一種海洋星蟲提取物及製備方法和應用的製作方法

2023-05-27 05:27:51 1

專利名稱：一種海洋星蟲提取物及製備方法和應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種海洋生物提取物及製備方法，具體涉及一種海洋星蟲活性組分提取物及製備方法和應用。
海洋星蟲除作食用外，民間還把它作為治療虛火上炎及滋陰補腎之食療藥物。一般用於目赤、面部潮紅。夏日盛暑因烈日暴曬，身體發熱，便秘的患者，用之可緩解症狀。因疲勞過度，四肢乏力，多服之可精神煥發，精力迅速恢復，故閩南人稱之為「動物人參」。沿海民間常用以取代昂貴的冬蟲夏草，因而又被美稱為「海洋裡的冬蟲夏草」。此外，在閩、臺、粵、瓊等沿海地區，漁民家常用海洋星蟲煮稀飯餵養幼兒，具有健脾滋補等食療作用。
海洋星蟲的保健功能，在我國古代醫藥專著中多有記載。海洋星蟲自古以來被視為「海藥」，唐末五代時的著名本草學家李荀廣遊嶺南，知曉南國鄉土風物，熟悉南國藥用動植物，所著《海藥本草》記載了大量外來藥，其中就記載了「海蠶沙」，雲其「生南海山石間，其蠶形，大如姆指，沙甚白，如玉粉狀，每有節」。海蠶沙「味鹹，大溫，無毒。主虛勞冷氣，褚風不遂。久服令人光澤，補虛贏，輕身，延年不老」。著名本草學家李時珍，在其所著《本草綱目》之中同樣也記載有「海蠶，，的藥用功效。中醫認為海洋星蟲性味甘、鹹、寒，有清肺補虛、滋陰降火功效，臨床實踐證實骨蒸潮熱、陰虛盜汗、肺虛咳喘、胸悶痰多等疾病，食用海洋星蟲有療效。對肺癆咳嗽、神經衰弱、小兒脾虛等疾患，若用海洋星蟲與薑片煲燉亦有很好的治療效果。以淮杞園肉煲海洋星蟲湯，不僅營養豐富，味道鮮美，而且具有滋陰養顏之效。民間效方有①海沙蟲煎取海沙蟲30g，水煎煮熟，1劑，每日水煎服2次，具有滋陰降火、清肺化痰功效，主治肺結核病、咳嗽吐痰、潮熱盜汗；②加味海沙蟲湯取海沙蟲10g，百部15g，生甘草5g；水煎，1劑，每日水煎服2次，具有滋陰潤肺、止咳祛痰功效，主治陰虛型肺結核病。
現代醫學研究發現海洋星蟲(P.Similis)的水解提取液具有收縮血管、加快心率、增強心博出量和冠脈血流量的作用，對失血性低血壓有顯著升壓作用，亦有良好的鎮靜止痛效果。黃哲元等用海洋星蟲的製成品-土蒜凍進行的藥學研究結果表明，海洋星蟲的水提取液對小鼠具有明顯的抗疲勞、耐缺氧、耐高溫的作用；發現它們含有6-7種人體必需胺基酸，尤其以Lys，Leu，Val含量較高；微量元素中尤其含鋅量很高，可達68μg/g。俞振良等人實驗發現泥蒜-海蝦合劑具有明顯的催乳作用。
本發明公開的海洋星蟲活性組分提取物是選用海洋星蟲為原料，用鹽溶液抽提，有機溶劑分級沉澱，超濾，凍乾等步驟獲取的活性組分提取物。
該活性組份提取物含有活性成份蛋白質、牛磺酸、微量元素和精氨酸，其中蛋白質的含量≥55％。
本發明所述活性組分提取物中的蛋白質分子量在1萬、2.8萬、3.1萬的三種活性蛋白含量佔總蛋白含量18％以上，佔總提取物活性組分含量5.67％以上。
本發明所要解決的另一技術問題是公開上述海洋星蟲活性組分提取物的製備方法。
本發明海洋星蟲活性組分提取物是通過下述技術方案獲得的海洋星蟲原料清洗乾淨後勻漿於2～5倍體積的含鹽酸鹽的緩衝溶液中，室溫提取24h，8000rpm高速離心30min，上清液用終濃度為20％～70％的無水乙醇分級沉澱，收集20％～70％的無水乙醇沉澱組分，真空冷凍乾燥，乾燥物溶解後用截留分子量為1萬和10萬的超濾膜分別超濾，收集1～10萬的組分，濃縮，凍幹，即得到海洋星蟲活性組分。
