穩定的酶促過酸產生系統的製作方法

2023-05-27 16:56:01

專利名稱：：穩定的酶促過酸產生系統的製作方法
技術領域：
：本發明涉及包含過水解酶(perhydrolase)、過氧化氫來源和酯底物的穩定組合物，其能高效產生水性過酸溶液，所述溶液適用於涉及多種化學和生物戰爭材料的去汙以及適用於一般的表面清潔和去汙。
背景技術：
：過酸作為去汙/消毒劑被廣泛接受。最特別地，過乙酸(也被稱為「過氧乙酸」或「PAA」)被廣泛使用，例如用於對食品工業和醫院中使用的物品進行滅菌以及用於對生物毒害進行去汙。PAA還可用作為漂白化學品，用於清潔組合物和工業工藝，例如，對紙漿漂白。PAA分解為易於在汙水處理工廠降解的化合物，因此，其使用後所引起的廢物處理問題相對較少。其針對微生物有較寬的活性譜，並且甚至在低溫下也是有效的。現有技術中已經描述了用於製備水性PAA溶液的大量非酶促、化學或電化學方法。見，例如，美國專利Nos.6，677，477,6,211，237,6,171，551,5,350，563和4，137，256，它們每份都通過引用併入本文。典型的可商業獲得的水性PAA溶液含有按重量計大約15%的PAA、按重量計大約14%的過氧化氫和按重量計28%的乙酸。這種類型的PAA溶液具有令人不喜的腐蝕性和助燃性質，因此使用它們會導致操作、貯藏、材料和運輸方面的問題。因此，PAA具有大的化學「足跡(footprint)」——這意味著該化學品的安全生產和使用需要過度的能量和資源。此外，這些商業溶液中，乙酸對PAA的比例較高，從而加劇了與清潔工藝期間不鏽鋼容器腐蝕相關的問題。乙酸的比例較低將降低用PAA清潔之後進一步處理(例如，鈍化)鋼容器的需求。可通過開發用於在水溶液中原位產生過酸的酶促系統，來削弱這些問題中的一些。酶促過酸產生系統提供了大量顯著的好處，因為基於水的生物化學溶劑的非苛性特性，使得使用者可安全使用該系統，而無須恐懼對其自身、其設備或環境的傷害。此外，因為酶系統易於運輸，易於使用，並且較之傳統去汙方法需要使用的水少得多，故而也降低了後勤負擔。此外，典型地，酶促過酸產生系統的副產物是可生物降解的。例如，PAA自發分解為乙酸或丙酸。2006年12月8日提交的PCT/US06/47022(其通過引用併入本文)公開了能以足夠用於去汙和消毒應用範圍的量高效產生水性過酸溶液的酶。在一些實施方式中，PCT/US06/47022公開了來自恥垢分枝桿菌(Mycobacteriumsmegmatis)的醯基轉移酶及變體，當酶與過碳酸鹽(percarbonate)和丙二醇二乙酸酯(PGDA)—起加入水中時，它們產生水性PAA溶液。水溶性容器(container)提供了將經預測量的組合物遞送到水溶液中的方便途徑。已在大量美國專利中描述過與清潔組合物一起使用的此類容器。例如，美國專利No.5，783，541教導了一种放置在水溶性膜中的餐具洗滌組合物，其中水溶性膜被水不溶的膠包覆。美國專利No.6，037，319教導了一種水溶性囊(sachet)，其中含有含醇(alcohol)和己二醇的清潔組合物。美國專利No.6，465，413公開了含在水溶性膜囊中的洗衣和餐具洗滌產物，其中，該製劑包含顆粒化的過碳酸化合物，其與包含硫酸鹽、羧甲基纖維素和非離子表面活性劑的包囊摻合物混合，並被封裝於其中。美國專利No.6，492，312公開了一種水溶性囊，其中包含此類餐具洗滌組合物以及能增強在餐具洗滌機中的清潔的離散顆粒。US20030199415Al教導了一種清潔系統，其中包含含有液體清潔組合物的濃縮物的水溶性囊，所述組合物具有優秀的泡沫瓦解性質和優秀的油脂切割性質。美國專利No.7，052，520公開了一種水可透過但並非水溶性的產品，其被稱為「囊」或「生物袋(bio-bag)」，用於酶促織物清潔。該「生物袋」不溶於水，但含有產生酶的微生物，含有的方式使得它們不能從其中分散進清洗用水中。儘管本領域中有了上述進展，但仍需要產生過酸的下述酶促系統，它們展示出更高的穩定性、更好的易用性，同時能減輕在商業去汙應用中使用這類化學品產生的貯藏、運輸和總體化學問題。
發明內容本發明提供了在水溶液中酶促產生過酸的穩定的組合物、系統和試劑盒，並且它們可用於寬範圍的去汙方法和應用。在一些實施方式中，本發明提供了可用於在水溶液中產生過酸的穩定的組合物，其中所述組合物包含具有過水解酶活性的酶、過氧化氫來源和酯底物。通過加入到水中來活化這三種活性成分，導致水性過酸溶液的產生。本發明驚人地發現，這些組合物在活化(即，加入到水中)之前高度穩定，其中，穩定性對應於組合物在加入到水中時以能有效對物品進行衛生處理、消毒和/或去汙的量產生過酸的能力。即，本發明的穩定的組合物能將其加入進水後產生過酸的能力(即，過酸產生活性)保持至少7天，大約14天，大約30天，大約60天或更長。在一些實施方式中，穩定的組合物包括另外的活性成分，例如另外的酶、表面活性齊U、洗滌劑(detergent)製劑和/或清潔組合物。但是，在一種優選的實施方式中，組合物包括三種活性成分醯基轉移酶、過氧化氫來源和酯底物。在一種優選的實施方式中，穩定的組合物包含來自恥垢分枝桿菌(M.smegmatis)的醯基轉移酶(MsAcT)、過碳酸鈉和丙二醇二乙酸酯(PGDA)，其中，所述的酶和過碳酸鹽是懸浮於液體PGDA中的固體。在一些實施方式中，過水解酶包含SEQIDNO:1所示的胺基酸序列或其變體或同源物。在一種實施方式中，過水解酶是SEQIDN0:1的S54V變體。在一種實施方式中，組合物包含按重量計大約0.001%至大約的MsAcT、按重量計大約35%至大約45%的過碳酸鈉和按重量計大約65%至大約55%的丙二醇二乙酸酯。加入到水中時，穩定的組合物被活化，並開始產生過乙酸(PAA)。不管這些組合物之前於環境溫度下貯藏至少7天，大約14天，大約30天，大約60天或更長時間後，水中產生的PAA的重量百分比並不顯著減少。在優選的實施方式中，得到的通過穩定的組合物產生的過酸水溶液是按重量計至少大約0.08%,0.16%,0.24%,0.32%,0.40%或更高百分比的過酸。在產生PAA的穩定組合物的實施方式中，得到的通過穩定的組合物產生的PAA水溶液為按重量計至少大約0.08%,0.16%,0.24%,0.32%,0.40%或更高百分比的PAA。在一種優選的實施方式中，PAA水溶液為按重量計至少大約0.16%PAA。此外，通過加入到水中的穩定的組合物的酶促活性生產的過酸與酸的比例為至少大約21、41、5UlO1,201或者甚至更高。在產生PAA的穩定組合物的實施方式中，加入到水中時產生的PAA與乙酸的比例為至少大約21、41、5UlO1、201或者甚至更高。本發明提供了在水溶液中產生過酸的系統和試劑盒，它們基於穩定的組合物的實施方式。因此，在一種實施方式中，本發明提供了在水溶液中產生過乙酸的系統，其中包含處於水溶性容器中的任何本發明的穩定組合物。在一些實施方式中，容器是從水溶性聚合物(優選地，聚乙烯醇聚合物)形成的。通常，水溶性容器可以是任何形式的，優選是囊、安瓿、膠囊或小球。在一種優選的實施方式中，水溶性容器是包含聚乙烯醇膜的囊。在另一實施方式中，本發明提供了用於去汙的試劑盒，其中包含包裝的下述物質的組合(a)處於密封容器中的、預先測量的量的任何本發明的穩定組合物，其中，穩定組合物的量能在加入到設定體積的水之後產生按重量計至少大約0.16%過乙酸的水溶液，和(b)使用穩定組合物的說明書。在一種實施方式中，試劑盒的密封容器足夠大，從而能裝下所述設定體積至少兩倍的水。在另一實施方式中，試劑盒還包含包裝在水溶性容器中的穩定組合物，所述水溶性容器包裝在所述密封容器中。在一種優選的實施方式中，水溶性容器是聚乙烯醇膜製成的囊。在一種備選實施方式中，試劑盒的包裝組合還包含處於第二密封容器中的設定體積的水，其中，所述水是經滅菌的。通常，本發明的穩定組合物和包括穩定組合物的系統和試劑盒可用於多種方法，來製備用於對物品進行去汙、消毒和/或衛生處理的水溶液。因此，本發明還提供了製備去汙溶液的方法，所述方法包括向水中加入可用於產生過乙酸的穩定組合物，混合至少大約30分鐘，20分鐘，15分鐘，10分鐘或者甚至更少的分鐘。在一些實施方式中，用於去汙的方法包括(a)提供穩定的組合物，其中包含具有過水解酶活性的酶，其中所述活性包含至少21的過水解與水解的比例；過氧化氫來源和酯底物；以及(b)將所述組合物加入水中，混合至少20分鐘，由此產生按重量計至少大約0.16%過乙酸的水溶液，以及小於大約9.0的pH；和(c)將包含汙染物的物品暴露給所述溶液。在一種實施方式中，穩定組合物的溶液不包括能緩衝PH的其它成分。在一種優選的實施方式中，本發明的去汙方法包括(a)提供穩定的組合物，其中包含醯基轉移酶、過氧化氫來源和丙二醇二乙酸酯；(b)將所述組合物加入到水中，混合至少20分鐘，由此產生按重量計至少大約0.16%的過乙酸的水溶液；和(c)將包含汙染物的物品暴露給所述溶液。在製備溶液的方法的一些實施方式中，提供的穩定的組合物包含按重量計大約0.001%至大約1%的MsAcT，按重量計大約35%至大約45%的過碳酸鈉以及按重量計大約65%至大約55%的丙二醇二乙酸酯。在所述方法的一種優選的實施方式中，穩定的組合物被包含在水溶性容器中，並將該容器加入到水中。在一種優選的實施方式中，水溶性容器是從水溶性聚合物(優選地，聚乙烯醇聚合物)形成的囊、安瓿、膠囊或小球(sphere)。在多種實施方式中，本發明的方法針對寬範圍的汙染物有用，所述汙染物包括選自肉毒桿菌毒素、炭疽毒素(anthracistoxin)、蓖麻毒蛋白、鯖毒素、魚肉毒素、河飩毒素、真菌毒素及其任何組合的毒素；選自細菌、病毒、真菌、寄生物、朊病毒及其任何組合的病原體。在一種實施方式中，本發明的方法針對生物薄膜有用，包括通過病原體形成的那些，所述病原體包括但不限於銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)(SRWC-10943)和單核細胞增生利斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)(ATCC19112)。在多種實施方式中，本發明的方法可用於對寬範圍的被汙染物品進行去汙和/或衛生處理，所述物品包括硬表面、織物、食品、飼料、衣服、小地毯(rug)、地毯、紡織品、醫療儀器、獸醫儀器、藥物加工設備和生物技術加工設備。在一種優選的實施方式中，使用本發明的穩定組合物產生的PAA溶液可用於對用於藥物和生物技術工藝中的不鏽鋼設備(包括大反應器)進行衛生處理。附圖簡述圖1提供的圖顯示了從過氧化氫或過碳酸鹽酶促產生PAA。圖2提供的圖顯示了從葡萄糖和丙二醇二乙酸酯產生PAA。圖3提供的圖顯示了三種不同溫度下PAA的產生(21°C、40°C和60°C)。圖4提供的圖顯示了乙醯基轉移酶生產濃縮PAA的能力。發明詳述I.綜述本發明提供了在水溶液中酶促產生過酸的穩定組合物、系統、試劑盒，它們可用於寬範圍的去汙方法和應用。本發明部分基於下述驚人發現包含過水解酶(例如醯基轉移酶)、過氧化氫來源和酯底物(例如丙二醇二乙酸酯)的組合物在使用前極其穩定。事實上，這三種組分的組合物可穩定至少7天，大約14天，大約30天，大約60天或者更長，其中穩定性對應於加入到水中時產生有效量的過酸的能力。過酸(例如過乙酸)是已被詳細分析過的去汙劑，其被接受和批准用於寬範圍的應用。在水中原位酶促產生過酸是根據本發明的穩定組合物、系統和試劑盒的一種優選實施方式來進行，這是人們需要的，因為其比在溶劑中進行反應化學產生要安全得多，並且需要的體積要少得多。因此，本發明提供了一種穩定的組合物，其可方便、簡單地使用，並且對寬範圍的去汙方法和技術高度有效。例如，本發明的穩定的組合物可在對化學和生物戰爭材料的去汙中使用，以及用於對一般表面的清潔和去汙。在一種優選的實施方式中，穩定的組合物包含醯基轉移酶，來自恥垢分枝桿菌的MsAcT，和作為過氧化氫來源的過碳酸鈉。在一種實施方式中，組合物包含按重量計大約0.001%至大約1%的MsAcT，按重量計大約35%至大約45%的過碳酸鈉以及按重量計大約65%至大約55%的丙二醇二乙酸酯。較之目前使用的利用過酸來清潔、消毒和/或去汙的方法，本發明的穩定組合物提供了多種優點。顯而易見地，所述組合物是穩定的「多合一」組合物，其中，所有成分都配製到一起(例如，在單個容器或包裝中)。由此，使用所述組合物僅需要將單個容器的內含物加入到水中。此外，本發明還提供了處於密封的水溶性容器中的穩定組合物，其允許甚至無需開啟容器的進一步的便利性。作為代替，水溶性容器中的組合物被加入到水中，由此提供了便於用於去汙的水溶液。II.定義除非另有定義，本文使用的所有技術和科學術語都具有與本發明所屬領域的普通技術人員通常的理解相同的含義。例如，Singleton和Sainsbury，DictionaryofMicrobiologyandMolecularBiology，第二版，JohnWiley和Sons，NY(1994)；以及Hale禾口Marham,TheHarperCollinsDictionaryofBiology,HarperPerennial,NY(1991)為本領域技術人員提供了本發明中使用的很多術語的通用詞典。雖然與本文所述相似或相當的任何方法和材料都可用於本發明的實踐，但本文中描述了一些優選的方法和材料。因此，將參照作為整體的申請文件來完整描述下文緊接著定義的術語。