入7.80g(56mmol)碳酸鉀和3.50mL(56mmol)碘甲烷，在室溫下將得到的混合物攪拌24小時。用水稀釋反應混合物，用乙酸乙酯提取。用水(2X)和鹽水洗滌合併的提取物，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，真空濃縮。進行矽膠柱色譜(洗脫2-10％乙酸乙酯/己烷)，提供6.70g N-叔丁氧羰基-O-(4-戊烯基)-L-絲氨酸甲基酯無色油。NMR(300MHz，CDCl3)δ5.78(dof d oft，1H，J＝17.2，10.2，6.6Hz)，5.34(br d，1H，J＝8.0Hz)，5.03-4.92(m，2H)，4.40(m，1H)，3.81(d of d，1H，J＝9.5，2.9Hz)，3.74(s，3H)，3.61(d ofd，1H，J＝9.5，3.5Hz)，3.42(m，2H)，2.06(四重峰，2H，J＝7.3Hz)，1.61(五重峰.，2H，J＝7.3Hz)，1.44(s，9H)。
步驟2實施例35，N-叔丁氧羰基-O-(4-戊烯基)-L-絲氨酸的製備
在室溫下，向6.65g(23mmol)N-叔丁氧羰基-O-(4-戊烯基)-L-絲氨酸甲基酯的500mL四氫呋喃溶液中加入1.95g(46mmol)氫氧化鋰一水合物的100mL水溶液。在室溫下將得到的混合物攪拌40小時。然後向反應混合物中加入46mL 1.00N鹽酸。用乙酸乙酯稀釋混合物，用水(3X)和鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，真空濃縮，得到6.30g N-叔丁氧羰基-O-(4-戊烯基)-L-絲氨酸無色油。..NMR(300MHz，CDCl3)δ5.77(dof d oft，1H，J＝17.2，10.2，6.6Hz)，5.37(br d，1H，J＝8.0Hz)，5.03-4.92(m，2H)，4.42(m，1H)，3.87(d of d，1H，J＝9.5，2.6Hz)，3.63(d of d，1H，J＝9.5，4.0Hz)，3.45(t，2H，J＝6.6Hz)，2.07(四重峰，2H，J＝7.3Hz)，1.64(五重峰，2H，J＝7.3Hz)，1.44(s，9H)。
實施例36 實施例36，(S)-4-烯丙氧基-2-(叔丁氧羰基氨基)丁酸的製備
在0℃，向氫化鈉(913mg，22.8mmol)的DMF混合物中加入N-t-Boc-L-高絲氨酸(2g，9.13mmol)。在0℃攪拌該反應混合物15分鐘，而後加入烯丙基溴(1.38g，11.4mmol)。將混合物升溫至室溫，攪拌2小時。然後將其真空濃縮。用水稀釋殘餘物，用己烷和醚順序洗滌。除去有機層，用1N HCl將水層小心地調節至pH值3。用乙酸乙酯提取該酸性水溶液。乾燥(MgSO4)有機相，真空濃縮，得到2.2g(93％)(S)-4-烯丙氧基-2-(叔丁氧羰基氨基)丁酸無色油。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ1.42(s，9H)，1.80-1.90(m，1H)，2.04-2.16(m，1H)，3.50-3.54(m，2H)，3.97(d，J＝4.39Hz，2H)，4.23(dd，J＝8.78，4.39Hz，1H)，5.15(d，J＝10.25Hz，1H)，5.26(dd，J＝17.38，1.65Hz，1H)，5.84-5.97(m，1H)。
實施例37 實施例37，(S)-2-(叔丁氧羰基)-3-(2-硝基-N-(戊-4-烯基)苯基磺醯氨基)丙酸的製備
步驟13-氨基-2(S)-(叔丁氧羰基氨基)丙酸甲酯的製備
向i(Boc-DAP-OH)(3.0g 14.7mmol)的50mL二氯甲烷混合物中加入5mL甲醇。向此溶液中慢慢地加入(三甲基甲矽烷基)重氮甲烷(2M，在醚中，7.9mL，15.8mmol)。在室溫攪拌混合物2小時，直到所有固體溶解為止，該溶液變成淺黃色。然後將其濃縮，得到3.2g(99％)3-氨基-2(S)-(叔丁氧羰基氨基)丙酸甲酯ii無色油。1H NMR(CD3OD，300MHz)δ1.46(s，9H)，2.82-3.00(m，2H)，3.71(s，3H)，4.14(brs，1H)。
2(S)-(叔丁氧羰基氨基)-3-(2-硝基苯基磺醯氨基)丙酸甲酯iii的製備
向3-氨基-2(S)-(叔丁氧羰基氨基)丙酸甲酯ii(1.6g，7.3mmol)的DCM(50mL)混合物中加入DIPEA(1.64mL，9.4mmol)和2-硝基苯磺醯氯(1.62g，7.3mmol)。將混合物在室溫下攪拌2小時。然後將其濃縮，溶於乙酸乙酯中，然後將其用飽和碳酸氫鈉、鹽水洗滌，用硫酸鎂乾燥。然後將其過濾，濃縮，得到2.9g(98％)2(S)-(叔丁氧羰基氨基)-3-(2-硝基苯基磺醯氨基)丙酸甲酯iii黃色泡沫。1H NMR(CD3OD，300MHz)δ1.41(s，9H)，3.36-3.51(m，2H)，3.71(s，3H)，4.22(m，1H)，7.80-7.90(m，3H)，8.07-8.10(m，1H)。
2(S)-(叔丁氧羰基氨基)-3-(2-硝基-N-(戊-4-烯基)苯基磺醯氨基)丙酸甲酯iv的製備
向2(S)-(叔丁氧羰基氨基)-3-(2-硝基苯基磺醯氨基)丙酸甲酯iii(150mg，0.37mmol)的3mL DMF的混合物中加入碳酸鉀(102mg，0.74mmol)。在室溫攪拌該混合物20分鐘，而後加入5-溴-1-戊烯(65μL，0.55mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌2天。然後過濾，濃縮，通過矽膠色譜純化(用25％乙酸乙酯/己烷洗脫)，得到75mg(43％)2(S)-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(2-硝基-N-(戊-4-烯基)苯基磺醯氨基)丙酸甲酯iv黃色固體。1H NMR(CD3OD，300MHz)δ1.42(s，9H)，1.54-1.64(m，2H)，1.97(q，J＝7.20Hz，2H)，3.37(m，2H)，3.57-3.80(m，2H)，3.72(s，3H)，4.42(dd，J＝8.60，5.31Hz，1H)，4.91-5.01(m，2H)，5.69-5.79(m，1H)，7.75-7.85(m，3H)，8.04(m，1H)；MS m/z 372(M++1-Boc)。
實施例37，2(S)-(叔丁氧羰基氨基)-3-(2-硝基-N-(戊-4-烯基)苯基磺醯氨基)丙酸v的製備
將(S)-2-(叔丁氧羰基)-3-(2-硝基-N-(戊-4-烯基)苯基磺醯氨基)-丙酸甲基酯iv(500mg，1.06mmol)溶於下列混合溶劑系統中THF(4ml)、甲醇(1mL)和水(2mL)。加入粉末氫氧化鋰(250mg，10.4mmol)。在室溫攪拌該淺黃色漿液15小時，而後真空濃縮。將殘餘物在醚和水之間分配。除去乙醚相，用1N HCl處理水相，直到pH值4為止。用乙酸乙酯提取該酸性溶液四次。將合併的乙酸乙酯提取物乾燥(MgSO4)，真空濃縮，得到430mg(89％)2-(叔丁氧羰基氨基)-3-(2-硝基-N-(戊-4-烯基)苯基磺醯氨基)丙酸(實施例26)黃色油。1H NMR(CD3OD，300MHz)δ1.38(s，9H)，1.51-1.60(m，2H)，1.89-1.98(m，2H)，3.28-3.32(m，2H)，3.59-3.64(dd，J＝14.95，9.46Hz，1H)，3.71-3.74(m，1H)，4.33(dd，J＝9.61，4.43Hz，1H)，4.87-4.94(m，2H)，5.63-5.72(m，1H)，7.71-7.77(m，3H)，8.01(dd，J＝7.48，1.37Hz，1H)；MS m/z 358(M++1-Boc)。
實施例86 (1S，4R，6S，14S，18R)-[7-順式-4-環丙烷磺醯基氨基羰基-12-環丙基-18-羥基-2，15-二氧代-3，12，16-三氮雜-三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基]氨基甲酸叔丁基酯(實施例86)的製備
步驟1N-(戊-4-烯基)環丙胺的合成。
