包含熱不穩定乳蛋白的組合物及其製備方法與流程

2024-03-28 06:37:05

本申請是國際申請日為2011年12月9日的國際申請pct/us2011/064054進入中國、申請號為201180064301.5的題為「包含熱不穩定乳蛋白的組合物及其製備方法」的發明專利申請的分案申請。

本公開一般地涉及包含熱不穩定乳蛋白的營養組合物領域如嬰兒配方食品、母乳強化劑、兒童膳食補充劑等和用於製備這類組合物的方法。

背景技術：

在乳中自然發現的幾種蛋白質具有有用的生物活性。能在全脂乳以及乳清、酪蛋白或其它乳蛋白部分或分離物中發現這些蛋白質。例如，在人類和非人類乳中發現的蛋白質乳鐵蛋白具有多種不同的抗菌活性和抗病毒活性。包含乳過氧化物酶和乳凝集素(乳脂肪球-egf因子8蛋白)的其它乳蛋白也被認為對降低感染風險有益。因此，期望嘗試在用於人類的乳類膳食組合物如嬰兒配方食品中包含這些生物活性蛋白。

不幸地，嘗試在乳類膳食組合物中包含生物活性蛋白常受某些乳蛋白的生物活性在通常用於提供用於人食用的衛生乳類組合物的溫度條件下能失去或顯著減少的事實阻撓。更特別地，許多乳蛋白由於熱加工方法而變性或者失活。例如，在經歷巴氏殺菌條件如72℃達15秒時，乳鐵蛋白和其它生物活性乳蛋白如乳過氧化物酶和乳凝集素在一定程度上不穩定。在高熱條件下遭受變性或失活的其它乳蛋白為乳鐵素和轉化生長因子(tgf-β)。這類蛋白質在更苛刻的加工條件下特別脆弱，例如在130℃至145℃下處理。

因此，有益的是提供用於製備已經經歷高溫加工條件但包含生物活性的熱不穩定乳蛋白的營養組合物如嬰兒配方食品、母乳強化劑、兒童膳食補充劑等的方法。

技術實現要素：

簡單地說，本公開在一個實施方案中涉及用於製備組合物的方法。在一個實施方案中，所述方法包括：a)提供包含脂肪或脂質源和蛋白質源的第一組合物並使所述第一組合物經歷至少約130℃的溫度；b)提供包含熱不穩定乳蛋白的第二組合物；和c)混合所述第一組合物與第二組合物以形成包含脂肪或脂質源、蛋白質源和熱不穩定乳蛋白的第三組合物。在優選的實施方案中，所述第一和第三組合物為營養組合物。

在一些實施方案中，第一組合物包含多達約7g/100kcal的脂肪或脂質源，更優選約3g/100kcal至約7g/100kcal的脂肪或脂質源，和多達約5g/100kcal的蛋白質源，更優選約1g/100kcal至約5g/100kcal的蛋白質源。

優選地，第二組合物中的熱不穩定乳蛋白為乳鐵蛋白、乳過氧化物酶乳鐵素、tgf-β和/或乳凝集素，更優選地，熱不穩定乳蛋白為乳鐵蛋白。特別優選地，熱不穩定乳蛋白為由非人類來源製備的乳鐵蛋白。

在一些實施方案中，第二組合物為溶液，優選為包含水的水溶液，其已經例如通過反滲透、紫外(uv)光處理、照射、電脈衝、高熱等處理用於食品加工。在一個實施方案中，在將第二組合物與第一組合物混合之前已經過濾第二組合物。在另一實施方案中，在將第二組合物與第一組合物混合時熱不穩定乳蛋白已經經歷消毒。在另一實施方案中，所述方法還包括無菌包裝第三組合物。第二組合物和第三組合物二者都不經歷大於約80℃的溫度。

在另一實施方案中，本公開涉及用於製備組合物的方法，其包括下列步驟：混合已經經歷至少約130℃的溫度的包含脂肪或脂質源和蛋白質源的第一組合物與未經歷約80℃或更高的溫度的包含熱不穩定乳蛋白的第二組合物以形成包含脂肪或脂質源、蛋白質源和熱不穩定乳蛋白的第三組合物；和無菌包裝第三組合物。