本發明所述的含鹽酸鹽的緩衝溶液可選用10～20mmol/L PB溶液或其它磷酸鹽緩衝液，其中含1～2mol/L鹽酸鹽和1～5mmol/LEDTA，所述的鹽酸鹽可選用NaCI、KCI等。
本發明所述活性峰可用MTT細胞活性試驗測定或用SDS-PAGE電泳鑑定。
本發明所要解決的另一技術問題是公開上述海洋星蟲活性組分提取物在製備抗疲勞和延緩衰老保健品或藥品中的應用。
本發明海洋星蟲活性組分可作為抗疲勞與延緩衰老保健食品及相關藥物的活性成份，根據保健及治療需要，與食用及藥用輔料製成各種製劑。
本發明海洋星蟲的抗疲勞作用研究選用昆明種小鼠為研究對象，設立低、中、高三個劑量的海洋星蟲樣品組，劑量分別為0.04、0.09、0.26g/kg，分別相當於人體推薦劑量的5、10、30倍，另設立蒸餾水對照組。每組動物數為10隻，灌胃給藥，灌胃容量為0.4ml/20g。結果顯示，本品對動物體重無明顯影響，能夠明顯延長小鼠負重遊泳時間，明顯加快運動後小鼠血乳酸消除，顯著降低血清尿素氮含量；說明海洋星蟲提取物具有明顯的抗疲勞作用。
本發明海洋星蟲的延緩衰老功能的抗氧化作用研究選用SD大鼠為研究對象，設立低、中、高三個劑量的海洋星蟲樣品組，劑量分別為0.04、0.09、0.26g/kg，分別相當於人體推薦劑量的5、10、30倍，另設立蒸餾水對照組和青年動物對照組。每組動物數為10隻，灌胃給藥，灌胃容量為1ml/100g，連續給藥30天。結果提示海洋星蟲提取物能夠降低SD大鼠血清MDA含量，增加血清SOD活性，說明海洋星蟲提取物具有抗氧化作用。
下面對本發明海洋星蟲提取物的抗疲勞和延緩衰老作用作進一步描述
本發明海洋星蟲活性組分富含蛋白質、牛磺酸、微量元素、精氨酸等活性物質。
牛磺酸(Taurine)，又名2-氨基乙烷亞磺酸，是細胞內含量最高的游離胺基酸。近年來研究證明它具有平衡細胞滲透壓、維持細胞膜穩定性、調節細胞鈣穩態和對抗氧自由基損傷等細胞保護作用。牛磺酸的主要藥理作用活性有A、解熱、鎮痛、消炎；B、鎮靜、安神；C、保護細胞膜、保肝利膽；D、抗病毒、抗病原菌；E、解毒、解化學中毒、預防中毒等。牛磺酸的主要生理調節作用有A、促進大腦發育，調節神經傳導，改善腦功能，抑制和治療老年性痴呆；B、提高機體特異性和非特異性免疫；C、增強和改善視力，維持視覺功能；D、促進營養物質鈣、脂類、維生素的吸收；E、改善兒童厭食和睡眠不良，促進兒童生長發育。
精氨酸能夠調節機體細胞因子的水平，促進嬰兒生長發育，促進創傷修復，減少應激時蛋白質的過分降解。精氨酸能夠增加胸腺的重量，刺激胸腺淋巴細胞和胸腺皮質與髓質的各種CD細胞，從而增強機體免疫功能。
鋅是目前研究最多，保健功能作用最為清楚的微量元素，具有抗生物過氧化、促進發育、提高機體免疫功能、增強骨骼發育、防止性功能減退、輔助降低血糖等多種保健作用。