使用加入漏鬥，用5分鐘的時間，將5-溴戊烯(15.75g，106mmol)的50mL甲醇溶液加入到環丙胺(20.6g，361mmol)的200mL甲醇溶液中。在室溫攪拌此溶液72小時，此時回流1小時。蒸餾除去甲醇和過量環丙胺。將殘餘物(產物的氫溴酸鹽)在醚和4N NaOH之間分配。用醚(2x)洗滌水相。將合併的乙醚提取物乾燥(MgSO4)，過濾，濃縮，得到8g(60％)N-(戊-4-烯基)環丙胺黃色油1H NMR(500MHz，CDCl3)δ0.31-0.36(m，2H)0.40-0.46(m，2H)1.53-1.63(m，2H)1.87(brs，1H)2.05-2.10(m，2H)2.10-2.14(m，1H)2.69(t，J＝7.32Hz，2H)4.91-5.07(m，2H)5.72-5.88(m，1H)。
步驟22(S)-(叔丁氧羰基氨基)-3-[N-環丙基-N-(戊-4-烯基)氨基]丙酸的合成
將N-(戊-4-烯基)環丙胺(668mg，5.30mmol)的20mL乙腈混合物加入到N-叔丁氧羰基-L-絲氨酸β-內酯(1.0g，5.30mmol)的40mL乙腈漿液中。在N2氛圍中、在室溫攪拌該混合物5天，而後真空濃縮，得到粗品2(S)-(叔丁氧羰基氨基)-3-[N-環丙基-N-(戊-4-烯基)氨基]丙酸。該物質不用純化就可以在步驟3中使用。LC-MS(Phenomenex 10微摩爾(「μm」)C 18HPLC柱3.0x50mm長度。梯度100％溶劑A/0％溶劑B至0％溶劑A/100％溶劑B。梯度時間3min。停留時間1min。流速4mL/min。檢測器波長220nM。溶劑A10％MeOH/90％ H2O/0.1％TFA。溶劑B10％H2O/90％ MeOH/0.1％TFA。(保留時間2.50min)，MS m/z 313(M++1)。
步驟31(R)-[1-[2(S)-(叔丁氧羰基氨基)-3-[N-環丙基-N-(戊-4-烯基)氨基]丙醯基]-4(R)-羥基吡咯烷-2(S)-羧醯胺]-2(S)-乙烯基環丙烷羧酸乙酯的合成。

將2(S)-(叔丁氧羰基氨基)-3-[N-環丙基-N-(戊-4-烯基)氨基]丙酸(1.47g，4.71mmol)的20mL DCM溶液用1(R)-[4(R)-羥基吡咯烷-2(S)-羧醯胺]-2(S)-乙烯基環丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽(在實施例5中製備)(1.44g，4.71mmol)、N-甲基嗎啉(1.80mL，16.34mmol)和HATU(2.14g，5.53mmol)順序處理。在室溫、在N2氛圍中攪拌反應混合物3小時，而後真空濃縮。將殘餘物溶於水中，加入1N HCl，直到pH值＝5為止。用EtOAc(3x)提取水溶液。用飽和NaHCO3水溶液洗滌有機相，乾燥(MgSO4)，真空濃縮，得到粗品。進行快速色譜(50％乙酸乙酯/己烷至100％乙酸乙酯)，得到1.55g(58％)1(R)-[1-[2(S)-(叔丁氧羰基氨基)-3-[N-環丙基-N-(戊-4-烯基)氨基]丙醯基]-4(R)-羥基吡咯烷-2(S)-羧醯胺]-2(S)-乙烯基環丙烷羧酸乙酯白色泡沫 LC-MS(Phenomenex-Luna S10 HPLC柱3.0x50mm長度。梯度100％溶劑A/0％溶劑B至0％溶劑A/100％溶劑B。梯度時間2min。停留時間1min。流速4mL/min。檢測器波長220nM。溶劑A10％MeOH/90％H2O/0.1％TFA。溶劑B10％H2O/90％MeOH/0.1％TFA)。(保留時間1.38min)，MS m/z 564(M+61)。
步驟41(R)-[1-[2(S)-(叔丁氧羰基氨基)-3-[N-環丙基-N-(戊-4-烯基)氨基]丙醯基]-4(R)-(叔丁基二甲基矽基氧基)吡咯烷-2(S)-羧醯胺]-2(S)-乙烯基環丙烷羧酸乙酯的合成。

向1(R)-[1-[2(S)-(叔丁氧羰基氨基)-3-[N-環丙基-N-(戊-4-烯基)氨基]丙醯基]-4(R)-羥基吡咯烷-2(S)-羧醯胺]-2(S)-乙烯基環丙烷羧酸乙酯(1.55g，2.75mmol)的10mL DMF的混合物中加入咪唑(0.47g，6.88mmol)和叔丁基二甲基甲矽烷基氯(826mg，5.50mmol)。在室溫攪拌該混合物18小時，真空濃縮，並在乙酸乙酯和水之間分配。用硫酸鎂乾燥有機相，真空濃縮，獲得類白色固體。進行快速色譜(用二氯甲烷而後乙酸乙酯洗脫)，得到1(R)-[1-[2(S)-(叔丁氧羰基氨基)-3-[N-環丙基-N-(戊-4-烯基)氨基]丙醯基]-4(R)-(叔丁基二甲基矽基氧基)吡咯烷-2(S)-羧醯胺基]-2(S)-乙烯基環丙烷羧酸乙酯白色固體(1.75g，94％) LC-MS(Phenomenex 10μm C18HPLC柱3.0x50mm長度。梯度100％溶劑A/0％溶劑B至0％溶劑A/100％溶劑B。梯度時間2min。停留時間1min。流速5mL/min。檢測器波長220nM。溶劑A10％MeOH/90％H2O/0.1％TFA。溶劑B10％H2O/90％MeOH/0.1％TFA)。(保留時間2.51min)，MS m/z 677(M++1)。
步驟5(1S，4R，6S，14S，18R)-7-順式-14-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基二甲基矽基氧基)-2，15-二氧代-3，12，16-三氮雜三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸乙酯的合成。

向1(R)-[1-[2(S)-(叔丁氧羰基氨基)-3-[N-環丙基-N-(戊-4-烯基)氨基]丙醯基]-4(R)-(叔丁基二甲基矽基氧基)吡咯烷-2(S)-羧醯胺基]-2(S)-乙烯基環丙烷羧酸乙酯(1.45g，2.14mmol)的1L二氯甲烷溶液中加入181mg(0.21mmol)Grubb′s第二代催化劑[(1，3-二-(2，4，6-三甲基苯基)-2-咪唑烷亞基)二氯(苯基亞甲基)(三環己基膦)釕]。將混合物回流加熱1小時。加入第二部分的催化劑(50mg，0.058mmol)，在室溫攪拌混合物過夜。真空濃縮殘餘物，而後通過快速色譜純化，用50％醚/己烷洗脫，得到0.84g(62％)(1S，4R，6S，14S，18R)-7-順式-14-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基二甲基矽基氧基)-2，15-二氧代-3，12，16-三氮雜三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸乙酯白色固體LC-MS(Phenomenex 10μm C18 HPLC柱3.0x50mm長度。梯度100％溶劑A/0％溶劑B至0％溶劑A/100％溶劑B。梯度時間2min。停留時間1min。流速5mL/min。檢測器波長220nM。溶劑A10％ MeOH/90％ H2O/0.1％TFA。溶劑B10％H2O/90％ MeOH/0.1％TFA)。(保留時間2.43min)，MS m/z 649(M++1)。
步驟6(1S，4R，6S，14S，18R)-7-順式-14-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基二甲基矽基氧基)-2，15-二氧代-3，12，16-三氮雜三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸的合成。

向(1S，4R，6S，14S，18R)-7-順式-14-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基二甲基矽基氧基)-2，15-二氧代-3，12，16-三氮雜三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸乙酯(0.84g，1.30mmol)的THF(30mL)、甲醇(15mL)和水(4mL)溶液中加入粉末氫氧化鋰水合物(0.31g，12.90mmol)。在室溫、在N2氛圍中將得到的淺黃色漿液攪拌過夜。然後真空濃縮混合物，並在己烷/醚(1∶1)和水之間分配。除去有機相，用1N HCl處理水相，直到pH值5為止。用EtOAc提取該酸性溶液(三次)。乾燥(MgSO4)合併的EtOAc提取物，真空濃縮，得到0.495g(61％)(1S，4R，6S，14S，18R)-7-順式-14-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基二甲基矽基氧基)-2，15-二氧代-3，12，16-三氮雜三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸類白色固體LC-MS(Phenomenex 10μmC18 HPLC柱3.0x50mm長度。梯度100％溶劑 A/0％溶劑 B至0％溶劑 A/100％溶劑 B。梯度時間2min。停留時間1min。流速5mL/min。檢測器波長220nM。溶劑A10％MeOH/90％ H2O/0.1％TFA。溶劑B10％H2O/90％ MeOH/0.1％ TFA)。(保留時間2.36min)，MS m/z621(M++1)。