經閱讀下列描述結合隨附的圖，本公開的許多其它目的、特徵和優勢對本領域技術人員而言容易顯而易見。

附圖說明

附圖是例示本公開方法的一個實施方案的流程圖。

具體實施方式

在一個實施方案中，本公開涉及用於製備包含脂肪或脂質源、蛋白質源和熱不穩定乳蛋白的組合物的方法，其包括下列步驟：a)使包含脂肪或脂質源和蛋白質源的第一組合物經歷至少約130℃的溫度；b)提供包含熱不穩定乳蛋白的第二組合物；和c)混合第一組合物與第二組合物以形成包含脂肪或脂質源、蛋白質源和熱不穩定乳蛋白的第三組合物。在優選的實施方案中，第二組合物沒有經歷約80℃或更高的溫度。

用於在第一組合物中包含的合適的脂肪或脂質源可為本領域任何已知或使用的，其包括但不限於動物來源如乳脂、奶油、奶油脂肪、蛋黃脂質；海洋來源如魚油、海洋油、單細胞油；蔬菜油和植物油如玉米油、芥花油、向日葵油、大豆油、棕櫚油精、椰子油、高油酸向日葵油、月見草油、菜籽油、橄欖油、亞麻仁(亞麻籽)油、棉籽油、高油酸紅花油、棕櫚硬脂、棕櫚仁油、麥胚油；中鏈甘油三酯油和乳液和脂肪酸的酯；及其任意組合。

在一些實施方案中，第一組合物中包含的蛋白質源包括牛乳蛋白。用於包含在第一組合物中的牛乳蛋白源包括但不限於乳蛋白粉、乳蛋白濃縮物、乳蛋白分離物、脫脂乳固體、脫脂乳、脫脂乳粉、乳清蛋白、乳清蛋白分離物、乳清蛋白濃縮物、甜乳清、酸乳清、酪蛋白、酸酪蛋白、酪蛋白酸鹽(例如，酪蛋白酸鈉、酪蛋白酸鈉鈣、酪蛋白酸鈣)及其任意組合。

在一個實施方案中，以完整蛋白質的形式提供蛋白質。在其它實施方案中，以完整蛋白質和水解程度為約4%至10%的部分水解蛋白質二者的組合形式提供蛋白質。在其它實施方案中，蛋白質為廣泛水解的，水解程度大於15%，甚至大於50%並且甚至高達90%或更高。在另一實施方案中，蛋白質源可補充有含穀氨醯胺的肽。

在本公開特殊的實施方案中，蛋白質源包含乳清蛋白和酪蛋白並且乳清蛋白與酪蛋白的比與在母乳中發現的相似。例如，在一些實施方案中，乳清蛋白與酪蛋白的重量比為約20%乳清:80%酪蛋白至約80%乳清:20%酪蛋白。

在一些實施方案中，第一組合物和/或第三組合物可以分類為嬰兒配方食品。術語「嬰兒配方食品」適用於通過作為母乳的替代品滿足嬰兒營養需求的液體或粉末形式的組合物。在美國，嬰兒配方食品的內容物由21c.f.r.§§100,106和107列出的聯邦法規規定。這些法規限定了宏量營養素、維生素、礦物質和其它成分水平試圖模擬母乳的營養和其它性質。在單獨的實施方案中，第一組合物和/或第三組合物可為母乳強化劑，意思是它為添加至母乳以增加母乳的營養價值的組合物。作為母乳強化劑，第三組合物可為粉末形式或液體形式。在另一實施方案中，公開的第一組合物和/或第三組合物可為兒童營養組合物。

使用技術人員熟悉的設備和方法可使第一組合物經歷130℃的溫度。優選地，使第一組合物經歷約130℃至約150℃的溫度時間為至少約1秒。更優選地，使第一組合物經歷約130℃至約150℃的溫度時間為約3秒至約30秒。