此外，在本文中使用時，單數形式的術語「一個/種」、「這個/種」(「a」、「an」和「the」)也包括複數指代，除非上下文另有清楚指明。除非另有指示，分別地，核酸都是從左到右按照5』到3』的方向書寫的；胺基酸序列都是從左到右按照氨基到羧基的方向書寫的。應當理解，本發明不局限於所描述的特定的方法、方案和試劑，這些可以根據本領域技術人員使用它們的背景而有所變化。本申請文件通篇中給出的每個最大數值限制都意欲包括每個比其較低的數值限制，就和這些較低的數值限制在本文中明確寫出來一樣。本申請文件通篇中給出的每個最小數值限制都將包括每個比其較高的數值限制，就和這些較高的數值限制在本文中明確寫出來一樣。本申請文件通篇中給出的每個數值範圍都將包括落在這些較寬的數值範圍中的每個比其較窄的數值範圍，就和這些較窄的數值範圍在本文中明確寫出來一樣。在本文中使用時，術語「酶」表示催化化學反應的任何蛋白。酶的催化功能組成其「活性」或者「酶促活性」。典型地按照其發揮的催化功能的類型對酶加以分類，所述功能例如，對肽鍵的水解。在本文中使用時，術語「底物」表示這樣的物質(例如，化學化合物)，酶在其上發揮酶的催化活性從而產生產物。「過水解酶」指能催化過水解反應的酶，所述反應導致產生足夠高的量的、適於例如清潔、漂白、消毒或滅菌應用的過酸。通常，用於本文所述的方法中的過水解酶展示出高的過水解與水解的比例。在一些實施方式中，過水解酶包含SEQIDNO:1所示的恥垢分枝桿菌過水解酶胺基酸序列或其變體或同源物，或者過水解酶由或基本上由SEQIDN0:1所示的恥垢分枝桿菌過水解酶胺基酸序列或其變體或同源物構成。在一些實施方式中，過水解酶包含醯基轉移酶活性，其能催化水性醯基轉移反應。「過酸」是式RC(=0)00H的有機酸。「過水解」及其各種詞性形式指產生過酸的酶促反應。在一些實施方式中，過酸是通過在過氧化氫(H2O2)存在下對式R1C(=0)0R2的酯底物過水解產生的，其中，R1和R2是相同或不同的有機部分。短語「過氧化氫來源」包括過氧化氫以及能自發或酶促產生作為反應產物的過氧化氫的系統的組分。短語「過水解與水解的比例」指在給定的條件下和給定的時間內，通過過水解酶從酯底物酶促產生的過酸的量與酶促產生的酸的量的比例。在本文中使用時，術語「醯基」指下述有機酸基團，其是羧酸中除去羥基(-0H)基團之後的剩餘物(例如，乙醯氯，CH3CO-Cl是從乙酸CH3CO-OH形成的醯氯)。通常各醯基基團的名稱是通過用「醯」代替酸的「酸」形成的(「_yl」代替「_ic」)。在本文中使用時，術語「醯化」指這樣的化學轉化，其中，醯基(RC0-)基團被取代進分子，通常是針對-OH基團的活性氫。在本文中使用時，術語「轉移酶」指催化官能團從一個底物轉移到另一個底物的酶。在本文中使用時，術語「酶促轉化」指通過將底物或中間產物與酶接觸，將底物或中間產物修飾為產物。在一些實施方式中，接觸通過將底物或中間產物直接暴露給合適的酶來進行。在其它一些實施方式中，接觸包括將底物或中間產物暴露給表達和/或排出所述酶的生物和/或能將想要的底物和/或中間產物分別代謝為想要的中間產物和/或最終產物的生物。在本文中使用時，「酶的有效量」表示獲得特定應用中所需活性必須要的酶的量(例如，通過醯基轉移酶生產過乙酸用於去汙)。本領域普通技術人員易於確定此類有效量，它們基於很多因素，例如所使用的特定酶變體、具體組合物、去汙的方法、待去汙的物品寸寸。在本文中使用時，提到物質(例如酶)或組合物時，術語「穩定性」表示其在某些環境條件下一定時間上保持一定水平的功能活性的能力。此外，術語「穩定性」可用於多種更為具體的上下文，其涉及感興趣的特定環境條件。例如，在本文中使用時，「熱穩定性」表示物質或組合物在增加的溫度下保持其功能(即，不降解)的能力。穩定性的實質性改變通過與不存在選用的環境條件時存在的活性相比較而言測定的功能活性半壽期的至少大約5%或更高的增加或減少(在大多數實施方式中，優選是增加)來證實。在本文中使用時，提到酶時使用的術語「化學穩定性」表示存在對其活性有不利影響的化學品時酶的穩定性。在一些實施方式中，此類化學品包括但不限於過氧化氫、過酸、陰離子洗滌劑、陽離子洗滌劑、非離子洗滌劑、螯合劑等。但是，本發明並不意欲受限於任何特定的化學穩定性水平或者化學穩定性範圍。在本文中使用時，「pH穩定性」表示物質(例如酶)或組合物在特定PH下發揮功能的能力。可通過本領域技術人員已知的標準流程和/或通過本文所述的方法來測量若干PH下的穩定性。pH穩定性的實質性改變通過與最優pH時的活性相比較而言功能活性半壽期的至少大約5%或更高的增加或減少(在大多數實施方式下，優選是增加)來證實。本發明並不意欲受限於任何PH穩定性水平或pH範圍。在本文中使用時，「氧化穩定性」指物質(例如酶)或組合物在氧化性條件(例如，存在氧化性化學品時)下發揮功能的能力。在本文中使用時，「氧化性化學品」指具有漂白能力的化學品。氧化性化學品以適於漂白的量、PH和溫度存在。該術語包括但不限於過氧化氫和過酸。在本文中使用時，術語「經純化」和「經分離」指從樣品去除汙染物。例如，通過去除汙染蛋白和溶液或製備物中並非醯基轉移酶的其它化合物來純化醯基轉移酶。在本文中使用時，術語「汙染物」指任何這樣的物質，它們通過與另外的物質、材料或物品的接觸或結合而使得其對於使用來說是不想要的、不純的和/或不適合的。在本文中使用時，術語「被汙染的物品」或「需要去汙的物品」指與汙染物接觸或結合和/或需要被去汙的任何物品或東西。該術語並不意欲受限於任何特定的東西或物品類型。例如，在一些實施方式中，物品是硬表面，而在其它實施方式中，物品是服裝物。在另外一些實施方式中，物品是紡織品。在還有一些實施方式中，物品用於醫療和/或獸醫領域。在一些優選的實施方式中，物品是手術儀器。在另一些實施方式中，物品用於運輸中(例如，道路、跑道、鐵道、火車、汽車、飛機、輪船等)。在另一些實施方式中，該術語在提到食品和/或飼料時使用，這包括但不限於肉、肉類副產品、魚、海鮮、蔬菜、水果、乳製品、穀物、烘焙產品、青貯飼料、乾草、草料(forage)等。事實上，該術語意欲包括適於使用本文提供的方法和組合物去汙的任何物品。在本文中使用時，術語「去汙」指從被汙染的物品除去基本上全部或全部汙染物。在一些優選的實施方式中，去汙包括消毒，在其它一些實施方式中，該術語包括滅菌。但是，該術語並不意欲受限於這些實施方式中，該術語也意欲包括除去沒有生命的汙染物以及微生物汙染(例如，細菌、真菌、病毒、朊病毒等)。在本文中使用時，術語「消毒」指從物品的表面除去汙染物以及在物品的表面上抑制或殺死微生物。但本發明並不意欲受限於任何特定的表面、物品或待去除的汙染物或微生物。在本文中使用時，術語「滅菌」指在表面殺死所有微生物生物體。在本文中使用時，術語「殺孢子」指殺死微生物孢子，這包括但不限於真菌和細菌的孢子。該術語包括對防止孢子萌芽有效的組合物以及讓孢子完全失活的組合物。在本文中使用時，術語「殺細菌」、「殺真菌」和「殺病毒」指分別殺死細菌、真菌和病毒的組合物。術語「殺微生物」指抑制任何微生物(包括但不限於細菌、真菌、病毒、原生動物、立克次氏體等)生長和/或複製的組合物。在本文中使用時，術語「制細菌」、「制真菌」和「抑病毒」指分別抑制細菌、真菌和病毒生長和/或複製的組合物。術語「抑微生物」指抑制任何微生物(包括但不限於細菌、真菌、病毒、原生動物、立克次氏體等)生長和/或複製的組合物。本文使用術語「清潔組合物，，是指可用於從待清潔的物品中去除不想要的化合物的組合物，所述物品如織物、盤碟、隱形眼鏡、其它固體底物、毛髮(洗髮劑)、皮膚(肥皂和乳膏)、牙齒(漱口劑、牙膏)等。該術語還表示適用於清潔、漂白、消毒和/或滅菌任何物體和/或表面的任何組合物。該術語旨在包括，但不僅限於洗滌劑組合物(例如液體和/或固體衣物洗滌劑、精細織物洗滌劑；硬表面清潔製劑，例如用於玻璃、木、陶瓷和金屬臺面和窗戶；地毯清潔劑；烤箱清潔劑；織物翻新劑(freshener)；織物柔軟劑；和紡織品及衣物去漬劑(pre-spotter)，以及盤碟洗滌劑)。該術語還包括針對所需的特定類型的清潔組合物及其產品形式(例如液體、凝膠、顆粒或噴霧組合物)而選擇的任何材料/化合物，只要該組合物與組合物中使用的洗氨基轉移酶、過氧化氫來源PGDA和任何其它酶或物質相容即可。考慮到待清潔的表面、物品或織物，和針對使用期間的清潔條件所需的組合物形式之後，容易對清潔組合物材料做出特定的選擇。事實上，除非另有說明，本文使用的術語「清潔組合物」包括顆粒或粉末形式的通用(all-purpose)或強效(heavy-duty)清洗劑，特別是清潔洗滌劑；液體、凝膠或糊狀形式的通用清洗劑，特別是所謂的強效液體(HDL)型；液體精細織物洗滌劑；手工洗碟劑或輕效(light-duty)洗碟劑，特別是高泡沫型的那些；用於家用和機構應用的機器洗碟劑，包括多種片狀、顆粒、液體和漂清助劑型；液體清潔和消毒齊U，包括抗菌洗手液(hand-wash)型、清潔棒(cleaningbar)、漱口劑、牙齒清潔劑、汽車或地毯清潔劑、浴室清潔劑；洗髮香波(hairshampoo)和洗髮水(hair-rinses)；沐浴凝膠和泡沫浴以及金屬清潔劑；以及清潔助劑，如漂白劑添加劑和「汙漬粘除(stain-stick)」或預處理型。本文使用術語「洗滌劑組合物」和「洗滌劑製劑」是指旨在用於清洗介質中的混合物方面使用，所述洗滌介質用於清潔髒汙的對象。在一些優選的實施方案中，使用該術語涉及洗滌織物和/或衣服(例如「洗衣洗滌劑」)。在可選的實施方案中，該術語是指其它洗滌劑，例如用於清潔盤碟、刀叉等的洗滌劑(例如「洗盤碟洗滌劑」)。不旨在將本發明限制於任何特定的洗滌劑製劑或組合物。事實上，除了過水解酶(例如醯基轉移酶)以外，該術語還旨在包括含有表面活性劑、轉移酶、水解酶、氧化還原酶、助洗劑、漂白劑、漂白活化劑、上藍劑和螢光染料、結塊抑制劑、掩蔽劑、酶激活劑、抗氧化劑和增溶劑的洗滌劑。在本文中使用時，當用於清潔組合物材料的上下文中時，術語「酶相容」表示在正常使用情況下，所述材料不將酶活性降低到相關酶不能像所期待的那樣有效的程度。在本文中使用時，「蛋白」指包含胺基酸並被本領域技術人員識別為蛋白的任何組合物。術語「蛋白」、「肽」和多肽在本文中可互換使用。其中肽是蛋白的一部分的情況下，本領域技術人員理解上下文中所述術語的使用。術語「野生型」和「天然」指自然界中發現的蛋白。在一些實施方式中，野生型蛋白的序列是蛋白工程的起點。在本文中使用時，術語「相關蛋白」或「同源蛋白」指功能上和/或結構上相似的蛋白(即，具有相似作用和/或結構)。該術語意欲包括從不同物種獲得的相同或相似的酶(即，在結構和功能方面)。本發明並不欲受限於來自任何特定來源的相關蛋白或進化上相關的蛋白。此外，術語相關蛋白或同源蛋白包括三級結構同源物和一級序列同源物。因此，所述術語包括具有相對於野生型序列來說是「變體」或「突變體」序列的蛋白。在本文中使用時，術語「衍生物」是通過在C-和N-末端之一或二者添加一個或多個胺基酸，在胺基酸序列的一個或多個不同位點取代一個或多個胺基酸，和/或在胺基酸序列C-和N-末端的之一或兩者或胺基酸序列的一個或多個位點缺失一個或多個胺基酸，和/或在胺基酸序列的一個或多個位點插入一個或多個胺基酸而從親本蛋白獲得的蛋白。蛋白衍生物的製備通常可通過對編碼天然蛋白的DNA序列加以修飾，將經修飾的DNA序列轉化進合適的宿主以及表達經修飾的DNA序列以產生衍生蛋白來實現。相關(和衍生)蛋白包括「變體蛋白」。變體蛋白與親本蛋白和/或彼此不同，有少量的胺基酸殘基差異。在一些實施方式中，有差異的胺基酸殘基的數量是大約1、2、3、4、5、10、20、25、30、35、40、45或50個中的任何。在一些實施方式中，變體有大約1至大約10個胺基酸不同。在一些實施方式中，相關蛋白，例如變體蛋白，包含至少大約35%，40%，45%，50%，55%，60%，65%，70%，75%，80%，85%，90%，95%，97%，98%、99%或99.5%中任何的胺基酸序列同一性。在本文中使用時，術語「類似序列」指蛋白中提供與參照蛋白相似的功能、三級結構和/或保守殘基的多肽序列。例如，在含有α螺旋或β摺疊結構的表位區域中，在類似序列中替換胺基酸能保持同樣的結構元件。在一些實施方式中，提供了這樣的類似序列，使得產生了展示出與變體所源自的親本蛋白相似或改進的功能的變體酶。在本文中使用時，「同源蛋白」指具有與參照蛋白(例如來自不同來源的過水解酶)相似功能(例如酶活性)和/或結構的蛋白(例如過水解酶)。同源物可來自進化上相關或不相關的物種。在一些實施方式中，同源物具有與參照蛋白相似的四級、三級和/或一級結構，因此潛在地允許用來自同源物的類似區段或片段替換參照蛋白中的區段或片段，這較之用來自非同源蛋白的序列替換區段或片段而言對參照蛋白的結構和/或功能的破壞降低。在本文中使用時，「野生型」、「天然」和「天然存在的」蛋白是在自然界中發現的蛋白。術語「野生型序列」指在自然界中發現的或天然存在的胺基酸或核酸序列。在一些實施方式中，野生型序列是蛋白工程(例如產生變體蛋白)的起點。III.在水溶液中酶促產生過酸本發明的穩定組合物包含至少一種酶作為組分(即，成份)。通常，用於本發明中的酶必須具有顯著的過水解酶活性，即，導致形成高含量的適用於例如清潔、漂白和消毒等應用的過酸的催化活性。W005/056782(其通過引用整體併入本文)中描述了具有過水解酶活性的酶用於產生過酸的用途。典型地，酶促過水解酶活性伴隨水解酶活性。事實上，如下文所討論的，存在過氧化氫時，很多水解酶也作為過水解酶發揮作用。