步驟7(1S，4R，6S，14S，18R)-[7-順式-4-環丙烷磺醯基氨基羰基-12-環丙基-18-(叔丁基二甲基矽基氧基)-2，15-二氧代-3，12，16-三氮雜-三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基]氨基甲酸叔丁基酯的合成。

將(1S，4R，6S，14S，18R)-7-順式-14-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基二甲基矽基氧基)-2，15-二氧代-3，12，16-三氮雜三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸(490mg，0.79mmol)溶於15mL THF中，並用CDI(179mg，1.10mmol)處理。(必須小心，使用烘乾的玻璃器皿，避免溼潤，保持乾燥N2氛圍)。將反應混合物回流兩小時之後，將其冷卻至室溫，用環丙基磺醯胺(134mg，1.10mmol)和DBU(168mg，1.10mmol)順序處理。在室溫攪拌過夜之後，通過旋轉蒸發除去THF。將殘餘物溶於水中，加入1N HCl，直到pH值＝5為止。用EtOAc(3x)提取水溶液。將合併的EtOAc提取物乾燥(MgSO4)，真空濃縮，得到粗品。通過快速柱純化，用3％甲醇/二氯甲烷洗脫，得到300mg(53％)(1S，4R，6S，14S，18R)-[7-順式-4-環丙烷磺醯基氨基羰基-12-環丙基-18-(叔丁基二甲基矽基氧基)-2，15-二氧代-3，12，16-三氮雜-三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基]氨基甲酸叔丁基酯白色固體LC-MS(Phenomenex 10μm C18HPLC柱3.0x50mm長度。梯度100％溶劑A/0％溶劑B至0％溶劑A/100％溶劑B。梯度時間2min。停留時間1min。流速5mL/min。檢測器波長220nM。溶劑A10％MeOH/90％H2O/0.1％TFA。溶劑B10％H2O/90％MeOH/0.1％TFA)。(保留時間2.40min)，MS m/z 724(M++1)。
步驟8(1S，4R，6S，14S，18R)-[7-順式-4-環丙烷磺醯基氨基羰基-12-環丙基-18-羥基-2，15-二氧代-3，12，16-三氮雜-三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基]氨基甲酸叔丁基酯(實施例86)的合成。

向化合物(1S，4R，6S，14S，18R)-[7-順式-4-環丙烷磺醯基氨基羰基-12-環丙基-18-(叔丁基二甲基矽基氧基)-2，15-二氧代-3，12，16-三氮雜-三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基]氨基甲酸叔丁基酯(250mg，0.35mmol)的15mL THF的混合物中加入四丁基氟化銨(129mg，0.46mmol)。將混合物在室溫下攪拌18小時。旋轉蒸發除去THF，在乙酸乙酯和水之間分配殘餘物。乾燥(MgSO4)有機相，真空濃縮，得到粗品。用己烷研磨進行純化，提供200mg(94％)(1S，4R，6S，14S，18R)-[7-順式-4-環丙烷磺醯基氨基羰基-12-環丙基-18-羥基-2，15-二氧代-3，12，16-三氮雜-三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基]氨基甲酸叔丁基酯白色固體LC-MS(保留時間2.32min)，MS m/z 610(M++1)。
(Phenomenex 10μm C18 HPLC柱3.0x50mm長度。梯度100％溶劑A/0％溶劑B至0％溶劑A/100％溶劑B。梯度時間3min。停留時間1min。流速4mL/min。檢測器波長220nM。溶劑A10％ MeOH/90％H2O/0.1％ TFA。溶劑B10％ H2O/90％ MeOH/0.1％TFA)。(保留時間2.32min)，MS m/z 610(M++1)。
實施例87化合物1的製備
方案1
步驟12-((1R，2S)-1-(環丙基磺醯基氨基甲醯基)-2-乙烯基環丙基氨基甲醯基)-4-苯基吡咯烷-1-羧酸(2S，4S)-叔丁基酯的製備 向(2S，4S)-Boc-4-苯基吡咯烷-2-羧酸(0.711g 2，44mmol)(從Chem-Impex International，Inc購買)、二異丙基乙胺(0.948g，7.33mmol)和環丙烷磺酸(1-(R)-氨基-2-(S)-乙烯基-環丙烷羰基)醯胺HCl鹽(0.561g，2.44mmol)的二氯甲烷(24ml)混合物中加入HATU(1.21g，3.18mmol)。攪拌反應混合物14小時之後，將其用5％NaHCO3水溶液(50mL)和5％枸櫞酸水溶液(50mL)洗滌。用2x25mL二氯甲烷順序提取每個水層。用MgSO4乾燥合併的有機層，過濾，濃縮。將得到的褐色粘性油通過快速柱色譜純化(SiO2，97∶3，二氯甲烷∶甲醇)，得到2-((1R，2S)-1-(環丙基磺醯基氨基甲醯基)-2-乙烯基環丙基氨基甲醯基)-4-苯基吡咯烷-1-羧酸(2S，4S)-叔丁基酯褐色泡沫狀的固體(0.973g，79％產率)。1H NMR(CD3OD，500MHz)δ0.91(br s，1H)，1.03(d，J＝6.4Hz，1H)，1.16-1.23(m，1H)，1.31-1.38(m，1H)，1.44(dd，J＝9.6，5.6Hz，1H)，1.48(s，4H)，1.52(s，5H)，1.89(t，J＝6.4Hz)，2.09(q，J＝8.4Hz，0.4H)，2.19(q，J＝8.6Hz，0.6H)，2.85-2.90(m，0.4H)，2.92-2.97(m，0.6H)，3.44(t，J＝9.6Hz，1H)，3.65(p，J＝8.0Hz，1H)，3.93-4.01(m，1H)，4.29(dd，J＝10.1，6.7Hz，1H)，5.12(d，J＝10.1Hz，1H)，5.30(d，J＝18.0Hz，1H)，5.75-5.82(m，1H)，7.24(t，J＝6.9Hz，1H)，7.29-7.33(m，5H)；MS m/z 504(M+Na)。
步驟2(2S，4S)-N-((1R，2S)-1-(環丙基磺醯基氨基甲醯基)-2-乙烯基環丙基)-4-苯基吡咯烷-2-羧醯胺的製備 向實施例1的步驟1的產物(0.900g，1.79mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入TFA(5mL)。在室溫下攪拌30分鐘之後，濃縮反應混合物，略略地真空乾燥。將得到的褐色粘性油再溶解在二氯甲烷(10mL)中，並逐滴加入到1N HCl/二乙醚(10mL)溶液中。形成白色固體沉澱，通過真空抽濾進行收集。用二乙醚洗滌濾餅，得到0.720mg(91％產率)(2S，4S)-N-((1R，2S)-1-(環丙基磺醯基氨基甲醯基)-2-乙烯基環丙基)-4-苯基吡咯烷-2-羧醯胺。MS m/z 404(MH+)。
步驟3(S)-1-((2S，4S)-2-((1R，2S)-1-(環丙基磺醯基氨基甲醯基)-2-乙烯基環丙基氨基甲醯基)-4-苯基吡咯烷-1-基)-1-氧代壬-8-烯-2-基氨基甲酸叔丁基酯的製備 向(S)-2-(叔丁氧羰基氨基)壬-8-烯酸(從RSP Amino Acids購買)(140mg，0.516mmol)的20mL DMF溶液中加入實施例1的步驟2的產物(227mg，0.516mmol)。向此溶液中加入HATU(236mg，0.620mmol)，而後加入N-甲基嗎啉(182mg，1.80mmol)。在室溫攪拌該混合物4小時，而後真空濃縮，除去DMF。將殘餘物在0.1N HCl和乙酸乙酯之間分配(保持水相在pH值3至pH值5之間)。乾燥(MgSO4)有機相，過濾，濃縮，得到300mg粗品褐色油。快速色譜，用1-5％甲醇/CH2Cl2洗脫，得到230mg(68％)(S)-1-((2S，4S)-2-((1R，2S)-1-(環丙基磺醯基氨基甲醯基)-2-乙烯基環丙基氨基甲醯基)-4-苯基吡咯烷-1-基)-1-氧代壬-8-烯-2-基氨基甲酸叔丁基酯無色油。MS m/z 657(MH+)。