將包含脂肪或脂質源和蛋白質源的第一組合物與包含熱不穩定乳蛋白的第二組合物混合。

如本文使用的，「熱不穩定乳蛋白」為蛋白質1)或者為在至少一種類型的哺乳動物的奶中天然發現的(即，具有基本上與在至少一種類型的哺乳動物的奶中天然發現的蛋白質相同的胺基酸序列的蛋白質)，或者為在至少一種類型的哺乳動物的奶中天然發現的蛋白質的胺基酸變體的蛋白質；和2)當經歷高溫如大於80℃或在一些情況下，至少約130℃的溫度時其生物活性喪失或減弱。優選地，熱不穩定乳蛋白為在至少一種類型的哺乳動物的奶中天然發現的。這種蛋白質可為例如從至少一種類型的哺乳動物的奶中分離的或通過轉基因有機體製備的。在另一實施方案中，熱不穩定乳蛋白為在至少一種類型的哺乳動物的奶中天然發現的蛋白質的胺基酸變體，其通過例如，從或向在至少一種類型的哺乳動物的奶中天然發現的蛋白質的胺基酸序列去除、替換或添加一個或多個胺基酸製備。用於本公開的熱不穩定乳蛋白包括但不限於乳鐵蛋白、乳凝集素、乳過氧化物酶、乳鐵素、tgf-β、溶菌酶和免疫球蛋白。優選地，熱不穩定乳蛋白為乳鐵蛋白、乳凝集素和/或乳過氧化物酶。特別優選地，熱不穩定乳蛋白為乳鐵蛋白。

乳鐵蛋白為依賴種類包含1–4個多糖的約80kd的單鏈多肽。不同種類的乳鐵蛋白的3-d結構非常相似，但不相同。各個乳鐵蛋白包含兩個同源葉，稱為n-葉和c-葉，分別是指分子的n-端和c-端部分。各個葉還由兩個子葉或域組成，其形成裂口其中鐵離子(fe3+)與碳酸(氫)鹽陰離子以協同配位形式緊密結合。這些域分別稱為n1、n2、c1和c2。乳鐵蛋白的n-端具有負責許多重要結合性質的強陽離子肽區域。乳鐵蛋白具有非常高的等電點(約pi9)並且它的陽離子性質在它抵抗細菌、病毒和真菌病原體的能力中發揮主要作用。在調整乳鐵蛋白對多種微生物的生物活性的乳鐵蛋白的n-端區域範圍內有幾種陽離子胺基酸殘基簇。例如，人乳鐵蛋白的n-端殘基1-47(牛乳鐵蛋白的1-48)對乳鐵蛋白的鐵獨立性生物活性是關鍵的。在人乳鐵蛋白中，殘基2至5(rrrr)和28至31(rkvr)在n-端中是精氨酸富集的陽離子域，這對乳鐵蛋白的抗菌活性特別關鍵。n-端的相似區域在牛乳鐵蛋白中發現(殘基17至42；fkcrrwqwrmkklgapsitcvrrafa)。

如在公開biochemistryandcellbiology，第275-281頁(2006)中發表的「perspectivesoninteractionsbetweenlactoferrinandbacteria」中描述的，來自不同宿主種的乳鐵蛋白在它們的胺基酸序列方面可能不同，儘管通常具有相對高的等電點以及在內葉的末端區域帶正電荷的胺基酸。用於本公開的合適的乳鐵蛋白包括在hlf(349-364)片段處與胺基酸序列avgeqelrkcnqwsgl具有至少48%同源性的那些。在一些實施方案中，乳鐵蛋白在hlf(349-364)片段處與胺基酸序列avgeqelrkcnqwsgl具有至少65%同源性，並且在實施方案中，具有至少75%同源性。例如，用於本公開的非人類乳鐵蛋白包括而不限於牛乳鐵蛋白、豬乳鐵蛋白、馬乳鐵蛋白、水牛乳鐵蛋白、羊乳鐵蛋白、鼠乳鐵蛋白和駱駝乳鐵蛋白。

在優選的實施方案中，乳鐵蛋白為通過非人類來源製備的乳鐵蛋白。如本文使用的，「通過非人類來源製備的乳鐵蛋白」是指通過除母乳之外的來源製備的或從除母乳之外的來源獲得的乳鐵蛋白。例如，在一些實施方案中，乳鐵蛋白為通過轉基因有機體製備的人乳鐵蛋白和/或非人乳鐵蛋白。如本文使用的，術語「有機體」是指任何連續生命系統如動物、植物、真菌或微生物。如本文使用的，術語「非人類乳鐵蛋白」是指具有與人乳鐵蛋白的胺基酸序列不同的胺基酸序列的乳鐵蛋白。還優選的是乳鐵蛋白未水解。在一個實施方案中，乳鐵蛋白為牛乳鐵蛋白。在一些實施方案中，以分離物形式提供乳鐵蛋白並且在其它中作為濃縮乳清部分的組分。

