在視網膜疾病中用二核苷酸多磷酸促進液體的去除的製作方法

2023-05-26 22:56:11 1

專利名稱：在視網膜疾病中用二核苷酸多磷酸促進液體的去除的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種治療眼病的方法。特別地，本發明涉及排除視網膜下和視網膜內空間中病態液體累積的方法。
背景技術：
視網膜色素上皮細胞(RPE)存在於脊椎動物眼睛後面並形成將視網膜和脈絡膜血液供應分開的屏障。RPE的一個重要功能是保持並調節視網膜下空間的水合作用，視網膜下空間是視網膜和RPE之間的胞外體積。(Marmor，M.F.Marmor和T.J.Wolfensberger所編The Retinal，Pigment Epithelium一書第3-12頁，牛津大學出版社，紐約，(1998))。這一功能是通過調節視網膜下空間和脈絡膜血液供應之間液體、離子和代謝物的轉運實現的。(Marmor，M.F.Marmor和T.J.Wolfensberger所編The Retinal，Pigment Epithelium一書第420-438頁，牛津大學出版社，紐約，(1998)；Pederson，S.J.Ryan所編Retina一書第1955-1968頁，Mosby，聖路易斯，(1994))。像所有的上皮細胞一樣，RPE含有兩層在功能和解剖學上都不同的膜朝向視網膜的頂膜和朝向脈絡膜血液供給的基底外側膜。在正常是視網膜中，液體在從視網膜下空間向脈絡膜穿過RPE時被吸收。這種通常被稱為「RPE泵」的RPE對液體的主動吸收通過將液體泵出視網膜空間從而對維持光感受器正確附著於RPE頂膜起到了重要的作用。(Marmor，S.J.Ryan，Mosby所編Retina一書第1931-1954頁，聖路易斯，(1994)；Hughes等，M.F.Marmor和T.J.Wolfensberger所編The Retinal，Pigment Epithelium一書第xvii，745頁，牛津大學出版社，紐約，(1998))。
視網膜剝離以視網膜下空間中液體的異常累積為特徵，這將導致視網膜從底部的視網膜色素上皮細胞脫落。視網膜水腫是指液體異常累積於視網膜自身。視網膜在視網膜中心部分(黃斑)脫落或水腫會造成嚴重的視力喪失，且最終可導致無法治癒的失明。(Yanoff和Duker，Ophthalmology，Mosby，費城，(1999)；Wilkinson等，Michels』Retinal Detachment，第二版，Mosby，聖路易斯(1997))。許多研究病狀可導致視網膜剝離或視網膜水腫。視網膜剝離最常見的類型是孔源性視網膜剝離，其原因是視網膜中產生了一個或多個允許液化的玻璃質進入視網膜下空間的裂紋(tear)或小洞，因此產生了視網膜剝離。
在治療孔源性視網膜剝離(RRD)上還沒有取得藥理學進展。目前對RRD的治療僅有外科手術(鞏膜扣帶術、充氣性視網膜固定術或玻璃體切割術)(Wilkinson，Michels』Retinal Detachment，第二版，Mosby，聖路易斯(1997)。成功的RRD手術包括兩個主要部分視網膜的再附著和視網膜破損修復。這三種治療RRD的手術技術的主要差別在於所用使視網膜再附著的方法。
鞏膜扣帶術使用了眼外扣帶(通常是矽酮海綿或固體矽酮)，它被縫在對著剝離的視網膜的鞏膜上(Wilkinson，Michels』Retinal Detachment，第二版，Mosby，聖路易斯(1997)。視網膜通常在幾天後再附著，但也可能需要數周。在手術時，外科醫師可通過鞏膜、脈絡膜和RPE插入一個針頭以排出視網膜下的液體。通常，扣帶將一直縫合在鞏膜上。在充氣性視網膜固定術中，氣泡被直接注入玻璃體，且頭被定位，因此氣泡可填塞並覆蓋視網膜的破損。(Tornambe和Hilton，Ophthalmology 96(6)772-83(1989))。視網膜下的液體通常會在1-2天內排除，但它需要精確的頭部定位以確保氣泡可覆蓋所述視網膜破損。(Tomambe等10人，Am.J.Ophthalmol.127(6)741-3(1999))。玻璃體切割術通常用於與玻璃體牽引或出血有關的複雜RRD，但有時也可用於單純性RRD(Chang，M.Yanoff和J.S.Duker所編Ophthalmology一書中8.34.1-8.34.6，Mosby，費城，(1999))。其過程包括貫穿鞏膜切三個小切口以將器械放進玻璃體房。取出玻璃體並用特殊的鹽溶液代替。根據剝離的類型和起因，然後可以使用各種器械和技術以使視網膜再附著。就單純性剝離而言，可穿過視網膜上的裂紋插入針頭並通過視網膜下空間的前引流術使視網膜變平。
鞏膜扣帶術和玻璃體切割通常需要全身麻醉，並且需要住院。充氣性視網膜固定術通常可在門診完成，但需要病人配合以確保成功(Hilton和Tornambe，Retina11(3)285-94(1991)；Hilton和Brinton，Stephen J.Ryan所編Retina一書第2093-2112頁，Mosby，費城，(1999)；Han等，Am.J.Ophthalmol.126(5)658-68(1998))。根據外科手術的技術和外科醫師，每種實驗的成功率是不同的，充氣性視網膜固定術的成功率最低，鞏膜扣帶術的成功率最高。(Tornambe等，Am.J.Ophthalmol.127(6)741-3(1999)；Han等，Am.J.Ophthalmol.126(5)658-68(1998))。視網膜剝離手術成功與否是根據手術後任何時候(從幾小時至數周)視網膜的再附著判定的。視覺後果和患者的生活質量等參數不能用來判斷視網膜剝離手術成功與否。
通常與更嚴重的視網膜內水腫有關的病症是糖尿病黃斑水腫、滲出性年齡相關的黃斑變性(AMD)和臨床上有意義的囊樣黃斑水腫。(Jampol和Po，S.J.Ryan所編Retina一書第999-1008頁，Mosby，聖路易斯，(1994))。其它與視網膜內或視網膜下空間液體累積異常有關的病理症狀包括葡萄膜炎、中央和分支靜脈阻塞、視網膜色素變性、中心性漿液性視網膜病、CMV視網膜炎和脈絡膜黑色素瘤。與某些外科手術(如白內障手術)後的眼損傷有關的物理創傷也可導致視網膜剝離或水腫。(Ahmed和Ai，M.Yanoff和J.Duker所編Ophthalmology一書中8.34.1-8.34.6，Mosby，費城，(1999))。
黃斑中液體在視網膜內的累積會導致視敏度降低，且通常會對患有糖尿病型視網膜病變、AMD和其它局部缺血性視網膜病變(如分支和中央視網膜靜脈阻塞)的患者造成視力喪失。(Jampol和Po，S.J.Ryan所編Retina一書第999-1008頁，Mosby，聖路易斯，(1994)；Kent等，Br.J Ophthalmol.84(5)542-5(2000))。黃斑水腫通常與葡糖膜炎並發且通常可在視網膜色素變性患者中觀察到。(Rothova等，Br.JOphthalmol.80(4)332-6(1996)；Fetkenhour等，Trans.Am.Acad.Ophthalmol.Otolaryngol.83(3)Pt 1OP515-21(1977))。黃斑水腫也是眼內手術後造成視力下降的主要原因(稱為囊樣黃斑水腫)。(Miyake，Surv，Ophthalmol.28增補本554-68(1984))。視網膜內液體的累積被認為是內部和/或外部血液-視網膜屏障崩潰的結果。(Kent等，Br.J Ophthalmol.84(5)542-5(2000))。內部視網膜屏障由視網膜脈管系統的內皮細胞構成，外部視網膜屏障包括視網膜色素上皮細胞。血液-視網膜屏障的崩潰會導致脈管系統的液體和累積在視網膜層或視網膜下空間中的液體病灶洩漏。目前對視網膜水腫的治療包括全身和局部施用皮質類固醇、乙醯唑胺和非類固醇類的消炎藥，還可以有手術方法，如玻璃體切割術、格柵(grid)雷射光凝術和病灶雷射光凝術。這些治療方法對患者的效用有限。
儘管現今的RRD手術已經有相對較高的成功率(60-90％)，但是一旦手術失敗，可再附著視網膜的藥物組合物將對患者非常有利。此外，在無法進行手術治療時，可再附著視網膜的藥物組合物對於治療是非常有效的，尤其是在孔源性視網膜剝離的治療中。