蛋白質是機體生命活動的重要物質基礎，是提供機體組織蛋白的主要原料，是構成機體的主要結構成分，是體內的一個重要載體；同時蛋白質作為酶、抗體、激素等，在生命活動中對細胞的生長分化的調控以及遺傳信息的表達，起著重要的作用；是各種代謝不可缺少的物質基礎。我們的研究表明海洋星蟲提取物蛋白質含量在55％以上，其中分子量在1萬左右，2.8萬，3.1萬三種活性蛋白含量約佔總蛋白的18％，海洋星蟲提取物中三種活性蛋白的含量為5.67％。我們發現這三種蛋白具有非常顯著的抗疲勞、抗衰老功效用本發明海洋星蟲提取物進行有關功效試驗1、海洋星蟲提取物能夠顯著提高機體免疫功能研究發現海洋星蟲提取物灌胃給藥對小鼠脾臟和胸腺重量指數有顯著增強作用，高劑量組P值均小於0.01(如表1)；能顯著促進小鼠淋巴細胞轉化，給藥劑量為0.2g/kg·d時顯著提高淋巴細胞轉化率(P＜0.05)，給藥劑量為1.0g/kg·d時非常顯著提高淋巴細胞轉化率(P＜0.01)(如表2)。說明海洋星蟲提取物對機體免疫功能具有顯著的促進作用。
表1 海洋星蟲提取物灌胃給藥對小鼠脾臟和胸腺指數的影響組別 動物數(只) 劑量 給藥方式(天) 脾指數(mg/g)胸腺指數(g/kg·d) (mg/g)生理鹽水9 0Po×204.04±0.33 2.22±0.47海洋星蟲110.2 Po×204.24±0.57 2.27±0.85海洋星蟲101.0 Po×204.66±0.74**2.33±0.35**表2 海洋星蟲提取物灌胃給藥對小鼠淋巴細胞轉化率的影響組別 動物數(只) 劑量(g/kg·d)給藥方式(天)淋轉率 P值生理鹽水9 0 Po×20 0.047±0.028海洋星蟲11 0.2 Po×20 0.092±0.062 ＜0.05海洋星蟲10 1.0 Po×20 0.142±0.111 ＜0.012、海洋星蟲提取物具有顯著的抗疲勞作用(1)海洋星蟲提取物能夠顯著延長小鼠負重遊泳時間採用小鼠負重遊泳試驗，結果如表3。昆明種小鼠口服給藥30天後，負重遊泳時間顯著延長，給藥中劑量組負重遊泳時間與對照組相比有顯著性延長(P＜0.05)。高劑量組負重遊泳時間與對照組相比有非常顯著延長(P＜0.01)。
表3 樣品對小鼠負重遊泳時間的影響(X±SD)劑量(g/kg.d)動物數(只)負重遊泳時間(秒)對照組 10456±1250.04 10527±1800.09 10577±152*0.26 10687±136**(2)海洋星蟲提取物能夠顯著加快動物血乳酸的消除昆明種小鼠口服給藥30天後，在末次給藥後30分鐘、負重(2％體重)遊泳後0分鐘、遊泳後熱風吹乾並安靜30分鐘後，分別測定小鼠血乳酸水平。結果如

圖1所示，運動前和運動後0分鐘各給藥組動物血乳酸水平與對照組動物均無明顯差異(P＞0.05)，給藥組動物運動後30分鐘血乳酸水平隨著給藥劑量的增加而逐漸下降，高劑量組下降非常顯著(P＜0.05)。
(3)海洋星蟲提取物能夠顯著降低運動小鼠血清尿素氮昆明種小鼠口服給藥30天後，在末次給藥後30分鐘，將小鼠放入30℃水溫遊泳90分鐘，熱風烘乾，安靜後，取血清測尿素氮。結果見圖2，隨著給藥劑量的增加，小鼠血清尿素氮逐漸下降，高劑量組有顯著性差異。
上述結果提示經口給予小鼠不同劑量的海洋星蟲提取物30天後，小鼠負重遊泳時間明顯延長，運動後小鼠血乳酸消除明顯加快，血清尿素氮含量下降顯著；說明海洋星蟲提取物具有明顯的抗疲勞作用。
3、海洋星蟲提取物具有顯著的延緩衰老作用1)海洋星蟲提取物具有顯著的抗氧化作用20月齡的SD雄性大白鼠為研究對象，分為低、中、高三劑量組，另設老齡動物對照組和青年動物對照組(給予蒸餾水)，每組10隻動物。連續口服給藥30天後於第31天，摘眼球取血，離心取血清。測定血中過氧化脂質降解產物丙二醛(MDA)含量和血中超氧化物歧化酶(SOD)活力。