步驟4化合物1的製備 將步驟3的產物(124mg，0.189mmol)溶於CH2Cl2中，放置在N2氛圍中，用Grubb′s第二代RCM催化劑(三環己基膦[1，3-二(2，4，6-三甲基-苯基)-4，5-二氫咪唑-2-亞基][亞苄基]-二氯化釕(IV))(16mg，0.019mmol)處理。回流18小時之後，將橙色/紅色溶液冷卻至室溫，真空濃縮，得到125mg棕色油。快速色譜，用1-5％甲醇/CH2Cl2洗脫，得到60mg粗品大環產物(～60％純度，利用1H NMR和LC/MS評估)。利用製備HPLC，得到22mg純產物類白色固體。1H NMR(500MHz，CDCl3)δppm0.90-1.00(m，1H)，1.05-1.14(m，1H)，1.14-1.22(m，1H)，1.23-1.84(m，10H)，1.41(s，9H)，1.88-2.00(m，2H)，2.14-2.29(m，2H)，2.39-2.49(m，1H)，2.50-2.60(m，1H)，2.86-2.96(m，1H)，3.91-4.01(m，2H)，4.05-4.14(m，1H)，4.39-4.48(m，1H)，4.48-4.56(m，1H)，4.97-5.04(m，1H)，5.13(d，J＝8.24Hz，1H)，5.70(q，J＝8.95Hz，1H)，6.72(s，1H)，7.36-7.24(m，5H)，10.14(s，1H)..MS m/z 629(MH+)。
實施例88化合物2的製備
步驟11-(2(S)-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯醯)-4(R)-羥基-吡咯烷-2(S)-羧酸甲基酯的製備
將2(S)-叔丁氧羰基氨基-8-壬烯酸(從RSP Amino Acids購買)(3.5g，12.9mmol)的200mL二氯甲烷溶液用4(R)-羥基吡咯烷-2(S)-羧酸甲基酯鹽酸鹽(2.15g，11.8mmol)、N-甲基嗎啉(4.25mL，38.6mmol)和HATU(5.37g，14.1mmol)順序處理。在室溫下、在N2氛圍中攪拌反應混合物3天，而後真空濃縮。將殘餘物在乙酸乙酯和pH值4的緩衝液(苯二甲酸氫鹽)之間分配。用飽和NaHCO3水溶液洗滌有機相，乾燥(MgSO4)，過濾，真空濃縮，得到粗品。進行快速色譜(50％乙酸乙酯/己烷至100％乙酸乙酯)，得到4.7g(～100％)的1-(2(S)-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯醯)-4(R)-羥基-吡咯烷-2(S)-羧酸甲基酯無色油。1H NMR(500MHz，CD3OD)δ1.33-1.50(m，8H)，1.46(s，9H)，1.57(m，1H)，1.72(m，1H)2.08(m，2H)，2.28(m，1H)，3.72(s，3H，)3.75-3.87(m，2H)，4.36(m，1H)，4.51(bs，1H)，4.57(t，J＝8.2Hz，1H)，4.95(d，J＝10.4Hz，1H)，5.01(m，1H)，5.83(m，1H)；LC-MS(方法A，保留時間3.01min)，MS m/z 399(M++1)。
步驟21-{[1-(2(S)-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯醯)-4(R)-羥基-吡咯烷-2(S)羰基]-(1R)-氨基}-2(S)-乙烯基-環丙烷羧酸乙酯的製備。

將1-(2(S)-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯醯)-4(R)-羥基-吡咯烷-2(S)-羧酸甲基酯(4.7g，11.8mmol)溶於THF(80mL)、甲醇(20mL)和水(40mL)中。加入粉末氫氧化鋰(5.6g，233mmol)。在室溫下、在N2氛圍中攪拌淺黃色漿液16小時，而後真空濃縮。將殘餘物在醚和水之間分配。除去乙醚相，用1N HCl處理水相，直到pH值4為止。用乙酸乙酯提取該酸性溶液(三次)。將合併的乙酸乙酯提取物乾燥(MgSO4)，過濾，真空濃縮，得到4.36g(96％)的1-(2(S)-叔丁氧羰基氨基-8-壬烯醯基)-4(R)-羥基-吡咯烷-2(S)-羧酸白色固體。然後將該酸溶於150mL的DMF中，加入(1R，2S)-1-氨基-2-乙烯基環丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽(2.61g，13.6mmol)、N-甲基嗎啉(2.5mL，22.6mmol)和HATU(5.2g，13.7mmol)。在室溫下、在N2氛圍中攪拌反應混合物16小時，而後真空濃縮。將殘餘物在乙酸乙酯和pH值4的緩衝液(苯二甲酸氫鹽)之間分配。用飽和NaHCO3水溶液洗滌有機相，乾燥(MgSO4)，過濾，真空濃縮，得到粗品。進行快速色譜(60％-80％乙酸乙酯/己烷)，得到6.0g(98％)1-{[1-(2(S)-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯醯)-4(R)-羥基-吡咯烷-2(S)羰基]-(1R)-氨基}-2(S)-乙烯基-環丙烷羧酸乙酯白色固體。1H NMR(500MHz，CD3OD)δ1.25(t，J＝7.2Hz，3H)，1.33-1.80(m，10H)，1.46(s，9H)，2.09(m，3H)，2.25(m，2H)，3.76(m，2H)，4.14(m，2H)，4.27(dd，J＝8.5，5.2Hz，1H)，4.50(m，2H)，4.94(d，J＝10.1Hz，1H)，5.01(dd，J＝17.1，1.8Hz，1H)，5.11(dd，J＝10.4，1.8Hz，1H)，5.30(d，J＝15.6Hz，1H)，5.80(m，2H)，8.57(s，1H)；LC-MS(方法A，保留時間3.21min)，MS m/z 522(M++1)。
步驟31-{[1-(2-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯醯)-4-(叔丁基-二甲基-矽烷基氧基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-2-乙烯基環丙烷羧酸乙酯的製備。

向1-{[1-(2(S)-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯醯)-4(R)-羥基-吡咯烷-2(S)羰基]-(1R)-氨基}-2(S)-乙烯基-環丙烷羧酸乙酯(1.5g，2.87mmol)的10mLDMF混合物中加入咪唑(0.25g，3.67mmol)和叔丁基-二甲基甲矽烷基氯(516mg，3.44mmol)。將混合物在室溫下攪拌兩天。然後真空濃縮反應混合物，將殘餘物溶於乙酸乙酯中。用水洗滌此溶液，用硫酸鎂乾燥，過濾，真空濃縮，獲得粗品固體。用快速色譜純化(用20％乙酸乙酯/己烷洗脫)，得到1.43g(78％)1-{[1-(2-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯醯)-4-(叔丁基-二甲基-矽烷基氧基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-2-乙烯基環丙烷羧酸乙酯白色固體。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ0.10(s，6H)，0.89(s，9H)，1.22(m，3H)，1.31-1.48(m，16H)，1.50-1.75(m，3H)，2.06(m，3H)，2.11-2.33(m，2H)，3.70(m，2H)，4.03-4.19(m，2H)，4.21(m，1H)，4.45(t，J＝7.87Hz，1H)，4.59(m，1H)，4.91(d，J＝9.15Hz，1H)，4.98(d，J＝17.20Hz，1H)，5.08(dd，J＝10.25，1.83Hz，1H)，5.27(dd，J＝17.38，1.65Hz，1H)，5.65-5.87(m，2H).LC-MS(方法A，保留時間4.00min)；MS m/z 636(M++1)。