在以其整體內容通過引用併入本文的okonogi等人的第4,791,193號美國專利中公開了用於製備高純度的牛乳鐵蛋白的方法。通常，公開的方法包括三步。首先將原料乳材料與弱酸性陽離子交換劑接觸以吸收乳鐵蛋白，隨後是第二步，其中發生洗滌以去除未吸收的物質。解吸步驟隨後發生，其中去除乳鐵蛋白以製備純的牛乳鐵蛋白。其它方法可包括第7,368,141號、第5,849,885號、第5,919,913號和第5,861,491號美國專利中描述的步驟，其公開內容都以其整體內容通過引用併入本文。

在一些實施方案中，在與第一組合物混合之前，熱不穩定乳蛋白已經經歷消毒(沒有應用超過80℃的溫度)。在一個實施方案中，在與第一組合物混合之前，通過一個或多個過濾器（優選地過濾器本身已經經歷消毒）過濾第二組合物。

應當理解，在一些實施方案中，經歷至少約130℃的溫度的第一組合物本身可能包含熱不穩定乳蛋白。這可能是如果例如，該熱不穩定乳蛋白的生物活性並不關鍵的情況。因此，在一些實施方案中，使包含脂肪或脂質源、蛋白質源和熱不穩定乳蛋白的第一組合物經歷至少約130℃的溫度，然後與包含熱不穩定乳蛋白（優選地與存在於第一組合物中不同的熱不穩定乳蛋白）的第二組合物混合，其中所述第二組合物不經歷大於約80℃的溫度。

能通過技術人員熟悉的方法完成混合第一和第二組合物的步驟。更特別地，在一些實施方案中，可通過無菌給料完成第一和第二組合物的混合併能以連續操作或批次操作的方式進行。例如，在一個實施方案中，第二組合物為水溶液，更優選為包含水的水溶液，其已經例如通過反滲透處理用於食品加工。然後，將溶液添加至第一組合物，其優選為液體形式。在特別優選的實施方案中，第一組合物為液體組合物的形式並且第二組合物為已經經歷消毒的溶液形式並且將第二組合物流給予第一組合物。

在另一優選的實施方案中，製備包含熱不穩定乳蛋白的組合物的方法包括：a)使包含脂肪或脂質源和蛋白質源的液體營養組合物經歷至少約130℃的溫度；b)製備包含熱不穩定乳蛋白的溶液；c)使溶液經歷消毒；和d)將液體營養組合物與溶液混合。

在另一優選的實施方案中，通過下列方法製備包含乳鐵蛋白的第三組合物，所述方法包括：a)使包含脂肪或脂質源和蛋白質源的液體營養組合物經歷至少約130℃的溫度以形成第一組合物；b)在至少1%的乳鐵蛋白濃度下製備包含乳鐵蛋白的溶液；在一些實施方案中，乳鐵蛋白濃度為約1%至約30%，並且在其它實施方案中，乳鐵蛋白濃度為約1%至約20%以形成第二組合物；c)在不大於80℃的溫度下使第二組合物經歷消毒；和d)將第一組合物與第二組合物混合以形成第三組合物。在一個實施方案中，所述方法包括製備包含1%-20%的乳鐵蛋白和已經例如通過反滲透處理用於食品加工的水的溶液。還優選地，使第二組合物經歷消毒的步驟包括在低於約60℃並且優選地為約4℃至約60℃的溫度下通過一個或多個過濾器(優選地過濾器本身已經經歷消毒)過濾第二組合物。在一個實施方案中，當為溶液時第二組合物的ph為約2至7。在一些實施方案中，混合液體營養組合物(即，第一組合物)與乳鐵蛋白溶液(即，第二組合物)以形成第三組合物的步驟包括將乳鐵蛋白溶液流給予液體營養組合物。

在一個實施方案中，選擇與第一組合物混合的包含乳鐵蛋白的第二組合物的量使得乳鐵蛋白以約0.1g/l至約2g/l的量存在於第三組合物中。在另一實施方案中，選擇與第一組合物混合的包含乳鐵蛋白的第二組合物的量使得乳鐵蛋白以至少約10mg/100kcal的量存在於第三組合物中，特別在營養組合物意圖用於兒童使用時。在一些實施方案中，乳鐵蛋白在第三組合物中的上限為約300mg/100kcal。在另一實施方案中，在第三組合物為嬰兒配方食品的情況下，乳鐵蛋白以約70mg至約220mg/100kcal的量存在於第三組合物中；在另一實施方案中，乳鐵蛋白以約90mg至約190mg/100kcal的量存在於第三組合物中。

