Fbn1基因突變體及其應用的製作方法
2023-07-28 04:44:06 2
Fbn1基因突變體及其應用的製作方法
【專利摘要】本發明公開了FBN1基因突變體及其應用，具體涉及分離的編碼FBN1突變體的核酸，分離的多肽，篩選易患馬凡氏症候群的生物樣品的方法，篩選易患馬凡氏症候群的生物樣品的系統，以及用於篩選易患馬凡氏症候群的生物樣品的試劑盒。其中，該分離的編碼FBN1突變體的核酸，與SEQ?ID?NO：1相比，具有c.C2671T突變。通過檢測該新突變體在生物樣品中是否存在，可以有效地檢測生物樣品是否易患馬凡氏症候群。
【專利說明】FBN1基因突變體及其應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及FBN1基因突變體及其應用。具體地，本發明涉及分離編碼FBN1突變體 的核酸，分離的多肽，篩選易患馬凡氏症候群的生物樣品的方法，篩選遺憾馬凡氏症候群的 生物樣品的系統，用於篩選易患馬凡氏症候群的生物樣品的試劑盒，構建體以及重組細胞。
【背景技術】
[0002] 馬凡氏症候群（Marfan' s Syndrome，MFS)是一種常染色體顯性遺傳性結締組織 疾病。發病率為1/5000?1/10000。其中，25%?30%為散發病例。MFS為不完全外顯性 遺傳病，患者臨床表現多樣化，在不同家系之間甚至在同一家系的不同患者之間，都存在較 大的表型差異。典型的MFS臨床表現主要涉及骨骼、眼和心血管系統。目前，馬凡氏症候群 致病基因比較明確，已證實FBN1基因的突變與MFS的發病相關，但仍存在著相當一部分未 知致病基因位點。
[0003] 因而，目前對馬凡氏症候群的研究仍有待深入。
【發明內容】
[0004] 本發明旨在至少解決現有技術中存在的技術問題之一。為此，本發明的一個目的 在於提出一種能夠有效篩選易患馬凡氏症候群的生物樣品的方法。
[0005] 本發明是基於發明人的下列工作完成的：發明人通過目標區域捕獲測序聯合候選 基因突變驗證的方法確定了馬凡氏症候群的新的致病突變--FBN1基因22號外顯子上的 C.C2671T 突變）。
[0006] 根據本發明的第一方面，本發明提出了一種分離的編碼FBN1突變體的核酸。根據 本發明的實施例，所述核酸與SEQ ID N0:1相比，具有C.C2671T突變，即相對於野生型FBN1 基因，本發明的FBN1基因突變體的第2671位鹼基從C突變為T。根據本發明的實施例，發 明人確定了 FBN1基因的新突變體，該突變體與馬凡氏症候群的發病密切相關，從而通過檢 測該新突變體在生物樣品中是否存在，可以有效地檢測生物樣品是否易患馬凡氏症候群。
[0007] 根據本發明的第二方面，本發明提出了一種分離的多肽。根據本發明的實施例，與 SEQID N0 :2相比，所述分離的多肽具有p. Gln891X突變，即該突變是由於c. C2671T的無義 突變而引起的，具體地，該突變表示：該分離的多肽，由於野生型FBN1的第891位Gin的密 碼子突變為終止密碼子，翻譯提前終止。通過檢測生物樣品中是否表達該多肽，可以有效地 檢測生物樣品是否易患馬凡氏症候群。
[0008] 根據本發明的第三方面，本發明提出了一種篩選易患馬凡氏症候群的生物樣品的 方法。根據本發明的實施例，該方法包括以下步驟：從所述生物樣品提取核酸樣本；確定所 述核酸樣本的核酸序列；所述核酸樣本的核酸序列與SEQ ID N0 :1相比，具有c. C2671T突 變是所述生物樣品易患馬凡氏症候群的指示。通過根據本發明實施例的篩選易患馬凡氏綜 合徵的生物樣品的方法，可以有效地篩選易患馬凡氏症候群的生物樣品。
[0009] 根據本發明的第四方面，本發明提出了一種篩選易患馬凡氏症候群的生物樣品的 系統。根據本發明的實施例，該系統包括：核酸提取裝置，所述核酸提取裝置用於從所述生 物樣品提取核酸樣本；核酸序列確定裝置，所述核酸序列確定裝置與所述核酸提取裝置相 連，用於對所述核酸樣本進行分析，以便確定所述核酸樣本的核酸序列；判斷裝置，所述判 斷裝置與所述核酸序列確定裝置相連，以便基於所述核酸樣本的核酸序列與SEQ ID NO :1 相比，是否具有c. C2671T突變，判斷所述生物樣品是否易患馬凡氏症候群。利用該系統，能 夠有效地實施前述篩選易患馬凡氏症候群的生物樣品的方法，從而可以有效地篩選易患馬 凡氏症候群的生物樣品。
[0010] 根據本發明的第五方面，本發明提出了一種用於篩選易患馬凡氏症候群的生物樣 品的試劑盒。根據本發明的實施例，該試劑盒含有：適於檢測FBN1基因突變體的試劑，其中 與SEQ ID N0:1相比，該FBN1基因突變體具有C.C2671T突變。利用根據本發明的實施例 的試劑盒，能夠有效地篩選易患馬凡氏症候群的生物樣品。
[0011] 根據本發明的第六方面，本發明還提出了一種構建體。根據本發明的實施例，該構 建體包含前面所述的分離的編碼FBN1突變體的核酸。由此，利用本發明的構建體轉化受體 細胞獲得的重組細胞，能夠有效地用於篩選治療馬凡氏症候群的藥物。
[0012] 根據本發明的第七方面，本發明還提出了一種重組細胞。根據本發明的實施例，該 重組細胞是通過前面所述的構建體轉化受體細胞而獲得的。根據本發明的一些實施例，利 用本發明的重組細胞，能夠有效地篩選治療馬凡氏症候群的藥物。
[0013] 本發明的附加方面和優點將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變 得明顯，或通過本發明的實踐了解到。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0014] 本發明的上述和/或附加的方面和優點從結合下面附圖對實施例的描述中將變 得明顯和容易理解，其中 ：
[0015] 圖1顯示了根據本發明實施例的篩選易患馬凡氏症候群的生物樣品的系統及其 組成部分的示意圖，其中，
[0016] 圖1A為根據本發明實施例的篩選易患馬凡氏症候群的生物樣品的系統的示意 圖，
[0017] 圖1B為根據本發明實施例的核酸提取裝置的示意圖，
[0018] 圖1C為根據本發明實施例的核酸序列確定裝置的示意圖；
[0019] 圖2顯示了根據本發明一個實施例的馬凡氏症候群患者家系的家系圖；
[0020] 圖3顯示了根據本發明的一個實施例，馬凡氏症候群患者家系中患者及家系內正 常人的FBN1基因c. C2671T突變位點的Sanger測序驗證峰圖。
【具體實施方式】
[0021] 下面詳細描述本發明的實施例，所述實施例的示例在附圖中示出，其中自始至終 相同或類似的標號表示相同或類似的元件或具有相同或類似功能的元件。下面通過參考附 圖描述的實施例是示例性的，僅用於解釋本發明，而不能理解為對本發明的限制。
[0022] FBN1基因突變體
[0023] 根據本發明的第一方面，本發明提出了一種分離的編碼FBN1突變體的核酸。根據 本發明的實施例，所述核酸與SEQ ID勵：1相比，具有〇.026711'突變。在本文中所使用的 表達方式"編碼FBN1突變體的核酸"，是指與編碼FBN1突變體的基因相對應的核酸物質， 即核酸的類型不受特別限制，可以是任何包含與FBN1突變體的編碼基因相對應的脫氧核 糖核苷酸和/或核糖核苷酸的聚合物，包括但不限於DNA、RNA或cDNA。根據本發明的一個 具體示例，前面所述的編碼FBN1突變體的核酸為DNA。根據本發明的實施例，發明人確定 了 FBN1基因的新突變體，這些新突變體與馬凡氏症候群的發病密切相關，從而通過檢測該 新突變體在生物樣品中是否存在，可以有效地檢測生物樣品是否易患馬凡氏症候群，也可 以通過檢測這些突變體在生物體中是否存在，可以有效地預測生物體是否易患馬凡氏綜合 徵。
[0024] 對於本發明說明書和權利要求書中，提及核酸，本領域技術人員應當理解，實際包 括互補雙鏈的任意一條，或者兩條。為了方便，在本說明書和權利要求書中，雖然多數情況 下只給出了一條鏈，但實際上也公開了與之互補的另一條鏈。例如，提及SEQ ID N0 :1，實際 包括其互補序列。本領域技術人員還可以理解，利用一條鏈可以檢測另一條鏈，反之亦然。
[0025] 該編碼FBN1突變體的核酸，是本申請的發明人通過目標區域捕獲測序聯合候選 基因突變驗證的方法確定的馬凡氏症候群的致病基因 FBN1上的新突變。該突變位點在現 有技術中並未被提到。
[0026] 其中，野生型FBN1基因的cDNA具有如下所示的核苷酸序列：
[0027] 1 ATGCGTCGAG GGCGTCTGCT GGAGATCGCC CTGGGATTTA CCGTGCTTTT AGCGTCCTAC
[0028] 61 ACGAGCCATG GGGCGGACGC CAATTTGGAG GCTGGGAACG TGAAGGAAAC CAGAGCCAGT
[0029] 121 CGGGCCMGA GAAGAGGCGG TGGAGGACAC GACGCGCTTA AAGGACCCAA TGTCTGTGGA
[0030] 181 TCACGTTATA ATGCTTACTG TTGCCCTGGA TGGAMACCT TACCTGGCGG AAATCAGTGT
[0031] 241 ATTGTCCCCA TTTGCCGGCA TTCCTGTGGG GATGGATTTT GTTCGAGGCC AAATATGTGC
[0032] 301 ACTTGCCCAT CTGGTCAGAT AGCTCCTTCC TGTGGCTCCA GATCCATACA ACACTGCAAT
[0033] 361 ATTCGCTGTA TGAATGGAGG TAGCTGCAGT GACGATCACT GTCTATGCCA GAAAGGATAC
[0034] 421 ATAGGGACTC ACTGTGGACA ACCTGTTTGT GAAAGTGGCT GTCTCAATGG AGGAAGGTGT
[0035] 481 GTGGCCCCAA ATCGATGTGC ATGCACTTAC GGATTTACTG GACCCCAGTG TGAMGAGAT
[0036] 541 TACAGGACAG GCCCATGTTT TACTGTGATC AGCAACCAGA TGTGCCAGGG ACAACTCAGC
[0037] 601 GGGATTGTCT GCACAAMCA GCTCTGCTGT GCCACAGTCG GCCGAGCCTG GGGCCACCCC
[0038] 661 TGTGAGATGT GTCCTGCCCA GCCTCACCCC TGCCGCCGTG GCTTCATTCC AAATATCCGC
[0039] 721 ACGGGAGCTT GTCAAGATGT GGATGAATGC CAGGCCATCC CCGGGCTCTG TCAGGGAGGA
[0040] 781 AATTGCATTA ATACTGTTGG GTCTTTTGAG TGCAMTGCC CTGCTGGACA CAAACTTAAT
[0041] 841 GMGTGTCAC MAAATGTGA AGATATTGAT GAATGCAGCA CCATTCCTGG AATCTGTGM
[0042] 901 GGGGGTGAAT GTACAAACAC AGTCAGCAGT TACTTTTGCA AATGTCCCCC TGGTTTTTAC
[0043] 961 ACCTCTCCAG ATGGTACCAG ATGCATAGAT GTTCGCCCAG GATACTGTTA CACAGCTCTG
[0044] 1021 ACAAACGGGCGCTGCTCTAA CCAGCTGCCA CAGTCCATAA CCAAAATGCA GTGCTGCTGT
[0045] 1081 GATGCCGGCC GATGCTGGTC TCCAGGGGTC ACTGTCGCCC CTGAGATGTG TCCCATCAGA
[0046] 1141 GCAACCGAGG ATTTCAACAA GCTGTGCTCT GTTCCTATGG TAATTCCTGG GAGACCAGM
[0047] 1201 TATCCTCCCC CACCCCTTGG CCCCATTCCT CCAGTTCTCC CTGTTCCTCC TGGCTTTCCT
[0048] 1261 CCTGGACCTC MATTCCGGT CCCTCGACCA CCAGTGGAAT ATCTGTATCC ATCTCGGGAG