在一些特別優選的實施方式中，本發明的酶具有非常高的過水解酶與水解酶活性的比例，由此產生相對於酸產物而言高比例的過酸(例如，至少大約21、5UlO1或更高的過酸對酸的比例)。這些不同的酶的這些高的過水解與水解的比例使得這些酶適用於非常寬範圍的應用。除了具有顯著的過水解酶活性之外，可用於本發明的穩定組合物中的酶在乾燥的或基本不含水的條件下展示出相對較低的活性。在一些實施方式中，當組合物中存在按重量計少於大約的水時，穩定組合物的酶組分具有少於大約1%、0.5%、0.2%或少於大約0.1%的活性(過水解酶或水解酶)。在一些優選的實施方式中，當存在按重量計大約2%或更少的水時，酶展示出少於大約0.的活性。在一些實施方式中，過水解酶是天然存在(即，細胞基因組編碼的過水解酶)。在一些實施方式中，過水解酶包含下述胺基酸序列或由或基本上由下述胺基酸序列構成，所述胺基酸序列與天然存在的過水解酶的胺基酸序列至少大約80%、85%、90%、95%、97%、98%、99%或99.5%同一。在一些實施方式中，過水解酶具有至少為1的過水解水解比例。1.醯基轉移酶_來自恥垢分枝桿菌的MsAcT在一種實施方式中，本發明提供了一種穩定的組合物，其中包含能在水溶液中將過氧化氫和酯底物酶促轉化為過酸的醯基轉移酶。在一些優選的實施方式中，本發明的穩定組合物使用產生非常高的過水解與水解的比例的醯基轉移酶。高的過水解與水解的比例意味著這些酶產生更高產率的過酸，使得它們在產生去汙溶液中更為有效。具有有利的過水解與水解比例使得其特別適用於本發明的醯基轉移酶是恥垢分枝桿菌醯基轉移酶(MsAcT)。例如，當用於酶促轉化來自過碳酸鹽的過氧化氫和PGDA時，MsAcT以較之乙酸至少51的過量產生PAA產物。因為MsAcT產生高的PAA與乙酸的比例，得到的水性過酸溶液的PH得以保持為相對低的pH，小於大約pH10，大約pH9.0，大約PH8.5，大約pH8.0或者大約pH7.5。此類低pH的PAA(或其它過酸)水溶液被認為較之含有高水平乙酸的典型商業PAA溶液來說對金屬不具有腐蝕性(或者至少顯著更少的腐蝕性)。此外，MsAcT在不存在水中基本沒有活性。MsAcT酶需要存在顯著含量的水(即，相對高的水化作用)，以展示出過水解酶或水解酶活性。典型地，當包括酶的組合物中存在按重量計少於大約的水時，MsAcT及其變體展示出少於大約1%、0.5%、0.2%或少於大約0.1%的活性(過水解酶或水解酶)。WO05/056782(其通過引用整體併入本文)中描述了野生型恥垢分枝桿菌醯基轉移酶。提交於2006年12月8日的PCT/US06/47022(也通過引用併入本文)公開了多種MsAcT變體(包括S54V-MsAcT)以及當將酶與過氧化氫來源和酯底物(例如，丙二醇二乙酸酯(PGDA))—起加入到水中時野生型和變體用於產生水性過酸溶液的用途。在一些實施方式中，過水解酶是天然存在的恥垢分枝桿菌過水解酶。在一些實施方式中，過水解酶包含SEQIDNO:1所示的胺基酸序列或其變體或同源物或者由或基本上由SEQIDNO:1所示的胺基酸序列或其變體或同源物構成。在一些實施方式中，過水解酶包含下述胺基酸序列或由或基本上由下述胺基酸序列構成，所述胺基酸序列與SEQIDNO1所示的胺基酸序列至少大約80%、85%、90%、95%、97%、98%、99%或99.5%相同。恥垢分枝桿菌過水解酶的胺基酸序列如下文所示MAKRILCFGDSLTWGWVPVEDGAPTERFAPDVRWTGVLAQQLGADFEVIEEGLSARTTNIDDPTDPRLNGASYLPSCLATHLPLDLVIIMLGTNDTKAYFRRTPLDIALGMSVLVTQVLTSAGGVGTTYPAPKVLVVSPPPLAPMPHPWFQLIFEGGEQKTTELARVYSALASFMKVPFFDAGSVISTDGVDGIHFTEANNRDLGVALAEQVRSLL(SEQIDNO1)編碼恥垢分枝桿菌過水解酶的相應多核苷酸序列是5』-ATGGCCAAGCGAATTCTGTGTTTCGGTGATTCCCTGACCTGGGGCTGGGTCCCCGTCGAAGACGGGGCACCCACCGAGCGGTTCGCCCCCGACGTGCGCTGGACCGGTGTGCTGGCCCAGCAGCTCGGAGCGGACTTCGAGGTGATCGAGGAGGGACTGAGCGCGCGCACCACCAACATCGACGACCCCACCGATCCGCGGCTCAACGGCGCGAGCTACCTGCCGTCGTGCCTCGCGACGCACCTGCCGCTCGACCTGGTGATCATCATGCTGGGCACCAACGACACCAAGGCCTACTTCCGGCGCACCCCGCTCGACATCGCGCTGGGCATGTCGGTGCTCGTCACGCAGGTGCTCACCAGCGCGGGCGGCGTCGGCACCACGTACCCGGCACCCAAGGTGCTGGTGGTCTCGCCGCCACCGCTGGCGCCCATGCCGCACCCCTGGTTCCAGTTGATCTTCGAGGGCGGCGAGCAGAAGACCACTGAGCTCGCCCGCGTGTACAGCGCGCTCGCGTCGTTCATGAAGGTGCCGTTCTTCGACGCGGGTTCGGTGATCAGCACCGACGGCGTCGACGGAATCCACTTCACCGAGGCCAACAATCGCGATCTCGGGGTGGCCCTCGCGGAACAGGTGCGGAGCCTGCTGTAA-3，(SEQIDNO2)2.變體醯基轉移酶本發明的穩定組合物並不欲受限於包括野生型恥垢分枝桿菌醯基轉移酶。在一些備選的實施方式中，可使用是MsAcT醯基轉移酶的同源物或經工程改造變體的醯基轉移酶。在另一些優選的實施方式中，對單體水解酶進行工程改造，產生比天然單體酶具有更好的醯基轉移酶活性的單體或多聚體酶。在一些特別優選的實施方式中，變體包含MsAcT的取代S54V(在本文中稱為「S54V-MsAcT」或「S54V變體」或「變體S54V」)。在其它一些實施方式中，用於穩定組合物中的醯基轉移酶是W005/056782中公開和描述的變體酶或同源物之一。在一些實施方式中，過水解酶包含處於等同於SEQIDNO1所示的恥垢分枝桿菌過水解酶胺基酸序列中位置的一個或多個胺基酸位置上的一處或多處取代。在一些實施方式中，過水解酶包含選自以下的胺基酸取代的任何一個或任何組合M1，K3，R4，15，L6，C7，D10,Sll,L12,T13,W14,W16,G15,V17,P18,V19,D21,G22,A23,P24,T25,E26,R27,F28,A29,P30,D31,V32,R33,W34,T35,G36,L38,Q40,Q41,D45,L42,G43,A44,F46,E47,V48,149，E50,E51,G52,L53,S54,A55,R56,T57,T58,N59,160，D61,D62,P63,T64,D65,P66,R67,L68,N69,G70,A71,S72,Y73,S76,C77,L78,A79,T80,L82,P83,L84,D85,L86,V87,N94,D95,T96,K97,Y99F100,R101,R102,P104,L105,D106,1107，A108,L109,G110,Mill,S112,V113,L114,V115,T116,Q117,V118,L119,T120,S121,A122,G124,V125,G126,T127,T128,Y129,P146,P148,W149,F150,1153，F154,1194，和F196.在一些實施方式中，過水解酶包含處於等同於SEQIDNO:1所示的恥垢分枝桿菌過水解酶胺基酸序列中的位置的一個或多個胺基酸位置上的下述取代中的一個或多個L12C、Q或G;T25S、G或P；L53H、Q、G或S；S54V、L、A、P、T或R;A55G或T；R67T、Q、N、G、E、L、或F；K97R；V125S、G、R、A或P；F154Y；F196G。在一些實施方式中，過水解酶包含處於等同於SEQIDNO:1所示的恥垢分枝桿菌過水解酶胺基酸序列中的胺基酸位置的胺基酸位置上的胺基酸取代的組合L12IS54V；L12MS54T；L12TS54V；L12QT25SS54V；L53HS54V；S54PV125R；S54VV125G；S54VF196G；S54VK97RV125G；或A55GR67TK97RV125G.本領域已知若干種方法適於產生本發明的醯基轉移酶的變體，所述方法包括但不限於，位點飽和誘變、掃描誘變、插入誘變、隨機誘變、定點誘變和定向進化以及若干其它重組手段。在一些實施方式中，可用於本發明的醯基轉移酶包括SGNH水解酶家族蛋白中經工程改造的變體。在一些優選的實施方式中，經工程改造的蛋白包含下述保守殘基的至少一個或組合L6、W14、W34、L38、R56、D62、L74、L78、H81、P83、M90、K97、G110、L114、L135、F180、G205。在一些備選的實施方式中，這些經工程改造的蛋白包含⑶SL-GRTT和/或ARTT基序。在另一些實施方式中，酶是多聚體，包括但不限於二聚體、八聚體和四聚體。在另一些其它優選的實施方式中，經工程改造的蛋白展示出高於大約11、21、51或者甚至101的過水解與水解的比例。如果醯基轉移酶的胺基酸殘基與恥垢分枝桿菌醯基轉移酶中特定的殘基或該殘基的特定部分同源(即，在一級和/或三級結構上具有相應的位置)或類似(即，具有相同或相似的組合、反應和/或化學相互作用的功能能力)的話，醯基轉移酶的胺基酸殘基與恥垢分枝桿菌醯基轉移酶的殘基就是等同的。在一些實施方式中，為建立與一級結構的同源性，將醯基轉移酶的胺基酸序列與恥垢分枝桿菌醯基轉移酶一級序列直接相比較，特別是與已知在序列已知的所有醯基轉移酶中都不變的一組殘基直接相比較。對保守殘基加以比對(允許必要的插入和缺失以保持比對(即，通過故意的缺失和插入來避免保守殘基的消失))後，與恥垢分枝桿菌醯基轉移酶的一級序列中特定胺基酸等同的殘基被界定出來。在一些優選的實施方式中，對保守殘基的比對保全了100%的此類殘基。但是，對超過75%或少至50%的保守殘基的比對也足以界定等同殘基。在一些優選的實施方式中，保持了催化性的絲氨酸和組氨酸殘基的保守性。用保守殘基來界定其它醯基轉移酶(例如，來自其它分枝桿菌屬(Mycobacterium)物種以及任何其它生物的醯基轉移酶)中恥垢分枝桿菌醯基轉移酶的相應等同胺基酸殘基。在一些實施方式中，修飾了恥垢分枝桿菌醯基轉移酶的下述殘基Cys7，AsplO,Serll,Leul2,Thrl3,Trpl4,Trp16,Pro24,Thr25,Leu53,Ser54,Ala55,Thr64,Asp65,Arg67,Cys77,Thr91,Asn94,Asp95,Tyr99,Vall25,Prol38,Leul40,Pro146,Prol48,Trp149,Phel50,Ilel53,Phel54,Thr159,Thrl86,Ilel92,Ilel94，和Phel96。但是，本發明並不欲受限於在這些位置經修飾的序列。事實上，本發明旨在將包括多種修飾和修飾組I=Iο在一些實施方式中，鑑定出來用於取代、插入或缺失的殘基中的一些是保守殘基，而另一些不是。本發明的醯基轉移酶突變體包括多種突變體，包括包含信號序列的核酸所編碼的那些。在此類序列編碼的醯基轉移酶突變體的一些實施方式中，由表達宿主分泌。在另一些實施方式中，核酸序列包含具有分泌信號的同源物。對野生型和突變體蛋白的表徵通過任何合適的方法來進行，這優選基於對感興趣的性質的評估。例如，在本發明的一些實施方式中，測定PH和/或溫度以及洗滌劑和/或氧化穩定性。事實上，考慮使用具有在這些性質(PH、溫度、蛋白水解穩定性、洗滌劑穩定性和/或氧化穩定性)中的一種或多種具有多種穩定性程度的酶。在另一些實施方式中，選擇具有低過酸降解活性的醯基轉移酶。3.其它酶雖然來自恥垢分枝桿菌的醯基轉移酶(MsAcT)用於穩定組合物的一種優選實施方式中，但是從任何來源獲得的、能在存在過氧化氫時將酯底物大部分轉化為過酸的任何過水解酶也可用於本發明。在一些優選的實施方式中，酶展示出高於大約21、51或甚至101的過水解與水解的比例。因此，過酸與酸產物的比例高於大約21、51或者甚至101，得到的水性過酸溶液的pH能保持為相對較低，例如，低於大約pH10，大約ρΗ9·0，大約pH8.5，大約pH8.0或者大約pH7.5。除了醯基轉移酶之外，多種水解酶也具有過水解活性，這使得它們可用作為本發明組合物中的酶。因此，可用於本發明的水解酶包括但不限於作用於酯鍵上的羧酸酯水解酶、硫代酸酯水解酶、磷酸單酯水解酶和磷酸二酯水解酶；作用於醚鍵上的硫醚水解酶；以及作用於肽鍵上的α-氨基-醯基肽水解酶、肽基_胺基酸水解酶、醯基_胺基酸水解酶、二肽水解酶和肽基_肽水解酶。此類水解酶可單獨使用或與MsAcT或另外的過水解酶組合使用。它們中羧酸酯水解酶和肽基_肽水解酶是優選的。其它合適的水解酶包括(1)屬於肽基-肽水解酶類的蛋白酶(例如，胃蛋白酶、胃蛋白酶B、凝乳酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶Α、胰凝乳蛋白酶B、彈性蛋白酶、腸激酶、組織蛋白酶C、木瓜蛋白酶、木瓜凝乳蛋白酶、無花果蛋白酶、凝血酶、纖維蛋白溶酶、血管緊張肽原酶、枯草桿菌蛋白酶、麴黴肽酶Α、膠原酶、梭菌肽酶B、激肽釋放酶、gastrisin、組織蛋白酶D、菠蘿蛋白酶、角蛋白酶、胰凝乳蛋白酶C、胃蛋白酶C、麴黴肽酶B、尿激酶、羧肽酶A和B以及氨肽酶)；(2)羧酸酯水解酶，包括，羧酸酯酶、脂肪酶、果膠酯酶和葉綠素酶；以及(3)具有高的過水解與水解比例的酶。