已經進行了大量藥理學和手術研究以治療囊樣黃斑水腫和糖尿病型黃斑水腫，但它們通常需藉助於經驗且經常是無效的。非特異性消炎治療被用於所有類型的黃斑水腫，除了與局部缺血型視網膜炎有關的水腫，對它可採用雷射治療。(Kent等，Br.J Ophthalmol.84(5)542-5(2000)。皮質類固醇通常被用於治療黃斑水腫，但它在隨機的、安慰劑控制的研究中無效(Flach等，Am.J Ophthalmol.103(4)479-86(1987)；Flach等，Ophthalmology 97(10)1253-8(1990))。乙醯唑胺也可減輕某些類型的黃斑水腫，且它被認為是通過RPE泵的作用起作用的，但對乙醯唑胺的全身性耐受較弱。(Cox等，Arch.OphthazmoZ.106(g)1190-5(1988))。格柵(grid)或病灶雷射光凝術通常被用來減少與糖尿病型視網膜炎有關的視網膜脈管系統滲漏，且它在有限的情況下是有效的。(Ip等，Ophthalmology，倫敦；PhiladelphiaMosby.8.4.1-8.4.2(1999)；The Diabetic Retinopathy Study Research Group，Ophthalmology 88(7)583-600(1981)；Early Treatment Diabetic RetinopathyStudy Research Group，Arch.Ophthalmol.103(12)1796-806(1985)；The BranchVein Occlusion Study Group，Am.J Ophthalmol.98(3)271-82(1984))。此外，玻璃體切割術被用於治療糖尿病型視網膜炎以及玻璃體出血和/或玻璃體視網膜牽引術。(Wilkinson等，Michels』Retinal Detachment，第二版，Mosby，聖路易斯(1997))。對黃斑水腫安全有效的治療還無法滿足醫療需求。(Kent等，Br.JOphthalmol.84(5)542-5(2000))。
以前的工作顯示，RPE的頂膜(朝向視網膜的膜)含有P2Y受體，該受體可被激活以促進液體沿視網膜下空間到脈絡膜血液供給的方向穿過RPE，且這種作用機制被認為在視網膜剝離時有助於除去視網膜下的液體。(Peterson等，J.Neurosci.17(7)2324-37(1997))。然而，P2Y2受體的天然配體是ATP和UTP，這兩者都會被普遍存在的胞外核苷酸酶迅速降解。因此，為使ATP和UTP在視網膜剝離的治療中有效，這些化合物需要被直接輸遞到視網膜下空間。然而，普遍認為向視網膜下空間輸遞藥物對患者有著不可接受的風險，因為這要將針頭插在視網膜和RPE之間，而這可能導致併發症和失明。因此，為使ATP或UTP可用於治療用途，必須將它們輸遞進玻璃體內腔，而這是侵入性小得多的過程。然而，為使ATP或UTP達到RPE頂膜，它必須擴散通過視網膜。還不知道在ATP或UTP到達RPE頂膜之前是否會被降解，因此不知道它們在促進視網膜再附著中是否有效。現有的例子顯示，玻璃體內的UTP對於促進視網膜再附著是無效的，因此新型抗水解激動藥對於促進視網膜再附著是有效的。
發明概述揭示了用於在需要此類治療的患者中促進將視網膜或視網膜下空間內的外來液體的除去的藥物組合物和使用它的方法。本發明所揭示的方法和組合物被用於促進將因任何原因產生的視網膜內或視網膜下的外來液體除去，這些原因包括但不限於對孔源性視網膜剝離的初步處理和附屬處理、漿液性視網膜剝離、所有形式的囊樣黃斑水腫(葡糖膜炎、手術後造成的、中央和分支靜脈阻塞以及遺傳性視網膜疾病，如視網膜色素變性)以及所有形式的視網膜和黃斑水腫(增生性和非增生性的、滲出性年齡相關的黃斑變性以及早熟性視網膜病)。
本發明揭示了通過施用結構式I的藥物組合物以治療視網膜疾病(如視網膜剝離或視網膜水腫)患者的方法，所述施用是通過玻璃體內注射、玻璃體內持續釋放或輸遞、眼表面滴注、跨鞏膜注射或灌輸、或是全身注射或灌輸進行的。
對本發明有用的藥物組合物包含P2Y受體促效藥，其中包括某些含有腺嘌呤、尿嘧啶和胞嘧啶的二核苷酸多磷酸，在視網膜色素上皮細胞的上皮細胞中它們是P2Y受體的選擇性促效藥。這些促效藥對P2Y受體的激活與升高的胞內鈣水平和液體通過RPE運輸的提高有關。
本發明還提供了含有結構式I的化合物的新型組合物，其中結構式I的呋喃型糖部分選自3』-脫氧呋喃核糖基、2』，3』-雙脫氧呋喃核糖基、呋喃阿拉伯糖基、3』-脫氧呋喃阿拉伯糖基、呋喃木糖基、2』-多於呋喃木糖基和呋喃來蘇糖基。
附圖簡述

圖1代表用非同位素原位雜交技術得到的白化兔視網膜/RPE/脈絡膜組織的新鮮冷凍橫截面中P2Y2受體mRNA的細胞定位。特別顯示了在P2Y2受體mRNA序列上進行的反義和正義洋地黃毒苷(DIG)標記的核糖探針(riboprobe)的原位雜交結果。GCL神經節細胞層。IPL內分子層。INL內核層。ONL外核層。IS內段。OS外段。
圖2比較了INS37217(UP4dC)和UTP在過表達P2Y2受體的1321NI細胞中對胞質溶膠鈣轉移的作用。
圖3比較了INS37217(UP4dC)和UTP在過表達P2Y2受體的1321NI細胞中對肌醇磷酸產生的作用。
圖4表示INS37217(UP4dC)在人類胎兒RPE中對液體吸收的作用。
圖5表示INS37217(UP4dC)在牛RPE中對液體轉運的數量和方向的作用。
圖6表示來自新鮮分離的豬視網膜組織的INS37217(UP4dC)和UTP的代謝速度。
圖7顯示了在許多視網膜剝離的幼豬中，玻璃體內INS37217(UP4dC)對視網膜下氣泡大小的作用，這是用間接檢眼鏡檢查法評價的。
圖8顯示了玻璃體內INS37217(UP4dC)對視網膜下氣泡再吸收的作用。視網膜下的氣泡是通過在視網膜下空間注射含或不含INS37217(1mM)的MPBS溶液產生的。總結的結果(平均值±SEM)顯示，與賦形劑對照相對，INS37217增加了視網膜下氣泡的清除速度。
圖9(A-C)顯示了玻璃體內INS37217對視網膜下氣泡再吸收的作用。將MPBS溶液注射進視網膜下以產生視網膜下的氣泡，然後立即在玻璃體內注射含或不含INS37217(12mM，1.4mm和0.15mM)的MPBS溶液。總結的結果顯示，與賦形劑對照相對，以12和1.4mM施用的INS37217增加了視網膜下氣泡的清除速度，但0.15mM則沒有這種效果。
圖10顯示INS37217(空心柱)和賦形劑對照(安慰劑，實心柱)對視網膜下氣泡的記分有顯著差異(p＜0.05)。
發明詳述本發明提供了一種方法，此方法可增加液體通過視網膜色素上皮細胞(RPE)的吸收以便於將外來視網膜內或視網膜下的液體從眼睛後面的部分除去，從而治療可導致視網膜剝離和視網膜水腫的疾病。本發明包括對受試者施用有效量的P2Y受體促效藥以促進將與水腫性視網膜疾病有關的視網膜內和視網膜下空間內的病態液體累積除去。
所述P2Y受體促效藥和或不和通常用於治療或控制視網膜剝離和視網膜水腫的其它治療劑和佐劑一起施用。有效劑量是激活位於視網膜色素上皮細胞朝向視網膜的膜(頂膜)上的P2Y受體並增強液體通過RPE吸收(從視網膜到脈絡膜的方向)所必須的此類促效藥的量。本發明提供了促進將外來液體從視網膜和視網膜下空間除去的方法，由此可有效預防、控制和治療水腫性視網膜疾病，如視網膜剝離和視網膜水腫。
本發明的方法可有效控制和/或治療所有與視網膜剝離和視網膜水腫有關的疾病，包括但不限於孔源性視網膜剝離、漿液性視網膜剝離、所有形式的囊樣黃斑水腫(葡糖膜炎、手術後造成的、中央和分支靜脈阻塞以及遺傳性視網膜疾病，如視網膜色素變性)以及所有形式的視網膜和黃斑水腫(增生性和非增生性的、滲出性年齡相關的黃斑變性以及早熟性視網膜病)。
本發明提供了向受試者施用含有P2Y受體促效藥的藥物組合物以除去視網膜下和視網膜內空間內的病態液體累積的方法。所述P2Y受體促效藥包括二核苷酸多磷酸和它們的類似物，它們可激活P2Y1、P2Y2、P2Y4、P2Y6和P2Y11，優選P2Y2受體。
化合物的描述對本發明有效的二核苷酸多磷酸是具有通式I的化合物活期藥學上可接受的無毒鹽結構式I
其中X是氧、亞甲基、二滷亞甲基(二氟亞甲基和二氯亞甲基是優選的)或亞氨；n＝0，1或2；m＝0，1或2；n+m＝0，1，2，3或4；Z＝OH或H；Z』＝OH或H；Y＝OH或H；Y』＝OH或H；和B和B』各自獨立為如結構式Ia或Ib所定義的嘌呤殘基或嘧啶殘基，分別通過9-或1-位連接；結構式Ia 其中R1是氫、氯、氨基、單取代的氨基、二取代的氨基、烷基硫代、芳基硫代或烷芳基硫代，其中硫上的取代基含有最多20個不飽和或飽和的碳原子；R2是羥基、鏈烯基、氧代、氨基、巰基、硫酮、烷基硫代、芳基硫代、烷芳基硫代、醯基硫代、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、醯氧基、單取代的烷基氨基、雜環基、單取代的環烷基氨基、單取代的芳烷基氨基、單取代的芳基氨基、二芳烷基氨基、二芳基氨基、二烷基氨基、醯基氨基或二醯基氨基，Rx是O、H或缺少；R2和Rx可任選地一起形成1，N6-乙烯腺嘌呤衍生物的五元稠合咪唑環，乙烯部分的4-或5-位被如下定義的烷基、芳基或芳烷基部分任意取代；
R3是如下定義的氫、疊氮、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、烷基硫代、芳基硫代或烷芳基硫代；或是T(C1-6烷基)OCONH(C1-6烷基)W，其中T和W獨立為氨基、巰基、羥基或羧基；或是它們藥學上可接受的酯、醯胺或鹽；或者缺少；因此，腺嘌呤的取代衍生物包括1-氧化物、1，N6-(4-或5-取代的乙烯)腺嘌呤；N6-取代的腺嘌呤；或N-取代的8-氨基腺嘌呤，其中6-或8-HNR』基的R』選自芳基烷基(C1-6)基，其芳基部分任選地如以下描述功能化；烷基；以及其中帶有以下官能團的烷基；如([6-氨基己基]氨基甲醯基甲基)-，和ω-醯化的氨基(羥基、硫醇和羧基)烷基(C2-10)-，以及它們ω-醯化的氨基(羥基、硫醇和羧基)衍生物，這裡的醯基選自(但不限於)乙醯基、三氟乙醯基、苯甲醯基、取代的苯甲醯基等，或者羧基部分以其酯或醯胺衍生物的形式出現，例如，乙基或甲基酯或其甲基、乙基或苄胺衍生物。ω-氨基(羥基、硫醇)部分可被C1-4烷基烷基化。