[0049] 1321 CCACCAAGGG TGCTGCCAGT MACGTTACT GATTACTGCC AGTTGGTCCG CTATCTCTGT
[0050] 1381 CMAATGGAC GCTGCATTCC MCTCCTGGG AGTTACCGGT GTGAGTGCAA CAAAGGGTTC
[0051] 1441 CAGCTGGACC TCCGTGGGGA GTGTATTGAT GTTGATGAAT GTGAGAAAAA CCCCTGTGCT
[0052] 1501 GGTGGTGAGT GTATTAACAA CCAGGGTTCG TACACCTGTC AGTGCCGAGC TGGATATCAG
[0053] 1561 AGCACACTCA CGCGGACAGA ATGCCGAGAC ATTGATGAGT GTTTACAGAA TGGCCGGATC
[0054] 1621 TGCAATMTG GACGCTGCAT CAACACAGAT GGCAGTTTTC ATTGCGTGTG TAATGCGGGC
[0055] 1681 TTTCATGTTA CACGAGATGG GAAGAACTGT GAAGATATGG ATGAATGCAG CATAAGGAAC
[0056] 1741 ATGTGCCTTA ATGGAATGTG TATCAATGAA GATGGCAGTT TTAAATGTAT TTGCAAACCT
[0057] 1801 GGATTCCAGC TGGCATCAGA TGGACGTTAT TGCAMGACA TTAACGAGTG TGAMCCCCT
[0058] 1861 GGGATCTGCA TGAATGGGCG TTGCGTCAAC ACTGATGGCT CCTACAGATG TGAATGCTTC
[0059] 1921 CCTGGACTGG CTGTGGGTCT GGATGGCCGT GTGTGTGTTG ACACACACAT GCGGAGCACA
[0060] 1981 TGCTATGGTG GATACAAGAG AGGCCAGTGT ATCAMCCTT TGTTTGGTGC TGTCACTAM
[0061] 2041 TCTGAATGCT GTTGCGCCAG CACTGAGTAT GCATTTGGGG AACCTTGCCA GCCGTGTCCT
[0062] 2101 GCACAGAATT CAGCGGMTA TCAGGCACTC TGCAGCAGTG GGCCAGGAAT GACGTCAGCA
[0063] 2161 GGCAGTGATA TAAATGMTG TGCACTAGAT CCTGATATTT GCCCMATGG AATCTGTGM
[0064] 2221 AACCTTCGTG GGACCTATAA ATGTATATGC AATTCAGGAT ATGAAGTGGA TTCAACTGGG
[0065] 2281 AMAACTGCG TTGATATTAA TGAATGTGTA CTGAACAGTC TCCTTTGTGA CAATGGACM
[0066] 2341 TGTAGAMTA CTCCTGGAAG TTTTGTCTGT ACCTGCCCCA AGGGATTTAT CTACAAACCT
[0067] 2401 GATCTAMAA CATGTGMGA CATTGATGAA TGCGMTCAA GTCCTTGCAT TAATGGAGTC
[0068] 2461 TGCAAGAACA GCCCAGGCTC TTTTATTTGT GAATGTTCTT CTGAMGTAC TTTGGATCCA
[0069] 2521 ACAAAAACCA TCTGCATAGA MCCATCAAG GGCACTTGCT GGCAGACTGT CATTGATGGG
[0070] 2581 CGATGTGAGA TCAACATCAA TGGAGCCACC TTAAAGTCCC AGTGCTGCTC CTCCCTCGGT
[0071] 2641 GCTGCGTGGG GAAGCCCGTG CACCCTATGCgAAGTTGATC CCATATGTGG TAAAGGGTAC
[0072] 2701 TCAAGAATTA MGGAACACA ATGTGMGAT ATAGATGAAT GTGAAGTGTT CCCAGGAGTG
[0073] 2761 TGTAAAMTG GCCTGTGTGT TAACACTAGG GGGTCATTCA AGTGTCAGTG TCCCAGTGGA
[0074] 2821 ATGACTTTGG ATGCCACAGG MGGATCTGT CTTGATATCC GCCTGGAAAC CTGCTTCCTG
[0075] 2881 AGGTACGAGG ACGAGGAGTG CACCCTGCCT ATTGCTGGCC GCCACCGCAT GGACGCCTGC
[0076] 2941 TGCTGCTCCG TCGGGGCAGC CTGGGGTACT GAGGMTGCG AGGAGTGTCC CATGAGMAT
[0077] 3001 ACTCCTGAGT ACGAGGAGCT GTGTCCGAGA GGACCCGGAT TTGCCACAAA AGAMTTACA
[0078] 3061 AATGGAMGC CTTTCTTCAA AGATATCAAT GAGTGCAAGA TGATACCCAG CCTCTGCACC
[0079] 3121 CACGGCMGT GCAGAAACAC CATTGGCAGC TTTAAGTGCA GGTGTGACAG CGGCTTTGCT
[0080] 3181 CTTGATTCTG MGAAAGGAA CTGCACAGAC ATTGACGAAT GCCGCATATC TCCTGACCTC
[0081] 3241 TGTGGCAGAG GCCAGTGTGT GAACACCCCT GGGGACTTTG AATGCAAGTG TGACGAAGGC
[0082] 3301 TATGAAAGTG GATTCATGAT GATGAAGAAC TGCATGGATA TTGATGAGTG TCAGAGAGAT
[0083] 3361 CCTCTCCTAT GCCGAGGTGG TGTTTGCCAT AACACAGAGG GAAGTTACCG CTGTGAATGC
[0084] 3421 CCGCCTGGCC ATCAGCTGTC CCCCAACATC TCCGCGTGTA TCGACATCAA TGAATGTGAG
[0085] 3481 CTGAGTGCAC ACCTGTGCCC CAATGGCCGT TGCGTGAACC TCATAGGGAA GTATCAGTGT
[0086] 3541 GCCTGCMCC CTGGCTACCA TTCAACTCCC GATAGGCTAT TTTGTGTTGA CATTGATGAA
[0087] 3601 TGCAGCATAA TGAATGGTGG TTGTGMACC TTCTGCACAA ACTCTGAAGG CAGCTATGAA
[0088] 3661 TGTAGCTGTC AGCCGGGATT TGCACTAATG CCTGACCAGA GATCATGCAC CGACATCGAT
[0089] 3721 GAGTGTGAAG ATAATCCCAA TATCTGTGAT GGTGGTCAGT GCACMATAT CCCTGGAGAG
[0090] 3781 TACAGGTGCT TGTGTTATGA TGGATTCATG GCATCTGAAG ACATGAAGAC TTGTGTAGAT
[0091] 3841 GTCAATGAGT GTGACCTGAA TCCAAATATC TGCCTAAGTG GGACCTGTGA AAACACGAM
[0092] 3901 GGCTCATTTA TCTGCCACTG TGATATGGGC TACTCCGGCA AAAAAGGAAA AACTGGCTGT
[0093] 3961 ACAGACATCA ATGAATGTGA MTTGGAGCA CACAACTGTG GCAAACATGC TGTATGTACC
[0094] 4021 AATACAGCAG GAAGCTTCAA ATGTAGCTGC AGTCCCGGGT GGATTGGAGA TGGCATTAAG
[0095] 4081 TGCACTGATC TGGACGMTG TTCCAATGGA ACCCATATGT GCAGCCAGCA TGCAGACTGC
[0096] 4141 AAGAATACCA TGGGATCTTA CCGCTGTCTG TGCAAGGAAG GATACACAGG TGATGGCTTC
[0097] 4201 ACTTGTACAG ACCTTGATGA GTGCTCTGAG AACCTGAATC TCTGTGGCAA TGGCCAGTGC
[0098] 4261 CTCAATGCAC CAGGAGGATA CCGCTGTGAA TGCGACATGG GCTTCGTGCC CAGTGCTGAC
[0099] 4321 GGGAAAGCCT GTGAAGATAT TGATGAGTGC TCCCTTCCGA ACATCTGTGT CTTTGGAACT
[0100] 4381 TGCCACMCC TCCCTGGCCT GTTCCGCTGT GAGTGTGAGA TAGGCTACGA ACTGGACAGA
[0101] 4441 AGCGGCGGGA ACTGCACAGA TGTGAATGAA TGCCTGGATC CAACCACGTG CATCAGTGGG
[0102] 4501 AACTGTGTCA ACACTCCAGG CAGCTATATC TGTGACTGCC CACCTGATTT TGAACTGAAC
[0103] 4561 CCAACTCGAG TTGGCTGTGT TGATACCCGC TCTGGAMTT GCTATTTGGA TATTCGACCT
[0104] 4621 CGAGGAGACA ATGGAGATAC AGCCTGCAGC AATGMATTG GAGTTGGTGT TTCCAAAGCT
[0105] 4681 TCCTGCTGCT GTTCTCTGGG TAAAGCCTGG GGTACTCCTT GTGAGATGTG TCCTGCTGTG
[0106] 4741 AACACATCCG AGTACAMAT TCTTTGTCCT GGAGGGGAAG GTTTCCGACC AAATCCTATC
[0107] 4801 ACCGTTATAT TGGAAGATAT TGATGAGTGC CAGGAGCTAC CAGGGCTGTG CCAAGGAGGA
[0108] 4861 AMTGTATCA ACACCTTTGG GAGTTTCCAG TGCCGCTGTC CMCCGGCTA CTACCTGAAT
[0109] 4921 GMGATACAC GAGTGTGTGA TGATGTGAAT GAATGTGAGA CTCCTGGAAT CTGTGGTCCA
[0110] 4981 GGGACATGTT ACAACACCGT TGGCAACTAC ACCTGTATCT GTCCTCCAGA CTACATGCM
[0111] 5041 GTGAATGGGG GAAATAATTG CATGGATATG AGAAGAAGTT TGTGCTACAG AAACTACTAT
[0112] 5101 GCTGACMCC AGACCTGTGA TGGAGMTTG TTATTCAACA TGACCAAGAA GATGTGCTGC
[0113] 5161 TGTTCCTACA ACATTGGCCG GGCGTGGAAC AAGCCCTGTG AACAGTGTCC CATCCCAAGT
[0114] 5221 ACAGATGAGT TTGCTACACT CTGTGGAAGT CAAAGGCCAG GCTTTGTCAT CGACATTTAT
[0115] 5281 ACCGGTTTAC CCGTTGATAT TGATGAGTGC CGGGAGATCC CAGGGGTCTG TGAMATGGA
[0116] 5341 GTGTGTATCA ACATGGTTGG CAGCTTCCGA TGTGMTGTC CAGTGGGATT CTTCTATAAT