它們中尤其有效的是脂肪酶，以及展示出高的過水解與水解比例的酯酶，以及使用本發明過水解酶的一級、二級、三級和/或四級結構特徵進行了蛋白工程改造的酯酶、角質酶和脂肪酶。此外，本發明的穩定組合物可包含另外的酶。考慮到通過使用酶的組合，所需的化學品的量將同時降低。另外的酶包括但不限於微生物細胞壁降解酶和糖蛋白降解酶、溶菌酶、半纖維素酶、過氧化物酶、蛋白酶、纖維素酶、木聚糖酶、脂肪酶、磷脂酶、酯酶、角質酶、果膠酶、角蛋白酶、還原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂氧合酶、木質酶(Iigninase)、支鏈澱粉酶、鞣酶、戊聚糖酶(pentosanase)、malanases、β-葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶、透明質酸酶、軟骨素酶、漆酶、內切葡聚糖酶、PNGase、澱粉酶等，以及其混合物。在一些實施方式中，穩定的組合物還可包括酶穩定劑。本發明並不欲受限於用於產生過氧化氫的任何特定的酶，與合適的底物產生H2O2和酸的任何酶都可用於本發明的方法中。例如，已知從乳酸和氧產生H2O2的來自乳桿菌屬(Lactobacillus)物種的乳酸氧化酶可用於本發明。事實上，本發明方法的一個優點是酸的產生將鹼性溶液的PH降低到過酸在漂白中最有效的pH範圍(即，處於或低於pKa)。能產生過氧化氫的其它酶(例如，醇氧化酶、乙二醇氧化酶、甘油氧化酶、胺基酸氧化酶等)也與本發明的醯基轉移酶或其它過水解酶組合用於酯底物，以產生過酸。從底物產生酸而不產生過氧化氫的酶也可用於本發明。此類酶的例子包括但不限於蛋白酶。因此，如本文所述，本發明提供了比目前使用的用於去汙製劑和用途以及若干其它應用的方法和組合物要高的顯著的優點。此外，氧化酶可用於本發明，它們包括選自以下的糖類氧化酶醛糖氧化酶(IUPAC分類ECl.1.3.9)、半乳糖氧化酶(IUPAC分類ECl.1.3.9)、纖維二糖氧化酶(IUPAC分類ECl.1.3.25)、吡喃糖氧化酶(IUPAC分類ECl.1.3.10)、山梨糖氧化酶(IUPAC分類ECl.1.3.11)和/或己糖氧化酶(IUPAC分類ECl.1.3.5)、葡糖氧化酶(IUPAC分類ECl.1.3.4)及其混合物。。事實上，滿足下述公式的任何合適的氧化酶都可用於本發明酶+還原的底物->氧化的底物+H2024.過氧化氫來源本發明提供了包含過氧化氫來源的穩定的組合物。在一些實施方式中，過氧化氫來源是加入到水中時產生過氧化氫的固體化合物。此類化合物包括過氧化氫與多種無機或有機化合物的加合物，其中最為廣泛使用的是過氧化水合碳酸鈉(sodiumcarbonateperhydrate)，其也被稱為過碳酸鈉。無機過氧化水合鹽(perhydratesalt)是過氧化氫來源的一種優選實施方式。無機過氧化水合鹽的例子包括過硼酸鹽、過碳酸鹽、過磷酸鹽、過硫酸鹽和過矽酸鹽。無機過氧化水合鹽通常是鹼金屬鹽。可用於本發明組合物的其它過氧化氫加合物包括過氧化氫與沸石的加合物或者脲過氧化氫。過氧化氫來源化合物可作為結晶和/或基本上純的固體包括進來，而無需額外的保護。但是對於某些過氧化水合鹽而言，此類顆粒化合物的優選實施方式利用在顆粒產品中對過氧化水合鹽提供更好的貯藏穩定性的材料包覆形式。合適的包覆包含無機鹽，例如鹼金屬矽酸鹽、碳酸鹽或硼酸鹽或其混合物，或者有機材料，例如蠟、油或脂肪皂。在一些實施方式中，本發明提供了穩定的組合物，其中過氧化氫來源是酶促過氧化氫產生系統。在一種優選的實施方式中，酶促過氧化氫產生系統包含氧化酶及其底物。合適的氧化酶包括但不限於葡糖氧化酶、山梨糖醇氧化酶、己糖氧化酶、膽鹼氧化酶、醇氧化酶、甘油氧化酶、膽固醇氧化酶、吡喃糖氧化酶、羧基醇氧化酶、L-胺基酸氧化酶、甘氨酸氧化酶、丙酮酸氧化酶、穀氨酸氧化酶、肌氨酸氧化酶、賴氨酸氧化酶、乳酸氧化酶、香草基氧化酶、乙醇酸氧化酶、半乳糖氧化酶、尿酸氧化酶、草酸鹽氧化酶和黃嘌呤氧化酶。在一些實施方式中，產生過氧化氫的化合物和酶系統可以其基本上純的形式組合進穩定的組合物。在一些備選的實施方式中，它們可與其它組分組合，例如表面活性劑、多價螯合劑(sequestrant)、助洗劑、pH調節劑、緩衝劑、穩定劑、加工添加劑，或者洗滌組合物、衛生處理組合物、消毒組合物或漂白添加劑的任何其它已知組分。在一種實施方式中，穩定的組合物包含洗滌劑。在本發明的穩定組合物中可用作為過氧化氫來源的其它化合物和酶促系統包括但不限於U.S.S.N.10/581，014(其通過引用併入本文)中描述的那些。5.酯底物和過酸本發明的穩定組合物並不欲受限於僅產生過乙酸的成分。還可製備能產生可用於清潔、消毒和去汙的寬範圍的任何過酸的穩定組合物。可從根據本發明的教導製備的多合一組合物產生過壬酸以及從長鏈脂肪酸(即C10-C18)或者更長的鏈製備的過酸。在一些優選的實施方式中，過酸選自過乙酸、過丙酸、過丁酸、過戊酸和過己酸以及過壬酸。根據本發明，加入到水中時產生特定過酸化合物的穩定的多合一組合物需要使用酯底物，其在酶促轉化時產生想要的過酸。因此，在一些實施方式中，酯底物是選自以下的酸的穩定酉旨乙酸、丙酸、丁酸(butanoicacid)、戊酸(pentanoicacid)、己酸(hexanoicacid)、壬酸、甲酸、丁酸(butyricacid)、戊酸(valericacid)、己酸(caproicacid)、辛酸、癸酸、十二烷酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸和油酸構成的列表的酸的穩定的酯。在一些另外的實施方式中，甘油三乙酸酯、甘油三丁酸酯、neodol酯和/或乙氧基化的neodol酯用作為過酸形成的酯底物。因此，示例性的乙酸酯底物包括但不限於乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、甘油三乙酸酯(1，3-二乙醯氧丙-2-基乙酸酯)和丙二醇二乙酸酯。在優選的實施方式中，酯底物是酸的穩定的醇酯，其酶促轉化產生想要的過酸。因此，在一種優選的實施方式中，酯底物是任何多元醇的酯化合物，例如，多元醇的二酯，例如PGDA。在另一優選的實施方式中，酯底物是二醇-二酯化合物。WO05/056782(其通過引用整體併入本文)中公開了針對可用於本發明的組合物中的過水解酶(例如醯基轉移酶)的寬範圍的酯底物。可用於本發明的穩定組合物的酯底物可以是固體或液體的形式。通常，酯底物應當是幹的或者基本上不含水(可活化組合物的酶組分)。在一些優選的實施方式中，酯底物包括按重量計少於大約5%，少於大約1%，少於大約0.5%，少於大約0.1%或者甚至更低的百分比的水。在一些實施方式中，酯底物在室溫下是穩定的液體，例如，丙二醇二乙酸酯(PGDA)。在一些實施方式中，酯底物是穩定的液體，其中，穩定組合物的酶和過氧化氫來源組分不溶。在一些優選的實施方式中，酯底物基本上不含水，由此使得在使用之前對組合物中酶和/或過氧化氫來源的任何活化最小化。6.輔助材料和另外的組分另外的組分可用於本發明的製劑。雖然本發明的製劑並不受限，但本文中公開了多種組分。事實上，儘管此類組分對於本發明的目的來說並非必需，下文闡述的輔料的非限制性列表適用於本發明的組合物，並可依需要包括進本發明的某些實施方式中，例如幫助或增強清潔性能，用於處理待清潔的底物，或根據情況例如用香料、著色劑、染料等等修飾清潔組合物的美觀。應當理解這類輔料是除本發明的酶、過氧化氫和/或過氧化氫來源以及包含酯部分的材料之外的。這些額外組分的精確性質及其摻入水平應取決於組合物的物理形式和要使用所述組合物的清潔操作的性質。合適的輔助材料包括但不僅限於表面活性劑、助洗劑、螯合劑、染料轉移抑制劑、沉積助劑、分散劑、腐蝕抑制劑、額外的酶和酶穩定劑、催化材料、漂白活化劑、漂白助促進劑、預形成的過酸、聚合物分散劑、粘土汙物去除/抗再沉積劑、增亮劑、抑泡劑、染料、香料、結構增彈劑、運載體、水溶助長劑、操作助劑和/或色素。除了下文的公開以外，這類其它輔料的合適實例和使用水平參見美國專利Nos.5，576，282,6,306,812和6，326，348，其通過參考併入本文。上述輔助成分構成本發明的清潔組合物的平衡。在一些實施方式中，本發明的酶系統還包含在實現去汙之後除去任何殘留的過酸和/或H2O2的酶。此類酶包括但不限於過氧化氫酶和/或水解酶。重要地，本發明提供了在寬的pH和溫度範圍上有效清潔、漂白和消毒的手段。在一些實施方式中，該產生利用的PH為4至12。在一些備選的實施方式中，利用的溫度範圍在大約5°C至大約90°C之間。本發明提供了較之目前使用的系統(見，例如，EPAppln.87-304933.9)而言的優點可在過酸氧化的最優pH下進行漂白，以及提供了在中性pH、酸性pH和低溫下進行的漂白。IV.用於產生過酸溶液的穩定組合物的製備和用途本發明的穩定組合物的一個重要優點在於它們是「多合一」製劑，其中，所有成分都在一個容器中。這些穩定的多合一組合物還具有可通過將成分(例如，酶、過氧化氫來源和酯底物)在合適的容具或容器中組合起來容易簡單製備的優點。將成分混合起來的順序並不特別重要，通常可順序加入各種成分。在一些實施方式中，組合物的所有成分都是固體，通過混合將它們簡單組合。在其它一些實施方式中，成份中的至少一種(典型地是酯底物)是液體，通過將幹的固體成分混合進液體來進行製備。優選地，使用固體形式的酶和產生過氧化氫的化合物，將它們混合到一起使得其懸浮於底物酯化合物的液體形式中，來製備穩定的組合物。在一種優選的實施方式中，本發明的穩定組合物包含醯基轉移酶、過氧化氫來源和液體酯底物PGDA。在一種優選的實施方式中，固體成分可組合於「幹製劑」中(例如，醯基轉移酶+過碳酸鹽)，然後將其加入到液體酯底物中，以產生懸浮液。見，例如，本文實施例9中公開的多合一組合物的製備。在一種優選的實施方式中，穩定組合物的固體成分就照原樣使用。例如，在容器中將過碳酸鈉的顆粒或粉末(即，直接來自商業獲得的試劑罐)與醯基轉移酶的粗製固體或顆粒組合，然後加入到液體PGDA中，產生懸浮液。在一些備選的實施方式中，可在互相組合之前，或在加入到任何液相中之前處理固體成分。此類處理的例子可包括將酶顆粒和/或產生過氧化物的化合物封裝，以抑制貯藏期間的活性或者實現加入水後隨時間更慢的釋放。通常，組合物的穩定性高度依賴於使用之前防止底物的任何酶促轉化和/或過氧化氫的產生。在全部組合物成份都是固體的實施方式中，這主要通過將混合的成分保持乾燥或者基本上無水(即，按重量計少於大約2%、1%或0.5%的水)來實現。應當避免允許酶活性和/或過氧化氫的產生發生的甚至相對少量的水，以使得多合一組合物的穩定性最大化。由此，在一些實施方式中，穩定的組合物還包含乾燥劑(dessicant)或乾燥劑(dryingagent)(例如，沸石化合物、分子篩等)。在一種實施方式中，酶以顆粒形式或含酶的粗提取物的經噴霧乾燥的包覆層(coating)被包括進穩定組合物。在其它一些實施方式中，組合物中使用的酶是基本上純的，並且是顆粒的、經噴霧乾燥的、經凍幹的或其它乾燥固體形式。在一些實施方式中，使用經配製的酶顆粒，以含有酶保護劑和溶解延緩材料(即，調節使用期間顆粒溶解的材料)。本發明可與用於製造幹的酶顆粒或過氧化氫來源化合物的幹製劑(例如美國專利No.5，324，649(其通過引用整體併入本文)中描述的EnZOguard(GenencorInternationalInc.,Rochester,N.Y.)或Savinase顆粒(NovoNordisk,Denmark)等)的任何數量的工藝組合使用。用於可用來製造本發明組合物的酶或其它化合物的其它示例性幹製劑工藝包括美國專利4，106，991,4,689，297,5,814，501,5,879，920,6,248，706、6，413，749、6，534，466或PCT公開文本WO97/12958,WO99/32613,WO01/29170中公開的那些和〃EnzymesinDetergency，"編著JanH.vanEe，等人，第15章，第310-312頁(MarcelDekker，Inc.,NewYork,N.Y.(1997))中描述的那些技術；它們每篇都通過引用併入本文。用於穩定組合物中的過氧化氫來源和酯底物的量取決於使用的特定化合物以及酶和過酸的最終濃度。通常，酶促產生過酸需要等摩爾量的過氧化氫和相應的酯底物化合物。因此，在一種優選的實施方式中，過氧化氫來源和底物中每種的重量百分比取決於特定化合物的結構式重量，並且將其選用為使得過氧化氫和底物等摩爾量。按照目的所需的量將酶加入到組合物中。通常，酶應當優選以0.00001至5重量百分比的量加入，更優選地，0.02至3重量百分比。當使用粗製的酶時，以顆粒中經純化的酶為0.001至50重量百分比的量，將顆粒加入到穩定組合物中。酶純度增加的情況下使用按重量計相對較小的量。以0.002至20重量百分比以及優選0.1至10重量百分比的量來使用顆粒。最後，酶的特定的量將在一定程度上取決於特定酶針對特定過酸應用而言通過經驗確定的活性。