步驟414-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基-二甲基-矽烷基氧基)-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸乙酯的製備
向1-{[1-(2-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯醯)-4-(叔丁基-二甲基-矽烷基氧基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-2-乙烯基-環丙烷羧酸乙酯(1.63g，2.56mmol)的640mL二氯甲烷溶液中加入215mg(0.26mmol)三環己基膦[1，3-二(2，4，6-三[亞苄基]二氯化釕(IV)。將混合物回流加熱15分鐘。真空濃縮殘餘物，而後用快速柱色譜純化，用30％乙酸乙酯/己烷洗脫。為了將樣品進一步脫色，再次將粗品色譜分離，用50％醚/己烷洗脫，得到1.5g(96％)14-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基-二甲基-矽烷基氧基)-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸乙酯白色固體。1HNMR(500MHz，CD3Cl)δ0.06(s，3H)，0.07(s，3H)，0.86(s，9H)，1.18-1.24(m，6H)，1.34-1.64(m，14H)，1.86-1.96(m，3H)，2.02-2.09(m，1H)，2.11-2.17(m，1H)，2.19-2.28(m，1H)，2.57-2.63(m，1H)，3.50-3.54(m，1H)，3.71(dd，J＝10.22，6.26Hz，1H)，4.06-4.17(m，2H)，4.52-4.58(m，2H)，4.75(d，J＝8.55Hz，1H)，5.21(t，J＝9.92Hz，1H)，5.35(d，J＝7.63Hz，1H)，5.45-5.50(m，1H)，6.94(s，1H)； LC-MS(方法A，保留時間3.88min)，MS m/z 608(M++1)。
步驟514-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基-二甲基-矽烷基氧基)-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸的製備
向14-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基-二甲基-矽烷基氧基)-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸乙酯(1.5g，2.47mmol)的THF(4mL)、甲醇(1mL)和水(2mL)混合溶劑系統的溶液中加入粉末氫氧化鋰一水合物(1.0g，50mmol)。在室溫、在N2氛圍中攪拌淺黃色漿液4小時。然後真空濃縮混合物，並將殘餘物在醚和水之間分配。除去乙醚相，用1N HCl處理水相，直到pH值4為止。用乙酸乙酯提取該酸性溶液(三次)。將合併的乙酸乙酯提取物乾燥(MgSO4)，過濾，真空濃縮，得到1.2g(84％)14-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基-二甲基-矽烷基氧基)-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸類白色固體。1H NMR(300MHz，CD3OD)0.12(s，6H)，0.89(s，9H)，1.23-1.64(m，17H)，1.70-1.87(m，1H)，1.90-2.49(m，6H)，3.70-3.80(m，1H)，3.83-3.90(m，1H)，4.28-4.36(m，1H)，4.47-4.55(m，1H)，4.65(s，1H)，5.30-5.39(m，1H)，5.53-5.62(m，1H)；LC-MS(方法A，保留時間3.69min)，MS m/z580(M++1)。
步驟6[18-(叔丁基-二甲基-矽烷基氧基)-4-環丙烷磺醯基氨基羰基-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基]-氨基甲酸叔丁基酯的製備。

將14-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基-二甲基-矽烷基氧基)-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸(500mg，0.86mmol)溶於25mL THF中，並用CDI(180mg，1.12mmol)處理。(必須小心，使用烘乾的玻璃器皿，避免溼潤，保持乾燥N2氛圍)。將反應混合物回流2小時之後，將其冷卻至室溫，用環丙基磺醯胺(135mg，1.12mmol)和DBU(170mg，1.12mmol)順序處理。將反應混合物在室溫下攪拌4小時，通過旋轉蒸發除去THF。將殘餘物在乙酸乙酯和pH值4的緩衝液之間分配。乾燥(MgSO4)有機相，過濾，真空濃縮，得到粗品。然後用快速色譜純化(用33％乙酸乙酯/己烷洗脫)，得到300mg(51％)[18-(叔丁基-二甲基-矽烷基氧基)-4-環丙烷磺醯基氨基羰基-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基]-氨基甲酸叔丁基酯白色固體。1HNMR(300MHz，CD3OD)δ0.07(s，3H)，0.08(s，3H)，0.85(s，9H)，0.87-1.49(m，21H)，1.73-1.95(m，3H)，2.08-2.16(m，1H)，2.25-2.36(m，2H)，2.42-2.56(m，1H)，2.85-2.93(m，1H)，3.65-3.74(dd，J＝10.61，3.66Hz，1H)，3.89(d，J＝10.25Hz，1H)，4.34(m，J＝9.70，9.70Hz，1H)，4.43(t，J＝7.87Hz，1H)，4.57(s，1H)，4.94-5.01(m，1H)，5.10(d，J＝8.78Hz，1H)，5.66-5.75(m，1H)，6.55(s，1H)，10.13(s，1H)；LC-MS(方法A，保留時間3.81min)，MSm/z 683(M++1)。
步驟7(4-環丙烷磺醯基氨基羰基-18-羥基-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基)-氨基甲酸叔丁基酯的製備。

向[18-(叔丁基-二甲基矽烷基氧基)-4-環丙烷磺醯基氨基羰基-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基]-氨基甲酸叔丁基酯(330mg，0.48mmol)的25mL THF混合物中加入氟化四丁銨(150mg，0.54mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌18小時，而後通過旋轉蒸發除去THF。將殘餘物在乙酸乙酯和水之間分配。乾燥(MgSO4)有機相，過濾，真空濃縮，得到粗品。然後通過用己烷研磨將其純化，得到200mg(73％)(4-環丙烷磺醯基氨基羰基-18-羥基-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基)-氨基甲酸叔丁基酯白色固體。1HNMR(500MHz，CD3Cl)δ1.87-1.64(m，21H)，1.70-1.98(m，3H)，2.15-2.56(m，5H)，2.85-2.94(m，1H)，3.71(d，J＝13.91Hz，1H)，4.10-4.26(m，2H)，4.51(t，J＝7.87Hz，1H)，4.62(s，1H)，4.98(m，1H)，5.06(d，J＝8.78Hz，1H)，5.64-5.71(m，1H)，6.72(s，1H)，10.24(s，1H)；LC-MS(方法A，保留時間2.85min)，MS m/z 569(M++1)。