J是碳或氮，條件是當J是氮時，R3不出現；其中，所述烷基是直鏈、支鏈或環狀的；其中，所述芳基可任選地被低級烷基、芳基、氨基、單取代或二取代的氨基、NO2、N3、氰基、羧基、醯胺基、亞磺醯氨基、磺酸、磷酸鹽或滷素基團取代；結構式Ib 其中R4是羥基、氧代、巰基、硫酮、氨基、氰基、C7-12芳基烷氧基、C1-6烷基硫代、C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基或二C1-4烷基氨基，其中所述烷基可任選地連接形成雜環；R5是氫、醯基、苯甲醯基、C1-6烷基、C1-5烷醯基、芳醯基或缺少；R6是羥基、氧代、巰基、硫酮、C1-4烷氧基、C7-12芳基烷氧基、C1-6烷基硫代、S-苯基、芳基硫代、芳基烷基硫代、三唑基、氨基、C1-6烷基氨基、C1-5雙取代的氨基、或二-C1-4烷基氨基，其中所述二烷基可任選地連接形成雜環或連接形成取代的環，如嗎啉環、吡咯環等；或者R5和R6一起在嘧啶環的3和4位之間形成五元稠合的咪唑環，並形成3，N4-乙烯胞嘧啶衍生物，其中所述乙烯部分在4-或5-位被C1-4烷基、苯基或苯氧基任意取代；其中所述C1-4烷基、苯基或苯氧基至少一個氫被選自以下基團的部分任意取代，這些基團是滷素、羥基、C1-4烷氧基、C1-4烷基、C6-10芳基、C7-12芳基烷基、羧基、氰基、硝基、亞磺醯氨基、磺酸鹽、磷酸鹽、磺酸、氨基、C1-4烷基氨基和二-C1-4烷基氨基，其中所述二烷基可任選地連接形成雜環；R7選自氫、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基或苯基；取代的C2-8炔基、滷素、取代的C1-4烷基、CF3、C2-3鏈烯基、C2-3炔基、丙烯氨基、溴乙烯、乙基丙烯酸鹽或丙烯酸和C2-8鏈烯基；或者R6和R7一起形成5或6元通過R6的N或O或S連接的飽和或不飽和的環，該環任意含有本身具有官能度的取代基；以及R8選自氫、氨基、二-C1-4烷基氨基、C1-4烷氧基、C7-12芳基烷氧基、C1-4烷基硫代、C7-12芳基烷基硫代、羧醯胺甲基、羧甲基、甲氧基、硫代甲基、苯氧基和硫代苯基；條件是當R8是氨基或取代的氨基時，R7是氫。
如上所述，所述核糖基部分是D-構型的，但也可以是L-構型，或者是D-和L-構型。D-構型是優選的。所述核苷殘基包括糖的部分，呋喃核糖基、呋喃阿拉伯糖基、2』-脫氧呋喃核糖基、3』-脫氧呋喃核糖基、2』，3』-雙脫氧呋喃核糖基、呋喃木糖基、2』-脫氧呋喃木糖基和呋喃來蘇糖基；並且可以是α-或β-和D-或L-構型，但最好是β-D-構型。
在結構式I的一般結構(上述Ia和Ib)中，2至6位的虛線表示在這些位置上存在單鍵或雙鍵；雙鍵或單鍵的相對位置由R4、R5和R6的取代基是否能夠酮-烯醇互變異構來確定。
在上述結構式I的一般結構中，醯基包括烷醯基和芳醯基。所述烷基含有1-8個碳原子，優選含有1-4個被如下所述的一個或多個合適的取代基任意取代的碳原子。芳基包括芳氧基基團的芳基部分，優選的是被如下所述的一個或多個合適的取代基任意取代的苯基。上面提到的鏈烯基或炔基含有2-8個碳原子，優選有2-6個碳原子，如乙烯基或乙炔基，可被如下所述的一個或多個合適的取代基任意取代。
上面提到的烷基、鏈烯基、炔基和芳基的合適取代基選自滷素、羥基、C1-4烷氧基、C1-4烷基、C6-12芳基、C6-12芳基烷氧基、羧基、氰基、硝基、亞磺醯氨基、磺酸鹽、磷酸鹽、磺酸基、氨基和取代的氨基，其中，所述氨基被C1-4烷基單取代或雙取代，當雙取代時，所述烷基可任意連接形成雜環。
通式I的二核苷酸多磷酸包括選自以下基團的二核苷酸四磷酸P1，P4-二(尿苷5』-)四磷酸(UP4U)；P1-(胞苷5』)-P4-(尿苷5』)四磷酸；P1，P4-二(腺苷5』-)四磷酸；P1-(腺苷5』)-P4-(尿苷5』)四磷酸；P1-(腺苷5』)-P4-(胞苷5』)四磷酸；P1，P4-二(乙烯腺苷)四磷酸；P1-(尿苷5』)-P4-(胸苷5』)四磷酸；P1-(腺苷5』)-P4-(肌苷5』)四磷酸；P1，P4-二(尿苷5』-)P2，P3-亞甲基四磷酸；P1，P4-二(尿苷5』-P2，P3-二氟亞甲基四磷酸)；P1，P4-二(尿苷5』-P2，P3-亞氨四磷酸)；P1，P4-二(4-硫代尿苷5』-四磷酸)；P1，P4-二(3，N4-乙烯胞苷5』-)四磷酸；P1，P4-二(咪唑[1，2-c]嘧啶-5(6H)-酮-2-(3-硝基)-苯基-6-β-D-呋喃核糖5』-)四磷酸，四銨鹽；P1-(肌苷5』-)P4-(尿苷5』-)四磷酸；P1-(4-硫代尿苷5』-)P4-(尿苷5』-)四磷酸；P1-(胞苷β-D-呋喃阿拉伯糖5』-)P4-(尿苷5』-)四磷酸；P1-(尿苷5』-)P4-(黃苷5』-)四磷酸；P1-(2』-脫氧尿苷5』-)-P4-(尿苷5』-)四磷酸；P1-(3』-疊氮-3』-脫氧胸苷5』-)P4-(尿苷5』-)四磷酸；P1，P4-二(3』-疊氮-3』-脫氧胸苷5』-)四磷酸2P4；P1，P4-二(3』-疊氮-3』-脫氧胸苷5』-)四磷酸；2』(3』)-苯甲醯-P1，P4-二(尿苷5』-)四磷酸；P1，P4-二(2』，3』)-苯甲醯尿苷5』-)四磷酸；P1-(2』-脫氧鳥苷5』-)P4-(尿苷5』-)四磷酸；P1-(2』-脫氧腺苷5』-)P4-(尿苷5』-)四磷酸；P1-(2』-脫氧肌苷5』-)P4-(尿苷5』-)四磷酸；P1-(2』-脫氧胞苷5』-)P4-(尿苷5』-)四磷酸；P1-(4-硫代尿苷5』-)P4-(尿苷5』-)四磷酸(dCP4U)；P1-(8-氮雜腺苷-5』-)P4-(尿苷5』-)四磷酸；P1-(6-巰基嘌呤核苷5』-)P4-(尿苷5』-)四磷酸；P1-(6-巰基嘌呤核苷5』-)P4-(2』-脫氧尿苷5』-)四磷酸；P1-(4-硫代尿苷5』-)P4-(阿拉伯糖胞苷5』-)四磷酸；P1-(腺苷5』-)P4-(4-硫代甲基尿苷5』-)四磷酸；P1-(2』-脫氧腺苷5』-)P4-(6-硫代己基嘌呤核苷5』-)四磷酸以及P1-(6-二十烷氧基嘌呤核苷5』-)P4-(尿苷5』-)四磷酸。UP4U和dCP4U是優選的化合物。
通式I的二核苷酸多磷酸包括選自以下基團的二核苷酸三磷酸P3-二(尿苷5』-)三磷酸；P1-(胞苷5』)-P3-(尿苷5』-)三磷酸；P1，P3-二(腺苷5』-)三磷酸；P1-(腺苷5』)-P3-(尿苷5』)三磷酸；P1-(腺苷5』)-P3-(胞苷5』)三磷酸；P1，P3-二(乙烯腺苷)三磷酸；P1-(尿苷5』)-P3-(胸苷5』)三磷酸；P1-(腺苷5』)-P3-(肌苷5』)三磷酸；P1，P3-二(尿苷5』-)P2，P3-亞甲基三磷酸；P1，P3-二(尿苷5』-P2，P3-二氟亞甲基三磷酸)；P1，P3-二(尿苷5』-P2，P3-亞氨三磷酸)；P1，P3-二(4-硫代尿苷5』-三磷酸)；P1，P3-二(3，N4-乙烯胞苷5』-)三磷酸；P1，P3-二(咪唑[1，2-c]嘧啶-5(6H)-酮-2-(3-硝基)-苯基-6-β-D-呋喃核糖5』-)三磷酸，四銨鹽；P1-(肌苷5』-)P3-(尿苷5』-)三磷酸；P1-(4-硫代尿苷5』-)P3-(尿苷5』-)三磷酸；P1-(胞苷β-D-呋喃阿拉伯糖5』-)P3-(尿苷5』-)三磷酸；P1-(尿苷5』-)P3-(黃苷5』-)三磷酸；P1-(2』-脫氧尿苷5』-)-P3-(尿苷5』-)三磷酸；P1-(3』-疊氮-3』-脫氧胸苷5』-)P3-(尿苷5』-)三磷酸；P1，P3-二(3』-疊氮-3』-脫氧胸苷5』-)三磷酸；P1，P3-二(3』-疊氮-3』-脫氧胸苷5』-)三磷酸；2』(3』)-苯甲醯-P1，P3-二(尿苷5』-)三磷酸；P1，P3-二(2』，3』)-苯甲醯尿苷5』-)三磷酸；P1-(2』-脫氧鳥苷5』-)P3-(尿苷5』-)三磷酸；P1-(2』-脫氧腺苷5』-)P3-(尿苷5』-)三磷酸；P1-(2』-脫氧肌苷5』-)P3-(尿苷5』-)三磷酸；P1-(2』-脫氧胞苷5』-)P3-(尿苷5』-)三磷酸；P1-(4-硫代尿苷5』-)P3-(尿苷5』-)三磷酸；P1-(8-氮雜腺苷-5』-)P3-(尿苷5』-)三磷酸；P1-(6-巰基嘌呤核苷5』-)P3-(尿苷5』-)三磷酸；P1-(6-巰基嘌呤核苷5』-)P3-(2』-脫氧尿苷5』-)三磷酸；P1-(4-硫代尿苷5』-)P3-(阿拉伯糖胞苷5』-)三磷酸；P1-(腺苷5』-)P3-(4-硫代甲基尿苷5』-)三磷酸；P1-(2』-脫氧腺苷5』-)P3-(6-硫代己基嘌呤核苷5』-)三磷酸以及P1-(6-二十烷氧基嘌呤核苷5』-)P3-(尿苷5』-)三磷酸。