[0117] 5401 GACAAGTTGT TGGTTTGTGA AGATATTGAC GAGTGTCAGA ACGGCCCAGT GTGCCAGCGC
[0118] 5461 AACGCCGAAT GCATCAACAC TGCAGGCAGC TACCGCTGTG ACTGTAAGCC CGGCTACCGC
[0119] 5521 TTCACCTCCA CAGGACAGTG CAATGATCGT AATGMTGTC AAGAMTCCC CAATATATGC
[0120] 5581 AGTCATGGGC AGTGCATTGA CACAGTTGGA AGCTTTTATT GCCTTTGCCA CACTGGTTTT
[0121] 5641 AMACAMTG ATGACCMAC CATGTGCTTG GACATAAATG AATGTGAAAG AGATGCCTGT
[0122] 5701 GGGAATGGAA CTTGCCGGAA CACAATTGGT TCCTTCAACT GCCGCTGCAA TCATGGTTTC
[0123] 5761 ATCCTTTCTC ACAACAATGA CTGTATAGAT GTTGATGAAT GTGCMGTGG AAATGGGAAT
[0124] 5821 CTTTGCAGAA ATGGCCAATG CATTAATACA GTGGGGTCTT TCCAGTGCCA GTGCMTGAA
[0125] 5881 GGCTATGAGG TGGCTCCAGA TGGGAGGACC TGTGTGGATA TCAATGAATG TCTTCTAGM
[0126] 5941 CCCAGAMAT GTGCACCAGG TACCTGTCAA AACTTGGATG GGTCCTACAG ATGCATTTGC
[0127] 6001 CCACCTGGAT ACAGTCTTCA MATGAGAAG TGTGMGATA TTGATGAGTG TGTCGAAGAG
[0128] 6061 CCAGAAATTT GTGCCCTGGG CACATGCAGT AACACTGAAG GCAGCTTCAA ATGTCTGTGT
[0129] 6121 CCAGAAGGGT TTTCCTTGTC CTCCAGTGGA AGAAGGTGCC AAGATTTGCG AATGAGCTAC
[0130] 6181 TGTTATGCGA AGTTTGMGG AGGAAAGTGT TCATCACCCA AATCCAGAAA TCACTCCAAG
[0131] 6241 CAGGAATGCT GCTGTGCCTT GAAGGGAGAA GGCTGGGGAG ACCCCTGCGA GCTCTGCCCC
[0132] 6301 ACGGAACCTG ATGAGGCCTT CCGCCAGATA TGTCCTTATG GAAGTGGGAT CATCGTGGGA
[0133] 6361 CCTGATGATT CAGCAGTTGA TATGGACGAA TGCAMGAAC CCGATGTCTG TAAACATGGA
[0134] 6421 CAGTGCATCA ATACAGATGG TTCCTATCGC TGCGAGTGTC CCTTTGGTTA TACTCTAGCA
[0135] 6481 GGGAATGAAT GTGTAGATAC TGATGMTGT TCTGTTGGCA ATCCTTGTGG AAATGGAACC
[0136] 6541 TGCAAGMTG TGATTGGAGG TTTTGMTGC ACCTGCGAGG AGGGATTTGA GCCCGGTCCA
[0137] 6601 ATGATGACAT GTGAAGATAT AMTGAATGT GCCCAGAATC CTCTGCTCTG TGCCTTCCGA
[0138] 6661 TGTGTGMCA CTTATGGGTC ATATGAATGC AAATGTCCCG TGGGATATGT GCTCAGAGM
[0139] 6721 GACCGTAGGA TGTGCAMGA TGAGGATGAG TGTGMGAGG GAAAACATGA CTGTACTGM
[0140] 6781 AMCAAATGG MTGCAAGAA CCTCATTGGC ACATATATGT GCATCTGTGG ACCCGGGTAT
[0141] 6841 CAGCGGAGAC CTGATGGAGA AGGCTGTGTA GATGAGAATG AATGTCAGAC GAAGCCAGGG
[0142] 6901 ATCTGTGAGA ATGGGCGCTG CCTCAACACC CGTGGGAGCT ACACCTGTGA GTGTAATGAT
[0143] 6961 GGGTTTACCG CCAGCCCCAA CCAGGACGAG TGCCTTGACA ATCGGGAAGG GTACTGCTTC
[0144] 7021 ACAGAGGTGC TACAAAACAT GTGTCAGATC GGCTCCAGCA ACAGGAACCC CGTCACCAM
[0145] 7081 TCGGAATGCT GCTGTGACGG AGGGAGAGGC TGGGGTCCCC ACTGTGAGAT CTGCCCTTTC
[0146] 7141 CAGGGGACTG TGGCTTTCAA GAAACTCTGT CCCCATGGCC GAGGATTCAT GACCAATGGA
[0147] 7201 GCAGATATCG ATGAATGCAA GGTTATTCAC GATGTTTGCC GMATGGGGA ATGTGTCAAT
[0148] 7261 GACAGAGGAT CATATCATTG CATTTGTAAA ACTGGGTACA CTCCAGATAT AACTGGGACT
[0149] 7321 TCCTGTGTAG ATCTGAACGA GTGCAACCAG GCTCCCAAAC CCTGCAATTT TATCTGCAM
[0150] 7381 AACACAGAAG GGAGTTACCA GTGTTCATGC CCGAMGGCT ACATTCTGCA AGAGGATGGA
[0151] 7441 AGGAGCTGCA MGATCTTGA TGAGTGTGCA ACCAAGCAAC ACAACTGCCA GTTCCTATGT
[0152] 7501 GTTAACACCA TTGGCGGCTT CACATGCAAA TGTCCTCCCG GATTTACCCA ACACCATACG
[0153] 7561 TCCTGCATTG ATAACAATGA ATGCACCTCT GACATCAATC TGTGCGGGTC TAAGGGCATT
[0154] 7621 TGCCAGMCA CTCCTGGAAG CTTCACCTGT GAATGCCAGC GGGGATTCTC ACTTGATCAG
[0155] 7681 ACCGGCTCCA GCTGTGMGA CGTGGACGAG TGTGAGGGTA ACCACCGCTG CCAGCATGGC
[0156] 7741 TGCCAGMCA TCATTGGGGG CTACAGGTGC AGCTGCCCCC AGGGCTACCT CCAGCACTAC
[0157] 7801 CAGTGGMCC AGTGTGTTGA TGAAAACGAA TGCCTCAGCG CTCACATCTG CGGAGGAGCC
[0158] 7861 TCCTGTCACA ACACCCTGGG GAGCTACAAG TGCATGTGTC CCGCCGGCTT CCAGTATGM
[0159] 7921 CAGTTCAGTG GAGGATGCCA AGACATCAAT GAATGTGGCT CTGCGCAGGC CCCCTGCAGC
[0160] 7981 TATGGCTGTT CCAATACCGA GGGCGGTTAC CTGTGTGGCT GTCCACCTGG TTACTTCCGC
[0161] 8041 ATAGGCCAAG GGCACTGTGT TTCTGGAATG GGCATGGGCC GAGGMACCC AGAGCCACCT
[0162] 8101 GTCAGTGGTG MATGGATGA CAATTCACTC TCCCCAGAGG CTTGTTACGA GTGTAAGATC
[0163] 8161 AATGGCTACC CCAAACGGGG CAGGAAACGG AGAAGCACAA ACGAAACTGA TGCCTCCAAT
[0164] 8221 ATCGAGGATC AGTCTGAGAC AGAAGCCAAT GTGAGTCTTG CAAGTTGGGA TGTTGAGAAG
[0165] 8281 ACAGCCATCT TTGCTTTCAA TATTTCCCAC GTCAGTAACA AGGTTCGAAT CCTAGAACTC
[0166] 8341 CTTCCAGCTC TTACAACTCT GACGAATCAC AACAGATACT TGATCGAATC TGGMATGM
[0167] 8401 GATGGCTTCT TTAAAATCAA CCAAAAGGAA GGGATCAGCT ACCTCCACTT CACMAGAAG
[0168] 8461 AAGCCAGTGG CTGGAACCTA TTCATTACAA ATCAGTAGTA CTCCACTTTA TAAMAGAM
[0169] 8521 GMCTTMCC AACTAGAAGA CAAATATGAC AAAGACTACC TCAGTGGTGA ACTGGGTGAT
[0170] 8581 AATCTGAAGA TGAAAATCCA GGTTTTGCTT CATTAA(SEQ ID N0：1),
[0171] 其編碼的蛋白質具有如下所示的胺基酸序列：
[0172] 1 MRRGRLLEIA LGFTVLLASY TSHGADANLE AGNVKETRAS RAKRRGGGGH DALKGPNVCG
[0173] 61 SRYNAYCCPG WKTLPGGNQCIVPICRHSCG DGFCSRPNMC TCPSGQIAPS CGSRSIQHCN
[0174] 121 IRCMNGGSCS DDHCLCQKGY IGTHCGQPVC ESGCLNGGRC VAPNRCACTY GFTGPQCERD
[0175] 181 YRTGPCFTVISNQMCQGQLS GIVCTKQLCC ATVGRAWGHP CEMCPAQPHP CRRGFIPNIR
[0176] 241 TGACQDVDEC QAIPGLCQGG NCINTVGSFE CKCPAGHKLN EVSQKCEDID ECSTIPGICE
[0177] 301 GGECTNTVSS YFCKCPPGFY TSPDGTRCID VRPGYCYTAL TNGRCSNQLP QSITKMQCCC
[0178] 361 DAGRCWSPGV TVAPEMCPIR ATEDFNKLCS VPMVIPGRPE YPPPPLGPIP PVLPVPPGFP
[0179] 421 PGPQIPVPRP PVEYLYPSRE PPRVLPVNVT DYCQLVRYLC QNGRCIPTPG SYRCECNKGF
[0180] 481 QLDLRGECID VDECEKNPCA GGECINNQGS YTCQCRAGYQ STLTRTECRDIDECLQNGRI
[0181] 541 CNNGRCINTD GSFHCVCNAG FHVTRDGKNC EDMDECSIRN MCLNGMCINE DGSFKCICKP
[0182] 601 GFQLASDGRY CKDINECETP GICMNGRCVN TDGSYRCECF PGLAVGLDGR VCVDTHMRST
[0183] 661 CYGGYKRGQCIKPLFGAVTK SECCCASTEY AFGEPCQPCP AQNSAEYQAL CSSGPGMTSA
[0184] 721 GSDINECALD PDICPNGICE NLRGTYKCIC NSGYEVDSTG KNCVDINECV LNSLLCDNGQ