步驟8 在0℃，向(4-環丙烷磺醯基氨基羰基-18-羥基-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基)-氨基甲酸叔丁基酯(1.00g，1.76mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液中加入一個份額的固體Dess-Martin試劑(1.64g，3.87mmol)。除去冰浴之後，在室溫下攪拌混合物3小時，用2-丙醇(2mL)淬滅，額外攪拌1小時，真空濃縮。用乙酸乙酯研磨殘餘物，過濾，濃縮濾液。用二氯甲烷研磨殘餘物，過濾。將濾液濃縮至幹。通過快速柱純化殘餘物，首先用2∶1、然後1∶1的己烷-丙酮洗脫，得到所需要的產物白色固體(670mg，67％)。LC-MS(保留時間2.42min，方法B)，MS m/z 567(M++H)。
步驟9 在70℃油浴中，在高真空條件下，將含有溴化鎂乙醚配合物(183mg，0.71mmol)的2頸燒瓶加熱4小時。冷卻至室溫後，加入叔丁基(6S，13aS，14aR，16aS，Z)-14a-(環丙基磺醯基氨基甲醯基)-2，5，16-三氧代-1，2，3，5，6，7，8，9，10，11，13a，14，14a，15，16，16a-十六氫環丙基[e]吡咯並[1，2-a][1，4]二氮雜環十五烯-6-基氨基甲酸酯(40mg，0.071mmol)。用冰冷卻燒瓶。通過注射器加入無水THF(2mL)。將形成的淡黃色漿液在室溫下大力攪拌過夜。向用乾冰-丙酮冷卻的該燒瓶中逐滴加入苯基鋰(1.8M，在THF中，0.39mL，0.71mmol)。在此溫度下攪拌混合物2小時，而後將浴替換為冰浴，另外攪拌1小時。用飽和NH4Cl淬滅混合物，用乙酸乙酯提取。用鹽水洗滌分離的有機層，用MgSO4乾燥，過濾，濃縮。用己烷(5mL)研磨殘餘物，過濾。濃縮濾液，通過製備HPLC純化，得到9.5mg(21％)所需要的產物白色固體。1H NMR(CD3OD)δ1.01-1.21(m，4H)，1.28-1.39(m，2H)，1.45(s，9H)，1.49-1.52(m，4H)，1.63-1.72(m，2H)，1.80-1.91(m，2H)，1.98-2.04(m，1H)，2.30-2.35(m，1H)，2.44-2.55(m，2H)，2.70-2.74(m，1H)，2.94-2.97(m，1H)，4.06-4.08(m，1H)，4.31-4.39(m，2H)，4.60-4.63(m，1H)，5.21-5.29(m，1H)，5.65-5.71(m，1H)，7.31-7.34(m，1H)，7.38-7.42(m，2H)，7.63-7.65(m，2H)；LC-MS(保留時間2.74min，方法B)，MS m/z 627(M++H-H2O)，571(M++H-H2O-t-丁基)。
實施例89化合物3的製備
使用與化合物2相同的方法製備化合物3。在70℃油浴中，在高真空條件下，將含有溴化鎂乙醚配合物(183mg，0.71mmol)的2頸燒瓶加熱4小時。冷卻至室溫後，加入叔丁基(6S，13aS，14aR，16aS，Z)-14a-(環丙基磺醯基氨基甲醯基)-2，5，16-三氧代-1，2，3，5，6，7，8，9，10，11，13a，14，14a，15，16，16a-十六氫環丙基[e]吡咯並[1，2-a][1，4]二氮雜環十五烯-6-基氨基甲酸酯(40mg，0.071mmol)。用冰冷卻燒瓶。通過注射器加入無水THF(2mL)。將形成的淡黃色漿液在室溫下大力攪拌過夜。
在-78℃，向含有4-溴聯苯(165mg，0.71mmol)的THF(4mL)溶液的另一個2頸燒瓶(燒瓶B)中逐滴加入正丁基鋰(2.5M，在己烷中，0.28mL，0.71mmol)，在此溫度下將形成的溶液攪拌1小時。
在-78℃，通過套管將燒瓶B的內含物轉入冷卻至-78℃的燒瓶A中。在此溫度下將形成的微黃溶液攪拌2小時，而後用冰浴替換幹-丙酮浴，另外攪拌1小時。用飽和NH4Cl淬滅混合物，用乙酸乙酯提取。用鹽水洗滌分離的有機層，用MgSO4乾燥，過濾，濃縮。用己烷(5mL)研磨殘餘物，過濾。濃縮濾液，通過製備HPLC純化，得到4.1mg(8％)所需要的產物白色固體。1H NMR(CD3OD)δ0.87-1.10(m，4H)，1.24-1.38(m，2H)，1.45(s，9H)，1.49-1.52(m，4H)，1.70-1.84(m，4H)，1.99-2.10(m，1H)，2.22-2.35(m，1H)，2.40-2.60(m，2H)，2.70-2.80(m，1H)，2.90-2.99(m，1H)，4.08-4.11(m，1H)，4.31-4.41(m，2H)，4.61-4.69(m，1H)，5.23-5.32(m，1H)，5.61-5.70(m，1H)，7.35-7.38(m，1H)，7.43-7.48(m，2H)，7.62-7.70(m，6H)；LC-MS(保留時間2.74min，方法B)，MS m/z 703(M++H-H2O)，647(M++H-H2O-t-丁基)。
生物學研究 在本公開中，使用HCV NS3/4A蛋白酶複合酶試驗和基於細胞的HCV複製子試驗，並且如下進行製備、操作和驗證 重組體HCV NS3/4A蛋白酶複合物的產生 如下所述，形成衍生自BMS株、H77株或J4L6S株的HCV NS3蛋白酶複合物。形成這些純化的重組體蛋白，用於同源試驗(見下文)，從而提供本公開的有效化合物如何抑制HCV NS3蛋白質分解活性的指示。
從Dr.T.Wright，San Francisco Hospital獲得HCV感染患者的血清。由DNA片段(由血清RNA(核糖核酸)的逆轉錄-PCR(RT-PCR)獲得)創立經過設計的HCV基因組(BMS株)的全長cDNA(補體脫氧核糖核酸)模板，使用基於其它基因型1a株之間的同源性所選擇的引物。由整個基因組序列的測定，按照Simmonds等人的分類，將基因型1a分配給HCV獨立型(參見P Simmonds，KA Rose，S Graham，SW Chan，F McOmish，BCDow，EA Follett，PL Yap and H Marsden，J.Clin.Microbiol.，31(6)，1493-1503(1993))。非結構區域的胺基酸序列，NS2-5B，顯示了與HCV基因型1a(H77)＞97％的相同性，和與基因型1b(J4L6S)87％的相同性。由R.Purcell(NIH)獲得感染性的克隆體H77(1a基因型)和J4L6S(1b基因型)，並且序列公開在Genbank中(AAB67036，參見Yanagi，M.，Purcell，R.H.，Emerson，S.U.和Bukh，J.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.94(16)，8738-8743(1997)；AF054247，參見Yanagi，M.，St Claire，M.，Shapiro，M.，Emerson，S.U.，Purcell，R.H.和Bukh，J，Virology 244(1)，161-172(1998))。