例如，在一種優選的實施方式中，穩定的組合物包含來自恥垢分枝桿菌的醯基轉移酶(MsAcT)、過碳酸鈉和丙二醇二乙酸酯(PGDA)，其中，酶和過碳酸鹽是懸浮於液體PGDA中的固體，並且其中，加入到水中時，穩定組合物能產生按重量計至少大約0.16%的過乙酸溶液。因為通過組合物產生的高的PAA與乙酸的比例，按重量計0.16%的PAA的水溶液具有大約8.6的pH。在一些實施方式中，對於水中組合物來說更長的混合/反應時間可產生甚至更高的PAA水平(例如，按重量計0.18%)並且具有更低的pH(大約pH8.0)。在該實施方式中，通過將過碳酸鹽和酶的幹製劑混合進PGDA來製備組合物。得到的穩定組合物是液體懸浮液，其優選包含按重量計大約0.001%至大約的MsAcT、按重量計大約35%至大約45%的過碳酸鈉和按重量計大約65%至大約55%的丙二醇二乙酸酯。該液體懸浮液的穩定性通過下述事實展示儘管組合物之前在環境溫度下貯藏至少7天，大約14天，大約30天，大約60天或更長的時間，但其在給定的水量中產生的過乙酸的重量百分比不顯著減少。本發明的穩定組合物用於製備水溶液的用途是簡單明了的簡單地將組合物加入到合適的量的水中並加以攪拌。通常，僅使用純化的(例如MilliQ水)、蒸餾的、滅菌的和去離子的水。因此，本發明還提供了製備過酸溶液的方法，所述方法包括將穩定的組合物加入到水中，並混合至少大約30分鐘、20分鐘、15分鐘、10分鐘、5分鐘或者甚至更少的分鐘。在一些實施方式中，製備方法包括(a)提供穩定的組合物，其包含具有過水解酶活性的酶(其中，所述活性包含至少21的過水解與水解的比例)；過氧化氫來源和酯底物；以及(b)將所述組合物加入到水中，並混合至少20分鐘，由此產生pH小於大約9.0的、按重量計至少大約0.16%的過乙酸的水溶液。在一種實施方式中，組合物和水不包含能緩衝pH的其它成分。在一些優選的實施方式中，製備方法包括(a)提供包含醯基轉移酶、過氧化氫來源和丙二醇二乙酸酯的穩定的組合物；以及(b)將所述組合物加入到水中，並混合至少20分鐘，由此產生按重量計至少大約0.16%的過乙酸的水溶液。本發明包括除了純水之外，穩定的組合物還可用於多種水性系統中，包括具有大百分比的水的那些(例如，超過大約85%，或者超過大約95%的水)以及具有較低百分比的水的那些(例如小於大約85%)。還包括一些備選的實施方式，其中穩定組合物加入到水性緩衝溶液和/或包含其它成分(例如表面活性劑、清潔組合物或洗滌劑製劑)的溶液中。在此類實施方式中，包括在水溶液中的其它成分可影響產生過酸的酶的催化活性。對酶濃度、攪拌時間、溫度和/或與穩定組合物的使用相關的其它參數的調節是本領域普通技術人員已知的，並且可由他們通過經驗確定。通常，通過在大約18°C至大約25°C或者大約20°C至大約22°C的典型溫度下加入到水中，來意圖使用本發明的穩定組合物。但是在一些應用中，可優選在更低或更高的溫度下使用穩定組合物。穩定組合物能在寬的溫度範圍上發揮功能(例如，大約5°C至大約900C；大約16°C至大約60°C；以及大約20°C至大約37°C)。通常，功能溫度範圍取決於酶保持足夠活性的能力。因此，在一種實施方式中，本發明涉及包含具有高的熱穩定性的野生型或經工程改造的酶的組合物。此外，本發明提供了用於在水溶液中產生過酸的系統和試劑盒，這基於穩定的組合物實施方式。因此，在一種實施方式中，本發明提供了在水溶液中產生過酸的系統，其中包含處於水溶性容器中的本發明的任何穩定組合物。在一些實施方式中，從水溶性聚合物(優選地，聚乙烯醇聚合物)形成容器。通常，水溶性容器可以是任何形式的，例如，囊、安瓿、膠囊或小球。在一種優選的實施方式中，水溶性容器是包含聚乙烯醇膜的囊。V.水溶性容器可用於遞送本發明的穩定組合物的水溶性容器可以是以下形式囊、膠囊或者其它吹塑的形狀、注入塑形的安瓿或者其它注入塑形的形狀或者旋轉塑形(rotationally-molded)的小球或從水溶性熱塑樹脂形成的膠囊。可用於形成容器的水溶性塑料包括低分子量和/或經化學修飾的聚交酯；此類聚合物已以名稱HEPLON(Chronopol，Inc.)被生產和銷售。在一種實施方式中，可用於本發明的水溶性容器包含可熔融加工的聚乙烯醇樹脂(PVA)。此類樹脂包括VINEX(TexasPolymerServices,Inc.)和M0N0S0L膜(ChrisCraftFilm)。可使用任何數量或組合的PVA樹脂。此類水溶性聚合物被描述於例如美國專利Nos.6，956，070,7,022，656和7，067，575中，每份都通過引用併入本文。典型樹脂性質是1.玻璃化轉變溫度(V)=28至38；優選是28至33。2.重均分子量(Mw)=15，000至95，000；優選是55，000-65，000。3.數均分子量(Mn)=7，500至60，000；優選是27，000至33，000。在一種實施方式中，使用的聚(乙烯)醇樹脂是M0N0S0L7030或M0N0S0L8630。吹塑的膠囊可從具有大約50，000至大約70，000的分子量以及大約28至大約33°C的玻璃轉化溫度的聚乙烯醇樹脂形成。將粒化樹脂和濃縮物進料至擠壓機。它們被進料至的擠壓機具有圓形、橢圓形、方形或矩形衝模以及合適的心軸。熔融的聚合物物質離開衝模，採用了衝模/心軸組合的形狀。向擠出物(extrude)的內部體積吹風，同時令擠出物與一對對開模子(apairofsplitmolds)接觸。所述的塑模控制包裝的最終形狀。當在塑模中時，向包裝中裝入合適體積的液體。塑模使得塑料淬火。液體被含有於經吹塑的包裝的內部體積中。從具有大約50，000至大約70，000的分子量以及大約28至大約38°C的玻璃化轉變溫度的聚(乙烯)醇樹脂形成注入塑形的安瓿或膠囊。將粒化的樹脂和濃縮物進料至往復式螺杆注入塑形機的狹道。螺杆的旋轉推動球狀物質前進，同時螺杆的直徑增加將團塊(pellete)壓縮並驅使它們與機器中經加熱的桶接觸。通過桶傳導給團塊的熱以及通過團塊與旋轉的螺杆接觸產生的磨擦熱的組合使得團塊隨著被推向前進的過程而熔融。隨著螺杆旋轉熔融的聚合物物質匯集於螺杆前部，並開始縮到機器的後面。在合適的時間，螺杆向前移動推動熔融物經過機器頂端的噴嘴進入塑模或熱流道系統(其中裝有若干塑模)。塑模控制完成的包裝的形狀。可同時在塑模中或從塑模排出之後向包裝中裝入液體。填裝完成後，包裝的填裝口被熱密封。該工藝可線內或離線進行。從具有大約50，000至大約70，000的分子量以及大約28至大約38°C的玻璃化轉變溫度的聚(乙烯)醇樹脂形成旋轉塑形的小球或膠囊。將粒化樹脂和濃縮物研至合適的篩目大小，典型地，35目。將特定重量的經研磨樹脂進料至具有想要的形狀和體積的冷塑模中。塑模被密封和加熱，同時在三個方向上旋轉。粉末熔融並包覆塑模的整個內表面。隨著持續的旋轉，塑模被冷卻，使得樹脂固化成型，其複製了塑模的大小和紋理。完成的包裝排出後，使用經加熱的針或探針向中空包裝中注入液體，填裝之後，對包裝的注射口進行熱密封。可用於本發明的水溶性容器的其它合適樹脂包括聚環氧乙烷(例如P0LY0X;UnionCarbide,Inc.)和源於纖維素的水溶性糖類(例如METH0CEL;DowChemical,Inc.)。典型地，源於纖維素的水溶性聚合物不是易於熔融加工的。在一些實施方式中，水溶性容器是囊。在一種特別優選的實施方式中，囊可從PVA膜形成。此類PVA膜囊是可商業獲得的(Solupak，Ltd.，UK)。通常，可用於本發明的PVA膜囊可以是商業獲得的(例如，從Solupak，Ltd.，UK)或可使用本領域公知的聚合物膜生產技術來生產。例如，將粒化的、經預先乾燥的、可熔融加工PVA樹脂進料至膜擠壓機。進料材料還可含有經預先乾燥的顏色濃縮物(使用PVA運載樹脂)。還可向擠壓機中加入類似製備的其它添加劑，例如抗氧化劑、UV穩定劑、防結塊添加劑等。樹脂和濃縮物在擠壓機中熔融摻合。擠壓機衝模可由用於生產吹膜的圓形衝模或用於生產平擠薄膜的衣架模(coathangerdie)構成。圓形衝模可具有旋轉的衝模嘴和/或心軸，以改變外觀和/或性質。用於本發明的水溶性囊的典型的PVA膜性質包括1.拉伸強度(125mil，破碎，50%RH)=4，700至5，700psi。2.拉伸模量(125mil,50%RH)=47，000至243，OOOpsi；優選範圍是140,000至150，OOOpsi。3.抗撕裂性(平均值)(ASTM-D_199gm/ml)=900-1500。4.衝擊強度(平均值)(ASTM-D-1709，gm)=600-1，000。5.100%伸長(平均值)(ASTM-D-882,psi)=300-600。6.透氧(oxygentransmission)(1.5mil,0%RH,latm)=0.0350至0.450cc/100sq.in./24h7.透氧(1.5mil，50%RH,latm)=1·20至1.50cc/100sq.in·/24h8.100%模數(平均值)(ASTM-D-882，psi)=1000-3000。9.溶解度(sec)(MSTM-205，75°F.)分裂=1-15；溶解=10-30。擠出的膜被切割為合適的寬度並纏繞到核上。每個核中裝有一捲軸的膜。經切割的膜的捲軸被裝入垂直成型填裝密封機(VFFS)或水平成型填裝密封機(HFFS)。成型填裝密封機(FFS)從膜製造合適的囊型(圓柱、方形、枕形、橢圓形等)，並縱向密封邊緣(機器向密封)。FFS機還進行末端密封(橫向密封)並將合適體積的非水性液體填裝到起始的橫向密封之上。然後FFS機應用另一末端密封。液體被含有在兩個末端密封之間的體積內。在一種實施方式中，使用的PVA膜是具有大約55，000至65，000的重均分子量範圍和大約27，000至33，000的數均分子量範圍的M0N0S0L。VI.試劑盒本文描述的本發明的穩定組合物特別適合包裝在多種試劑盒中。在一種實施方式中，本發明提供了用於去汙的試劑盒，其中在合適的包裝中包含預先測量的量的任何本文所述的穩定組合物，其中所述穩定組合物包含過水解酶、過氧化氫來源和酯底物，並且，其中，穩定組合物的量是加入到給定體積的水中之後產生按重量計至少大約0.16%過酸的水溶液的量。在一些實施方式中，試劑盒還包含在本文所述的去汙方法中使用穩定組合物的說明書。說明書可以以列印形式提供或者以電子媒介形式(例如軟盤、CD或DVD)提供或者以網址(可在其中獲得此類說明書)形式提供。在一種優選的實施方式中，提供了處於水溶性密封容器中的穩定組合物。在一種優選的實施方式中，試劑盒的水溶性容器是從水溶性熱塑樹脂形成的囊、膠囊、安瓿、小球的形式的，或者是其它注入塑形的形狀的。在一些實施方式中，水溶性密封容器由選自聚乙烯醇、聚環氧乙烷、源於纖維素的水溶性糖類和聚交酯(polyactide)的水溶性聚合物材料製成。在一種優選的實施方式中，試劑盒的水溶性容器是由聚乙烯醇膜製成的囊。在試劑盒的一種實施方式中，試劑盒還包含混合容器(container)(或容具(vessel))，其具有足夠大的體積，大到能夠裝納至少兩倍所述設定體積的水。在該實施方式中，混合容器是一次性的桶或燒杯，任選是經滅菌的，其任選含有穩定組合物和在容器中的磁攪拌棒。在一種實施方式中，包含穩定組合物的密封容器被包裝在試劑盒的混合容器內。因此，使用這樣的試劑盒僅需要在攪拌下將水加入到混合容器中。在另一實施方式中，試劑盒還包含處於密封容器中的設定體積的水。在一種實施方式中，密封容器中的水是經滅菌的。在一種實施方式中，試劑盒在第一密封容器中包含穩定組合物並在第二密封容器中包含水。在另一實施方式中，試劑盒包括攪拌裝置(例如，勺子或類似器具)和/或磁攪拌棒，它們被包裝在試劑盒內但在密封容器之外。在其它一些實施方式中，試劑盒還包含單獨的包裝，其中含有用於在使用後中和過酸溶液的組合物。VlI.用於衛生處理、消毒和/或去汙的方法和用途本發明的穩定組合物(以及包含這些組合物的相關系統和試劑盒)可在一系列方法中用於對物品去汙、消毒和/或衛生處理。在一些實施方式中，本發明的去汙方法包括(a)提供穩定的組合物，其包含具有過水解酶活性的酶(其中，所述活性包含至少21的過水解與水解的比例)；過氧化氫來源和酯底物；以及(b)將所述組合物加入到水中，並混合至少20分鐘，由此產生pH小於大約9.0的、按重量計至少大約0.16%的過乙酸的水溶液；以及(c)將包含汙染物的物品暴露給所述溶液。在一種優選的實施方式中，本發明的去汙方法包括(a)提供包含醯基轉移酶、過氧化氫來源和丙二醇二乙酸酯的穩定的組合物；以及(b)將所述組合物加入到水中，並混合至少20分鐘，由此產生按重量計至少大約0.16%的過乙酸的水溶液；以及(c)將包含汙染物的物品暴露給所述溶液。在用於製備溶液的方法的一些實施方式中，提供的穩定的組合物包含按重量計大約0.001%至大約1%的MsAcT、按重量計大約35%至大約45%的過碳酸鈉以及按重量計大約65%至大約55%的丙二醇二乙酸酯。取決於待去除的汙染物的特定類型，將物品暴露給過酸溶液的步驟可在寬範圍的時間規模上進行。例如，在某些衛生處理流程中，短至大約30秒、1分鐘、5分鐘或10分鐘的暴露時間可能是足夠的。但是，在其它一些應用(例如，除去生物膜)中，可能必須要將物品暴露長得多的時間段，例如大約30分鐘、1小時、6小時、12小時、24小時或者甚至更長，以獲得足夠的去汙水平。類似地，可根據汙染物的特定類型，對暴露步驟期間過酸溶液的溫度加以調節。在一種優選的實施方式中，暴露溫度是製備溶液的環境溫度，即，通常大約18-25°C。在其它一些實施方式中，可使用更高的溫度來協助去汙過程。