此外，通式III的二核苷酸多磷酸包括選自P1-(尿苷5』-)P2-(4-硫代尿苷5』-)二磷酸；P1，P5-二(尿苷5)-五磷酸和P1，P6-二(尿苷5)-六磷酸的化合物。
優選的核苷促效藥是抗水解的促效藥。抗水解的促效藥是帶有經過修飾的磷酸酯主鏈的核苷，如亞甲基、亞氨基或其它可保護磷酸酯鍵被輕易水解的基團。二核苷酸也可因缺少末端磷酸基團而抵抗水解。某些二核苷酸特別抗水解。例如，與P1，P4-二(尿苷5』-)四磷酸相比，P1-(胞苷5』)-P4-(尿苷5』)四磷酸更加抗水解。此外，置於單核苷酸磷酸鏈末端的基團可賦予一定的抗水解穩定性，如簡單的烷基磷酸酯(甲基、乙基、苄基等)或硫代基團(如UTPγS)。
本發明還提供了結構式I的化合物的新型組合物，其中結構式I的呋喃基糖部分選自3』-脫氧呋喃核糖基、2』，3』-雙脫氧呋喃核糖基、呋喃阿拉伯糖基、3』-脫氧呋喃阿拉伯糖基、呋喃木糖基、2』-多於呋喃木糖基和呋喃來蘇糖基。
以下特殊的化合物也是新的P1-(6-巰基嘌呤核苷5』-)P4-(尿苷5』-)四磷酸；P1-(6-巰基嘌呤核苷5』-)P4-(2』-脫氧尿苷5』-)四磷酸；P1-(4-硫代尿苷5』-)P4-(阿拉伯糖胞苷5』-)四磷酸；P1-(2』-脫氧腺苷5』-)P4-(6-硫代己基嘌呤核苷5』-)四磷酸；P1-(6-二十烷氧基嘌呤核苷5』-)P4-(尿苷5』-)四磷酸；P1-(阿拉伯糖腺苷5』)P4-(尿苷-5』-)四磷酸；P1-(呋喃來蘇糖基胸苷5』)P4-(尿苷-5』-)四磷酸和P1-(呋喃來蘇糖基尿嘧啶-5』-)P4-(尿苷-5』-)四磷酸。
可以將一種被縮合劑活化的核苷酸的單-、二-或三磷酸與第二種相同或不同的單-、二-或三磷酸分子縮合，以形成所需的二核苷酸多磷酸，這樣便可製得本發明的化合物，上述縮合劑包括但不限於羰基二咪唑或二環己基碳二亞胺。另一種製備方法是，將按上述方法活化的一種核苷酸磷酸依次和無核苷酸的單-、二-或三磷酸部分縮合以產生所需的二核苷酸多磷酸，其中所述無核苷酸的單-、二-或三磷酸部分有(但不限於)單磷酸或焦磷酸陰離子，這時，沒有分離的中間產物是單核苷酸多磷酸。再一種製備方法是將按上述方法活化的單-、二-或三磷酸部分，或是酸性滷化物形式或其它朝著親核置換的衍生反應物形式的單-、二-或三磷酸部分與核苷酸磷酸或核苷酸多磷酸依次縮合，以產生所需的二核苷酸多磷酸。可通過在嘌呤、嘧啶或碳水化合物環上進行取代或衍生修飾預先形成的二核苷酸多磷酸，這樣也可形成所需的二核苷酸多磷酸。用作原料是核苷酸磷酸是商業上可獲得的，或者可用精通此領域的技術人員熟知的方法由相應的核苷酸製得。同樣，當核苷酸是商業上無法獲得時，它們可通過修飾其它容易獲得的核苷酸而製得，或者用精通此領域的技術人員熟知的方法由雜環和碳水化合物前體合成，這些方法有WO 96/40059，WO96/02443A1，WO-A-9815563和WO 98/55494；Theoclitou等，J.Chem.Sot.Perkin.Trans.I，2009-2019(1996)；Guranowski等，Nucleosides and Nucleotides 14，731-734(1995)；Visscher等，Nucleic Acids Research 20，5749-5752(1992)；Holler等，Biochemistry 22，4924-10 4933(1983)；Orr等，Biochem.Pharmacol.673-677(1988)；Plateau等，Biochemistry 24，914-922(1985)；Hagmeier等，J.Chromatography 237，174-177(1982)；Scheffzek等，Biochemistry 35，9716-9727(1996)；Stridh等，Antiviral Res.，97-105(1981)；Tarasova等，Chem.Abs.110，154770(1988)；Hata等，Chem.Lett.987-990(1976)；Huhn等，28，1959-1970(1993)；Tumanov等，Chem.Abs.109-6867d(1987)；Pintor等，MolecularPharmacology 51，277-284(1997)；以及美國專利第4,855,304；5,635,160；5,495,550和5,681,823號。
那些精通此領域的技術人員將認識到，所述原料是可以變化的，並且可以使用額外的步驟以製造本發明的化合物，這正如以下實施例所證明。某些情況下，對某些反應官能度的保護對於實現上述一些轉化是有用的。通常，對這些保護基團的需求以及加上和除去這些基團所需的條件對於精通有機合成領域的技術人員而言是顯而易見的。
本發明的化合物還包括它們無毒的藥學上可接受的鹽，比如但不限於鹼金屬鹽，如鋰、鈉或鉀；鹼土金屬鹽，如錳、鎂或鈣；或是銨鹽或四烷基季銨鹽，即NX4+(其中X是C1-4)。藥學上可接受的鹽是保留了本化合物所需的生物學活性且沒有不需要的毒理學效應的鹽。本發明還包括這裡所描述的化合物醯化的前體藥物。那些精通此領域的技術人員將了解各種可用於製備所述化合物無毒的藥學上可接受的鹽和醯化的前體藥物的合成方法。
儘管本發明的化合物只要用於治療人類受試者，但它們也可被獸醫用於治療其它哺乳動物受試者，如狗和貓。
本發明化合物的藥效可通過對P2Y2和其它P2Y受體活性進行肌醇磷酸測定來說明。如Lazarowski等(1995)(Brit.J.Pharm.116，1619-27)描述的這種被廣泛使用的測定方法依賴於對肌醇磷酸形成的測量，它被作為化合物活化通過G-蛋白與磷酸酶C連接的受體的活性的度量。
這些化合物的功效反映在它們促進除去視網膜下和視網膜內空間中的病態液體累積的能力上，這種累積與包括視網膜剝離和視網膜水腫在內的水腫性視網膜疾病有關。有效劑量取決於各個患者的特徵、所用特定化合物的活性、用藥模式和疾病或病症的特徵，並且可有精通此領域的技術人員決定。
可除去視網膜內或視網膜下空間中外來液體的劑量水平在眼睛每眼10μg-10mg之間，優選每眼50μg-6mg，最優選為每眼0.1mg-4mg。
化合物的施用可用各種合適的方法對患者的眼睛施用這裡所揭示的活性化合物，但優選的施用方法是以液滴、噴霧或凝膠的形式施用所述活性化合物的液體或凝膠懸液。或者，可通過脂質體對眼睛施用活性化合物。此外，可通過泵-導管系統將所述活性化合物灌輸進淚液膜。本發明的另一實施方案涉及含在連續或選擇性釋放裝置中的活性化合物，所述裝置如用於(但不限於)OcusertTM系統(Alza公司，Palo Alto，加利福尼亞州)的膜。在另一個實施方案中，所述活性化合物被含在、攜帶在或附在放在眼睛上的隱性眼鏡上。本發明的另一實施方案包括含在可用於眼表面的藥籤或海綿上的活性化合物。本發明的另一實施方案包括含在可用於眼表面的液體噴霧器內的活性化合物。本發明的另一實施方案包括將活性化合物直接注射到淚腺組織或眼表面。
優選以含水懸液的形式將這裡所揭示的活性化合物使用到玻璃體內。玻璃體內用藥包括；一次或多次玻璃體內注射；在手術時直接對玻璃體室單獨施用或與眼內衝洗液或其它類似溶液或裝置一起施用，這些裝置通常是在玻璃體視網膜手術時使用的；通過脂質體或其它合適的藥物載體施用；通過連續或選擇性釋放的植入玻璃體內的裝置施用，這些裝置包括但不限於OcusertTM(Alza公司，Palo Alto，加利福尼亞州)和Vitrasert(Bausch和Lomb公司，羅徹斯特，紐約州)。所述玻璃體內溶液含有活性化合物，並可任意含有生理上可接受的賦形劑，如精通眼科的技術人員按常規標準可選用的那些。所述賦形劑可選自已知的眼賦形劑，如(但不限於)鹽溶液、含水的聚醚類(如聚乙二醇)、聚乙烯類(如聚乙烯醇和聚吡咯烷酮)、纖維素衍生物類(如甲基纖維素和羥丙基甲基纖維素)、石油衍生物類(如礦物油和白凡士林)、動物脂肪(如羊毛脂)、丙烯酸的聚合物(如羧基聚亞甲基凝膠)、植物脂肪(如花生油)和多糖類(如葡聚糖)和糖胺聚糖類(如透明質酸鈉鹽)和鹽類(如氯化鈉和氯化鉀)。優選的實施方案是含有活性化合物和pH中性且生理等滲的鹽水的玻璃體內溶液。
含有活性化合物的局部溶液還可以含有生理上相容的賦形劑，精通眼科技術的人員可用常規的標準進行選擇。賦形劑可選自已知的眼科賦形劑，包括(但不限於)鹽水和含水的電解質溶液、含水的聚醚類(如聚乙二醇)、聚乙烯類(如聚乙烯醇和聚吡咯烷酮)、纖維素衍生物類(如甲基纖維素和羥丙基甲基纖維素)、石油衍生物類(如礦物油和白凡士林)、動物脂肪(如羊毛脂)、丙烯酸的聚合物(如羧基聚亞甲基凝膠)、植物脂肪(如花生油)和多糖類(如葡聚糖)和糖胺聚糖類(如透明質酸鈉鹽)和鹽類(如氯化鈉和氯化鉀)。
除了上述局部用藥的方法，還有許多全身性施用本發明的活性化合物的方法，這樣，化合物就可以通過全身吸收和循環到達眼部。這類方法之一涉及一種被受試者吸入的含有活性化合物的可吸入顆粒的氣溶膠懸浮液。活性化合物將通過肺被吸收進血液，或經過鼻淚管與眼組織接觸，隨後再以藥物有效量與眼內細胞接觸。可吸入的顆粒可以是液體或固體，粒徑應該足夠小以被吸入時通過口腔和喉；通常，粒徑在約1-10微米，但最好在1-5微米，這一範圍內的顆粒被認為是可吸入的。