海洋星蟲提取物對SD大鼠體重的影響如表4所示。樣品各劑量組與老年對照組相比，均無顯著性差異。海洋星蟲提取物對SD大鼠血清過氧化脂質降解產物丙二醛(MDA)含量的影響如圖3，與老齡對照組比較，各給藥組隨著給藥劑量的增MDA含量逐漸下降，高劑量組下降明顯。海洋星蟲提取物對SD大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)活力的影響如圖4，與老齡對照組比較，各給藥組隨著給藥劑量的增SOD活性逐漸上升，高劑量組上升顯著。
表4 海洋星蟲提取物對SD大鼠體重的影響組別動物數 初始體重中期體重終期體重老年對照 10 485±14 512±12 541±16低劑量(0.04g/kg.d)10 480±16 511±18 538±15中劑量(0.09g/kg.d)10 482±16 510±18 541±1810 480±18 513±16 546±20高劑量(0.26g/kg.d)1078±4*140±11*187±11*青年對照上述結果提示海洋星蟲提取物能夠降低SD大鼠血清MDA含量，增加血清SOD活性，說明海洋星蟲提取物具有抗氧化作用。
2)海洋星蟲提取物能夠明顯延長果蠅生存時間八小時新羽化果蠅成蟲為研究對象，每組400隻，雌雄各半。設0.006％、0.017％、0.052％和0.156％四個劑量組和一個對照組(普通玉米粉)，每組樣本數為200隻。在氣溫25±1℃條件下培養，每四天更換新鮮配製的培養基一次，每兩天觀察記錄果蠅生存數和死亡數，直到全部果蠅死亡為止。計算出半數死亡時間、平均壽命和平均最高壽命等三個指標。結果如表5所示。高劑量的海洋星蟲能夠顯著延長雌雄果蠅的平均壽命和雄果蠅平均最高壽命，說明海洋星蟲提取物具有延年益壽之功效。
表5 海洋星蟲提取物對果蠅生存的影響樣品濃 平均體重半數死亡時間平均壽命 平均最高壽命度(％) (μg) (天) (天) (天)雄雌 雄雌 雄 雌雄 雌0 611 632 556955±968±972±4 80±20.006 609 633 557155±12 68±10 73±3 80±20.017 613 628 557156±11 68±10 74±4 80±20.052 612 629 577256±11 70±874±2 81±20.156 609 635 587259±11*71±7*76±4*81±2上述試驗結果海洋星蟲提取物具有抗氧化和延年益壽的功效，說明海洋星蟲提取物具有延緩衰老作用。
4、結論本發明海洋星蟲提取物採用廣西北海無汙染天然的海洋星蟲提取精製而成。富含多種營養成分，如含有人體必需的8種胺基酸及多種具有重要生物學功能的活性蛋白質，含有豐富天然牛磺酸及人體所需礦物質及微量元素，廣泛適用於兒童、老人及病人，具有多種保健功能。我們及上海預防醫學研究中心的檢測結果說明海洋星蟲具有明顯的抗疲勞和延緩衰老功效，海洋星蟲提取物能夠增強動物在應激狀態下的耐力，顯著提高衰老期小鼠存活率，增強機體SOD活性，具有明顯的抗衰老作用。具有雙向調節功能。具有抗衰老及延年益壽功能。
陸地冬蟲夏草因其獨特的療效、滋補作用被譽為諸虛百損之聖藥，備受歷代醫家重視，在國內外享有盛名。俗語云「寧得蟲草一把，不要金玉滿車」足顯其名貴。但是，近年來由於青藏高原氣候條件的破壞，使冬蟲夏草的主要產地青海省出現了暖冬和長期乾旱，導致了冬蟲夏草產量的銳減，並使該品面臨滅絕的危險。