通常，更高的溫度將加速過酸溶液的反應活性，由此加速去汙過程。因此，在一些實施方式中，可在大約30°C、37°C、45°C、50°C、60°C、75°C、90°C或者甚至更高時用過酸溶液進行暴露步驟。在所述方法的一種優選實施方式中，穩定組合物被含有在水溶性容器中，並將所述容器加入到水中。在一種優選的實施方式中，水溶性容器是從水溶性聚合物(優選地，聚乙烯醇聚合物)形成的囊、安瓿、膠囊或小球。在多種實施方式中，使用穩定組合物的去汙方法可針對寬範圍的汙染物有用，所述汙染物包括選自肉毒桿菌毒素、炭疽毒素(anthracistoxin)、蓖麻毒蛋白、鯖毒素(scombroidtoxin)、魚肉毒素、河飩毒素、真菌毒素及其任何組合的毒素；選自細菌、病毒、真菌、寄生物、朊病毒及其任何組合的病原體。例如，本文公開的方法可用於對被包括但不限於毒性化學品、芥子、VX、炭疽芽胞桿菌(B.anthracis)孢子、鼠疫耶爾森氏菌(Y.pestis)、土拉熱弗朗西絲氏菌(F.tularensis)、真菌和毒素(例如，肉毒桿菌(botulinum)、蓖麻毒蛋白、真菌毒素等)的物質汙染的物質，以及被感染性病毒體(例如黃病毒、正黏病毒、副黏病毒、沙粒病毒、棒狀病毒、蟲媒病毒、腸道病毒、布尼亞病毒等)感染的細胞進行去汙。在一些特別優選的實施方式中，至少一種病原體選自芽孢桿菌屬物禾中(Bacillusspp·)、gHHfiff胃(B·Emthracis)、胃M·禾中(Clostridiumspp.)>毒梭菌(C.botulinum)、產氣莢膜梭菌(C.perfringens)、利斯特氏菌屬物種(Listeriaspp.)、假單胞菌屬物種(Pseudomonasspp.)、葡萄球菌屬物種(Staphylococcusspp.)、鏈球菌屬物種(Str印tococcusspp.)、沙門氏菌屬物種(Salmonellaspp.)、志賀氏菌屬物種(Shigellaspp.)、大腸桿菌(E.coli)、耶爾森氏菌屬物種(Yersiniaspp.)、鼠疫耶爾森氏菌(Y.pestis)、弗朗西絲氏菌屬物種(Francisellaspp.)、土拉熱弗朗西絲氏菌(F.tularensis)、Camplyobacterssp.、弧菌屬物種(Vibriospp.)、布魯氏菌屬物種(Brucellaspp.)、隱孢子蟲屬物種(Cryptosporidiumspp·)、賈第蟲屬物種(Giardiaspp.)、環孢子蟲屬物種(Cyclosporaspp.)和毛線蟲屬物種(Trichinellaspp.)。生物膜是嵌入細胞外聚合物物質和多種有機和無機化合物的基質中的微生物集合。雖然一些生物膜可含有單物種的微生物，但是通常生物膜不僅包含不同微生物物種還包括不同類型的微生物，例如，藻類、原生動物、細菌等。已經發現，生物膜的特徵性特徵之一是其中的微生物是合作或協同的。已靠經驗發現，生物膜中生活的微生物比在生物膜外生活的微生物受到更好的保護以抵擋殺生物劑。因此，除去病原體生物膜代表了去汙和/或衛生處理設備中特別難的問題。使用本發明的穩定組合物及其使用方法產生的過酸溶液對針對生物膜去汙是有效的。在一種實施方式中，穩定組合物被製造來產生可用於除去生物膜的過酸溶液，所述生物膜包括由選自以下的一種或多種病原性細菌形成的那些芽孢桿菌屬物種(Bacillusspp.)>^H^Ififf^(B.anthracis)M^^(Clostridiumspp.)>毒梭菌(C.botulinum)、產氣莢膜梭菌(C.perfringens)、利斯特氏菌屬物種(Listeriaspp.)、假單胞菌屬物種(Pseudomonasspp.)、葡萄球菌屬物種(Staphylococcusspp.)、鏈球菌屬物種(Streptococcusspp.)、沙門氏菌屬物種(Salmonellaspp.)、志賀氏菌屬物種(Shigellassp.)、大腸桿菌(Ε.coli)、耶爾森氏菌屬物種(Yersiniaspp.)、鼠疫耶爾森氏菌(Y.pestis)、弗朗西絲氏菌屬物種(Francisellaspp.)、土拉熱弗朗西絲氏菌(F.tularensis)、Camplyobacterssp.、弧菌屬物種(Vibriospp.)、布魯氏菌屬物種(Brucellaspp.)、隱孢子蟲屬物種(Cryptosporidiumspp.)、賈第蟲屬物種(Giardiaspp.)、環孢子蟲屬物種(Cyclosporaspp·)、毛線蟲屬物種(Trichinellaspp.)及其任何組合。在一種優選的實施方式中，通過本發明的方法製造的過酸溶液可用於對選自銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌(SRWC-10943)、單核細胞增生利斯特氏菌(ATCC19112)及其任何組合的生物膜進行去汙。在一種優選的實施方式中，可通過在45°C暴露給按重量計0.16%的PAA溶液(從穩定的組合物產生的)45分鐘，來基本上除去汙染不鏽鋼設備的包含假單胞菌屬物種(Pseudomonasspp.)、葡萄球菌屬物種(Staphylococcusspp.)和/或利斯特氏菌屬物種(Listeriaspp.)的細菌培養物的病原性生物膜。在多種實施方式中，使用穩定的組合物進行去汙的方法可用於對寬範圍的被汙染的物品進行去汙，所述物品包括硬表面、織物、食品、飼料、衣服、小地毯、地毯、紡織品、醫療儀器、獸醫儀器，衛生處理和不鏽鋼物品和設備(包括用於藥物和生物技術工藝的大型反應器)。使用本發明的穩定組合物酶促產生的過酸溶液特別適用於清潔不鏽鋼物品和設備，因為，水溶液中產生的過酸與相應的酸的比例要比在商用溶液中發現的高得多。例如，使用S54V-MsAcT、過碳酸鹽和PGDA的穩定組合物產生的PAA溶液將具有大約101的PAA與乙酸的比例。商用PAA溶液通常具有多過PAA的乙酸，並且甚至可能具有相反的比例(110)。PAA與乙酸的比例增加降低了在PAA處理之後對不鏽鋼物品或設備進行進一步鈍化處理的需求，或者完全無須這種需求。因此，在一些實施方式中，使用本發明的穩定組合物產生的過酸溶液可用於對不鏽鋼物品和設備(包括用於藥物和生物技術工藝的大型反應器)進行衛生處理。在一些優選的實施方式中，過酸溶液可用於在單個步驟中對不鏽鋼物品和設備加以衛生處理，而無須用鈍化劑對不鏽鋼進行任何進一步的處理。在還一些實施方式中，本發明可用於對食品和/或飼料(包括但不限於蔬菜、水果和其它食品和/或飼料物品)進行去汙。事實上，本發明將可用於對水果、蔬菜、蛋、肉等進行表面清潔。事實上，本發明意欲用於食品和/或飼料工業，以從多種食品和/或飼料物品除去汙染物。在一些特別優選的實施方式中，如本領域技術人員已知的，食品和藥品管理局(FoodandDrugAdministration)和/或其它食品安全機構指出的用於食品和/或飼料去汙的方法可用於本發明。在還有一些優選的實施方式中，需要去汙的物品選自硬表面、織物、食品、飼料、衣月艮、小地毯、地毯、紡織品、醫療儀器和獸醫儀器。在一些特別優選的實施方式中，食品選自水果、蔬菜、魚、海產食品和肉。在還一些優選的實施方式中，硬表面選自家居表面和工業表面。在一些特別優選的實施方式中，家居表面選自廚房臺面、水池、櫃櫥、案板、桌子、擱架、食品製備貯藏區、浴室裝置、地板、天花板、牆和臥室區域。在一些備選的實施方式中，工業表面選自食品加工區、飼料加工區、桌子、擱架、地板、天花板、牆、水池、案板、飛機、汽車、火車和船。實施例提供下述實施例以展現和進一步闡述本發明的某些優選實施方式和方面，它們並不應當被解釋為對其範圍加以限制。在下文的實驗公開內容中，應用了下述縮寫V(攝氏度)、RT(室溫)、rpm(每分鐘轉數)、H20(水)、dH20(蒸餾水)、HCl(鹽酸)、aa(胺基酸)、bp(鹼基對)、kb(千鹼基對)、kD(千道爾頓)、gm(克)、yg和ug(微克)、mg(毫克)、ng(納克)、μ1和ul(微升)、ml(毫升)、mm(毫米)、nm(納米)、μm和um(微米)、M(摩爾)、mM(毫摩爾)、μM和uM(微摩爾)、U(單位)、V(伏特)、麗(分子量)、sec(秒)、min(s)(分鐘)、hr(s)(小時)、MgCl2(氯化鎂)、NaCl(氯化鈉)、OD42tl(420nm處的光密度)、PAGE(聚丙烯醯胺凝膠電泳)、EtOH(乙醇)、LB(Luria培養基)、LA(Luria瓊脂)、PBS(磷酸緩衝的鹽溶液[150mMNaCl、10mM磷酸鈉緩衝液，pH7.2])、SDS(十二烷基硫酸鈉)、Tris(三(羥甲基)氨基甲烷)、w/v(重量體積比)、ν/ν(體積體積比)、wt%(重量百分比)、PGDA(1，2-丙二醇二乙酸酯)、PAA(過乙酸)、Per(過水解酶)、per(過水解酶基因)、Ms(恥垢分枝桿菌)、MsAcT(恥垢分枝桿菌醯基轉移酶)、S54V-MsAcT或S54V變體(包含S54V取代的恥垢分枝桿菌醯基轉移酶變體)、MS(質譜)、Dial(DialBrands,Inc.，Scottsdale,AZ)、Kemira(KemiraIndustrialChemicals,Helsingborg,Sweden)、EMScience(EMScience,Gibbston,NJ)>HP(Hewlett-Packard,PaloAlto,CA)>ICN(ICNPharmaceuticals,Inc.，CostaMesa,CA)、Dial(Dial,Corp.,Scottsdale,AZ)、Pierce(PierceBiotechnology,Rockford,IL)、Amicon(Amicon，Inc.,Beverly,MA)、ATCC(美國典型培養物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection),Manassas,VA)>Amersham(AmershamBiosciences,Inc.,Piscataway,NJ)>BectonDickinson(BectonDickinsonLabware,LincolnPark,NJ)、BioRad(BioRad,Richmond,CA)>Difco(DifcoLaboratories,Detroit,MI)、GIBCOBRLGibcoBRL(LifeTechnologies,Inc.，Gaithersburg,MD)、MIDI(MIDILabs,Newark,DE)、Sigma或Aldrich(Sigma-AldrichInc.，St.Louis,MO)、Sorvall(Sorvalllnstruments,DuPontCo.的子公司，BiotechnologySystems,Wilmington,DE)>Agilent(AgilentTechnologies,PaloAlto,CA)、Minolta(KonicaMinolta,Ramsey,NJ)禾口Zeiss(CarlZeiss,Inc.，Thornwood,NY)。實施例1過乙酸(PAA)對枯草芽孢桿菌(B.subtilis)孢子的殺菌曲線在本實施例中，進行實驗來測定過乙酸(PAA)和PAA組合洗滌劑(商業可獲得的PUREX[Dial]用於本實施例中)對枯草芽孢桿菌(B.subtilis)孢子的殺菌曲線。在這些實驗中，按照本領域的已知來製備枯草芽孢桿菌(B.subtilis)孢子(見，例如，Siccardi等人，J.Bacterid.，12113-19[1975])。在96孔圓底微滴定板(Costar)中，用過乙酸(32wt%，處於乙酸中；Aldrich)—式兩份進行測定。在5OmMKPO4緩衝液(pH7.1)(「緩衝液」)中或在處於同樣緩衝液中的Purex(原製劑；Dial)的1500稀釋液(「緩衝液+Det」)中，對PAA進行系列稀釋(總體積為50μ1)。加入測定中的PAA的量為0、0.4、4或40mM。然後將體積為5μ1的孢子懸浮液(含有IO9-IOltl個孢子)加入到每個孔中，在RT下對測定進行15分鐘的孵育。然後向每個孔中加入冰冷的LB(150μ1)(見，例如，Sambrook等人，「MolecularCloning:ALaboratoryManual",第二版(ColdSpringHarbor),[1989])，混合，並將ΙΟΟμΙ轉移到新的96孔板中。製備每種溶液的系列稀釋液(總體積為100μ1/孔)。將每種稀釋液取5μ1體積點滴(spot)到LA板(上文的Sambrook等人)上，在37°C孵育17-24小時。對菌落加以計數，測定相對於各對照(僅緩衝液或緩衝液+洗滌劑，其中沒有過酸)的％孢子殺死率。結果作為來自一次實驗的雙份重複的平均值示於表1中。但是，實驗一式兩份進行兩次，具有相似的結果。基於這些結果，大約4至大約40mM的範圍內的PAA被確定為足以在15分鐘內殺死枯草芽孢桿菌(B.subtilis)孢tableseeoriginaldocumentpage27在本實施例中，描述了用於通過醯基轉移酶產生PAA的三種方法。在一種方法中，將至少一種醯基轉移酶(野生型或變體)與至少一種酯底物和過氧化氫在緩衝液或洗滌劑中(有或沒有一種或多種表面活性劑)組合。在一種備選的方法中，將至少一種醯基轉移酶(野生型或變體)、至少一種酯底物以及過碳酸鈉(或者H2O2的其它來源)在緩衝液或洗滌劑中(有或沒有一種或多種其它表面活性劑)組合。在還一種方法中，將至少一種醯基轉移酶(野生型或變體)與葡糖氧化酶和葡萄糖(濃度足以產生能殺死孢子的量的PAA)在緩衝液或洗滌劑中組合。