在混合第一和第二組合物之後，能在第三組合物上進行附加加工步驟，只要任何這樣的附加加工步驟不導致第三組合物中任何完整熱不穩定蛋白的滅活或變性。例如，在優選的實施方案中，在混合第一和第二組合物的步驟之後立即或在一個或多個附加步驟之後無菌包裝第三組合物。在另一實施方案中，在混合第一和第二組合物的步驟之後立即或在一個或多個附加步驟之後，將第三組合物與已經消毒的包裝組合併在消毒條件下密封，例如在約4℃至約30℃的溫度下。在另一實施方案中，在混合第一和第二組合物之後，通過例如冷凍乾燥將第三組合物變為粉末形式。然後，在給予人之前，通過例如，將粉末添加至乳或水可將粉末以液體形式再生。

通過本文公開的方法製備的第三組合物可提供最低、部分或全部營養支持。組合物可為營養補充物或膳食替代物。在一些實施方案中，可結合食物或另外的營養組合物給予組合物。在該實施方案中，在被個體攝取之前能將組合物與食物或其它營養組合物混合或能在食物或營養組合物的攝取之前或之後給予個體。在一些實施方案中，將第三組合物給予嬰兒或兒童。將「兒童(child)」和「兒童(children)」定義為年齡為12個月至約12歲的人。術語「嬰兒」通常定義為從出生至12個月大的人。在一些實施方案中，可將組合物給予接受嬰兒配方食品、母乳、母乳強化劑或其組合的早產嬰兒。「早產嬰兒」為在小於37周妊娠之後出生的嬰兒，而「足月嬰兒」是指在至少37周妊娠之後出生的嬰兒。

第三組合物可以但不必須是嬰兒配方食品並且可為營養全面的。技術人員知道「營養全面」依賴多種因素變化，所述因素包括但不限於應用所述術語的個體的年齡、臨床情況和飲食攝入量。通常，「營養全面」是指本公開的組合物提供了正常生長所需的足夠量的所有碳水化合物、脂質、必需脂肪酸、蛋白質、必需胺基酸、條件性必需胺基酸、維生素、礦物質和能量。當應用於營養素時，術語「必需」是指不能由身體合成含量足夠用於正常生長並維持健康的任何營養素，因此其必需通過飲食提供。當應用於營養素時，術語「條件性必需」是指在身體不能獲得足夠量的前體化合物用於發生內源性合成時的條件下必須通過飲食提供的營養素。

用於早產嬰兒的「營養全面」的組合物按照定義將提供早產嬰兒生長所需的質量和數量上足夠量的所有碳水化合物、脂質、必需脂肪酸、蛋白質、必需胺基酸、條件性必需胺基酸、維生素、礦物質和能量。用於足月嬰兒的「營養全面」的組合物按照定義將提供足月嬰兒生長所需的質量和數量上足夠量的所有碳水化合物、脂質、必需脂肪酸、蛋白質、必需胺基酸、條件性必需胺基酸、維生素、礦物質和能量。用於兒童的「營養全面」的組合物按照定義將提供兒童生長所需的質量和數量上足夠量的所有碳水化合物、脂質、必需脂肪酸、蛋白質、必需胺基酸、條件性必需胺基酸、維生素、礦物質和能量。

可以本領域已知的任何形式提供第三組合物，包括粉末、凝膠、懸浮液、糊狀物、固體、液體、液體濃縮物或即食產品。在一個優選的實施方案中，第三組合物為嬰兒配方食品，特別是適合用作嬰兒的唯一營養來源的嬰兒配方食品。

在優選的實施方案中，可經腸給予第三組合物。如本文使用的，「經腸」是指通過或在胃腸道或消化道內並且「經腸給予」包括經口餵養、胃內餵養、經幽門給予或任何其它方式引入至消化道中。

優選地，根據本公開製備的第三組合物包含一種或多種益生元、一種或多種益生菌和/或一種或多種長鏈多不飽和脂肪酸源。如本文使用的，術語「益生菌」是指對宿主健康發揮有益作用的具有低的或沒有致病性的微生物並且術語「益生元」是指通過選擇性刺激宿主生長和/或活動而有益影響宿主的非消化性食品成分或能改善宿主健康的結腸中有限數量的細菌。