另一種向受試者的眼全身性施用活性化合物的方法包括以液態製劑的眼藥水或洗眼液或滴鼻藥水形式，或以受試者吸入的可吸入顆粒的鼻噴霧劑的形式施用液/液懸浮液。可以用精通此領域的技術人員已知的方法，將活性化合物與合適的賦形劑，如無菌無熱原的水或無菌鹽水混合，以製備用來製造鼻噴霧劑或滴鼻或滴眼液的活性化合物的液態藥物組合物。
其它全身性施用活性化合物的方法包括口服施用，其中含有結構I的化合物的藥物組合物是片劑、錠劑、水性或油性懸浮液、可分散的粉劑或顆粒劑、乳劑、硬或軟膠囊、或糖漿劑或酏劑的形式。可以根據此領域中已知的用來製造藥物組合物的任何方法來製造供口服的組合物，且這種組合物可以含有一種或多種選自甜味劑、調味劑、著色劑和防腐劑的物質以提供好看且美味的藥物製劑。與無毒的藥學上可接受的賦形劑混合的含有活性成分的片劑是適宜於製造片劑的。這些賦形劑可以是，例如，惰性稀釋劑，如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；成粒劑和崩解劑，如玉米澱粉或海藻酸；粘合劑，例如澱粉、明膠或阿拉伯膠；和潤滑劑，如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。片劑可以不包衣或可用已知的技術進行包衣以延遲它們在腸胃道中的崩解和吸收，從而在較長的時間內提供持續的活性。例如，可以使用單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯之類的緩釋材料。供口服的製劑可以硬明膠膠囊的形式提供，其中活性成分與惰性固體稀釋劑(如，碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土)混合，或作為軟明膠膠囊的形式，其中活性成分與水或油性介質(如，花生油、液態石蠟或橄欖油)混合。
其它向受試者的眼全身性使用活性成分的方法包括活性成分的栓劑形式，以通過全身性吸收和循環使治療有效量的化合物到達眼部。
進一步的全身性施用活性化合物的方法包括直接內操作(intra-operative)滴注凝膠、乳膏或液體懸液形式的治療有效量的活性化合物。
本發明的方法可有效提高用於治療和控制與視網膜剝離和視網膜水腫有關的疾病的手術、藥物療法和佐劑的功效。手術方法包括鞏膜扣帶術、充氣性視網膜固定術、黃斑易位(macular translocation)和玻璃體切割術。皮質類固醇和乙醯唑胺等藥物治療劑已被用於治療黃斑水腫。
為達到實現目標響應的水平，一些治療劑的用量可能較大，但這通常會帶來較高頻率的藥物相關不良作用。因此，在使用本發明的化合物時，通常用於治療視網膜剝離和視網膜水腫的藥劑的用量應相對較小，這樣，因長期使用此類治療劑而導致的不良副作用的頻率就較低。因此，本發明化合物的另一適應症是降低用於治療視網膜剝離和視網膜水腫的藥物的不良副作用，比如提高乙醯唑胺的總體效果。
通過以下實施例進一步闡述了本發明，這些實施例不能理解為將本發明限制在它們所描述的特定步驟的範圍內。
實施例實施例1.P2Y2-受體mRNA在視網膜和RPE中的定位用非同位素原位雜交技術研究了白化兔視網膜/RPE/脈絡膜組織的新鮮冷凍橫截面中P2Y2受體mRNA的細胞定位。圖1代表在P2Y2受體mRNA序列上進行的反義和正義洋地黃毒苷(DIG)標記的核糖探針(riboprobe)的原位雜交結果。用鹼性磷酸酶共軛的抗DIG抗體通過免疫組織化學顯示反義和正義核糖探針的雜交，並對鹼性磷酸酶進行生色團反應以檢測DIG特異信號，產生了紫色/黑色的染色。還用核堅牢紅對該組織進行復染。作為對照的正義探針(右)沒有顯示特異的標記。反義探針標記顯示P2Y2受體mRNA序列定位在神經節細胞分散的核和內核層中，並穿過光感受器的內段層。在脈絡膜血管的上皮細胞中還檢測到了貫穿RPE的強標記。
實施例2.合成的P2Y2促效藥UP4dC(INS37217)對克隆的人P2Y2受體的作用二核苷酸[P1-(尿苷5』-)-P4-(2』-脫氧胞苷5』-)四磷酸四鈉鹽](UP4dC)，也稱為INS37217，被測試了其在克隆的人P2Y受體亞型上的活性(潛能、效力和選擇性)，這種亞型在1321N1星形細胞瘤細胞中被穩定表達。用兩種體外細胞活性指標評定活性，這兩種指標是1)胞內鈣儲備的活化，以及2)[3H]-肌醇磷酸([3H]-IP)的累積。UP4dC在兩種反對細胞表達P2Y1、P2Y2、P2Y4或P2Y6受體的測定中都具有活性。
UTP和UP4dC在表達人P2Y2(圖2)受體的1321N1星形細胞瘤細胞中誘導了胞質溶膠鈣的活化，其EC50值分別為0.22μM和0.8μM。在P2Y2受體上，鈣對100PM UP4dC的響應與對UTP的最大響應相等。總之，與UTP相比，UP4dC在P2Y2受體上是鈣活化的全效促效藥。
UTP和UP4dC促進表達人10 P2Y(圖3)受體的1321N1細胞中[3H]-IP的累積，其EC50值分別為1.1和2.2μM。肌醇磷酸對100PM UP4dC的響應大致等於UTP的最大響應。總之，在實驗系統中與UTP相比，UP4dC在P2Y2受體上是肌醇磷酸釋放的全效促效藥。
實施例3.在新鮮分離的RPE單層中UP4dC(INS37217)促進液體的吸收用經過改進的電容探針技術研究了液體通過新鮮分離的、完整的牛和人RPE單層的轉移(Frambach等，Biophys.J.47(4)547-52(1985)；J Gen.Physiol.83(6)875-99(1984))。
RPE被垂直安置在改進的Ussing室中，這樣頂膜和基底外側膜就各自暴露於儲存在浴池(bathing reservoirs)中的林格溶液。不鏽鋼電容探針被緩慢放進頂部和基底外側的浴池中以感知探針和液體半月板之間空隙的電容。液體轉移速度Jv(μL cm-2hr-1)是通過監測因液體移動而導致的頂部和基底外側浴液處空隙電容的變化而測定的。
圖4顯示了人胚胎RPE中促效藥對J的代表性作用。正的Jv值表示液體被吸收(頂部向基底外側)而負的Jv值表示液體分泌(基底外側向頂部)。在圖4顯示的實驗中，對照液體通過新鮮分離的人胚胎RPE單層的移動以約5μL cm-2hr-1的速度被吸收。在沐浴頂膜的林格溶液中加入50μM促效藥使液體吸收在回到刺激前水平前暫時升高到約40μL cm-2hr-1。在1小時的處理階段中，UP4dC(INS37217)增加的總液體吸收大約有三倍。
儘管RPE通常是液體吸收上皮，但在新鮮分離的RPE標本中也觀察到了液體分泌。假設體內液體分泌在某些情況(如在黑暗和明亮之間轉換時)或在病態狀況(如漿液性視網膜剝離)下是RPE生理機能的正常組成部分。圖5顯示了在新鮮分離的牛RPE單層中，其中Jv分泌是在對照條件下觀察的，所述促效藥可逆轉液體轉運被吸收的方向。在返回對照林格溶液後促效劑的作用是可逆的。促效藥在體內的這種作用將為漿液性視網膜剝離的治療提供治療的可能，所述漿液性視網膜剝離如中心性漿液性視網膜病，其中，假設異常的RPE介導的液體分泌可引起脈絡膜的液體轉運進入視網膜下空間。
實施例4.新鮮分離的視網膜組織中UP4dC(INS37217)和UTP代謝穩定性的比較UP4dC(INS37217)和UTP在新鮮分離的豬視網膜組織中的代謝速度是用連接有UV檢測器的高效液相色譜(HPLC)法檢測的。大小相同的新鮮分離的視網膜組織是從安樂死的幼豬(2-3個月)中分離的，並將視網膜組織分別放在37℃的培養室中。平衡30分鐘後，將各個組織和100μM UP4dC或UTP一起摻到生理緩衝液中，並溫育0.5、1、2和4小時。然後對來自各個室的等量的緩衝液進行W-偶聯的HPLC檢測，以得到各個時間點上母體UP4dC和UTP化合物的色譜圖，從而可記錄各個母體化合物的代謝速度。圖6顯示，在這些實驗條件下UP4dC的代謝半衰期是UTP的四倍。
實施例5.在大氣泡型視網膜剝離(large bullous retinal detachment)的豬模型中UP4dC增加了視網膜下液體的再吸收目的設計該研究的目的是評價在正常手術條件下UP4dC對視網膜下液體再吸收的臨床作用，所述手術是在大氣泡型視網膜剝離的豬中進行的。
方法將300μl平衡鹽鹽水加(BBS+)注射進12隻豬一隻眼睛的視網膜下空間，這樣可產生中心性玻璃體切割術和延伸1-2個象限的大視網膜剝離。將含或不含UP4dC(5.6mM)的BBS+注射進玻中璃體腔，並通過間接檢眼鏡檢查、超聲和OCT-成像觀察3-7天。
結果在用UP4dC處理的所有眼睛中，在36小時內觀察到了大視網膜剝離中視網膜下液體的完全再吸收，並在所有的對照研究中在5-7天後觀察到了這一結果。這些結果顯示在圖7中。
結論在小和大視網膜剝離的試驗動物模型中，在玻璃體內使用UP4dC增加了視網膜下液體的再吸收。因此將UP4dC作為外科輔助物以促進人類視網膜剝離或限制性黃斑易位中視網膜下液體的再吸收是有效的。