H77和J4L6S株用於重組體NS3/4A蛋白酶複合物的製備。將這些株的重組體HCV NS3/4A蛋白酶複合物(胺基酸1027至1711)進行DNA編碼，是按照P.Gallinari等人所描述的方法進行的(參見Gallinari P，Paolini C，Brennan D，Nardi C，Steinkuhler C，De Francesco R.Biochemistry.38(17)5620-32，(1999))。簡要地說，在NS4A編碼區的3′端添加三個賴氨酸增溶尾部。將NS4A-NS4B裂解位點(胺基酸1711)的P1位置上的半胱氨酸轉換為甘氨酸，以避免賴氨酸標記物的解朊裂解。此外，在胺基酸位置1454，利用PCR引起半胱氨酸至絲氨酸的突變，以防止在NS3解螺旋酶區域中的自溶裂解。在pET21b細菌表達載體(Novagen)中克隆變體DNA片段，並且按照P.Gallinari等人所描述方案(參見Gallinari P，Brennan D，Nardi C，Brunetti M，Tomei L，Steinkuhler C，De Francesco R.，J Virol.72(8)6758-69(1998))的改型，用大腸桿菌株BL21(DE3)(Invitrogen)表達NS3/4A複合物。簡要地說，在20℃，用0.5毫摩爾(mM)的異丙基β-D-1-硫代半乳糖苷(IPTG)將NS3/4A蛋白酶複合物表達誘導22小時。典型的發酵(1升(L))得到大約10克(g)溼潤細胞軟膏。將細胞再懸浮在溶解緩衝液(10mL/g)中(溶解緩衝液由下列組成25mM N-(2-羥乙基)哌嗪-N′-(2-乙烷磺酸)(HEPES)，pH值7.5，20％丙三醇，500mM氯化鈉(NaCl)，0.5％Triton X-100，1微克/毫升(「μg/mL」)溶菌酶，5mM氯化鎂(MgCl2)，1μg/ml DnaseI，5mM β-巰基乙醇(βME)，蛋白酶抑制劑-不含乙二胺四乙酸(EDTA)(Roche))，在4℃均化並培養20分鐘。在4℃，將勻漿超聲處理，並通過在235000g下超離心1小時來進行澄清。將咪唑加入到上清液中，至15mM的最後濃度，將pH值調節至8.0。將粗蛋白提取物裝填到氮川三乙酸鎳(Ni-NTA)柱上，該柱用緩衝液B(25mM HEPES，pH 8.0，20％丙三醇，500mM NaCl，0.5％Triton X-100，15mM咪唑，5mMβME)預平衡。以1mL/min的流速裝填樣品。用15柱體積的緩衝液C(與緩衝液B相同，只是含有0.2％TritonX-100)洗滌該柱。用5柱體積的緩衝液D(與緩衝液C相同，只是含有200mM咪唑)洗脫蛋白。
收集含有NS3/4A蛋白酶複合物的部分，並裝填到脫鹽柱Superdex-S200上，該柱用緩衝液D(25mM HEPES，pH 7.5，20％丙三醇，300mM NaCl，0.2％Triton X-100，10mM βME)預平衡。以1mL/min的流速裝填樣品。收集含有NS3/4A蛋白酶複合物的餾分，並濃縮至大約0.5mg/ml。通過SDS-PAGE和質譜分析斷定，NS3/4A蛋白酶複合物(衍生自BMS、H77和J4L6S株)的純度大於90％。將酶在-80℃存儲，在冰上解凍，在試驗緩衝液中使用之前進行稀釋。
監控HCV NS3/4A蛋白質分解活性的FRET肽試驗 該體外試驗的目的是測定本公開化合物對HCV NS3蛋白酶複合物(衍生自BMS株、H77株或J4L6S株，如上所述)的抑制。該試驗提供了本公開的有效化合物如何抑制HCV NS3蛋白質分解活性的指標。
為了監控HCV NS3/4A蛋白酶活性，使用NS3/4A肽基質。該基質是RET S1(共振能量轉移縮酚酸肽基質(Resonance Energy TransferDepsipeptide Substrate)；AnaSpec，Inc.cat#22991)(FRET肽)，由Taliani等人在Anal.Biochem.240(2)60-67(1996)中進行了描述。對於HCV NS3蛋白酶，該肽的序列泛泛地基於NS4A/NS4B天然裂解位點，只是在裂解位點有酯鍵而不是醯胺鍵。該肽還含有接近肽的一端的螢光供體EDANS，和接近另一個端部的受體DABCYL。通過在供體和受體之間的分子間共振能量轉移(RET)，可以猝滅肽的螢光，但當NS3蛋白酶裂解肽時，產物從RET猝滅階段釋放，並且供體的螢光變得清晰可見。
在不存在或存在本公開化合物的條件下，用三個重組體NS3/4A蛋白酶複合物中的一個來培養肽基質。通過使用Cytofluor Series 4000來實時監控螢光反應產物的形成，測定化合物的抑制效果。
試劑如下從GIBCO-BRL獲得HEPES和丙三醇(超純)。從Sigma獲得二甲亞碸(DMSO)。從Bio Rad獲得β-巰基乙醇。
試驗緩衝液50mM HEPES，pH值7.5；0.15M NaCl；0.1％Triton；15％丙三醇；10mM βME。基質2μM最後濃度(得自於2mM儲備溶液，在DMSO中，在-20℃存儲)。HCV NS3/4A蛋白酶類型1a(1b)，2-3nM最後濃度(得自於5μM儲備溶液，在25mM HEPES(pH值7.5)、20％丙三醇、300mM NaCl、0.2％ Triton-X100、10mM βME中)。對於具有接近試驗極限的潛力的化合物，通過向試驗緩衝液中添加50μg/ml牛血清白蛋白(Sigma)，並且將最終蛋白酶濃度降低至300pM，可以使試驗更靈敏。
在96孔聚苯乙烯黑色平皿(得自於Falcon)中進行試驗。每個孔含有25μl NS3/4A蛋白酶複合物(在試驗緩衝液中)、50μl本公開的化合物(在10％DMSO/試驗緩衝液中)和25μl基質(在試驗緩衝液中)。在相同試驗平皿上製備對照物(不含化合物)。將酶複合物與化合物或對照物溶液混合1分鐘，而後通過加入基質來引發酶促反應。使用CytofluorSeries 4000(Perspective Biosystems)立即將試驗平皿讀數。設置儀器，從而在25℃讀出340nm的發射和490nm的激發。反應通常進行大約15分鐘。
用下列方程式計算百分比抑制 100-[(δFinh/δFcon)x100] 其中δF是在曲線的線性範圍內的螢光變化。將非線性的曲線擬合用於抑制-濃度數據，通過利用Excel XLfit軟體，使用方程式y＝A+((B-A)/(1+((C/x)^D)))來計算50％有效濃度(IC50值)。
特異性試驗 進行特異性試驗，以說明本公開化合物在抑制HCV NS3/4A蛋白酶(與其它絲氨酸或半胱氨酸蛋白酶類相比)時的體外選擇性。
相對於各種絲氨酸蛋白酶類，測定本公開化合物的特異性人類嗜中性白細胞彈性酶(HNE)、豬胰腺彈性酶(PPE)和人類胰腺糜蛋白酶，和一種巰基蛋白酶人類肝組織蛋白酶B。在所有情況下，使用先前描述的96孔平皿程式方案(使用對於每種酶具有螢光的氨基-甲基-香豆素(AMC)特定基質)(PCT專利申請No.WO 00/09543)，對於絲氨酸蛋白酶試驗進行一些改進。所有的酶是從Sigma，EMDbiosciences購買的，而基質得自於Bachem，Sigma和EMDbiosciences。
根據化合物的勢能，化合物濃度在100至0.4μM之間變化。通過將基質加入到酶抑制劑(在室溫下預先培養10分鐘，並且在cytofluor上測定，水解至15％轉化率)中來引發每個酶試驗。
每個試驗的最終條件如下 50mM三(羥基甲基)氨基甲烷鹽酸鹽(Tris-HCl)pH值8，0.5M硫酸鈉(Na2SO4)，50mM NaCl，0.1mM EDTA，3％DMSO，0.01％Tween-20(含有5μM LLVY-AMC)和1nM糜蛋白酶。
50mM Tris-HCl(pH值8.0)，50mM NaCl，0.1mM EDTA，3％DMSO，0.02％Tween-20，5μM succ-AAPV-AMC和20nM HNE或8nM PPE； 100mM NaOAC(乙酸鈉)pH值5.5，3％DMSO，1mM TCEP(三(2-羧乙基)膦鹽酸鹽)，5nM組織蛋白酶B(在使用之前，在含有20mM TCEP的緩衝液中活化的酶原料)和2μM Z-FR-AMC(在水中稀釋)。
使用下式計算抑制的百分比 [1-((UVinh-UVblank)/(UVctl-UVblank))]x100 非線性的曲線擬合用於抑制-濃度數據，通過利用Excel XLfit軟體計算50％有效濃度(IC50值)。
HCV複製子的產生 利用下列中所描述的方法建立HCV複製子完整的細胞系統Lohmann V，Korner F，Koch J，Herian U，Theilmann L，Bartenschlager R.，Science 285(5424)110-3(1999)。該系統能夠使我們評價HCV蛋白酶化合物對HCV RNA複製的效果。簡要地說，使用Lohmann文章(登錄號AJ238799)中所描述的HCV株1b序列，通過Operon Technologies，Inc.(Alameda，CA)合成HCV cDNA，然後使用標準分子生物學技術，在質粒pGem9zf(+)(Promega，Madison，WI)中組裝全長複製子。複製子由下列組成(i)HCV 5′UTR，其與衣殼蛋白的頭12個胺基酸稠合，(ii)新黴素磷酸轉移酶基因(neo)，(iii)得自於腦心肌炎病毒(EMCV)的IRES，和(iv)HCV NS3至NS5B基因和HCV 3′UTR。用ScaI將質粒DNAs線性化，按照製造商的說明，使用T7MegaScript轉錄試劑盒(Ambion，Austin，TX)體外合成RNA轉錄產物。將cDNA的體外轉錄產物轉染到人類肝癌細胞系HUH-7中。在選擇性標記物新黴素(G418)的存在下，獲得對可結構性表達HCV複製子的細胞的選擇。隨著時間推移所得到細胞系被賦予正和負鏈RNA產物和蛋白產物的特性。