海洋星蟲在功效成分上與冬蟲夏草極其類似，作為正瀕臨滅絕的陸地冬蟲夏草的唯一天然替代品，其資源豐富，又可人工養殖，成本低廉，開發海洋星蟲必將成為21世紀的黃金產業。
海洋星蟲原料清洗乾淨後勻漿於5倍體積的含1mol/l KCl的20mmol/l PB緩衝溶液中，室溫提取24h，10000rpm高速離心20min，上清液用終濃度為20％～70％的無水乙醇分級沉澱，收集20％～70％的無水乙醇沉澱組分，真空冷凍乾燥，乾燥物溶解後用截留分子量為1萬和10萬的超濾膜分別超濾，收集1～10萬的組分，濃縮，凍幹，即得到海洋星蟲活性組分。活性組分各活性成份含量見圖6。
權利要求
1.一種海洋星蟲有效成份提取物，其特徵在於該提取物是選用海洋星蟲為原料，用鹽溶液抽提，有機溶劑分級沉澱，超濾，乾燥後獲得的活性組分提取物。
2.一種如權利要求1所述的海洋星蟲有效成份提取物，其特徵在於該活性組份提取物含有蛋白質、牛磺酸、微量元素和精氨酸。
3.一種如權利要求1或2所述的海洋星蟲有效成份提取物，其特徵在於其中蛋白質的含量為55％。
4.一種如權利要求1所述的海洋星蟲有效成份提取物的製備方法，其特徵在於該提取物通過下述方法獲得海洋星蟲原料清洗乾淨後勻漿於2～5倍體積的含鹽酸鹽的緩衝溶液中，室溫提取24h，8000rpm高速離心30min，上清液用終濃度為20％～70％的無水乙醇分級沉澱，收集20％～70％的無水乙醇沉澱組分，真空冷凍乾燥，乾燥物溶解後用截留分子量為1萬和10萬的超濾膜分別超濾，收集1～10萬的組分，濃縮，凍幹，即得。
5.一種如權利要求5所述的海洋星蟲有效成份提取物的製備方法，其特徵在於其中所述的含鹽酸鹽的緩衝溶液選自10～20mmol/L PB溶液或其它磷酸緩衝液，其中含1～2mol/L鹽酸鹽和1～10mmol/LEDTA，所述的鹽酸鹽選自NaCI或KCI。
6.一種如權利要求5所述的海洋星蟲有效成份提取物的製備方法，其特徵在於其中所述有機溶劑選自乙醇或丙酮。
7.一種如權利要求1所述的海洋星蟲有效成份提取物在製備抗疲勞和延緩衰老保健品或藥品中的應用。
8.一種如權利要求7所述的海洋星蟲有效成份提取物的應用，其特徵在於該提取物可作為抗疲勞與延緩衰老保健食品及相關藥物的活性成份，根據保健及治療需要，與食用及藥用輔料製成各種製劑。
全文摘要
本發明涉及一種海洋星蟲有效成分提取物及製備方法和應用。本發明公開的海洋星蟲有效成分提取物是選用海洋星蟲為原料，用鹽溶液抽提，有機溶劑分級沉澱，超濾，冷凍乾燥後獲得活性組分提取物。其主要功效成分為活性蛋白質、牛磺酸、精氨酸、微量元素鋅等。免疫學研究發現，海洋星蟲提取物能夠顯著提高機體免疫功能，使機體脾指數和胸腺指數顯著增加，淋轉率顯著提高。動物抗疲勞試驗發現，海洋星蟲提取物具有顯著的抗疲勞作用，能夠顯著延長小鼠負重遊泳時間，加快動物血乳酸消除，降低運動動物血清尿素氮。動物延緩衰老研究發現，海洋星蟲提取物能夠顯著延緩衰老，顯著降低大鼠血清MDA含量，增加血清SOD活性，延長果蠅生存時間。說明海洋星蟲提取物能夠具有提高機體免疫功能，以及抗疲勞和延緩衰老作用。
文檔編號A61K35/56GK1430975SQ0311510
公開日2003年7月23日 申請日期2003年1月23日 優先權日2003年1月23日
發明者沈先榮, 賈福星, 蔣定文, 儲智勇, 周菊珍, 陳美華, 李樹林 申請人:上海澳博海洋生物技術開發有限公司