[0185] 781 CRNTPGSFVC TCPKGFIYKP DLKTCEDIDE CESSPCINGV CKNSPGSFIC ECSSESTLDP
[0186] 841 TKTICIETIK GTCWQTVIDG RCEININGAT LKSQCCSSLG AAWGSPCTLC QVDPICGKGY
[0187] 901 SRIKGTQCED IDECEVFPGV CKNGLCVNTR GSFKCQCPSG MTLDATGRIC LDIRLETCFL
[0188] 961 RYEDEECTLP IAGRHRMDAC CCSVGMWGT EECEECPMRN TPEYEELCPR GPGFATKEIT
[0189] 1021 NGKPFFKDIN ECKMIPSLCT HGKCRNTIGS FKCRCDSGFA LDSEERNCTDIDECRISPDL
[0190] 1081 CGRGQCVNTP GDFECKCDEG YESGFMMMKN CMDIDECQRD PLLCRGGVCH NTEGSYRCEC
[0191] 1141 PPGHQLSPNI SACIDINECE LSAHLCPNGR CVNLIGKYQC ACNPGYHSTP DRLFCVDIDE
[0192] 1201 CSMNGGCET FCTNSEGSYE CSCQPGFALM PDQRSCTDID ECEDNPNICD GGQCTNIPGE
[0193] 1261 YRCLCYDGFM ASEDMKTCVD VNECDLNPNICLSGTCENTK GSFICHCDMG YSGKKGKTGC
[0194] 1321 TDINECEIGA HNCGKHAVCT NTAGSFKCSC SPGWI⑶GIK CTDLDECSNG THMCSQHADC
[0195] 1381 KNTMGSYRCL CKEGYTGDGF TCTDLDECSE NLNLCGNGQC LNAPGGYRCE CDMGFVPSAD
[0196] 1441 GKACEDIDEC SLPNICVFGT CHNLPGLFRC ECEIGYELDR SGGNCTDVNE CLDPTTCISG
[0197] 1501 NCVNTPGSYICDCPPDFELN PTRVGCVDTR SGNCYLDIRP RGDNGDTACS NEIGVGVSKA
[0198] 1561 SCCCSLGKAff GTPCEMCPAV NTSEYKILCP GGEGFRPNPI TVILEDIDEC QELPGLCQGG
[0199] 1621 KCINTFGSFQ CRCPTGYYLN EDTRVCDDVN ECETPGICGP GTCYNTVGNY TCICPPDYMQ
[0200] 1681 VNGGNNCMDM RRSLCYRNYY ADNQTCDGEL LFNMTKKMCC CSYNIGRAWN KPCEQCPIPS
[0201] 1741 TDEFATLCGS QRPGFVIDIY TGLPVDIDEC REIPGVCENG VCINMVGSFR CECPVGFFYN
[0202] 1801 DKLLVCEDID ECQNGPVCQR NAECINTAGS YRCDCKPGYR FTSTGQCNDR NECQEIPNIC
[0203] 1861 SHGQCIDTVG SFYCLCHTGF KTNDDQTMCL DINECERDAC GNGTCRNTIG SFNCRCNHGF
[0204] 1921 ILSHNNDCID VDECASGNGN LCRNGQCINT VGSFQCQCNE GYEVAPDGRT CVDINECLLE
[0205] 1981 PRKCAPGTCQ NLDGSYRCIC PPGYSLQNEK CEDIDECVEE PEICALGTCS NTEGSFKCLC
[0206] 2041 PEGFSLSSSG RRCQDLRMSY CYAKFEGGKC SSPKSRNHSK QECCCALKGE GWGDPCELCP
[0207] 2101 TEPDEAFRQI CPYGSGIIVG PDDSAVDMDE CKEPDVCKHG QCINTDGSYR CECPFGYTLA
[0208] 2161 GNECVDTDEC SVGNPCGNGT CKNVIGGFEC TCEEGFEPGP MMTCEDINEC AQNPLLCAFR
[0209] 2221 CVNTYGSYEC KCPVGYVLRE DRRMCKDEDE CEEGKHDCTE KQMECKNLIG TYMCICGPGY
[0210] 2281 QRRPDGEGCV DENECQTKPG ICENGRCLNT RGSYTCECND GFTASPNQDE CLDNREGYCF
[0211] 2341 TEVLQNMCQI GSSNRNPVTK SECCCDGGRG WGPHCEICPF QGTVAFKKLC PHGRGFMTNG
[0212] 2401 ADIDECKVIH DVCRNGECVN DRGSYHCICK TGYTPDITGT SCVDLNECNQ APKPCNFICK
[0213] 2461 NTEGSYQCSC PKGYILQEDG RSCKDLDECA TKQHNCQFLC VNTIGGFTCK CPPGFTQHHT
[0214] 2521 SCIDNNECTS DINLCGSKGI CQNTPGSFTC ECQRGFSLDQ TGSSCEDVDE CEGNHRCQHG
[0215] 2581 CQNIIGGYRC SCPQGYLQHY QWNQCVDENE CLSAHICGGA SCHNTLGSYK CMCPAGFQYE
[0216] 2641 QFSGGCQDIN ECGSAQAPCS YGCSNTEGGY LCGCPPGYFR IGQGHCVSGM GMGRGNPEPP
[0217] 2701 VSGEMDDNSL SPEACYECKI NGYPKRGRKR RSTNETDASN IEDQSETEAN VSLASWDVEK
[0218] 2761 TAIFAFNISH VSNKVRILEL LPALTTLTNH NRYLIESGNE DGFFKINQKE GISYLHFTKK
[0219] 2821 KPVAGTYsLQ IssTPLYKKK ELNQLEDKYD KDYLsGELGD NLKMKIQVLL H * (SEQ ID NO :2)。本發明的FBNI基因突變體的cDNA序列如下所示：
[0220] 1 ATGCGTCGAG GGCGTCTGCT GGAGATCGCC CTGGGATTTA CCGTGCTTTT AGCGTCCTAC
[0221] 61 ACGAGCCATG GGGCGGACGC CAATTTGGAG GCTGGGAACG TGAAGGAAAC CAGAGCCAGT
[0222] 121 CGGGCCMGA GAAGAGGCGG TGGAGGACAC GACGCGCTTA AAGGACCCAA TGTCTGTGGA
[0223] 181 TCACGTTATA ATGCTTACTG TTGCCCTGGA TGGAMACCT TACCTGGCGG AAATCAGTGT
[0224] 241 ATTGTCCCCA TTTGCCGGCA TTCCTGTGGG GATGGATTTT GTTCGAGGCC AAATATGTGC
[0225] 301 ACTTGCCCAT CTGGTCAGAT AGCTCCTTCC TGTGGCTCCA GATCCATACA ACACTGCAAT
[0226] 361 ATTCGCTGTA TGAATGGAGG TAGCTGCAGT GACGATCACT GTCTATGCCA GAAAGGATAC
[0227] 421 ATAGGGACTC ACTGTGGACA ACCTGTTTGT GAAAGTGGCT GTCTCAATGG AGGMGGTGT
[0228] 481 GTGGCCCCAA ATCGATGTGC ATGCACTTAC GGATTTACTG GACCCCAGTG TGAMGAGAT
[0229] 541 TACAGGACAG GCCCATGTTT TACTGTGATC AGCAACCAGA TGTGCCAGGG ACAACTCAGC
[0230] 601 GGGATTGTCT GCACAAMCA GCTCTGCTGT GCCACAGTCG GCCGAGCCTG GGGCCACCCC
[0231] 661 TGTGAGATGT GTCCTGCCCA GCCTCACCCC TGCCGCCGTG GCTTCATTCC AAATATCCGC
[0232] 721 ACGGGAGCTT GTCAAGATGT GGATGMTGC CAGGCCATCC CCGGGCTCTG TCAGGGAGGA
[0233] 781 AATTGCATTA ATACTGTTGG GTCTTTTGAG TGCAMTGCC CTGCTGGACA CAAACTTAAT
[0234] 841 GMGTGTCAC MAAATGTGA AGATATTGAT GAATGCAGCA CCATTCCTGG AATCTGTGM
[0235] 901 GGGGGTGAAT GTACAAACAC AGTCAGCAGT TACTTTTGCA AATGTCCCCC TGGTTTTTAC
[0236] 961 ACCTCTCCAG ATGGTACCAG ATGCATAGAT GTTCGCCCAG GATACTGTTA CACAGCTCTG
[0237] 1021 ACAAACGGGC GCTGCTCTAA CCAGCTGCCA CAGTCCATAA CCAAMTGCA GTGCTGCTGT
[0238] 1081 GATGCCGGCC GATGCTGGTC TCCAGGGGTC ACTGTCGCCC CTGAGATGTG TCCCATCAGA
[0239] 1141 GCAACCGAGG ATTTCAACAA GCTGTGCTCT GTTCCTATGG TAATTCCTGG GAGACCAGM
[0240] 1201 TATCCTCCCC CACCCCTTGG CCCCATTCCT CCAGTTCTCC CTGTTCCTCC TGGCTTTCCT
[0241] 1261 CCTGGACCTC MATTCCGGT CCCTCGACCA CCAGTGGAAT ATCTGTATCC ATCTCGGGAG
[0242] 1321 CCACCAAGGG TGCTGCCAGT MACGTTACT GATTACTGCC AGTTGGTCCG CTATCTCTGT
[0243] 1381 CMAATGGAC GCTGCATTCC MCTCCTGGG AGTTACCGGT GTGAGTGCAA CAAAGGGTTC
[0244] 1441 CAGCTGGACC TCCGTGGGGA GTGTATTGAT GTTGATGAAT GTGAGAAAAA CCCCTGTGCT
[0245] 1501 GGTGGTGAGT GTATTAACAA CCAGGGTTCG TACACCTGTC AGTGCCGAGC TGGATATCAG
[0246] 1561 AGCACACTCA CGCGGACAGA ATGCCGAGAC ATTGATGAGT GTTTACAGAA TGGCCGGATC
[0247] 1621 TGCAATMTG GACGCTGCAT CAACACAGAT GGCAGTTTTC ATTGCGTGTG TAATGCGGGC
[0248] 1681 TTTCATGTTA CACGAGATGG GAAGAACTGT GAAGATATGG ATGAATGCAG CATAAGGAAC
[0249] 1741 ATGTGCCTTA ATGGAATGTG TATCAATGAA GATGGCAGTT TTAAATGTAT TTGCAAACCT
[0250] 1801 GGATTCCAGC TGGCATCAGA TGGACGTTAT TGCAMGACA TTAACGAGTG TGAMCCCCT
[0251] 1861 GGGATCTGCA TGAATGGGCG TTGCGTCAAC ACTGATGGCT CCTACAGATG TGAATGCTTC
[0252] 1921 CCTGGACTGG CTGTGGGTCT GGATGGCCGT GTGTGTGTTG ACACACACAT GCGGAGCACA