HCV複製子FRET試驗 進行HCV複製子FRET試驗，以監控本公開所描述化合物對HCV病毒複製的抑制效果。使結構性表達HCV複製子的HUH-7細胞生長在Dulbecco改進的Eagle培養基(DMEM)(Gibco-BRL)中，該培養基含有10％胎牛血清(FCS)(Sigma)和1mg/ml G418(Gibco-BRL)。在96孔組織培養無菌平皿中，天黑以前將細胞播種(1.5x104個細胞/孔)。在稀釋平皿(在試驗中，0.5％DMSO最後濃度)中，在含有4％FCS、1∶100青黴素/鏈黴素(Gibco-BRL)、1∶100L-谷醯胺和5％DMSO的DMEM中製備化合物和沒有化合物的對照物。將化合物/DMSO混合物加入到細胞中，在37℃培養4天。4天之後，首先使用阿爾瑪藍(Trek Diagnotstic Systems)評價細胞的細胞毒性，以CC50示數。通過向培養細胞的介質中加入1/10th體積的阿爾瑪藍，測定化合物的毒性(CC50)。4小時之後，讀出每個孔的螢光信號，用530nm的激發波長和580nm的發射波長，使用CytofluorSeries 4000(Perspective Biosystems)。然後用磷酸緩衝鹽水(PBS)(3次，150μl)徹底衝洗平皿。將細胞用25μl的溶解試驗試劑溶解，該試劑含有HCV蛋白酶基質(5X細胞螢光素酶細胞培養物溶解試劑(Promega#E153A))，用蒸餾水稀釋至1X，NaCl加入到150mM最終濃度，FRET肽基質(上面酶試驗所描述)稀釋至10μM最終濃度(用2mM原料，在100％DMSO中)。然後將平皿放入Cytofluor 4000儀器中，將該儀器定到340nM激發/490nm發射，21個循環的自動化模式，以動力學模式進行平皿讀數。按照IC50值測定所描述的方法，進行EC50值測定。
HCV複製子螢光素酶指示試驗 作為其次的試驗，在複製子螢光素酶指示試驗中，證明了由複製子FRET試驗得到的EC50值測定數據。複製子螢光素酶指示試驗的使用，首先由Krieger等人進行了描述(Krieger N，Lohmann V，和BartenschlagerR，J.Virol.75(10)4614-4624(2001))。利用嵌入cDNA編碼Renilla螢光素酶基因的人源化形式和直接與螢光素酶基因的3′端稠合的連接序列，改進了FRET試驗所描述的複製子結構。使用位於核中的Asc1限制位點(新黴素標誌基因的直接上遊)，將這種嵌入引入複製子結構中。還可在位置1179(絲氨酸至異亮氨酸)引起適應性突變(Blight KJ，Kolykhalov，AA，Rice，CM，Science 290(5498)1972-1974)。形成結構性表達這種HCV複製子結構的穩定細胞系，如上所述。按照具有下列改進的HCV複製子FRET試驗所描述的方法，建立螢光素酶指示試驗。在37℃/5％CO2培養箱中4天之後，使用Promega Dual-Glo螢光素酶試驗系統，分析細胞的Renilla螢光素酶活性。從含有細胞的每個孔中除去介質(100μl)。向剩餘的50μl介質中加入50μl Dual-Glo螢光素酶試劑，在室溫下將平皿搖動10分鐘至2小時。然後將Dual-Glo Stop & Glo試劑(50μl)加入到每個孔中，在室溫下再次搖動平皿10分鐘至2小時。使用螢光程序，在Packard TopCount NXT上將平皿讀數。
使用下式計算抑制的百分比
將該值製成圖形，使用XLfit進行分析，獲得EC50值。
注意，通過使用示於表2中的專利實施例編號和專利化合物編號，可以在本文中找到化合物的結構。
表2 對於本領域技術人員其是明顯的，本公開不局限於前述的說明例證性的實施例，在不背離本公開的必要特性的條件下，其可以用其它特定形式來加以涵蓋。因此期望，實施例在各個方面被認為是說明例證性的，而不是限制性的，應參考附加的權利要求、而不是前述實施例，因此意欲包括落入權利要求的等效內容的含義和範圍內的所有變化。
權利要求
1.式(I)的化合物
或其可藥用鹽，其中
R1選自烷氧基、羥基和-NHSO2R7；
R2a和R2b獨立地選自氫和甲基；
R3選自烯基、烷基、芳基、芳烷基、環烷基、(環烷基)烷基、雜環基和雜環基烷基；條件是，當R4是氫時，則R3不是雜環基；
R4選自氫和羥基；
R5選自氫、烷基和環烷基；
R6選自氫、烷基、烷氧羰基、烷胺基羰基、烷基羰基、氨基羰基、芳氧羰基、環烷基氧基羰基、二烷胺基羰基、滷代烷氧基羰基、滷代烷基、滷代烷基羰基、雜環基氧基羰基和(NRaRb)磺醯基；
R7選自烷基、芳基、環烷基、(環烷基)烷基、雜環基和-NRaRb；其中環烷基和(環烷基)烷基的環烷基部分任選被一個、兩個或三個獨立地選自下列的基團取代烯基，烷氧基，烷氧基烷基，烷基，芳烷基，芳基羰基，氰基，環烯基，(環烷基)烷基，滷素，滷代烷氧基，滷代烷基和(NReRf)羰基；且其中Ra和Rb獨立地選自氫、烷氧基、烷基、芳基、芳烷基、環烷基、(環烷基)烷基、滷代烷基、雜環基和雜環基烷基；且其中Re和Rf獨立地選自氫、烷基、芳基、芳烷基和雜環基；其中芳基、芳烷基的芳基部分和雜環基任選被一或兩個獨立地選自烷氧基、烷基和滷素的取代基取代；和
Q是C3-9飽和或不飽和鏈，任選含有一個至三個獨立地選自O、S(O)m和NR9的雜原子，其中m是0、1或2，和R9選自氫、烷氧基、烷氧羰基、烷基、烷基羰基、烷基磺醯基、氨基羰基、芳基磺醯基、環烷基、(環烷基)烷基、環烷基氧基、二烷胺基羰基、二烷胺基羰基烷基、滷代烷基和雜環基羰基。
2.權利要求1的化合物或其可藥用鹽，其中
R4是羥基；和
R2a和R2b各自是氫。
3.權利要求1的化合物或其可藥用鹽，其中R1是-NHSO2R7。
4.權利要求3的化合物或其可藥用鹽，其中R7是環烷基。
5.權利要求1的化合物或其可藥用鹽，其中Q是含有零個雜原子的C6不飽和鏈。
6.式(II)的化合物
或其可藥用鹽，其中
R1是-NHSO2R7；
R2a和R2b是氫；
R3選自烯基、烷基、芳基、芳烷基、環烷基、(環烷基)烷基、雜環基和雜環基烷基；條件是，當R4是氫時，則R3不是雜環基；
R4選自氫和羥基；
R5是氫；
R6是烷氧羰基；
R7選自烷基、芳基、環烷基、(環烷基)烷基、雜環基和-NRaRb；其中Ra和Rb獨立地選自氫、烷氧基、烷基、芳基、芳烷基、環烷基、(環烷基)烷基、滷代烷基、雜環基和雜環基烷基；和
Q是C3-9飽和或不飽和鏈，任選含有一個至三個獨立地選自O、S(O)m和NR9的雜原子，其中m是0、1或2，和R9選自氫、烷氧基、烷氧羰基、烷基、烷基羰基、烷基磺醯基、氨基羰基、芳基磺醯基、環烷基、(環烷基)烷基、環烷基氧基、二烷胺基羰基、二烷胺基羰基烷基、滷代烷基和雜環基羰基。
7.權利要求6的化合物或其可藥用鹽，其中
R4是羥基；
R7是環烷基；和
Q是含有零個雜原子的C6不飽和鏈。
8.選自下列的化合物
或其可藥用鹽。
9.一種藥物組合物，其包含權利要求1的化合物或其可藥用鹽和可藥用載體。
10.權利要求9的組合物，進一步包含至少一種具有抗HCV活性的其它化合物。
11.權利要求10的組合物，其中至少一種其它化合物是幹擾素或利巴韋林。
12.權利要求10的組合物，其中至少一種其它化合物選自白細胞間介素2、白細胞間介素6、白細胞間介素12、可增加1型輔助性T細胞響應形成的化合物、幹擾性的RNA、反義RNA、咪奎莫特、利巴韋林、次黃嘌呤核苷5′-一磷酸脫氫酶抑制劑、金剛烷胺和金剛烷乙胺。
13.治療患者HCV感染的方法，該方法包括給予患者治療有效量的權利要求1的化合物或其可藥用鹽。
14.權利要求13的方法，進一步包括給予至少一種具有抗HCV活性的其它化合物，該化合物在給予權利要求1的化合物或其可藥用鹽之前、之後或與其同時給予。
15.權利要求14的方法，其中至少一種其它化合物是幹擾素或利巴韋林。
全文摘要
公開了具有如右通式的大環肽，還公開了包含該化合物的組合物和使用該化合物來抑制HCV的方法。
文檔編號C07D498/04GK101568336SQ200780048062
公開日2009年10月28日 申請日期2007年11月15日 優先權日2006年11月16日
發明者A·X·王, B·Z·鄭, S·丹德裡, N·A·米恩威爾, P·M·斯科拉 申請人:百時美施貴寶公司