能通過多種方式完成在本公開的組合物中包含一種或多種益生元、一種或多種益生菌和/或一種或多種長鏈多不飽和脂肪酸(lcpufas)來源。例如，在一個實施方案中，在使組合物經歷至少約130℃的溫度之前，將一種或多種這些組分如益生元和/或長鏈多不飽和脂肪酸包含在第一組合物中。在另一實施方案中，在使組合物經歷至少約130℃的溫度之後但在與第二組合物混合之前，使一種或多種這些組分如益生元和/或長鏈多不飽和脂肪酸存在於第一組合物中。在其它實施方案中，將包含的任何益生菌添加至第三組合物，例如在無菌處理過程中。優選地，如果期望包含在經歷這種溫度條件之後會失去其活性的益生元、益生菌和/或長鏈多不飽和脂肪酸源，則在第一組合物已經經歷至少約130℃的溫度之後將其包含在第三組合物或第二組合物中或添加。

如上所述，在一個實施方案中，根據本公開可包含一種或多種益生菌。只要它實現預期效果則在該實施方案中可接受本領域已知的任何益生菌。在特殊的實施方案中，益生菌可選自乳酸桿菌(lactobacillusspecies)、鼠李糖乳酸桿菌(lactobacillusrhamnosusgg)、雙歧桿菌(bifidobacteriumspecies)、短雙歧桿菌(bifidobacteriumbrevis)、長雙歧桿菌(bifidobacteriumlongum)和動物雙歧桿菌乳亞種bb-12(bifidobacteriumanimalissubsp.lactisbb-12)。

如果包含，第三組合物中益生菌的量可從約104變化至約1010菌落形成單位(cfu)每千克體重每天。在另一實施方案中，益生菌的量可從約106變化至約109cfu每千克體重每天。在另一實施方案中，益生菌的量可為至少約106cfu每千克體重每天。此外，公開的組合物還可包含益生菌條件培養基組分。

在一個實施方案中，一種或多種益生菌是存活的。在另一實施方案中，一種或多種益生菌是非存活的。如本文使用的，術語「存活的」是指活的微生物。術語「非存活的」或「非存活益生菌」是指無生命的益生菌微生物，它們的細胞組分及其代謝物。這種非存活益生菌可能已被加熱殺死或者另外滅活但保持有利影響宿主健康的能力。用於本公開的益生菌可為天然存在的、合成的或通過有機體的基因操作培育的，不論這種新來源是目前已知的或以後開發的。如果使用存活益生菌，優選地，將益生菌包含在第二組合物或第三組合物中。

根據本公開，組合物還可使用一種或多種益生元。這種益生元可為天然存在的、合成的或通過有機體和/或植物的基因操作培育的，不論這種新來源是目前已知的或以後開發的。在一些實施方案中，在本公開的組合物中包含的益生元包括由第7,572,474號美國專利教導的那些，其公開內容通過引用併入本文。用於本公開的益生元可包括低聚糖、多糖和其它益生元，其包含果糖、木糖、大豆、半乳糖、葡萄糖和甘露糖。更特別地，用於本公開的益生元可包括乳果糖、低聚乳果糖、棉籽糖、低聚葡萄糖、菊糖、聚葡萄糖、聚葡萄糖粉、低聚半乳糖、低聚果糖、低聚異麥芽糖、大豆低聚糖、低聚乳果糖、低聚木糖、低聚殼聚糖(chito-oligosaccharide)、低聚甘露糖、低聚阿拉伯糖、唾液酸寡糖、低聚海藻糖和低聚龍膽糖。優選地，益生元為聚葡萄糖和/或低聚半乳糖。任選地，除了聚葡萄糖和/或低聚半乳糖之外，根據本公開使用一種或多種另外的益生元。

在一個實施方案中，包含益生元使得第三組合物中存在的益生元的總量為約0.1g/100kcal至約1g/100kcal。更優選地，第三組合物中存在的益生元的總量為約0.3g/100kcal至約0.7g/100kcal。至少20%的益生元應包含低聚半乳糖(gos)和/或聚葡萄糖(pdx)。

如果使用聚葡萄糖，則在一個實施方案中第三組合物中聚葡萄糖的量可為約0.1g/100kcal至約1g/100kcal。在另一實施方案中，第三組合物中聚葡萄糖的量為約0.2g/100kcal至約0.6g/100kcal。

如果使用低聚半乳糖，則在一個實施方案中第三組合物中低聚半乳糖的量可為約0.1g/100kcal至約1g/100kcal。在另一實施方案中，第三組合物中低聚半乳糖的量可為約0.2g/100kcal至約0.5g/100kcal。在一些實施方案中，第三組合物中聚葡萄糖與低聚半乳糖的比為約9:1至約1:9。

