一種對二維固相的同一區域上多種分析物進行同步檢測的方法
2023-05-26 22:08:36 1
專利名稱：一種對二維固相的同一區域上多種分析物進行同步檢測的方法
技術領域：
本發明及一種對二維固相的同一捕獲區域上對不同分析物進行同步檢測的方法，屬於二維固相上進行分析物檢測技術領域。
背景技術：
現有科學文獻中報導並已商業化的檢測方法都是將分析物分布在一個二維空間裡。以一個早早孕測試為例，在這個測試中，在膜的表面首先標記上抗人體絨(毛)膜促性腺激素(HCG)的捕獲抗體。而一種包含HCG的生物樣品(如尿液)會與一種可見試劑(諸如膠體金或有色乳膠或螢光素)反應，然後會與抗HCG的抗體偶聯形成一個HCG偶聯物。此偶聯物然後流經膜上標記了捕獲抗體的區域後，HCG偶聯物就會被捕獲而形成抗體-抗原-抗體「夾心法」偶聯物，這樣一來就可通過肉眼或儀器被檢測出來。
以上是一個抗體夾心法形式的形成，同樣原理可以也可以應用於標記抗原而檢測抗體，在這種情況下，就會形成雙抗原夾心法形式。
另一種結構是，膜上的不同區域標記不同的捕獲抗體。與不同的分析物結合的抗體偶聯物被分別捕獲後在這些區域上形成的夾心法形式而可以以不同的點或線的形式被識別。例如一份尿樣中的幾種違禁藥物能以列陣形式被檢測出來。另一個例子就是微陣，即不同的分析物以微點的形式分布在玻片上，然後利用螢光結合的方式檢測。
以上檢測中，不管是單一抗體或者單一抗原的檢測，還是列陣或者微陣，在同一個捕獲區域內均只能檢測一種抗體或者抗原，檢測不僅耗時，而且耗資源。
發明內容
本發明的目的是提供一種簡單、便捷、有效的對二維固相的同一區域上多種分析物進行同步檢測的方法，以克服現有技術的不同。
本發明是這樣實現的首先採用傳統的免疫標記法將一份針對各自特異性分析物的含有多種不同抗體或抗原的抗體或抗原混合物標記固定在一個二維固相的單一區域中，其次將一份包含著多種不同抗原或抗體分析物的樣品與固定在該二維固相的單一區域中的抗體或抗原混合物進行特異性反應得抗原-抗體或抗體-抗原偶聯物，然後用不同的有色試劑與另一份含有不同抗體或抗原的抗體或抗原混合物進行偶聯得抗體或抗原偶聯物，將所得的抗體或抗原偶聯物流經二維固相上的抗原-抗體或抗體-抗原偶聯物進行抗體或抗原捕獲就會得到具有不同色彩的夾心法形式的偶聯物，這些不同色彩的夾心法形式的偶聯物又都同時處於一個捕獲區域中，這樣即可採用色分離處理儀器對同一區域中的具有不同色彩的夾心法形式的偶聯物進行同步分色檢測和量化處理，從而在二維固相的同一區域上同步檢測出多種分析物。
二維固相指的是膜、玻片或試紙等。
單一區域指的是二維固相上的點或線。
不同的有色試劑指的是不同的螢光素、有色或螢光乳膠微粒、有色溶劑或膠質染料等。
在採用色分離處理儀器對同一區域中的具有不同色彩的夾心法形式的偶聯物進行同步分色檢測和量化處理時，使用CCD相機成像技術對夾心法形式的偶聯物進行感光並獲取圖像，然後將該圖像轉換成數位訊號輸入電腦或輸入具有分色圖象分析軟體的儀器中進行處理，從而得到不同色彩的夾心法形式的偶聯物中的不同標記物的螢光折光率或顏色反射率的分辨值或量化值。
在採用色分離處理儀器對同一區域中的具有不同色彩的夾心法形式的偶聯物進行同步分色檢測和量化處理時，使用可以分辨發射或折射光波長的光學掃描裝置來檢測或量化同一區域中的具有不同色彩的夾心法形式的偶聯物。