[0253] 1981 TGCTATGGTG GATACAAGAG AGGCCAGTGT ATCAAACCTT TGTTTGGTGC TGTCACTAAA
[0254] 2041 TCTGAATGCT GTTGCGCCAG CACTGAGTAT GCATTTGGGG AACCTTGCCA GCCGTGTCCT
[0255] 2101 GCACAGAATT CAGCGGMTA TCAGGCACTC TGCAGCAGTG GGCCAGGAAT GACGTCAGCA
[0256] 2161 GGCAGTGATA TAAATGMTG TGCACTAGAT CCTGATATTT GCCCMATGG AATCTGTGM
[0257] 2221 AACCTTCGTG GGACCTATAA ATGTATATGC AATTCAGGAT ATGAAGTGGA TTCMCTGGG
[0258] 2281 AMAACTGCG TTGATATTAA TGAATGTGTA CTGAACAGTC TCCTTTGTGA CAATGGACAA
[0259] 2341 TGTAGAMTA CTCCTGGAAG TTTTGTCTGT ACCTGCCCCA AGGGATTTAT CTACAAACCT
[0260] 2401 GATCTAMAA CATGTGMGA CATTGATGAA TGCGMTCAA GTCCTTGCAT TAATGGAGTC
[0261] 2461 TGCAAGAACA GCCCAGGCTC TTTTATTTGT GAATGTTCTT CTGAMGTAC TTTGGATCCA
[0262] 2521 ACAAAAACCA TCTGCATAGA MCCATCAAG GGCACTTGCT GGCAGACTGT CATTGATGGG
[0263] 2581 CGATGTGAGA TCAACATCAA TGGAGCCACC TTAAAGTCCC AGTGCTGCTC CTCCCTCGGT
[0264] 2641 GCTGCGTGGG GAAGCCCGTG CACCCTATGC 1 AAGTTGATC CCATATGTGG TAAAGGGTAC
[0265] 2701 TCAAGAATTA MGGAACACA ATGTGMGAT ATAGATGAAT GTGAAGTGTT CCCAGGAGTG
[0266] 2761 TGTAAAMTG GCCTGTGTGT TAACACTAGG GGGTCATTCA AGTGTCAGTG TCCCAGTGGA
[0267] 2821 ATGACTTTGG ATGCCACAGG MGGATCTGT CTTGATATCC GCCTGGAAAC CTGCTTCCTG
[0268] 2881 AGGTACGAGG ACGAGGAGTG CACCCTGCCT ATTGCTGGCC GCCACCGCAT GGACGCCTGC
[0269] 2941 TGCTGCTCCG TCGGGGCAGC CTGGGGTACT GAGGMTGCG AGGAGTGTCC CATGAGMAT
[0270] 3001 ACTCCTGAGT ACGAGGAGCT GTGTCCGAGA GGACCCGGAT TTGCCACAAA AGAMTTACA
[0271] 3061 AATGGAMGC CTTTCTTCAA AGATATCAAT GAGTGCAAGA TGATACCCAG CCTCTGCACC
[0272] 3121 CACGGCMGT GCAGAAACAC CATTGGCAGC TTTAAGTGCA GGTGTGACAG CGGCTTTGCT
[0273] 3181 CTTGATTCTG MGAAAGGAA CTGCACAGAC ATTGACGAAT GCCGCATATC TCCTGACCTC
[0274] 3241 TGTGGCAGAG GCCAGTGTGT GAACACCCCT GGGGACTTTG AATGCAAGTG TGACGAAGGC
[0275] 3301 TATGAAAGTG GATTCATGAT GATGAAGAAC TGCATGGATA TTGATGAGTG TCAGAGAGAT
[0276] 3361 CCTCTCCTAT GCCGAGGTGG TGTTTGCCAT AACACAGAGG GAAGTTACCG CTGTGAATGC
[0277] 3421 CCGCCTGGCC ATCAGCTGTC CCCCAACATC TCCGCGTGTA TCGACATCAA TGAATGTGAG
[0278] 3481 CTGAGTGCAC ACCTGTGCCC CAATGGCCGT TGCGTGAACC TCATAGGGAA GTATCAGTGT
[0279] 3541 GCCTGCMCC CTGGCTACCA TTCAACTCCC GATAGGCTAT TTTGTGTTGA CATTGATGAA
[0280] 3601 TGCAGCATAA TGAATGGTGG TTGTGMACC TTCTGCACAA ACTCTGAAGG CAGCTATGAA
[0281] 3661 TGTAGCTGTC AGCCGGGATT TGCACTAATG CCTGACCAGA GATCATGCAC CGACATCGAT
[0282] 3721 GAGTGTGAAG ATAATCCCAA TATCTGTGAT GGTGGTCAGT GCACMATAT CCCTGGAGAG
[0283] 3781 TACAGGTGCT TGTGTTATGA TGGATTCATG GCATCTGAAG ACATGAAGAC TTGTGTAGAT
[0284] 3841 GTCAATGAGT GTGACCTGAA TCCAAATATC TGCCTAAGTG GGACCTGTGA AAACACGAM
[0285] 3901 GGCTCATTTA TCTGCCACTG TGATATGGGC TACTCCGGCA AAAAAGGAAA AACTGGCTGT
[0286] 3961 ACAGACATCA ATGAATGTGA MTTGGAGCA CACAACTGTG GCAAACATGC TGTATGTACC
[0287] 4021 AATACAGCAG GAAGCTTCAA ATGTAGCTGC AGTCCCGGGT GGATTGGAGA TGGCATTAAG
[0288] 4081 TGCACTGATC TGGACGMTG TTCCAATGGA ACCCATATGT GCAGCCAGCA TGCAGACTGC
[0289] 4141 AAGAATACCA TGGGATCTTA CCGCTGTCTG TGCAAGGAAG GATACACAGG TGATGGCTTC
[0290] 4201 ACTTGTACAG ACCTTGATGA GTGCTCTGAG AACCTGAATC TCTGTGGCAA TGGCCAGTGC
[0291] 4261 CTCAATGCAC CAGGAGGATA CCGCTGTGAA TGCGACATGG GCTTCGTGCC CAGTGCTGAC
[0292] 4321 GGGAAAGCCT GTGAAGATAT TGATGAGTGC TCCCTTCCGA ACATCTGTGT CTTTGGAACT
[0293] 4381 TGCCACMCC TCCCTGGCCT GTTCCGCTGT GAGTGTGAGA TAGGCTACGA ACTGGACAGA
[0294] 4441 AGCGGCGGGA ACTGCACAGA TGTGAATGAA TGCCTGGATC CAACCACGTG CATCAGTGGG
[0295] 4501 AACTGTGTCA ACACTCCAGG CAGCTATATC TGTGACTGCC CACCTGATTT TGAACTGAAC
[0296] 4561 CCAACTCGAG TTGGCTGTGT TGATACCCGC TCTGGAMTT GCTATTTGGA TATTCGACCT
[0297] 4621 CGAGGAGACA ATGGAGATAC AGCCTGCAGC AATGMATTG GAGTTGGTGT TTCCAAAGCT
[0298] 4681 TCCTGCTGCT GTTCTCTGGG TAAAGCCTGG GGTACTCCTT GTGAGATGTG TCCTGCTGTG
[0299] 4741 AACACATCCG AGTACAMAT TCTTTGTCCT GGAGGGGAAG GTTTCCGACC AAATCCTATC
[0300] 4801 ACCGTTATAT TGGAAGATAT TGATGAGTGC CAGGAGCTAC CAGGGCTGTG CCAAGGAGGA
[0301] 4861 AMTGTATCA ACACCTTTGG GAGTTTCCAG TGCCGCTGTC CMCCGGCTA CTACCTGAAT
[0302] 4921 GMGATACAC GAGTGTGTGA TGATGTGAAT GAATGTGAGA CTCCTGGAAT CTGTGGTCCA
[0303] 4981 GGGACATGTT ACAACACCGT TGGCAACTAC ACCTGTATCT GTCCTCCAGA CTACATGCM
[0304] 5041 GTGAATGGGG GAAATAATTG CATGGATATG AGAAGAAGTT TGTGCTACAG AAACTACTAT
[0305] 5101 GCTGACMCC AGACCTGTGA TGGAGMTTG TTATTCAACA TGACCAAGAA GATGTGCTGC
[0306] 5161 TGTTCCTACA ACATTGGCCG GGCGTGGAAC AAGCCCTGTG AACAGTGTCC CATCCCAAGT
[0307] 5221 ACAGATGAGT TTGCTACACT CTGTGGAAGT CAAAGGCCAG GCTTTGTCAT CGACATTTAT
[0308] 5281 ACCGGTTTAC CCGTTGATAT TGATGAGTGC CGGGAGATCC CAGGGGTCTG TGAMATGGA
[0309] 5341 GTGTGTATCA ACATGGTTGG CAGCTTCCGA TGTGMTGTC CAGTGGGATT CTTCTATAAT
[0310] 5401 GACAAGTTGT TGGTTTGTGA AGATATTGAC GAGTGTCAGA ACGGCCCAGT GTGCCAGCGC
[0311] 5461 AACGCCGAAT GCATCAACAC TGCAGGCAGC TACCGCTGTG ACTGTAAGCC CGGCTACCGC
[0312] 5521 TTCACCTCCA CAGGACAGTG CAATGATCGT AATGMTGTC AAGAMTCCC CAATATATGC
[0313] 5581 AGTCATGGGC AGTGCATTGA CACAGTTGGA AGCTTTTATT GCCTTTGCCA CACTGGTTTT
[0314] 5641 AMACAMTG ATGACCMAC CATGTGCTTG GACATAAATG AATGTGAAAG AGATGCCTGT
[0315] 5701 GGGAATGGAA CTTGCCGGAA CACAATTGGT TCCTTCAACT GCCGCTGCAA TCATGGTTTC
[0316] 5761 ATCCTTTCTC ACAACAATGA CTGTATAGAT GTTGATGAAT GTGCMGTGG AAATGGGAAT
[0317] 5821 CTTTGCAGAA ATGGCCMTG CATTAATACA GTGGGGTCTT TCCAGTGCCA GTGCMTGAA
[0318] 5881 GGCTATGAGG TGGCTCCAGA TGGGAGGACC TGTGTGGATA TCAATGAATG TCTTCTAGM
[0319] 5941 CCCAGAMAT GTGCACCAGG TACCTGTCAA AACTTGGATG GGTCCTACAG ATGCATTTGC
[0320] 6001 CCACCTGGAT ACAGTCTTCA MATGAGAAG TGTGMGATA TTGATGAGTG TGTCGAAGAG