實施例6.兔模型中視網膜下和玻璃體內UP4dC的作用方法誘導視網膜下氣泡的外科手術過程通過肌肉內注射每千克體重0.3ml鹽酸氯胺酮(100mg/ml)和0.5ml鹽酸甲苯噻嗪(100mg/ml)將重約1.5kg(2-3個月大)的紐西蘭白兔麻醉。按需要加入鹽酸氯胺酮。對於需要觀察眼底的實驗，用氫溴酸東莨菪鹼0.25％、cyclogy 1％和鹽酸苯腎上腺素2.5％滴眼液擴張瞳孔。
在每隻眼睛中產生局部視網膜剝離。放進金屬絲的眼瞼窺鏡並在時鐘3和9的位置上進行節段性角膜緣球結膜環狀切開術(segmental conjunctivalperitomy)(大約需要2小時)。用19號MVR刀片在邊緣後0.5mm貫穿玻璃體將鞏膜切出兩條切口。將自留平凹隱性眼鏡放在角膜表面。將用來照明的枝形吊燈光源(Grieshaber Co.，AG Schaffhausen，Switzerland)小心通過一個鞏膜切開位置放進玻璃體腔以避免接觸隱性眼鏡。
用有斜面的36號視網膜針頭(Grieshaber Co.，AG Schaffhausen，Switzerland)造成視網膜剝離，所述針頭通過一伸縮管連接到1ml的注射器，該注射器由經過校準的機械注射泵(351型，Sage Instruments，Cambridge，Mass)驅動。用手術顯微鏡直接觀察，所述視網膜針頭被插進通過第二鞏膜切口並緩慢前進至鼻或太陽穴的髓磷脂翼瓣(myelin wing)。這些位置是選出來供注射用的，這時因為與附近薄且無血管的視網膜相比，髓磷脂翼瓣可提供額外的結構支持。將眼內壓保持在較低水平以使易碎的視網膜從RPE上緩慢地水分離。將36號針的尖端小心插到髓磷脂翼瓣下。用機械注射泵在視網膜下空間注射進約50μl磷酸緩衝鹽水，這樣可產生局部的圓形視網膜剝離。從眼睛中除去這些裝置，鞏膜切割位置將維持打開狀態以保持眼內壓恆定。儘管這些試驗性的視網膜剝離只有非常小的視網膜穿孔，但它們在功能上與非視網膜剝離類似並可被用來研究視網膜下液體的再吸收機制。
注射溶液用於所有視網膜下和視網膜內注射的經過改進的磷酸緩衝鹽水(MPBS)含有13.6mM Na2HPO4、6.2mM NaH2PO4、130.5mM NaCl和5mM KCl，其同滲容摩約為300mOsm，pH為7.2。在MPBS溶液中加入UP4dC(MW 862)以使靶藥物的濃度為12mM、1.4mM、1.0mM或0.15mM。使實驗溶液和對照溶液保持相等的同滲容摩。對於濃度為1mMUP4dC或更低的溶液，需在MPBS溶液中加入適量NaCl以補償UP4dC對同滲容摩的貢獻(1mM UP4dC的貢獻約為4-5mOsm)。對於濃度大於1mM UP4dC的溶液，可通過減少MPBS溶液中相等的NaCl的同滲容摩以代替加入的UP4dC，這樣可維持溶液的等滲性。每種劑量的所有實驗溶液和對照溶液都照此配製，最終的同滲容摩分別為±2mOsm。提供了無菌溶液並讓不知情的觀察者來評價。
研究設計將每個動物的一隻眼睛作為實驗眼，而另一隻眼睛作為對照。UP4dC是通過視網膜下或玻璃體內輸遞的，以評價其在試驗性視網膜剝離中對視網膜下液體再吸收的作用。在第一系列的實驗中，含或不含UP4dC(1mM)的MPBS被注射到視網膜下空間中。在第二系列的實驗中，產生了含有MPBS溶液的視網膜下氣泡，然後用100μl的Hamilton注射器在靠近所述視網膜下氣泡的地方將50μl含或不含UP4dC(12mM、1.4mM和0.15mM)的MPBS溶液施用到玻璃體腔。外科醫師是不知道所施用溶液的具體濃度的。
實驗前的觀察用甲基纖維素層保護角膜上皮以保持角膜透明。在選定的情況下用眼底照相機(TRC-W，TOPCON，日本)得到眼底的照片。觀察者通過間接檢眼鏡檢查確定氣泡最初的大小，並且每30分鐘測定一次氣泡大小，這樣進行3小時。以鄰近的視神經盤為參考標記，將每個視網膜下氣泡的垂直和水平直徑記錄為盤直徑(discdiameter)。(視神經盤的評價參考直徑約為1mm，如先前在顯微鏡下在10隻來自白化兔的摘除細胞核的眼睛中測定的結果類似)。每個評定時間點的氣泡的大小的計算方法是，首先將垂直和水平尺寸相乘，然後將結果除以各個氣泡最初的大小以得到無量綱的數值。然後將各個評定時間點上無量綱(歸一化)的氣泡尺寸作為時間的函數繪圖並分析。
結果視網膜下和玻璃體內UP4dC的作用在第一組實驗中，將含有1mM UP4dC的等滲的MPBS溶液直接注射進視網膜下空間。對面的眼睛僅接受了視網膜下注射的等滲的MPBS溶液。圖8顯示，含有UP4dC的視網膜下氣泡的消散明顯快於僅含MPBS溶液的氣泡。在用UP4dC處理的氣泡中，在120-150分鐘觀察到了視網膜的再附著，而對照的視網膜下氣泡在3小時的觀察期內都沒有消散。通過重複使用ANOVA測量方法，30、60和90分鐘的視網膜下再吸收有顯著差異(p＜0.05)。
在第二組實驗中，首先用MPBS溶液誘導視網膜下氣泡，然後立即在非常接近所述氣泡的地方在玻璃體內注射50μl含或不含UP4dC(12、1.4和0.15mM)的MPBS溶液。圖9A和B顯示，與賦形劑相比，兩個較高劑量的UP4dC明顯增強了視網膜下氣泡的再吸收和視網膜再附著的速度。在用UP4dC處理和單獨用賦形劑處理30、60和90分鐘的眼睛的再吸收速度之間存在著統計學上顯著的差異(p＜0.05)。用UP4dC處理的眼睛在約90分鐘即顯示了接近完全的視網膜再附著，而對照氣泡在180分鐘時還沒有完全再附著。
圖9C顯示了用0.15mM玻璃體內UP4dC處理或單獨用賦形劑處理的眼睛中視網膜下氣泡的再吸收。與單獨用賦形劑處理相比，在用0.15mM UP4dC處理的眼睛中，任何時間點上視網膜下液體的再吸收之間都沒有統計學上顯著的差異。
實施例7.大鼠模型中UP4dC對視網膜再附著的作用方法體內準備大鼠研究設計在Long-Evans雌性大鼠中通過將2-3μl經過改進的磷酸緩衝鹽水(MPBS)的林格溶液注射進視網膜下空間以造成視網膜剝離；對每隻大鼠只使用一隻眼睛。使用CCD照相機以1分鐘為間隔獲得視網膜下氣泡的圖象，這樣持續數小時。下面將更詳細地描述圖象的獲得。在各個實驗的對照部分(視網膜剝離產生後0-30分鐘)，表觀氣泡大小達到穩定，其大小在麻醉階段(數小時)保持不變。配製含或不含UP4dC(5mM)的MPBS溶液並在隱蔽和隨機的條件下將其注射進大鼠眼睛的玻璃體內(3μl)。針劑藥水瓶和它們的成分是無法區別的。玻璃體注射後，如實驗者用圖10所示的7級範圍(0±3)做出的判斷，表觀氣泡大小在以後的60分鐘內既不增加也不減小，或者說是恆定的。該等級是通過觀察在玻璃體內注射藥物或安慰劑後30-90分鐘內表觀氣泡大小的變化制定的。等級為-3說明視網膜氣泡明顯被展平。等級為+3說明氣泡的尺寸幾乎增大了兩倍。0等級說明表觀氣泡大小未隨時間變化。所有實驗完成後，告知各個針劑藥水瓶的成分並與試驗者的結論進行比較，試驗者的結論是根據對圖象的觀察得出的，所示圖象是在施用藥物或安慰劑後30-90分鐘內和以後一天內獲得的。
結論圖10顯示了玻璃體內UP4dC對12隻大鼠(每隻動物用1隻眼睛)視網膜再附著的作用。實驗是以不知情的方式進行的，以精密並客觀地評價UP4dC對液體再吸收(來自實驗製造的視網膜下的氣泡)的作用。在這些實驗中，氣泡產生後，以不知情的方式(針劑藥水瓶和它們的成分是無法區別的)將藥物或安慰劑溶液注射進大鼠眼睛的玻璃體內。對所有12隻眼睛都記分後，告知關鍵因素並與基於1和24小時觀察的總結果進行比較。結果總結在圖10中，它顯示UP4dC(空心柱)和賦形劑對照(安慰劑，實心柱)對視網膜下氣泡的記分存在顯著差異(p＜0.05)。處理1小時後，用UP4dC處理的眼睛都顯示了氣泡大小的減小，而對照眼睛卻都顯示出氣泡大小的增加。第二條，來自用UP4dC處理的眼睛的視網膜下氣泡幾乎完全消失，而來自賦形劑處理的研究的視網膜下氣泡則基本上沒有改變。6隻用UP4dC處理的眼睛中有4隻，其視網膜在24小時的時間點上似乎完全展平。
實施例8.初步處理患有黃斑病變性視網膜剝離(macula-off rhegmatogenousretinal detachment)的受試者中心視力突然喪失的患者被診斷為黃斑病變性視網膜剝離，它在上視網膜(superior retina)中只有一個尺寸小於1時鐘小時的缺口。用典型的Betadine消毒患者的結膜(盲管)，並洗滌並遮蓋臉、睫毛和眼瞼。通過結膜下注射利多卡因進行局部麻醉。
然後將來自0.25cc或0.50cc結核菌素注射器的29或30號針通過鞏膜插入眼睛的睫狀環區域，以便僅對患者緩慢施用50μL玻璃體內注射的無菌藥物組合物。所示藥物組合物含有阻止代謝的P2Y2受體促效藥，所述促效藥在鹽水中被製備成等滲(280-300mOsm)，並具有生理pH(7.0-7.5)。
從兩側修復患者的眼睛，並使患者在水平的位置上休息4小時，就是在這一位置上對眼睛進行視網膜再附著實驗的。如果視網膜在4小時的時間點沒有完全再附著，則再從兩側修復患者的眼睛直至第二條(給藥20-24小時後)，此時在檢查視網膜的再附著情況。在視網膜再附著後，用常規的方法適當處理視網膜裂孔，比如冷凍療法或雷射凝固。