由於採用了上述技術方案，本發明可以在二維固相，比如膜、玻片或者試紙上標記上對各分析物有特異性的抗體或抗原混合物，然後將含有多種分析物的樣品與其對應的特異性抗體反應，而每種抗體或抗原可以與不同的有色試劑偶聯，這樣固定在固相上的抗體或抗原被捕獲後，每種分析物會與不同的有色試劑形成夾心法形式，但同時又都處於一個捕獲區域中，使用CCD相機技術和成像分析軟體來進行感光，轉換成數位訊號的處理，輸入電腦或輸入具有分色圖象分析軟體的儀器中即可分辨及量化不同標記物的螢光折射率或顏色反射率，使用可以分辨發射或折射光波長光學掃描裝置來檢測或量化多標記的點或線，這樣即可方便地一次性在同一個捕獲區域中將不同分析物檢測出來。因此，本發明與現有技術相比，本發明不僅具有簡單、便捷、有效的優點，而且還具有檢測精度較高的優點。
具體實施例方式
具體實施例方式被檢測的針對各自特異性分析物的不同的抗體或抗原混合物可以被固定於二維固相的同一區域中。一份包含著不同分析物的樣品會與對各分析物有特異性的抗體或抗原混合物反應，每種抗體或抗原與不同的有色試劑偶聯，比如不同的螢光素或不同有色乳膠微粒。當固定在固相上的抗體或抗原被捕獲後，每種分析物會與不同的有色試劑形成夾心法形式，但同時又都處於一個捕獲區域中。而每一種有色試劑都可以被檢測，可以通過類似於印刷工業中採用的「色分離」技術的成像分析系統的CCD相機或其他成像系統來感光，並將色彩信息轉換成數位訊號，輸入電腦或具有分色圖象分析軟體的儀器中，即可輕鬆來分辨和量化。對於螢光染料的檢測，可以使用特定激發波長或寬波段激發光源，而使用特定的濾光片在攝像系統中的可以用來分析螢光發射率。當不同顏色的乳膠微粒被作為有色試劑使用時，可以使用白光測試其反射係數。而一個配備分色圖象分析軟體的CCD相機可以用來檢測並分色與量化。
具體實施時可按以下方法進行實施首先採用傳統的免疫標記法(即常用的免疫標記技術)根據所要檢測的多種分析物將一份針對各自特異性分析物的含有多種不同抗體或抗原的抗體或抗原混合物標記固定在一個二維固相的單一區域中，其二維固相可以是膜、玻片或試紙等，膜最好採用硝酸纖維素膜，其單一區域可以取二維固相上的點或線；其次將一份包含著多種不同抗原或抗體分析物的樣品與固定在該二維固相的單一區域中的抗體或抗原混合物按傳統的方式進行特異性反應得抗原-抗體或抗體-抗原偶聯物，然後用不同的有色試劑與另一份含有不同抗體或抗原的抗體或抗原混合物進行偶聯得抗體或抗原偶聯物，不同的有色試劑可以採用現有技術中不同的螢光素、有色或螢光乳膠微粒、有色溶劑或膠質染料等；然後將所得的抗體或抗原偶聯物流經二維固相上的抗原-抗體或抗體-抗原偶聯物進行抗體或抗原捕獲就會得到具有不同色彩的夾心法形式的偶聯物，這些不同色彩的夾心法形式的偶聯物都同時處於一個捕獲區域中，這樣即可採用色分離處理儀器對同一區域中的具有不同色彩的夾心法形式的偶聯物進行同步分色檢測和量化處理，從而在二維固相的同一區域上同步檢測出多種分析物。
在採用色分離處理儀器對同一區域中的具有不同色彩的夾心法形式的偶聯物進行同步分色檢測和量化處理時，使用CCD相機成像技術對夾心法形式的偶聯物進行感光並獲取圖像，然後將該圖像轉換成數位訊號輸入電腦或輸入到現有技術中常用的具有分色圖象分析軟體的儀器中進行處理，從而得到不同色彩的夾心法形式的偶聯物中的不同標記物的螢光折光率或顏色反射率的分辨值或量化值；也可使用現有技術中可以分辨發射或折射光波長的光學掃描裝置來檢測或量化同一區域中的具有不同色彩的夾心法形式的偶聯物。