[0321] 6061 CCAGAAATTT GTGCCCTGGG CACATGCAGT AACACTGAAG GCAGCTTCAA ATGTCTGTGT
[0322] 6121 CCAGAAGGGT TTTCCTTGTC CTCCAGTGGA AGAAGGTGCC AAGATTTGCG AATGAGCTAC
[0323] 6181 TGTTATGCGA AGTTTGMGG AGGAAAGTGT TCATCACCCA AATCCAGAAA TCACTCCAAG
[0324] 6241 CAGGAATGCT GCTGTGCCTT GAAGGGAGAA GGCTGGGGAG ACCCCTGCGA GCTCTGCCCC
[0325] 6301 ACGGAACCTG ATGAGGCCTT CCGCCAGATA TGTCCTTATG GAAGTGGGAT CATCGTGGGA
[0326] 6361 CCTGATGATT CAGCAGTTGA TATGGACGAA TGCAMGAAC CCGATGTCTG TAAACATGGA
[0327] 6421 CAGTGCATCA ATACAGATGG TTCCTATCGC TGCGAGTGTC CCTTTGGTTA TACTCTAGCA
[0328] 6481 GGGAATGAAT GTGTAGATAC TGATGMTGT TCTGTTGGCA ATCCTTGTGG AAATGGAACC
[0329] 6541 TGCAAGMTG TGATTGGAGG TTTTGMTGC ACCTGCGAGG AGGGATTTGA GCCCGGTCCA
[0330] 6601 ATGATGACAT GTGAAGATAT AMTGAATGT GCCCAGAATC CTCTGCTCTG TGCCTTCCGA
[0331] 6661 TGTGTGMCA CTTATGGGTC ATATGAATGC AAATGTCCCG TGGGATATGT GCTCAGAGM
[0332] 6721 GACCGTAGGA TGTGCAMGA TGAGGATGAG TGTGMGAGG GAAAACATGA CTGTACTGM
[0333] 6781 AMCAAATGG MTGCAAGAA CCTCATTGGC ACATATATGT GCATCTGTGG ACCCGGGTAT
[0334] 6841 CAGCGGAGAC CTGATGGAGA AGGCTGTGTA GATGAGAATG AATGTCAGAC GAAGCCAGGG
[0335] 6901 ATCTGTGAGA ATGGGCGCTG CCTCAACACC CGTGGGAGCT ACACCTGTGA GTGTAATGAT
[0336] 6961 GGGTTTACCG CCAGCCCCAA CCAGGACGAG TGCCTTGACA ATCGGGAAGG GTACTGCTTC
[0337] 7021 ACAGAGGTGC TACAAAACAT GTGTCAGATC GGCTCCAGCA ACAGGAACCC CGTCACCAM
[0338] 7081 TCGGAATGCT GCTGTGACGG AGGGAGAGGC TGGGGTCCCC ACTGTGAGAT CTGCCCTTTC
[0339] 7141 CAGGGGACTG TGGCTTTCAA GAAACTCTGT CCCCATGGCC GAGGATTCAT GACCAATGGA
[0340] 7201 GCAGATATCG ATGAATGCAA GGTTATTCAC GATGTTTGCC GMATGGGGA ATGTGTCAAT
[0341] 7261 GACAGAGGAT CATATCATTG CATTTGTAAA ACTGGGTACA CTCCAGATAT AACTGGGACT
[0342] 7321 TCCTGTGTAG ATCTGAACGA GTGCAACCAG GCTCCCAAAC CCTGCAATTT TATCTGCAM
[0343] 7381 AACACAGAAG GGAGTTACCA GTGTTCATGC CCGAMGGCT ACATTCTGCA AGAGGATGGA
[0344] 7441 AGGAGCTGCA MGATCTTGA TGAGTGTGCA ACCAAGCAAC ACAACTGCCA GTTCCTATGT
[0345] 7501 GTTAACACCA TTGGCGGCTT CACATGCAAA TGTCCTCCCG GATTTACCCA ACACCATACG
[0346] 7561 TCCTGCATTG ATAACAATGA ATGCACCTCT GACATCAATC TGTGCGGGTC TAAGGGCATT
[0347] 7621 TGCCAGMCA CTCCTGGAAG CTTCACCTGT GAATGCCAGC GGGGATTCTC ACTTGATCAG
[0348] 7681 ACCGGCTCCA GCTGTGMGA CGTGGACGAG TGTGAGGGTA ACCACCGCTG CCAGCATGGC
[0349] 7741 TGCCAGMCA TCATTGGGGG CTACAGGTGC AGCTGCCCCC AGGGCTACCT CCAGCACTAC
[0350] 7801 CAGTGGMCC AGTGTGTTGA TGAAAACGAA TGCCTCAGCG CTCACATCTG CGGAGGAGCC
[0351] 7861 TCCTGTCACA ACACCCTGGG GAGCTACAAG TGCATGTGTC CCGCCGGCTT CCAGTATGM
[0352] 7921 CAGTTCAGTG GAGGATGCCA AGACATCAAT GAATGTGGCT CTGCGCAGGC CCCCTGCAGC
[0353] 7981 TATGGCTGTT CCAATACCGA GGGCGGTTAC CTGTGTGGCT GTCCACCTGG TTACTTCCGC
[0354] 8041 ATAGGCCAAG GGCACTGTGT TTCTGGAATG GGCATGGGCC GAGGMACCC AGAGCCACCT
[0355] 8101 GTCAGTGGTG MATGGATGA CAATTCACTC TCCCCAGAGG CTTGTTACGA GTGTAAGATC
[0356] 8161 AATGGCTACC CCAAACGGGG CAGGAAACGG AGAAGCACAA ACGAAACTGA TGCCTCCAAT
[0357] 8221 ATCGAGGATC AGTCTGAGAC AGAAGCCAAT GTGAGTCTTG CAAGTTGGGA TGTTGAGAAG
[0358] 8281 ACAGCCATCT TTGCTTTCAA TATTTCCCAC GTCAGTAACA AGGTTCGAAT CCTAGAACTC
[0359] 8341 CTTCCAGCTC TTACAACTCT GACGAATCAC AACAGATACT TGATCGAATC TGGMATGM
[0360] 8401 GATGGCTTCT TTAAAATCAA CCAAAAGGAA GGGATCAGCT ACCTCCACTT CACMAGAAG
[0361] 8461 AAGCCAGTGG CTGGAACCTA TTCATTACAA ATCAGTAGTA CTCCACTTTA TAAMAGAM
[0362] 8521 GMCTTMCC AACTAGAAGA CAAATATGAC AAAGACTACC TCAGTGGTGA ACTGGGTGAT
[0363] 8581 AATCTGAAGA TGAAAATCCA GGTTTTGCTT CATTAA(SEQ ID NO :3)，
[0364] 其編碼的蛋白質具有如下所示的胺基酸序列：
[0365] 1 MRRGRLLEIA LGFTVLLASY TSHGADANLE AGNVKETRAS RAKRRGGGGH DALKGPNVCG
[0366] 61 SRYNAYCCPG WKTLPGGNQC I VPICRHSCG DGRCSRPNMC TCPSGQIAPS CGSRSIQHCN
[0367] 121 IRCMNGGSCS DDHCLCQKGY IGTHCGQPVC ESGCLNGGRC VAPNRCACTY GFTGPQCERD
[0368] 181 YRTGPCFTVI SNQMCQGQLS GIVCTKQLCC ATVGRAWGHP CEMCPAQPHP CRRGFIPNIR
[0369] 241 TGACQDVDEC QAIPGLCQGG NCINTVGSFE CKCPAGHKLN EVSQKCEDID ECSTIPGICE
[0370] 301 GGECTNTVSS YFCKCPPGFY TSPDGTRCID VRPGYCYTAL TNGRCSNQLP QSITKMQCCC
[0371] 361 DAGRCWSPGV TVAPEMCPIR ATEDFNKLCS VPMVIPGRPE YPPPPLGPIP PVLPVPPGFP
[0372] 421 PGPQIPVPRP PVEYLYPSRE PPRVLPVNVT DYCQLVRYLC QNGRCIPTPG SYRCECNKGF
[0373] 481 QLDLRGECID VDECEKNPCA GGECINNQGS YTCQCRAGYQ STLTRTECRDIDECLQNGRI
[0374] 541 CNNGRCINTD GSFHCVCNAG FHVTRDGKNC EDMDECSIRN MCLNGMCINE DGSFKCICKP
[0375] 601 GFQLASDGRY CKDINECETP GICMNGRCVN TDGSYRCECF PGLAVGLDGR VCVDTHMRST
[0376] 661 CYGGYKRGQCIKPLFGAVTK SECCCASTEY AFGEPCQPCP AQNSAEYQAL CSSGPGMTSA
[0377] 721 GSDINECALD PDICPNGICE NLRGTYKCIC NSGYEVDSTG KNCVDINECV LNSLLCDNGQ
[0378] 781 CRNTPGSFVC TCPKGFIYKP DLKTCEDIDE CESSPCINGV CKNSPGSFIC ECSSESTLDP
[0379] 841 TKTICIETIK GTCWQTVIDG RCEININGAT LKsQCCssLG AAWGsPCTLC * (SEQ ID NO :4)。
[0380] 發明人發現的新的新突變體與SEQ ID NO :1相比，具有c. C2671T突變，即相對於 野生型FBN1基因，本發明的FBN1基因突變體的第2671位鹼基從C突變為T。由此，其所編 碼的產物與野生型的FBN1相比，具有p. Gln891X突變，即該突變是由於c. C2671T的無義突 變而引起的，具體地，該突變表示：野生型FBN1的第891位Gin胺基酸突變為終止密碼子， 翻譯提前終止。
[0381] FBN1基因全長237,483bp，由66個外顯子構成，定位於15q21. 1。其mRNA包含 9663個核苷酸，由5'端非翻譯區、開放讀碼框和3'非翻譯區組成，長度分別為134、8613和 916個核苷酸。由FBN1基因編碼的FBN1是一種350ku的糖蛋白，為10?12nm結締組織 微纖維的主要組成部分，廣泛分布於彈性和非彈性組織中。該蛋白由47個與表皮生長因子 (EGF)表現同源的半胱氨酸富含基序組成，其中43個由於存在鈣結合序列而被認為在穩定 鈣依賴蛋白中發揮作用。這些鈣結合EGF樣基序長鏈結構中還穿插其他功能區域，包括7 個與轉化生長因子1結合蛋白同源的結構及富含半胱氨酸，由EGF樣結構和TGF-1樣結構 融合而成的雜交區域。鈣結合區域的突變及半胱氨酸的置換可引起FBN1功能障礙。目前 發現FBN1的突變會引起馬凡氏症候群。但是，本發明的FBN1基因突變位點c. C2671T並未 見報導。