現在已經用完整、清楚、簡潔且準確的術語描述了本發明以及製造和使用它的方式和方法，這就使得精通此領域的任何技術人員都可以製造和使用它。應該理解的是，上面描述了本發明優選的實施方案，並可以在不背離如權利要求所列出的本發明範圍的情況下對其作出改進。為特別指出並明確要求本發明的主題，用以下的權利要求結束本說明書。
權利要求
1.一種在需要治療的受試者中治療水腫性視網膜疾病的方法，其特徵在於，所述方法包括對所述受試者施用含有P2Y受體拮抗劑的藥物組合物，P2Y受體拮抗劑的量可有效促進與水腫性視網膜疾病有關的視網膜內和視網膜下空間中病態液體累積的去除。
2.如權利要求1所述的方法，其中，所述視網膜疾病是視網膜剝離或視網膜水腫。
3.如權利要求1所述的方法，其中，所述水腫性視網膜疾病選自糖尿病黃斑水腫、年齡相關的黃斑變性、中心性漿液性視網膜病和黃斑水腫。
4.如權利要求3所述的方法，其中，所述黃斑水腫起因於葡萄膜炎、中央和分支靜脈阻塞、視網膜色素變性、中心性漿液性視網膜病、CMV視網膜炎或脈絡膜黑色素瘤。
5.如權利要求1所述的方法，其中，施用了所述P2Y受體拮抗劑被以使玻璃體內濃度範圍為1微摩爾至500微摩爾。
6.如權利要求1所述的方法，其中，所述P2Y受體拮抗劑是具有結構式I的二核苷酸多磷酸化合物結構式I 其中X是氧、亞甲基、二滷亞甲基或亞氨；n＝0，1或2；m＝0，1或2；n+m＝0，1，2，3或4；Z＝OH或H；Z』＝OH或H；Y＝OH或H；Y』＝OH或H；和B和B』各自獨立為如結構式Ia或Ib所定義的嘌呤殘基或嘧啶殘基，分別通過9-或1-位連接；結構式Ia 其中R1是氫、氯、氨基、單取代的氨基、二取代的氨基、烷基硫代、芳基硫代或烷芳基硫代，其中硫上的取代基含有最多20個不飽和或飽和的碳原子；R2是羥基、鏈烯基、氧代、氨基、巰基、硫酮、烷基硫代、芳基硫代、烷芳基硫代、醯基硫代、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、醯氧基、單取代的烷基氨基、雜環基、單取代的環烷基氨基、單取代的芳烷基氨基、單取代的芳基氨基、二芳烷基氨基、二芳基氨基、二烷基氨基、醯基氨基或二醯基氨基，Rx是O、H或缺少；R2和Rx可任選地一起形成1，N6-乙烯腺嘌呤衍生物的五元稠合咪唑環，乙烯部分的4-或5-位被如下定義的烷基、芳基或芳烷基部分任意取代；R3是如下定義的氫、疊氮、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、烷基硫代、芳基硫代或烷芳基硫代；或是T(C1-6烷基)OCONH(C1-6烷基)W，其中T和W獨立為氨基、巰基、羥基或羧基；或是它們藥學上可接受的酯、醯胺或鹽；或者缺少；J是碳或氮，條件是當J是氮時，R3不出現；其中，所述烷基是直鏈、支鏈或環狀的；其中，所述芳基可任選地被低級烷基、芳基、氨基、單-或二烷基氨基、NO2、N3、氰基、羧基、醯胺基、亞磺醯氨基、磺酸、磷酸鹽或滷素基團取代；結構式Ib 其中R4是羥基、氧代、巰基、硫酮、氨基、氰基、C7-12芳基烷氧基、C1-6烷基硫代、C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基或二C1-4烷基氨基，其中所述烷基可任選地連接形成雜環；R5是氫、醯基、苯甲醯基、C1-6烷基、C1-5烷醯基、芳醯基或缺少；R6是羥基、氧代、巰基、硫酮、C1-4烷氧基、C7-12芳基烷氧基、C1-6烷基硫代、S-苯基、芳基硫代、芳基烷基硫代、三唑基氨基、C1-6烷基氨基、C1-5雙取代的氨基、或二-C1-4烷基氨基，其中所述二烷基可任選地連接形成雜環或連接形成取代的環，如嗎啉環、吡咯環等；或者R5和R6一起在嘧啶環的3和4位之間形成3，N4-乙烯胞嘧啶衍生物的五元稠合咪唑環，其中所述乙烯部分在4-或5-位被C1-4烷基、苯基或苯氧基任意取代；其中所述C1-4烷基、苯基或苯氧基至少一個氫被選自以下基團的部分任意取代，這些基團是滷素、羥基、C1-4烷氧基、C1-4烷基、C6-10芳基、C7-12芳基烷基、羧基、氰基、硝基、亞磺醯氨基、磺酸鹽、磷酸鹽、磺酸、氨基、C1-4烷基氨基和二-C1-4烷基氨基，其中所述二烷基可任選地連接形成雜環；R7選自氫、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基或苯基；取代的C2-8炔基、滷素、取代的C1-4烷基、CF3、C2-3鏈烯基、C2-3炔基、丙烯氨基、溴乙烯、乙基丙烯酸鹽或丙烯酸和C2-8鏈烯基；或者R6和R7一起形成5或6元通過R6的N或O或S連接的飽和或不飽和的環，該環任意含有本身具有官能度的取代基；以及R8選自氫、氨基、二-C1-4烷基氨基、C1-4烷氧基、C7-12芳基烷氧基、C1-4烷基硫代、C7-12芳基烷基硫代、羧醯胺甲基、羧甲基、甲氧基、硫代甲基、苯氧基和硫代苯基。
7.如權利要求6所述的方法，其中，所述通式I的二核苷酸多磷酸是選自P3-二(尿苷5』-)三磷酸；P1-(胞苷5』)-P3-(尿苷5』-)三磷酸；P1，P3-二(腺苷5』-)三磷酸；P1-(腺苷5』)-P3-(尿苷5』)三磷酸；P1-(腺苷5』)-P3-(胞苷5』)三磷酸；P1，P3-二(乙烯腺苷)三磷酸；P1-(尿苷5』)-P3-(胸苷5』)三磷酸；P1-(腺苷5』)-P3-(肌苷5』)三磷酸；P1，P3-二(尿苷5』-)P2，P3-亞甲基三磷酸；P1，P3-二(尿苷5』-P2，P3-二氟亞甲基三磷酸)；P1，P3-二(尿苷5』-P2，P3-亞氨三磷酸)；P1，P3-二(4-硫代尿苷5』-三磷酸)；P1，P3-二(3，N4-乙烯胞苷5』-)三磷酸；P1，P3-二(咪唑[1，2-c]嘧啶-5(6H)-酮-2-(3-硝基)-苯基-6-β-D-呋喃核糖5』-)三磷酸，四銨鹽；P1-(肌苷5』-)P3-(尿苷5』-)三磷酸；P1-(4-硫代尿苷5』-)P3-(尿苷5』-)三磷酸；P1-(胞苷β-D-呋喃阿拉伯糖5』-)P3-(尿苷5』-)三磷酸；P1-(尿苷5』-)P3-(黃苷5』-)三磷酸；P1-(2』-脫氧尿苷5』-)-P3-(尿苷5』-)三磷酸；P1-(3』-疊氮-3』-脫氧胸苷5』-)P3-(尿苷5』-)三磷酸；P1，P3-二(3』-疊氮-3』-脫氧胸苷5』-)三磷酸；P1，P3-二(3』-疊氮-3』-脫氧胸苷5』-)三磷酸；2』(3』)-苯甲醯-P1，P3-二(尿營5』-)三磷酸；P1，P3-二(2』，3』)-苯甲醯尿苷5』-)三磷酸；P1-(2』-脫氧鳥苷5』-)P3-(尿苷5』-)三磷酸；P1-(2』-脫氧腺苷5』-)P3-(尿苷5』-)三磷酸；P1-(2』-脫氧肌苷5』-)P3-(尿苷5』-)三磷酸；P1-(2』-脫氧胞苷5』-)P3-(尿苷5』-)三磷酸；P1-(4-硫代尿苷5』-)P3-(尿苷5』-)三磷酸；P1-(8-氮雜腺苷-5』-)P3-(尿苷5』-)三磷酸；P1-(6-巰基嘌呤核苷5』-)P3-(尿苷5』-)三磷酸；P1-(6-巰基嘌呤核苷5』-)P3-(2』-脫氧尿苷5』-)三磷酸；P1-(4-硫代尿苷5』-)P3-(阿拉伯糖胞苷5』-)三磷酸；P1-(腺苷5』-)P3-(4-硫代甲基尿苷5』-)三磷酸；P1-(2』-脫氧腺苷5』-)P3-(6-硫代己基嘌呤核苷5』-)三磷酸和P1-(6-二十烷氧基嘌呤核苷5』-)P3-(尿苷5』-)三磷酸的二核苷酸三磷酸。
8.如權利要求6所述的方法，其中，所述通式I的二核苷酸多磷酸是選自P1-(尿苷5』-)P2-(4-硫代尿苷5』-)二磷酸；P1，P5-二(尿苷5)-五磷酸和P1，P6-二(尿苷5)-六磷酸的化合物。
9.如權利要求6所述的方法，其中，所述通式I的二核苷酸多磷酸是選自P1，P4-二(尿苷5』-)四磷酸；P1-(胞苷5』)-P4-(尿苷5』)四磷酸；P1，P4-二(腺苷5』-)四磷酸；P1-(腺苷5』)-P4-(尿苷5』)四磷酸；P1-(腺苷5』)-P4-(胞苷5』)四磷酸；P1，P4-二(乙烯腺苷)四磷酸；P1-(尿苷5』)-P4-(胸苷5』)四磷酸；P1-(腺苷5』)-P4-(肌苷5』)四磷酸；P1，P4-二(尿苷5』-)P2，P3-亞甲基四磷酸；P1，P4-二(尿苷5』-P2，P3-二氟亞甲基四磷酸)；P1，P4-二(尿苷5』-P2，P3-亞氨四磷酸)；P1，P4-二(4-硫代尿苷5』-四磷酸)；P1，P4-二(3，N4-乙烯胞苷5』-)四磷酸；P1，P4-二(咪唑[1，2-c]嘧啶-5(6H)-酮-2-(3-硝基)-苯基-6-β-D-呋喃核糖5』-)四磷酸，四銨鹽；P1-(肌苷5』-)P4-(尿苷5』-)四磷酸；P1-(4-硫代尿苷5』-)P4-(尿苷5』-)四磷酸；P1-(胞苷β-D-呋喃阿拉伯糖5』-)P4-(尿苷5』-)四磷酸；P1-(尿苷5』-)P4-(黃苷5』-)四磷酸；P1-(2』-脫氧尿苷5』-)-P4-(尿苷5』-)四磷酸；P1-(3』-疊氮-3』-脫氧胸苷5』-)P4-(尿苷5』-)四磷酸；P1，P4-二(3』-疊氮-3』-脫氧胸苷5』-)四磷酸2P4；P1，P4-二(3』-疊氮-3』-脫氧胸苷5』-)四磷酸；2』(3』)-苯甲醯-P1，P4-二(尿苷5』-)四磷酸；P1，P4-二(2』，3』)-苯甲醯尿苷5』-)四磷酸；P1-(2』-脫氧鳥苷5』-)P4-(尿苷5』-)四磷酸；P1-(2』-脫氧腺苷5』-)P4-(尿苷5』-)四磷酸；P1-(2』-脫氧肌苷5』-)P4-(尿苷5』-)四磷酸；P1-(2』-脫氧胞苷5』-)P4-(尿苷5』-)四磷酸；P1-(4-硫代尿苷5』-)P4-(尿苷5』-)四磷酸；P1-(8-氮雜腺苷-5』-)P4-(尿苷5』-)四磷酸；P1-(6-巰基嘌呤核苷5』-)P4-(尿苷5』-)四磷酸；P1-(6-巰基嘌呤核苷5』-)P4-(2』-脫氧尿苷5』-)四磷酸；P1-(4-硫代尿苷5』-)P4-(阿拉伯糖胞苷5』-)四磷酸；P1-(腺苷5』-)P4-(4-硫代甲基尿苷5』-)四磷酸；P1-(2』-脫氧腺苷5』-)P4-(6-硫代己基嘌呤核苷5』-)四磷酸以及P1-(6-二十烷氧基嘌呤核苷5』-)P4-(尿苷5』-)四磷酸的二核苷酸四磷酸。