權利要求
1.一種對二維固相的同一區域上多種分析物進行同步檢測的方法，它包括採用免疫標記法，其特徵在於首先採用免疫標記法將一份針對各自特異性分析物的含有多種不同抗體或抗原的抗體或抗原混合物標記固定在一個二維固相的單一區域中，其次將一份包含著多種不同抗原或抗體分析物的樣品與固定在該二維固相的單一區域中的抗體或抗原混合物進行特異性反應得抗原-抗體或抗體-抗原偶聯物，然後用不同的有色試劑與另一份含有不同抗體或抗原的抗體或抗原混合物進行偶聯得抗體或抗原偶聯物，將所得的抗體或抗原偶聯物流經二維固相上的抗原-抗體或抗體-抗原偶聯物進行抗體或抗原捕獲就會得到具有不同色彩的夾心法形式的偶聯物，這些不同色彩的夾心法形式的偶聯物又都同時處於一個捕獲區域中，這樣即可採用色分離處理儀器對同一區域中的具有不同色彩的夾心法形式的偶聯物進行同步分色檢測和量化處理，從而在二維固相的同一區域上同步檢測出多種分析物。
2.根據權利要求1所述的對二維固相的同一區域上多種分析物進行同步檢測的方法，其特徵在於二維固相指的是膜、玻片或試紙。
3.根據權利要求1所述的對二維固相的同一區域上多種分析物進行同步檢測的方法，其特徵在於單一區域指的是二維固相上的點或線。
4.根據權利要求1所述的對二維固相的同一區域上多種分析物進行同步檢測的方法，其特徵在於不同的有色試劑指的是不同的螢光素、有色或螢光乳膠微粒、有色溶劑或膠質染料。
5.根據權利要求1所述的對二維固相的同一區域上多種分析物進行同步檢測的方法，其特徵在於在採用色分離處理儀器對同一區域中的具有不同色彩的夾心法形式的偶聯物進行同步分色檢測和量化處理時，使用CCD相機成像技術對夾心法形式的偶聯物進行感光並獲取圖像，然後將該圖像轉換成數位訊號輸入電腦或輸入具有分色圖象分析軟體的儀器中進行處理，從而得到不同色彩的夾心法形式的偶聯物中的不同標記物的螢光折光率或顏色反射率的分辨值或量化值。
6.根據權利要求1所述的對二維固相的同一區域上多種分析物進行同步檢測的方法，其特徵在於在採用色分離處理儀器對同一區域中的具有不同色彩的夾心法形式的偶聯物進行同步分色檢測和量化處理時，使用可以分辨發射或折射光波長的光學掃描裝置來檢測或量化同一區域中的具有不同色彩的夾心法形式的偶聯物。
全文摘要
本發明公開了一種對二維固相的同一區域上多種分析物進行同步檢測的方法，它首先採用免疫標記法將一份針對各自特異性分析物的含有多種不同抗體或抗原的抗體或抗原混合物標記固定在一個二維固相的單一區域中，其次將一份抗原或抗體分析物的樣品與固定在固相上的抗體或抗原混合得抗原－抗體或抗體－抗原偶聯物，然後用不同的有色試劑與另一份抗體或抗原混合物進行偶聯得抗體或抗原偶聯物，將所得的抗體或抗原偶聯物流經二維固相上的抗原－抗體或抗體－抗原偶聯物進行抗體或抗原捕獲得到夾心法形式的偶聯物，用色分離處理儀器對該偶聯物進行同步分色檢測和量化處理。本發明不僅具有簡單、便捷、有效的優點，而且還具有檢測精度較高的優點。
文檔編號G01N21/25GK1971278SQ200610119219
公開日2007年5月30日 申請日期2006年12月6日 優先權日2006年12月6日
發明者陳國治 申請人:益思美詮生物科技(上海)有限公司