在一些製劑中，還包括一種或多種其它表面活性劑。產生H2O2的其它酶也可用於該系統，包括氧化酶、氧化還原酶(例如，甘油氧化酶或己糖氧化酶)。在一些優選的實施方式中，使用獨立於輔因子的醇氧化酶。測定PAA濃度在這些實驗中，用本領域已知的方法來測定PAA的濃度(見，例如，Pinkernell等人，Analyst，122:567_571[1997])。在該ABTS測定中，將100μ1待測溶液加入到lmll25mM檸檬酸鉀緩衝液(pH5.0)(含有1.OmM3-乙基苯並噻唑啉_6_磺酸(ABTS)和50uMΚΙ)中，令其在RT下孵育3分鐘。在HP8452Α二極體陣列分光光度計中測量420nm處的吸光度，並將其與使用權威標準(authenticstandard)製備的標準曲線相比較。通過加入酶來起始酶促反應以形成PAA，反應在室溫下進行。在指定的時間從反應中取等分試樣，針對PAA濃度對其加以分析。用於這些實驗的過碳酸鈉是從Kemira獲得的，過氧化氫是從EMScience獲得的。將自H2O2或過碳酸鈉酶促產生的PAA相比較在320mMKPO4(pH7.1)中製備39mM過碳酸鈉溶液(過氧化水合碳酸鈉(sodiumcarbonateperoxyhydrate)，技術級85%，產生IOOmM有效的H2O2；Kemira)。固體過碳酸鹽溶解後，得到的溶液具有7.6的pH。為對相同pH條件下由製備的H2O2(32wt%，Aldrich)或由從過碳酸鹽形成的H2O2進行的PAA酶促生產加以比較，製備兩項反應。一項反應含有處於320mMKPO4(pH7.6)中的IOOmMH2O2UOOmM1，2_丙二醇二乙酸酯(Aldrich)和2ppm變體S54V。從標籤聲稱的值來假定H2O2的絕對濃度，未通過分析加以驗證。第二項反應含有處於320mMKP04(pH7.1)中的39mM過碳酸鈉、IOOmM1，2-丙二醇二乙酸酯和2ppm變體S54V。通過加入酶來起始反應。在指出的時間取樣，按照實施例1所述測定PAA濃度。圖1中顯示了PGDA作為底物的結果。如圖1所示，兩種情況下反應進程和PAA的終濃度都相似。為研究不同丙醇乙酸酯底物的使用，使用與上文針對PGDA所述相同的一般性方法來產生PAA，但是其中使用乙酸丙酯或甘油三乙酸酯作為酯底物。觀察到，這另外的兩種酯底物也在系統中與S54V-MsAcT反應，從而製造PAA。針對三種酯底物而言，觀察到轉化成PAA的相對轉化速率為PGDA>甘油三乙酸酯>乙酸丙酯。實施例3PAA的酶促產生殺死枯草芽孢桿菌(B.subtilis)孢子在本實施例中，描述了用枯草芽孢桿菌(B.subtilis)孢子評估測試的酶促產生的PAA的殺死能力所進行的實驗。基於在實施例1和2中描述的實驗中獲得的結果，4至40mM範圍的PAA被確定為足以表明殺死枯草芽孢桿菌1-168的孢子。在這些實驗中，在緩衝液以及洗滌劑中對孢子殺死進行了評估。在緩衝液中的孢子殺死在本實驗中，用過碳酸鈉作為H2O2的來源。最終的溶液在800μ1的總體積中含有IOOmM1，2_丙二醇二乙酸酯、2ppmS54V變體、39mM過碳酸鈉(技術級85%；產生IOOmM有效的H2O2)(處於320mMKP04pH7.1中)。對該混合物(產生40mMPAA)進行系列稀釋，產生了另外的混合物，其產生4.9,9.9和20.5mMPAA。用僅與400mMKPO4pH7.1的混合物來測定沒有PAA存在時的總孢子計數。令混合物在室溫下孵育3分鐘。然後將每種混合物取180μ1的體積，分進圓底96孔板(Costar)的雙份重複孔中，孔中含有20μ1實施例1中使用的孢子懸浮液，從而在每個孔中產生了200μ1的總體積。輕柔抽吸液體4-5次，以確保組分混合。將混合物再在室溫下與孢子孵育15或30分鐘。在15和30分鐘的時間點，從每個孔中取20μ1，加入到新的96孔板的孔中，在LB中系列稀釋至10-7(總體積100μ1)。從每種孢子混合物的每種稀釋液取5μ1的體積，點滴到LA板上，令其乾燥，然後在37°C孵育過夜。還在15和30分鐘的時間點，從每個孔取合適的體積，將其在dH20中充分稀釋，以產生按照實施例1所述採用標準以規模方式(onscale)用ABTS測定可測量到的PAA的量。這些測定的結果在表2中顯示。孢子殺死的結果作為雙份重複的平均值表示。tableseeoriginaldocumentpage29在洗滌劑中的孢子殺死實驗完全依所述進行，除了用Purex在320mMKPO4pH7.1中的1500稀釋液代替緩衝液。結果示於表3(雙份重複的平均值)。對照包括處於400mMKPO4pH7.1緩衝液中的多種反應組分2ppmS54V變體、2ppmS54V變體與39mM過碳酸鹽、IOOmM1，2_丙二醇二乙酸酯、IOOmM1，2_丙二醇二乙酸酯和39mM過碳酸鈉、39mM過碳酸鈉。所有這些處理在30分鐘的孵育之後都給出了等價的孢子/ml水平，只除了僅過碳酸鈉的情況(1XIO9孢子/ml，其它對照中是5XIO9孢子/ml)。在過碳酸鈉與其它組分組合的情況下沒有看到這種減少，並且這種減少並沒有採用相當水平的所有三種組分的混合物時看到的殺死效果那麼顯著(100%殺死)。表3:MsAcT系統用於產生PAA以在洗滌劑中殺死枯草芽抱桿菌(B.subtilisJ孢子的用途在本實施例中，描述了進行來評估PAA對裡氏木黴(T.reesei)孢子的殺死能力的實驗。通過在馬鈴薯右旋葡萄糖(dextrose)(PDA)培養基上在30°C對菌株進行大約4天的培養，來製備裡氏木黴孢子。當平板有75%被真菌生長覆蓋時，在室溫下再孵育若干天，直到匯合生長。使用棉籤從板上刮下孢子，將其重新懸浮於lmll0%的甘油中，在-80°C冷凍，直到使用。在孢子殺死測定中使用之前，對孢子懸浮液解凍，通過離心使孢子沉澱，用ImldH20洗兩次，再重懸浮於ImldH20中。按照實施例3所述進行孢子殺死實驗，只是向96孔板的孔中加入20μ1真菌孢子製備物，代替芽孢桿菌屬孢子。此外，製備這樣的混合物，使得產生PAA的量為40、13.3,4.4和1.5mM。將15和30分鐘孵育的稀釋液塗布到PDA培養基上。在15和30分鐘的時間點，按照實施例1所述，測定產生的PAA的實際的量。結果示於表4中。這些結果表明，MsAcT系統產生的PAA以比枯草芽孢桿菌(B.subtilis)孢子更低水平的PAA殺死真菌孢子。表4:MsAcT系統用於產生PAA以在洗滌劑中殺死裡氏木黴(Trichodermareesei)抱子的用途tableseeoriginaldocumentpage31實施例5從葡萄糖和PGDA產生PAA在該實施例中，描述了評估從葡萄糖和丙二醇二乙酸酯產生的過乙酸的量的實驗。製備15ml溶液，其中含有50mMKPO4pH7.1以及60mM葡萄糖和20mM1，2-丙二醇二乙酸酯(Aldrich)。向溶液中持續噴入空氣，並在室溫下攪拌。通過加入100個單位的葡糖氧化酶(OxygenHP,GenencorInternational)來起始產生H2O2的反應，反應進行1小時。取樣，並針對PAA加以測試，之後加入2ppmS54V變體，以起始從形成的H2O2對PAA的生產。結果示於圖2中。在圖2示出的時間取更多樣品，按照上文所述測定PAA的濃度。在添加酶之前沒有檢測到PAA，而從20mM1，2-丙二醇二乙酸酯和由葡萄糖/葡糖氧化酶反應產生的H2O2產生了大約9.5mM的PAA。實施例6通過MsAcT在不同溫度下產生PAA在本實施例中，描述了進行來評估MsAcT在不同溫度下的過乙酸產生的實驗。此類產生提供了解決與PAA在多種溫度下的貯藏不穩定性相關的問題的手段。在這些實驗中，在大約20°C至大約60°C的溫度範圍上，用MsAcT產生PAA。在一些實驗中，使用的溫度例如21°C、40°C和600Cο在這些實驗中，準備三項反應，它們由320mMKPO4pH7.UlOOmM1，2-丙二醇二乙酸酯(Aldrich)和IOOmM過碳酸鈉構成。在21°C、40°C和60°C對反應加以平衡，然後通過加入S54V變體至2ppm的終濃度來起始反應。結果示於圖3中。在圖中指出的時間取樣，按照上文所述測定PAA濃度。這些結果表明，酶系統在至少高至60°C時是有功能的。實施例7通過MsAcT產生濃縮的過乙酸在本實施例中，進行實驗來測定MsAcT產生過乙酸的濃縮溶液的能力。進行這些實驗，以展示製備適用於加入或稀釋進不同溶液以備使用的濃縮過乙酸溶液的潛在好處。在該實驗中，反應含有50mMKP04、2MH2O2(EMScience),2M1，2_丙二醇二乙酸酯(Aldrich)和S54V變體(終濃度為160ppm)。偶爾振蕩反應體系使得反應物混合，因為它們在該濃度下不易混合。在室溫下進行混合。結果示於圖4中。在指出的時間稀釋樣品，按照上文所述測定過乙酸濃度。實施例8具有高的殺孢子活性的酶促PAA產生系統本實施例顯示了使用三種組分製劑(來自恥垢分枝桿菌的醯基轉移酶的S54V突變體(S54V-MsAcT)、l，2-丙二醇二乙酸酯(PGDA)(作為酯底物)和過碳酸鈉(作為過氧化氫來源))產生的按重量計0.16%的過乙酸(PAA)溶液在多種EPA認可的去汙測定中的有效性。材料和方法製備250mLPAA測試溶液在15mL錐形管中製造幹製劑，其中每份含有大約1.20g至大約1.30g的過碳酸鈉以及大約26.Omg至大約31.9mg的S54V_MsAcT酶顆粒。對於每個幹製劑的管而言，製備另一15mL錐形管，其中含有1.8mL的酯底物，丙二醇二乙酸酯(PGDA)。在單個拉鏈鎖袋中裝入一個幹製劑的管和一個PGDA管。一個拉鏈鎖袋的內含物(即，一個幹製劑的管和一個PGDA管)構成了加入到250mL水中時產生0.16%PAA的一個單位。通過將來自一個單位的幹製劑加入到250mL室溫下經滅菌的去離子水中直到完全溶解，來製備PAA測試溶液。用250mL測試溶液中的一些來將任何殘餘的幹製劑從管中洗到溶液中。然後將管中的PGDA液體加入至攪拌250mL的溶液，並再次用一些溶液將任何殘餘的PGDA從管中洗進溶液。然後對PAA測試溶液進行20分鐘的攪拌。進行視覺檢查判斷，PAA測試溶液是均勻的。其在製備的2小時內使用。製備2000mLPAA溶液在15mL錐形管中製造幹製劑，每份含有大約9.6g至大約9.8g的過碳酸鈉以及大約216mg至大約226mg的S54V-MsAcT酶的顆粒。對於每個幹製劑的樣品而言，製備另一15mL錐形管，其中含有1.8mL的酯底物，丙二醇二乙酸酯(PGDA)。在單個拉鏈鎖袋中裝入一個幹製劑的管和一個PGDA管。一個拉鏈鎖袋的內含物(即，一個幹製劑的管和一個PGDA管)構成了加入到2000mL水中時產生0.16%PAA的一個單位。按照與上文針對250mL測試溶液所述相同的方式來製備2000mLPAA測試溶液，但是使用更大量的幹製劑、PGDA液體和水。測定1殺菌和洗滌劑衛生處理作用按照上文250mL的方案來製備PAA測試溶液。將金黃色葡萄球菌(ATCC6538)或大腸桿菌(Escherichiacoli)(ATCC11229)細胞的懸浮液暴露給PAA測試溶液30秒或60秒。暴露之後，轉移等分試樣到中和傳代培養基(Letheen肉湯+0.硫代硫酸鈉+0.01%過氧化氫酶)中，使用傾倒塗板技術和胰蛋白腖葡萄糖提取物瓊脂(TGEA)來測定存活物。還進行了適當的數量對照，純度、無菌(sterility)、存活和中和對照。測定2無生命的(inanimate)非食品接觸表面衛生處理效果按照上文250mL的方案來製備PAA測試溶液。細菌細胞的膜在載玻片載體的表面上乾燥。使用兩種不同的細菌金黃色葡萄球菌(ATCC6538)和產氣腸桿菌(Enterobacteraerogenes)(ATCC13048)，來製備四組不同的八塊載玻片。被汙染的載玻片中的五塊在18.0°C被暴露給PAA測試溶液兩分鐘或5分鐘。暴露之後，向含有載玻片載體和PAA測試溶液的每個罐中加入中和傳代培養基(Letheen肉湯+0.硫代硫酸鈉+0.01%過氧化氫酶)，針對存活物對溶液加以測定。來自每個組的三塊對照載玻片沒有暴露給水溶液，但用中和傳代培養基進行了相似的處理。測定3:A0AC殺菌效果-使用-稀釋方法按照上文2000mL的方案來製備PAA測試溶液。細菌細胞的膜在一組30件不鏽鋼載體物品的表面上乾燥。使用三種不同的細菌銅綠假單胞菌(ATCC15442)、金黃色葡萄球菌(ATCC6538)和豬霍亂沙門氏菌(Salmonellacholeraesuis)(ATCC10708)，來製備三個不同的組。每個被汙染的物品在室溫下(20.0°C)暴露給PAA測試溶液5分鐘或10分鐘。暴露之後，將物品轉移到含有中和傳代培養基(Letheen肉湯+0.硫代硫酸鈉+0.01%過氧化氫酶)的容器中，針對存活的細菌加以測定。還進行了適當的純度、存活、載體物品無菌性、中和傳代培養基無菌性、存活、中和驗證和載體群對照。測定4:A0AC殺孢子效果按照上文250mL的方案來製備PAA測試溶液。枯草芽胞桿菌(Bacillussubtilis)(ATCC19659)孢子懸浮液在30根Dacron縫線的組上乾燥。產芽胞梭狀芽孢桿菌(Clostridiumsporogenes)(ATCC3584)的懸浮液在一組30件瓷penicylinders上乾燥。每個被汙染的物品在室溫下(20.0°C)暴露給PAA測試溶液2小時或5.5小時。暴露之後，將物品轉移到含有中和傳代培養基(巰基乙酸培養基+0.