根據本公開還可使用一種或多種長鏈多不飽和脂肪酸源。優選地，lcpufas來源包含二十二碳六烯酸(dha)。其它合適的lcpufas包括但不限於α-亞油酸、γ-亞油酸、亞油酸、亞麻酸、二十碳五烯酸(epa)和花生四烯酸(ara)。

在一個實施方案中，第一組合物補充有dha和ara。在該實施方案中，ara:dha的重量比可為約1:3至約9:1。在本公開的一個實施方案中，ara:dha的重量比為約1:2至約4:1。

第三組合物中長鏈多不飽和脂肪酸的量可從約5mg/100kcal變化至約100mg/100kcal，更優選從約10mg/100kcal變化至約50mg/100kcal。

使用本領域已知的標準技術可對組合物補充含dha和ara的油。例如，通過更換等量的油，例如通常存在於組合物中的高油酸向日葵油可將dha和ara添加至組合物。作為另一實例，通過更換等量的通常存在於組合物（無dha和ara）中的總脂肪混合物的剩餘部分可將含dha和ara的油加入至組合物。

如果使用，則dha和ara來源可為本領域已知的任何來源，例如海洋油、魚油、單細胞油、蛋黃脂質和腦脂質。在一些實施方案中，dha和ara分別源自單細胞martek油、dhasco®和arasco®或其變體。dha和ara能為天然形式，條件是lcpufa來源的剩餘部分對個體不導致任何顯著有害影響。或者，能以精製形式使用dha和ara。

在本公開的一個實施方案中，dha和ara來源為例如在第5,374,567號；第5,550,156號；和第5,397,591號美國專利中教導的單細胞油，其公開內容以其整體通過引用併入本文。然而，本公開不僅僅局限於這類油。

在特殊的實施方案中，tgf-β是根據本公開存在的一種熱不穩定蛋白質。tgf-β可以其無活性形式存在於本文使用的蛋白質源中。然後，其在人腸道被酶、極端ph和/或分裂激活。在特殊的實施方案中，本公開的組合物增強人腸道中tgf-β的生物利用度或生物活性。這可能包括增強tgf-β在人體中的信號。在一個實施方案中，本公開的組合物可增強tgf-β在人腸道中的生物活性至少約5%，更有利至少約15%或甚至至少約25%或更高，多達約65%。

在本公開特殊的實施方案中，第三組合物包含約0.0150(pg/µg)ppm至約0.1000(pg/µg)ppm的tgf-β。在另一實施方案中，第三組合物中tgf-β的水平為約0.0225(pg/µg)ppm至約0.0750(pg/µg)ppm。

在本公開特殊的實施方案中，公開的第三組合物中tgf-β的水平為約500pg/ml至約10,000pg/ml組合物，更優選為約3000pg/ml至約8000pg/ml。

在一個實施方案中，公開的第三組合物中tgf-β1:tgf-β2的比例為約1:1至約1:20或更特別為約1:5至約1:15。

在一些實施方案中，通過添加生物活性乳清部分增強tgf-β在組合物中的生物活性。只要它實現預期效果，則本領域已知的任何生物活性乳清部分可用於該實施方案。在一個實施方案中，該生物活性乳清部分可為乳清蛋白質濃縮物。在特殊的實施方案中，乳清蛋白質濃縮物可為salibra®800，得自glanbianutritionals。在特殊的實施方案中，salibra®800乳清蛋白質濃縮物為2.5%酸化的。在另一實施方案中，salibra®800乳清蛋白質濃縮物為5%酸化的。在另一實施方案中，salibra®800乳清蛋白質濃縮物為2%酸化的。在其它實施方案中，salibra®800乳清蛋白質濃縮物為3%酸化的。

在另一實施方案中，乳清蛋白質濃縮物可為nutriwhey800，得自dmvinternational。在另一實施方案中，乳清蛋白質濃縮物可為salibra-850，得自glanbianutritionals。在另一實施方案中，乳清蛋白質濃縮物可為prolactalacataliswpi90，得自lactilusindustrieu.s.a.,inc。在其它實施方案中，乳清蛋白質濃縮物可由mgnutritionals提供。

實施例

提供下列實施例以例示本公開營養組合物的實施方案，但不應解釋為是對其的任何限制。考慮本文公開的營養組合物或方法的說明或實踐，本文權利要求範圍內的其它實施方案對於本領域技術人員而言是明顯的。意圖認為說明書連同實施例僅為例示性的，公開的範圍和實質由緊隨實施例的權利要求規定。