[0382] 根據本發明的第二方面，本發明提出了一種分離的多肽。根據本發明的實施例，與 野生型FBN1相比，該分離的多肽具有D. Gln891X突變，即該突變是由於c. C2671T的無義突 變而引起的，具體地，該突變表示：該分離的多肽野生型FBN1的第891位Gin胺基酸突變為 終止密碼子，翻譯提前終止。根據本發明的一些具體示例，該多肽是由前述分離的編碼FBN1 突變體的核酸編碼的。通過檢測生物樣品中是否表達該多肽，可以有效地檢測生物樣品是 否易患馬凡氏症候群，也可以通過檢測這些多肽在生物體中是否存在，可以有效地預測生 物體是否易患馬凡氏症候群。
[0383] 根據本發明的第三方面，本發明提出了一種篩選易患馬凡氏症候群的生物樣品的 方法。根據本發明的實施例，該方法包括以下步驟：
[0384] 從所述生物樣品提取核酸樣本。根據本發明的實施例，生物樣品的類型並不受特 別限制，只要從該生物樣品中能夠提取到反映生物樣品FBN1是否存在突變的核酸樣本即 可。根據本發明的實施例，生物樣品可以為選自人體血液、皮膚、皮下組織的至少一種，優選 外周血。由此，可以方便地進行取樣和檢測，從而能夠進一步提高篩選易患馬凡氏症候群的 生物樣品的效率。根據本發明的實施例，這裡所使用的術語"核酸樣本"應做廣義理解，其可 以是任何能夠反映生物樣品中FBN1是否存在突變的樣本，例如可以是從生物樣品中直接 提取的全基因組DNA，也可以是該全基因組中包含FBN1編碼序列的一部分，可以是從生物 樣品中提取的總RNA，也可以是從生物樣品中提取的mRNA。根據本發明的一個實施例，所述 核酸樣本為全基因組DNA。由此，可以擴大生物樣品的來源範圍，並且可以同時對生物樣品 的多種信息進行確定，從而能夠提高篩選易患馬凡氏症候群的生物樣品的效率。另外，根據 本發明的實施例，針對採用RNA作為核酸樣本，從生物樣品提取核酸樣本可以進一步包括： 從生物樣品提取RNA樣本，優選RNA樣本為mRNA ;以及基於所得到的RNA樣本，通過反轉錄 反應，獲得cDNA樣本，所得到的cDNA樣本構成核酸樣本。由此，可以進一步提高利用RNA 作為核酸樣本篩選易患馬凡氏症候群的生物樣品的效率。
[0385] 接下來，在得到核酸樣本之後，可以對核酸樣本進行分析，從而能夠確定所得到核 酸樣本的核酸序列。根據本發明的實施例，確定所得到核酸樣本的核酸序列的方法和設備 並不受特別限制。根據本發明的具體實施例，可以通過測序方法，確定核酸樣本的核酸序 列。根據本發明的實施例，可以用於進行測序的方法和設備並不受特別限制。根據本發明的 實施例，可以採用第二代測序技術，也可以採用第三代以及第四代或者更先進的測序技術。 根據本發明的具體示例，可以利用選自Hiseq2000、S0LiD、454和單分子測序裝置的至少一 種對核酸序列進行測序。由此，結合最新的測序技術，針對單個位點可以達到較高的測序 深度，檢測靈敏度和準確性大大提高，因而能夠利用這些測序裝置的高通量、深度測序的特 點，進一步提高對核酸樣本進行檢測分析的效率。從而，能夠提高後續對測序數據進行分析 時的精確性和準確度。由此，根據本發明的實施例，確定核酸樣本的核酸序列可以進一步包 括：首先，針對所得到的核酸樣本，構建核酸測序文庫；以及對所得到的核酸測序文庫進行 測序，以便獲得由多個測序數據構成的測序結果。根據本發明的一些實施例，可以採用選自 HiSeq2000、S0LiD、454和單分子測序裝置的至少一種對所得到的核酸測序文庫進行測序。 另外，根據本發明的實施例，可以對核酸樣本進行篩選，富集FBN1外顯子，該篩選富集可以 在構建測序文庫之前，構建測序文庫過程中，或者構建測序文庫之後進行。根據本發明的一 個實施例，針對核酸樣本，構建核酸測序文庫進一步包括：利用FBN1外顯子特異性引物，對 核酸樣本進行PCR擴增；以及針對所得到的擴增產物，構建核酸測序文庫。由此，可以通過 PCR擴增，富集FBN1外顯子（尤其是第22號外顯子），從而能夠進一步提高篩選易患馬凡 氏症候群的生物樣品的效率。根據本發明的實施例，FBN1外顯子特異性引物的序列不受特 別限制，根據本發明的優選實施例，這些FBN1外顯子特異性引物（針對FBN1的22號外顯 子）具有SEQ IDNO :5和6所示的核苷酸序列：
[0386] GTTGTTATACTTAATGTCAGCTTTT (SEQ ID NO ：5)
[0387] TTTTTGAAAGATAATCTGTACCTAT (SEQ ID NO ：6)
[0388] 發明人驚奇地發現，通過採用這些引物，可以在PCR反應體系中通過顯著有效地 完成對FBN1外顯子的擴增。需要說明的是，這些SEQ ID N0:5和SEQ ID N0:6所示的核苷 酸序列是本發明的發明人在付出了艱苦的勞動後，意外獲得的。
[0389] 關於針對核酸樣本，構建測序文庫的方法和流程，本領域技術人員可以根據不 同的測序技術進行適當選擇，關於流程的細節，可以參見測序儀器的廠商例如Illumina 公司所提供的規程，例如參見Illumina公司Multiplexing Sample Preparation Guide (Part#1005361;Feb2010)或 Paired-End SamplePrep Guide(Part#1005063; Feb2010)，通過參照將其併入本文。根據本發明的實施例，從生物樣品提取核酸樣本的方法 和設備，也不受特別限制，可以採用商品化的核酸提取試劑盒進行。
[0390] 需要說明的是，在這裡所使用的術語"核酸序列"應作廣義理解，其可以是在對核 酸樣本進行測序得到的測序數據進行組裝後，得到的完整的核酸序列信息，也可以是直接 採用通過對核酸樣本進行測序所得到的測序數據（reads)作為核酸序列，只要這些核酸序 列中含有對應FBN1的編碼序列即可。
[0391] 最後，在確定核酸樣本的核酸序列之後，將所得到的核酸樣本的核酸序列與SEQ ID N0 :1的序列相比對。如果在所得到的核酸序列中具有C.C2671T突變，則指示生物樣品 易患馬凡氏症候群。由此，通過根據本發明實施例的篩選易患馬凡氏症候群的生物樣品的 方法，可以有效地篩選易患馬凡氏症候群的生物樣品。根據本發明的實施例，對核酸序列與 SEQ ID N0 :1進行比對的方法和設備並不受特別限制，可以採用任意常規的軟體進行操作， 根據本發明的具體實例，可以採用SOAP軟體進行比對。
[0392] 需要說明的是，根據本發明實施例的"篩選易患馬凡氏症候群的生物樣品的方法" 的用途不受特別限制，例如可以用作非診斷目的的篩選方法。
[0393] 篩選易患馬凡氏症候群的生物樣品的系統和試劑盒
[0394] 根據本發明的第四方面，本發明提出了一種能夠有效實施上述篩選易患馬凡氏綜 合徵的生物樣品的方法的系統。
[0395] 參考圖1，根據本發明的實施例，該篩選易患馬凡氏症候群的生物樣品的系統 1000包括核酸提取裝置100、核酸序列確定裝置200以及判斷裝置300。
[0396] 根據本發明的實施例，核酸提取裝置100用於從生物樣品提取核酸樣本。如前所 述，根據本發明的實施例，核酸樣本的類型並不受特別限制，對於採用RNA作為核酸樣本， 則核酸提取裝置進一步包括RNA提取單元101和反轉錄單元102,其中，提取單元101用於 從生物樣品提取RNA樣本，反轉錄單元102與RNA提取單元101相連，用於對RNA樣本進行 反轉錄反應，以便獲得cDNA樣本，所得到的cDNA樣本構成核酸樣本。
[0397] 根據本發明的實施例，核酸序列確定裝置200與核酸提取裝置100相連，用於對核 酸樣本進行分析，以便確定核酸樣本的核酸序列。如前所示，可以採用測序的方法確定核酸 樣本的核酸序列。由此，根據本發明的一個實施例，所述核酸序列確定裝置200可以進一步 包括：文庫構建單元201以及測序單元202。文庫構建單元201用於針對核酸樣本，構建核 酸測序文庫；測序單元202與文庫構建單元201相連，用於對核酸測序文庫進行測序，以便 獲得由多個測序數據構成的測序結果。如前所述，可以通過PCR擴增，富集FBN1外顯子，進 一步提商篩選易患馬凡氏症候群的生物樣品的效率。由此，文庫構建單兀201可以進一步 包括PCR擴增模塊（圖中未示出），在該PCR擴增模塊中設置有FBN1外顯子特異性引物， 以便利用FBN1外顯子特異性引物，對所述核酸樣本進行PCR擴增，根據本發明的具體實施 例，FBN1外顯子特異性引物（針對FBN1的22號外顯子）具有如SEQ ID NO :3和4所示的 核苷酸序列。根據本發明的實施例，測序單元202可以包括選自HISEQ2000、S0LiD、454和 單分子測序裝置的至少一種。由此，結合最新的測序技術，針對單個位點可以達到較高的測 序深度，檢測靈敏度和準確性大大提高，因而能夠利用這些測序裝置的高通量、深度測序的 特點，進一步提高對核酸樣本進行檢測分析的效率。從而，提高後續對測序數據進行分析時 的精確性和準確度。
[0398] 根據本發明的實施例，判斷裝置300與核酸序列確定裝置200相連，適於將核酸樣 本的核酸序列進行比對，以便基於核酸樣本的核酸序列與SEQ ID N0 :1的區別判斷生物樣 品是否易患馬凡氏症候群。具體地，基於核酸樣本的核酸序列與SEQ ID N0:1相比，是否具 有c. C2671T突變，判斷生物樣品是否易患馬凡氏症候群。如前所述，根據本發明的一個實 施例，核酸樣本的核酸序列與SEQ ID N0:1相比，具有C.C2671T突變，是生物樣品易患馬凡 氏症候群的指示。如前所述，根據本發明的實施例，對核酸序列與SEQ IDN0:1進行比對的 設備並不受特別限制，可以採用任意常規的軟體進行操作，根據本發明的具體實例，可以採 用SOAP軟體進行比對。
[0399] 由此，利用該系統，能夠有效地實施前述篩選易患馬凡氏症候群的生物樣品的方 法，從而可以有效地篩選易患馬凡氏症候群的生物樣品。
[0400] 根據本發明的第五方面，本發明提出了一種用於篩選易患馬凡氏症候群的生物樣 品的試劑盒。根據本發明的實施例，該用於篩選易患馬凡氏症候群的生物樣品的試劑盒包 括：適於檢測FBN1基因突變體的試劑，其中與SEQ ID N0 :1相比，該FBN1基因突變體具有 C.C2671T突變。利用根據本發明的實施例的試劑盒，能夠有效地篩選易患馬凡氏症候群的 生物樣品。在本文中，所使用的術語"適於檢測FBN1基因突變體的試劑"應做廣義理解，即 可以是檢測FBN1編碼基因的試劑，也可以是檢測FBN1突變體多肽的試劑，例如可以採用識 別特異性位點的抗體。根據本發明的一個實施例，所述試劑為核酸探針或引物，優選地，所 述核酸探針或引物具有如SEQ IDN0:5-6所示的核苷酸序列。由此，可以高效地篩選易患馬 凡氏症候群的生物樣品。
[0401] 需要說明的是，在本文前面篩選易患馬凡氏症候群的生物樣品的方法部分中所描 述的特徵和優點，同樣適用於篩選易患馬凡氏症候群的生物樣品的系統或者試劑盒，在此 不再贅述。
[0402] 構建體及重組細胞
[0403] 根據本發明的第六方面，本發明還提出了一種構建體。根據本發明的實施例，該構 建體包含前面所述的分離的編碼FBN1突變體的核酸，即本發明的FBN1基因突變體。由此， 利用本發明的構建體轉化受體細胞獲得的重組細胞，能夠有效地用於篩選治療馬凡氏綜合 徵的藥物。其中，所述受體細胞的種類不受特別限制，例如可以為大腸桿菌細胞、哺乳動物 細胞，優選該受體細胞來源於哺乳動物。
[0404] 在本發明中所使用的術語"構建體"是指這樣的一種遺傳載體，其包含特定核酸序 列，並且能夠將目的核酸序列轉入宿主細胞中，以獲得重組細胞。根據本發明的實施例，構 建體的形式不受特別限制。根據本發明的實施例，其可以為質粒、噬菌體、人工染色體、粘粒 (Cosmid)、病毒的至少一種，優選質粒。質粒作為遺傳載體，具有操作簡單，可以攜帶較大片 段的性質，便於操作和處理。質粒的形式也不受特別限制，既可以是環形質粒，也可以是線 性質粒，即可以是單鏈的，也可以是雙鏈的。本領域技術人員可以根據需要進行選擇。在本 發明中所使用的術語"核酸"可以是任何包含脫氧核糖核苷酸或者核糖核苷酸的聚合物，包 括但不限於經過修飾的或者未經修飾的DNA、RNA，其長度不受任何特別限制。對於用於構建 重組細胞的構建體，優選所述核酸為DNA，因為DNA相對於RNA而言，其更穩定，並且易於操 作。根據本發明的第七方面，本發明還提出了一種重組細胞。根據本發明的實施例，該重組 細胞是通過前面所述的構建體轉化受體細胞而獲得的。從而，本發明的重組細胞能夠表達 構建體所攜帶的FBN1基因突變體。根據本發明的一些實施例，利用本發明的重組細胞，能 夠有效地篩選治療馬凡氏症候群的藥物。根據本發明的實施例，受體細胞的種類不受特別 限制，例如可以為大腸桿菌細胞、哺乳動物細胞，優選所述受體細胞來源於非人哺乳動物。