10.如權利要求1所述的方法，其中，所述P2Y受體拮抗劑和用於治療水腫性視網膜疾病的初步處理或佐劑一起施用。
11.如權利要求10所述的方法，其中，所述初步處理選自手術、格柵(grid)和病灶雷射光凝術以及藥物療法。
12.如權利要求11所述的方法，其中，所述手術選自鞏膜扣帶術、充氣性視網膜固定術、玻璃體切割術和黃斑易位。
13.如權利要求11所述的方法，其中，所述藥物療法選自皮質類固醇、碳酸酐酶抑制劑、消炎劑以及可促進與玻璃體和視網膜連接的膠原組織和纖維組織消化的藥物。
14.如權利要求6所述的方法，其中，所述二核苷酸多磷酸化合物被製備在選自水性、凝膠、類凝膠和固體製劑的製劑中。
15.如權利要求14所述的方法，其中，所述凝膠或類凝膠製劑選自OE透明質酸、和批准可供眼內手術應用的含有透明質酸的製劑。
16.如權利要求1所述的方法，其中，所述施用是所述藥物組合物經由攜帶賦形劑的局部施用，所述賦形劑選自液滴、洗液、凝膠、軟膏、噴霧和脂質體。
17.如權利要求16所述的方法，其中，所述局部施用包括通過一種裝置將所述藥物組合物灌輸進所述眼表面，所述裝置選自泵-導管系統、連續或選擇性釋放裝置和隱性眼鏡。
18.如權利要求1所述的方式，其中，所述施用是所述藥物組合物的全身施用。
19.如權利要求18所述的方法，其中，所述藥物組合物的全身施用是通過鼻滴、鼻噴霧或霧化的液體將液體或液體懸液施用到所述受試者的口或鼻咽通氣管，或者以口服形式、注射形式或栓劑形式給所述受試者用藥，或對所述受試者施用凝膠、乳膏、粉末、泡沫、晶體、脂質體、噴霧或液體懸液形式的內操作(intra-operative)滴注物，這樣治療有效量的所述化合物便通過全身吸收和循環與所述受試者的眼組織接觸。
20.如權利要求18所述的方法，其中，所述藥物組合物的全身施用是通過施用可注射形式的所述化合物實現的，這樣治療有效量的所述化合物便通過全身吸收和循環與所述受試者的眼組織接觸。
21.如權利要求20所述的方法，其中，所述藥物組合物是通過注射進玻璃體或推注，通過在玻璃體內持續灌輸，通過持續釋放進玻璃體腔，通過眼球後結膜下注射、釋放或灌輸，通過穿過鞏膜(transcleral)注射，通過持續穿過鞏膜釋放或灌輸，通過眼表面滴注或通過急性或慢性注射或灌輸向所述受試者施用的。
22.如權利要求21所述的方法，其中，所述對玻璃體的注射是以50-100微升的注射體積進行一次或多次玻璃體內注射。
23.如權利要求21所述的方法，其中，所述P2Y受體拮抗劑以每隻眼睛0.10-4.0毫克的量施用。
24.如權利要求1所述的方法，其中，所述藥物組合物被含在眼製劑內施用，所述眼製劑含有有效量的所述P2Y受體拮抗劑，或其藥學上可接受的鹽，以及生理上適用的賦形劑，所述賦形劑選自電介質水溶液、聚醚、聚乙烯、丙烯酸的聚合物、羊毛脂和糖胺聚糖；其中所述製劑可促進與水腫性視網膜疾病有關的視網膜下和視網膜空間中病態液體的去除。
25.具有結構式I的化合物 其中X是氧、亞甲基、二滷亞甲基或亞氨；n＝0，1或2；m＝0，1或2；n+m＝0，1，2，3或4；Z＝OH或H；Z』＝OH或H；Y＝OH或H；Y』＝OH或H；和B和B』各自獨立為如結構式Ia或Ib所定義的嘌呤殘基或嘧啶殘基，分別通過9-或1-位連接；結構式Ia 其中R1是氫、氯、氨基、單取代的氨基、二取代的氨基、烷基硫代、芳基硫代或烷芳基硫代，其中硫上的取代基含有最多20個不飽和或飽和的碳原子；R2是羥基、鏈烯基、氧代、氨基、巰基、硫酮、烷基硫代、芳基硫代、烷芳基硫代、醯基硫代、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、醯氧基、單取代的烷基氨基、雜環基、單取代的環烷基氨基、單取代的芳烷基氨基、單取代的芳基氨基、二芳烷基氨基、二芳基氨基、二烷基氨基、醯基氨基或二醯基氨基，Rx是O、H或缺少；R2和Rx可任選地一起形成1，N6-乙烯腺嘌呤衍生物的五元稠合咪唑環，乙烯部分的4-或5-位被如下定義的烷基、芳基或芳烷基部分任意取代；R3是如下定義的氫、疊氮、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、烷基硫代、芳基硫代或烷芳基硫代；或是T(C1-6烷基)OCONH(C1-6烷基)W，其中T和W獨立為氨基、巰基、羥基或羧基；或是它們藥學上可接受的酯、醯胺或鹽；或者缺少；J是碳或氮，條件是當J是氮時，R3不出現；其中，所述烷基是直鏈、支鏈或環狀的；其中，所述芳基可任選地被低級烷基、芳基、氨基、單-或二烷基氨基、NO2、N3、氰基、羧基、醯胺基、亞磺醯氨基、磺酸、磷酸鹽或滷素基團取代；結構式Ib 其中R4是羥基、氧代、巰基、硫酮、氨基、氰基、C7-12芳基烷氧基、C1-6烷基硫代、C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基或二C1-4烷基氨基，其中所述烷基可任選地連接形成雜環；R5是氫、醯基、苯甲醯基、C1-6烷基、C1-5烷醯基、芳醯基或缺少；R6是羥基、氧代、巰基、硫酮、C1-4烷氧基、C7-12芳基烷氧基、C1-6烷基硫代、S-苯基、芳基硫代、芳基烷基硫代、三唑基氨基、C1-6烷基氨基、C1-5雙取代的氨基、或二-C1-4烷基氨基，其中所述二烷基可任選地連接形成雜環或連接形成取代的環，如嗎啉環、吡咯環等；或者R5和R6一起在嘧啶環的3和4位之間形成3，N4-乙烯胞嘧啶衍生物的五元稠合咪唑環，其中所述乙烯部分在4-或5-位被C1-4烷基、苯基或苯氧基任意取代；其中所述C1-4烷基、苯基或苯氧基至少一個氫被選自以下基團的部分任意取代，這些基團是滷素、羥基、C1-4烷氧基、C1-4烷基、C6-10芳基、C7-12芳基烷基、羧基、氰基、硝基、亞磺醯氨基、磺酸鹽、磷酸鹽、磺酸、氨基、C1-4烷基氨基和二-C1-4烷基氨基，其中所述二烷基可任選地連接形成雜環；R7選自氫、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基或苯基；取代的C2-8炔基、滷素、取代的C1-4烷基、CF3、C2-3鏈烯基、C2-3炔基、丙烯氨基、溴乙烯、乙基丙烯酸鹽或丙烯酸和C2-8鏈烯基；或者R6和R7一起形成5或6元通過R6的N或O或S連接的飽和或不飽和的環，該環任意含有本身具有官能度的取代基；以及R8選自氫、氨基、二-C1-4烷基氨基、C1-4烷氧基、C7-12芳基烷氧基、C1-4烷基硫代、C7-12芳基烷基硫代、羧醯胺甲基、羧甲基、甲氧基、硫代甲基、苯氧基和硫代苯基；條件是當R8是氨基或取代的氨基時，R7是氫；以及結構式I的呋喃糖部分選自3』-脫氧呋喃核糖基、2』，3』-雙脫氧呋喃核糖基、呋喃阿拉伯糖基、3』-脫氧呋喃阿拉伯糖基、呋喃木糖基、2』-多於呋喃木糖基和呋喃來蘇糖基。
26.選自P1-(6-巰基嘌呤核苷5』-)P4-(尿苷5』-)四磷酸；P1-(6-巰基嘌呤核苷5』-)P4-(2』-脫氧尿苷5』-)四磷酸；P1-(4-硫代尿苷5』-)P4-(阿拉伯糖胞苷5』-)四磷酸；P1-(2』-脫氧腺苷5』-)P4-(6-硫代己基嘌呤核苷5』-)四磷酸；P1-(6-二十烷氧基嘌呤核苷5』-)P4-(尿苷5』-)四磷酸；P1-(阿拉伯糖腺苷5』)P4-(尿苷-5』-)四磷酸；P1-(呋喃來蘇糖基胸苷5』)P4-(尿苷-5』-)四磷酸和P1-(呋喃來蘇糖基尿嘧啶-5』-)P4-(尿苷-5』-)四磷酸的化合物。
全文摘要
本發明提供了治療水腫性視網膜疾病的方法。所述方法包括施用含有P2Y受體拮抗劑的藥物組合物以促進將視網膜下和視網膜空間中病態的外來液體除去，從而減少與視網膜剝離和視網膜疾病有關的所述液體的累積。上述P2Y受體拮抗劑可以和通常用於治療水腫性視網膜疾病的治療劑和佐劑一起施用。所述對本發明有效的藥物組合物含有對胞外水解有增強抗性的P2Y受體激動藥，如二核苷酸多磷酸化合物。
文檔編號A61P9/10GK1575181SQ02804303
公開日2005年2月2日 申請日期2002年1月29日 優先權日2001年1月30日
發明者W·M·彼德森, B·R·葉爾克薩 申請人:印斯拜爾藥品股份有限公司