實施例1

該實施例例示能用於製備本公開的營養產品的成分的一個實施方案。

水872ml

乳糖65.6mg

蔬菜油混合物353.0mg

脫脂乳34.0mg

乳清蛋白8.5mg

低聚半乳糖4.7mg

酪蛋白3.5mg

聚葡萄糖2.4mg

乳鐵蛋白溶液(10%)1.0mg

dha和ara油混合物0.94mg

單-和雙-甘油酯0.7mg

碳酸鈣0.44mg

磷酸鈣0.4mg

檸檬酸鉀0.4mg

氯化鉀0.4mg

卵磷脂0.4mg

氯化鈉0.3mg

磷酸鉀0.3mg

氯化膽鹼0.2mg

氧化鎂0.08mg

氫氧化鈣0.08mg

硫酸亞鐵0.07mg

維生素0.03mg

礦物質0.03mg。

實施例2

該實施例例示能用於製備本公開的營養產品的成分的另一實施方案。

水686ml

乳清215mg

脫脂乳67mg

蔬菜油混合物33mg

乳糖17mg

低聚半乳糖4.7mg

聚葡萄糖2.4mg

乳鐵蛋白溶液(10%)1.0mg

dha和ara油混合物0.9mg

單-和雙-甘油酯0.7mg

碳酸鈣0.44mg

磷酸鈣0.4mg

檸檬酸鉀0.4mg

氯化鉀0.4mg

卵磷脂0.4mg

磷酸鉀0.3mg

角叉菜膠0.3mg

檸檬酸鈉0.2mg

氯化膽鹼0.2mg

氧化鎂0.08mg

氯化鈣0.08mg

硫酸亞鐵0.07mg

維生素0.03mg

礦物質0.03mg。

製備液體形式的包含除了乳鐵蛋白之外的來自實施例1和2的上述組分的營養組合物並經歷約135℃至約145℃的溫度達約3秒至約30秒。在反滲透水中製備1%-30%的乳鐵蛋白溶液並使用消毒過濾器過濾以產生乳鐵蛋白的消毒溶液。通過將乳鐵蛋白溶液流給予液體營養組合物將液體營養組合物與乳鐵蛋白溶液混合。將生成的組合物無菌包裝。

現在參考附圖，通過參考數字10表示本公開方法的一個實施方案的流程圖。在所述方法中，製備營養組合物100。營養組合物100可包含各種熱穩定成分以及一種或多種熱不穩定蛋白質。在加工步驟20中，將營養組合物100暴露於至少130℃的溫度以形成第一組合物120，其為消毒的；在第一組合物120中，營養組合物100中的任何熱不穩定蛋白質可為滅活的或變性的。

繼續流程圖10中顯示的方法，製備包含一種或多種熱不穩定蛋白質的溶液200，並經歷加工步驟30，其可包括過濾但不包括將溶液200暴露於大於80℃的溫度以形成第二組合物220，其為消毒的；第二組合物220中的熱不穩定蛋白質未變性或滅活。

然後，在加工步驟40中將第一組合物120和第二組合物220混合以形成包含來自第二組合物220的完整熱不穩定蛋白質的第三組合物300。然後，在加工步驟50中使第三組合物300經歷無菌加工並包裝以提供無菌包裝的組合物320。

本說明書中引用的所有參考文獻包括但不限於所有文件、公開、專利、專利申請、演講文稿、文章、報告、手稿、簡介、書本、網絡發帖、期刊論文、期刊等在此以它們的整體內容通過引用併入本說明書中。本文參考文獻的討論僅意圖概括由它們的作者提出的主張並且沒有承認任何參考文獻構成現有技術。申請人保留質疑引用的參考文獻的準確性和相關性的權利。

儘管已經使用特定術語、設備和方法描述了本公開的優選實施方案，但這樣的描述僅用於例示目的。使用的詞語是描述性而非限制性的詞語。應當理解，在不違背本公開實質或範圍（在下列權利要求中闡述）前提下本領域一般技術人員可以進行改變和變型。此外，應當理解，各個實施方案的方面可以整體形式或部分形式互換。例如，儘管已經例示了用於生產根據那些方法製備的商業消毒液體營養補充物的方法，但考慮其它用途。因此，附加權利要求的實質和範圍不應局限於其中包括的優選版本的描述。