[0405] 下面參考具體實施例，對本發明進行說明，需要說明的是，這些實施例僅僅是說明 性的，而不能理解為對本發明的限制。
[0406] 若未特別指明，實施例中所採用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規手 段，可以參照《分子克隆實驗指南》第三版或者相關產品進行，所採用的試劑和產品也均為 可商業獲得的。未詳細描述的各種過程和方法是本領域中公知的常規方法，所用試劑的來 源、商品名以及有必要列出其組成成分者，均在首次出現時標明，其後所用相同試劑如無特 殊說明，均以首次標明的內容相同。
[0407] 實施例1確定MFS致病突變
[0408] 1、樣本收集
[0409] 發明人收集到一個馬凡氏症候群（在本文中有時也簡稱為MFS)患者家系，其家系 圖見圖2。如圖2所示，其中，□表示正常男性，〇表示正常女性，籲表示女性患者，0表 示無法確定是否患病的已逝男性，表示無法確定是否患病的已逝女性，箭頭所指為先證 者。由圖2可知，該家系目前共有9個成員，其中MFS患者3名，正常成員6名。具體地，先 證者（II :4)，46歲，醫院就醫時被確診患有MFS。先證者的母親（I :2)去世，父親（I :1)健 在且為正常人；先證者的哥哥（II :1)去世，但育有一女（III :1)，其為MFS患者；先證者的 姐姐（II :2)健在，為正常人。先證者與丈夫（II :5)育有3個孩子：兩個女兒（III :2,為 MFS患者；III :3,為正常人），1個兒子（III :4,為正常人）。
[0410] 2、全外顯子組測序
[0411] 文獻報導馬凡氏症候群為顯性遺傳，且其有明確的致病基因 FBN1。因而，發明人結 合Illumina Hiseq2000的高通量測序技術，對圖2所示的MFS患者家系中的三名患者（II : 4、III :1和III :2)的FBN1基因的66個外顯子區域序列進行了測序。
[0412] 具體如下：
[0413] 2.1DNA 提取
[0414] 採集圖2所示MFS患者家系中的三名患者（II :4、III :1和III :2)的外周血，利 用白細胞裂解法從該外周血樣品中提取各患者的基因組DNA，並利用分光光度計測量DNA 的濃度及純度，所得各基因組DNA的0D26(l/0D28(l均應位於1. 7-2. 0之間，濃度不少於200ng/ 微升，總量不少於3微克。
[0415] 2.2外顯子捕獲與測序
[0416] 利用超聲波儀（CovarisS2，Massachusetts，USA)將各基因組DNA樣本隨機打斷 成200-300bp左右的片段，隨後按照製造商提供的操作說明書，在片段兩端分別連接上接 頭製備文庫（可參見：http://www. illumina. com/提供的Illumina/Solexa標準建庫說明 書，通過參照將其全文併入本文）。文庫經純化後經過Ligation-mediated PCR(LM-PCR) 的線性擴增與捕獲試劑Biotinylated DNA Library進行雜交富集，再經過LM-PCR的線性 擴增，文庫檢測合格後即可上機測序，以便獲得原始測序數據。其中，測序平臺為Illumina Hi Seq2000,讀取長度為90bp，各樣本的平均測序深度最少為150 X。
[0417] 3、變異檢測、注釋及資料庫比較
[0418] 利用Illumina basecalling Softwarel. 7對上述獲得的原始測序數據進行處 理，經過過濾去汙染後，使用S0APaligner/S0AP2(可參見：Li R，Li Y，Kristiansen K， et al, SOAP ：short oligonucleotide alignment program. Bioinformatics2008, 24(5)： 713-714 ；Li R, Yu C, Li Y, ea al, S0AP2 ：an improved ultrafast tool for short read alignment. Bioinformatics2009, 25 (15) : 1966-1967,通過參照將其全文併入本文）比對 到UCSC人類參考基因組（hgl9, build37. 1，http://genome. ucsc. edu/)，以便獲得比對到 基因組上的唯一比對序列。然後利用SOAPsnp(可參見：Li R，Li Y，Fang X，Yang H，et al， SNP detection for massively parallel whole-genome resequencing. Genome Res2009, 19(6) :1124-1132,通過參照將其全文併入本文）確定靶區域的基因型。
[0419] 結果，在這些樣本中，發明人發現：對於FBN1基因來講，在患者II :4中發現有29 個單核苷酸多態性（SNPs)和12處的插入/缺失，在患者III :2中發現有30個SNP和13 處的Indels。隨後通過dbSNP資料庫
[0420] (http://hgdownload.cse. ucsc.edu/goldenPath/hgl9/database/snpl35.txt. gz. )、HapMap 資料庫
[0421] (ftp://ftp. ncbi. nlm. nih. gov/hapmap)、千人基因組資料庫
[0422] (ftp://ftp. lOOOgenomes. ebi. ac. uk/voll/ftp)、炎黃資料庫（http:// yh. genomics, org. cn/)等公共資料庫的過濾，去掉所有已知的且在資料庫中等位基因頻率 大於0.005的變異。
[0423] 結果，發明人發現，在上述三個患者中只有新無義突變c. 2671C> T為發生在FBN1 基因編碼區中的非同義突變，其餘均為內含子或同義突變。進一步，綜合三個患者高度一致 的表型，以及患者II :4和III :2為母女關係，首先可以判斷三個患者的致病位點應該是相 同的。接著，通過顯性性遺傳模式結合家系分析，可以推斷：三個患者應該均攜帶上述突變 (c. 2671C > T)，且都為雜合突變類型，家系內正常人在此位置均未發生突變。
[0424] 隨後在圖2所示的上述MFS患者家系中對FBN1基因進行突變排查，即針對FBN1 基因中的無義突變c.2671C>T進行Sanger測序驗證，結果確認在此家系中三名患者（II : 4、III :1和III :2)均攜帶FBN1基因中的新生無義突變c. 2671C > T(p.Gln891X)，而家系 中所有未受累的家族成員均未攜帶該突變，在家系內證明基因型與表型存在共分離。由此， 初步判定FBN1基因中的新生無義突變c. 2671C > T(p. Gln891X)為該馬凡氏症候群家系中 患者的致病原因，FBN1基因的c. 2671C > T突變為馬凡氏症候群的致病突變。
[0425] 實施例2 Sanger法測序驗證
[0426] 分別對實施例1中所述的馬凡氏症候群患者家系中的3名患者（II :4、III :2和 III :1)和2名家系內正常人（II :5和III :4)的FBN1基因進行檢測：針對FBN1基因的 22號外顯子上的c. C2671T突變設計引物，然後通過PCR擴增、產物純化和測序的方法獲得 FBN1有關序列，根據確定序列測定結果屬於突變型還是野生型，驗證FBN1基因的c. C2671T 突變與馬凡氏症候群之間的相關性。
[0427] 具體方法步驟如下：
[0428] 1、DNA 提取
[0429] 按照實施例1中所述的提取DNA的方法，分別提取製備受試者外周靜脈血中的基 因組DNA，備用。
[0430] 2、引物設計及PCR反應
[0431] 首先，參考人類基因組序列資料庫GRCh37/hgl9,設計得到具有SEQ ID NO :5-6所 示的核苷酸序列的FBN1基因外顯子特異性引物，具體序列見下表：
[0432]
【權利要求】
1. 一種分離的編碼FBN1突變體的核酸，其特徵在於，所述核酸與SEQ ID NO :1相比， 具有c. C2671T突變。
2. -種分離的多肽，其特徵在於，與SEQ ID N0:2相比，所述分離的多肽具有 p.Gln891X 突變。
3. -種篩選易患馬凡氏症候群的生物樣品的方法，其特徵在於，包括以下步驟： 從所述生物樣品提取核酸樣本； 確定所述核酸樣本的核酸序列； 所述核酸樣本的核酸序列與SEQ ID N0:1相比，具有C.C2671T突變是所述生物樣品易 患馬凡氏症候群的指示， 任選地，所述生物樣本為選自人體血液、皮膚、皮下組織的至少一種， 任選地，所述核酸樣本為全基因組DNA。
4. 根據權利要求3所述的方法，其特徵在於，從所述生物樣品提取核酸樣本進一步包 括： 從所述生物樣品提取RNA樣本，優選所述RNA樣本為mRNA ;以及 基於所述RNA樣本，通過反轉錄反應，獲得cDNA樣本，所述cDNA樣本構成所述核酸樣 本。
5. 根據權利要求3所述的方法，其特徵在於，確定所述核酸樣本的核酸序列進一步包 括： 針對所述核酸樣本，構建核酸測序文庫；以及 對所述核酸測序文庫進行測序，以便獲得由多個測序數據構成的測序結果，任選地，採 用選自Hiseq2000、S0LiD、454和單分子測序裝置的至少一種對所述核酸測序文庫進行測 序， 任選地，針對所述核酸樣本，構建核酸測序文庫進一步包括： 利用FBN1基因外顯子特異性引物，對所述核酸樣本進行PCR擴增；以及 針對所得到的擴增產物，構建所述核酸測序文庫， 任選地，所述特異性引物具有如SEQ ID NO :5-6所示的核苷酸序列。
6. -種篩選易患馬凡氏症候群的生物樣品的系統，其特徵在於，包括： 核酸提取裝置，所述核酸提取裝置用於從所述生物樣品提取核酸樣本； 核酸序列確定裝置，所述核酸序列確定裝置與所述核酸提取裝置相連，用於對所述核 酸樣本進行分析，以便確定所述核酸樣本的核酸序列； 判斷裝置，所述判斷裝置與所述核酸序列確定裝置相連，以便基於所述核酸樣本的核 酸序列與SEQ ID N0:1相比，是否具有C.C2671T突變，判斷所述生物樣品是否易患馬凡氏 症候群， 任選地，所述核酸提取裝置進一步包括： RNA提取單元，所述RNA提取單元用於從所述生物樣品提取RNA樣本；以及 反轉錄單元，所述反轉錄單元與所述RNA提取單元相連，用於對所述RNA樣本進行反轉 錄反應，以便獲得cDNA樣本，所述cDNA樣本構成所述核酸樣本。
7. 根據權利要求6所述的系統，其特徵在於，所述核酸序列確定裝置進一步包括： 文庫構建單元，所述文庫構建單元用於針對所述核酸樣本，構建核酸測序文庫；以及 測序單元，所述測序單元與所述文庫構建單元相連，用於對所述核酸測序文庫進行測 序，以便獲得由多個測序數據構成的測序結果， 任選地，所述文庫構建單元進一步包括： PCR擴增模塊，所述PCR擴增模塊中設置有FBN1基因外顯子特異性引物，以便利用所述 特異性引物，對所述核酸樣本進行PCR擴增， 任選地，所述特異性引物具有如SEQ ID NO :5-6所示的核苷酸序列， 任選地，所述測序單元包括選自HISEQ2000、S0LiD、454和單分子測序裝置的至少一 種。
8. -種用於篩選易患馬凡氏症候群的生物樣品的試劑盒，其特徵在於，含有： 適於檢測FBN1基因突變體的試劑，其中與SEQ ID N0:1相比，所述FBN1基因突變體具 有c. C2671T突變， 任選地，所述試劑為核酸探針或引物， 任選地，所述核酸探針或引物具有如SEQ ID NO :5-6所示的核苷酸序列。
9. 一種構建體，其特徵在於，包含權利要求1所述的分離的編碼FBN1突變體的核酸。
10. -種重組細胞，其特徵在於，所述重組細胞是通過權利要求9所述的構建體轉化受 體細胞而獲得的。
【文檔編號】C12Q1/68GK104120132SQ201310156634
【公開日】2014年10月29日 申請日期:2013年4月28日 優先權日:2013年4月28日
【發明者】沈曉麗, 韓莉莉, 賴力, 陳點, 林賽梅, 朱慶燕, 朱倩, 張建國, 王俊, 汪建, 楊煥明 申請人:福建省立醫院, 深圳華大基因科技有限公司