硫代硫酸鈉+0.01%過氧化氫酶)的容器中，針對存活的細菌加以測定。還進行了適當的HC1、存活、純度、無菌、被汙染物品定量和中和對照。結果測定1:PAA測試溶液展示在20.0°C暴露僅30秒後，金黃色葡萄球菌(ATCC6538)或大腸桿菌(ATCC11229)就有>99.999%的降低。測定2:PAA測試溶液展示在18.0°C暴露2分鐘(或5分鐘)後，載玻片上的金黃色葡萄球菌(ATCC6538)或產氣腸桿菌(Enterobacteraerogenes)(ATCC13048)降低>99.9%。測定3被汙染的不鏽鋼載體物品暴露給PAA測試溶液5分鐘導致30個傳代培養管中的任何管中銅綠假單胞菌(ATCC15442)、金黃色葡萄球菌(ATCC6538)和豬霍亂沙門氏菌(ATCC10708)都沒有顯現的生長。暴露給PAA溶液10分鐘的30件物品之一展示出銅綠假單胞菌(ATCC15442)的生長，但是十分鐘暴露的任何傳代培養管中的任何其它細菌都沒有顯現的生長。測定4當用在20.0°C暴露給PAA溶液2小時或5.5小時的被汙染的Dacron縫線進行測試時，在30份初級傳代培養物的任何中沒有顯現的枯草芽孢桿菌(ATCC19659)的生長，並且在30份次級傳代培養物中的任何中都沒有生長。類似地，當用在20.0°C暴露給PAA溶液2小時或5.5小時的被汙染的瓷penicylinder進行測試時，在30份初級傳代培養物的任何中沒有顯現的產芽胞梭狀芽孢桿菌(Clostridiumsporogenes)(ATCC3584)的生長，並且在30份次級傳代培養物中的任何中沒有生長。結論使用S54V_MsAcT酶、丙二醇二乙酸酯(作為酯底物)和過碳酸鈉(作為過氧化物來源)的三種組分製劑產生的0.16%PAA溶液在測試的所有四種經EPA認可的消毒/去汙測定中都高度有效。消毒劑的殺菌和洗滌衛生處理作用測試結果顯示了高於99.999%的針對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的有效性。推薦給無生命的非食品接觸表面的衛生消毒劑效果的標準測試方法的測試結果顯示了超過99.9%的針對金黃色葡萄球菌和產氣腸桿菌(Enterobacteraerogenes)的有效性。A0AC使用-稀釋方法測試結果顯示了針對金黃色葡萄球菌、豬霍亂沙門氏菌(Salmonellacholeraesius)的100%的有效性以及針對銅綠假單胞菌的96.7%的有效性。消毒劑的殺孢子活性(A0AC)測定展示了PAA溶液針對枯草芽孢桿菌和產芽胞梭狀芽孢桿菌(Clostridiumsporogenes)的孢子的100%的效果。實施例9具有高殺孢子活性的穩定的「多合一」PAA產生組合物本實施例描述了處於液體酯底物，丙二醇二乙酸酯中的S54V_MsAcT酶和過碳酸鈉的「多合一」組合物的製備和隨時間的穩定性。該實施例還描述了該組合物用於產生按重量計0.16%的PAA溶液的用途。材料和方法多合一組合物向按照實施例8所述製備的幹製劑的管(含有1.22g過碳酸鈉和28.OmgS54V-MsAcT顆粒)中加入1.8mL的PGDA液體。對多合一組合物的活化和測定在攪拌下將按照上文所述製備的多合一組合物加入到250mL去離子水中。根據上文實施例8所述的250mL和2000mL的方案來製備兩種另外的PAA溶液。在t=20分鐘時，測量這三種溶液中每種的pH，發現其為10.3。在t=20分鐘時，從三種溶液中的每種取20iiL的等分試樣，將其加入到了980yL125mM檸檬酸鈉(pH5.0)中。然後使用上文所述的ABTS測定，針對PAA濃度，對這三份稀釋樣品加以測定。穩定性研究製備另外兩種多合一組合物樣品。在250mL水中活化並且測定PAA濃度之前，一種被放置4天。另一種在250mL水中活化並且測定PAA濃度之前於室溫下放置33天。為進行比較，按照實施例8所述製備樣品，其中，在水中活化之前，幹製劑組分與液體PGDA組分在室溫下分開放置同樣的4天和33天階段。可變的PAA產生組合物製備一套5種過碳酸鈉的量不同的多合一組合物，以表明在標準組合物的大約60%至160%的範圍上改變產生PAA的濃度的能力。根據表5列出的量來製造這五種多合一組合物樣品。表5tableseeoriginaldocumentpage34然後在環境溫度下(20°C)攪拌下將這五種樣品加入到250mL去離子水中。在10、20和30分鐘時取等分試樣樣品用於測定。使用ABTS測定在微滴定板中測定PAA濃度。殺孢子功效測定在15.OmL錐形管中製備含有1.37g過碳酸鈉、33.30mgS54V-MsAcT(與1.80mLPGDA混合)的多合一組合物。在20分鐘的攪拌下，將組合物加入到無菌去離子水中。向4個25X150mm管中的每個中裝入10ml得到的PAA測試溶液。將這些管放在20°C培養箱，令其達到溫度。使用滅菌鑷子，向每個管中加入5個被枯草芽孢桿菌(B.subtilis)汙染的penicylinder或者5個被枯草芽孢桿菌(B.subtilis)汙染的縫線環。向每種溶液中加入所有滾軸式骨針(cylinder)或縫線之後，保持5分鐘的時間，以備之後再將其從管中取出。20°C下1小時的接觸時間後，取出penicylinder或縫線，使用彎曲的無菌塑料針(無菌下在袋內將尖端彎曲成鉤)，將它們每個放到另外的IOmL流體巰基乙酸培養基(DifcoCat.#225650)的管中。向巰基乙酸培養基的初級管轉移完成之後，將滾軸式骨針和縫線轉移到新鮮的巰基乙酸培養基(IOmL)管中，於37°C孵育21天。如果21天後沒有觀察到生長，在80°C對管進行熱激，並在37°C再孵育另外的72小時。進行19至20份重複。結果當在攪拌下於250mL水中活化20分鐘時，多合一組合物產生了0.18%過酸的溶液。同一測定中製備的250mL和2000mL的方案分別產生了具有0.17%和0.17%過酸的溶液。用在室溫下保持4天和33天的多合一組合物製備的溶液產生的過酸濃度為預期的100%。類似地，使用單獨的幹製劑和液體組分製備的溶液也產生了其預期PAA濃度的接近100%。用不同的過碳酸鈉量製備的五種多合一組合物樣品在20分鐘的時間點產生了0.11%至0.33%範圍內的PAA濃度，這構成了標準使用條件。因此，多合一組合物可被「調諧」以提供所指出的範圍內的想要的PAA濃度。在這個特別的實施例中，產生的PAA濃度範圍在19-51mM之間，這是28.5-76.5mMH2O2(Na2CO3L5H202)。H2O2的最大轉化率為61.7%,這是在t=30分鐘時用樣品5觀察到的。基於此，可通過調節過碳酸鹽水平或PGDA水平或二者，來獲得想要的PAA的量。用1.37g過碳酸鈉、33.30mgS54V_MsAcT混合1.80mLP⑶A(在250mL水中)製備的多合一組合物在針對被枯草芽孢桿菌(B.subtilis)汙染的縫線和penicylinder的殺孢子功效方面沒有展示出失敗。結論與幹組分和液體PGDA酯底物分開貯藏的製劑一樣，在單個管中含有用於酶促PAA產生的所有三種組分的「多合一」組合物可用於產生有效的PAA去汙溶液(0.16%)。明顯地，在水中活化之前，於室溫下甚至33天之後，多合一組合物顯示了在PAA產生的性能上的0%損失的穩定性。此外，當在被汙染的縫線和瓷penicylinder上進行測定時，使用「多合一」組合物製備的PAA溶液顯示出高水平的殺孢子功效，與分開的幹和液體組分製劑等價。此外，發現，可通過改變所用的過碳酸鈉的量，來「調諧」多合一組合物，使其產生大約0.11%至0.33%範圍內的PAA濃度。實施例10水溶性囊用於遞送多合一PAA產生組合物的用途本實施例描述了對在水溶性囊中配製的用於產生PAA的多合一組合物的製備和用途。材料和方法從SolupakLtd.(Manchester,UK)獲得水溶性聚乙烯醇(PVA)囊。製備10個這樣的囊用於多合一組合物，其中每個中裝入7.5gPGDA、4.8g過碳酸鈉和IlOmg醯基轉移酶S54V-MsAcT。然後使用熱密封儀密封每個囊。將囊從UK運到US，使得使用前有7天的運輸時間。收到後，於21°C將囊溶於2000mL經純化的水(MilliQ)中。在50分鐘的時間段內，在選擇的時間點，測量2000mL溶液的PH和PAA濃度。按照上文所述，使用ABTS在檸檬酸鹽測定中測定PAA。結果溶於2000mL溶液中的囊如預期那樣遞送了多合一組合物，並且得到了下表6中列出的PAA濃度和pH值。表6tableseeoriginaldocumentpage36如上所示，囊遞送系統可規模運行。其產生了目標PAA濃度，並且給出了典型的pH模式，在20分鐘(預設溶解時間)時產生了pH8.6，這是通常認為非腐蝕性的pH範圍。結論多合一組合物是穩定的，並且可在水溶性聚乙烯醇囊中被有效遞送至溶液。30分鐘後，得到的溶液的PAA濃度和pH值等於不用囊時觀察到的情況。本說明書中提及的所有專利和出版物指出了本發明所屬
技術領域：
的技術人員的水平。所有專利和出版物通過參考併入本文至這樣的程度，即好像每個單獨的出版物都表示為明確地分別通過參考併入本文。儘管已經描述了本發明的優選實施方案，對本領域普通技術人員顯而易見的是，可以對公開的實施方案進行各種修改，而且此種修改旨在被包括在本發明的範圍內。本領域技術人員容易認識到，本發明完全可以進行調整以實現目標並獲得所提及的以及固有的結果和優勢。本文中描述的組合物和方法，代表了優選的實施方案，是示範性的，而不意圖成為對本發明範圍的限制。對本領域技術人員顯而易見的是，可以對本文中公開的發明進行各種置換和修改，而不脫離本發明的精神和範圍。本文中例證地描述的本發明可以在缺少本文中未具體公開的任一元素或許多元素、限定或許多限定的情況下適宜地實施。已被使用的術語和表述，是被用作描述性術語的，而不是限定性的，並且本發明的意圖不是在使用這些術語和表述時排除顯示和描述的特徵或其部分的等價物，應認識到在要求保護的發明範圍內各種修改是可能的。因此，應該理解，儘管本發明通過優選的實施方案和可選的特徵被具體地公開，但本領域技術人員可以重新對本文公開的概念進行修改和變化，而這些修改和變化被認為包含在如附帶的權利要求限定的本發明的範圍之內。在本文中，本發明已以寬泛的和一般性的方式被描述。落入該概括性公開內容中的每一較窄的種類和亞類也形成本發明的一部分。這包括發明的這樣的概括性描述，其帶有附加條件或從該類中除去任何主題的負限定，不論刪除的該物質是否在本文中被具體地詳述。權利要求組合物，其包含過水解酶、過氧化氫來源和酯底物，其中所述組合物與水混合時產生過酸，並且，其中，所述組合物在至少大約7天的時間內保持產生過酸的活性。2.權利要求1的組合物，其中所述酯底物是液體，所述過水解酶和過氧化氫來源是懸浮於液體中的固體。3.權利要求1的組合物，其中所述過酸選自過乙酸、過壬酸、過丙酸、過丁酸、過戊酸和過己酸。4.權利要求4的組合物，其中所述過酸是過乙酸。5.權利要求1的組合物，其中所述酯底物是丙二醇二乙酸酯。6.權利要求1的組合物，其中所述過水解酶包含SEQIDNO1所示的胺基酸序列。7.權利要求1的組合物，其中所述過水解酶是SEQIDNO1的S54V變體。8.權利要求1的組合物，其中所述過氧化氫來源是產生過氧化氫的化合物，所述化合物選自過碳酸鈉、過硼酸鈉和脲過氧化氫。9.權利要求8的組合物，其中所述過氧化氫來源是過碳酸鈉。10.權利要求1的組合物，其中所述組合物包含按重量計大約0.001%至大約的過水解酶、按重量計大約35%至大約45%的過碳酸鈉和按重量計大約55%至大約65%的丙二醇二乙酸酯。11.權利要求1的組合物，其中所述過氧化氫來源是包含氧化酶及其底物的酶促過氧化氫產生系統。12.權利要求11的組合物，其中所述氧化酶選自葡糖氧化酶、山梨糖醇氧化酶、己糖氧化酶、膽鹼氧化酶、醇氧化酶、甘油氧化酶、膽固醇氧化酶、吡喃糖氧化酶、羧基醇氧化酶、L-胺基酸氧化酶、甘氨酸氧化酶、丙酮酸氧化酶、穀氨酸氧化酶、肌氨酸氧化酶、賴氨酸氧化酶、乳酸氧化酶、香草基氧化酶、乙醇酸氧化酶、半乳糖氧化酶、尿酸氧化酶、草酸鹽氧化酶和黃嘌呤氧化酶。13.權利要求1的組合物，其還包含選自蛋白酶、纖維素酶、澱粉酶和微生物細胞壁降解酶的至少一種另外的酶。14.權利要求1的組合物，其中所述組合物還包含至少一種表面活性劑。15.製備去汙溶液的方法，所述方法包括將權利要求1至14中任意一項的組合物加入到水中，並混合至少大約20分鐘。16.用於去汙的方法，所述方法包括(a)提供權利要求1至14中任意一項的組合物；(b)將所述組合物加入水中並混合，由此產生水性過酸溶液；(c)將包含汙染物的物品暴露給所述溶液。17.權利要求16的方法，其中所述組合物被包含在水溶性容器中。18.權利要求18的方法，其中所述容器是聚乙烯醇膜製成的囊。19.權利要求16的方法，其中所述水是經滅菌的。20.權利要求16的方法，其中所述暴露包括將所述物品在高溫下暴露給所述溶液。21.權利要求16的方法，其中所述汙染物包含選自肉毒桿菌毒素、炭疽毒素、蓖麻毒蛋白、鯖毒素、魚肉毒素、河飩毒素、真菌毒素及其任何組合的毒素。22.權利要求16的方法，其中所述汙染物包含選自細菌、病毒、真菌、寄生物、朊病毒及其任何組合的病原體。23.權利要求22的方法，其中所述病原體選自芽孢桿菌屬物種(Bacillusspp.)、炭mififf(B.EfflthrEiCis)、It胃M·禾中(Clostridiumspp.)、胃(C.botulinum)、產氣莢膜梭菌(C.perfringens)、利斯特氏菌屬物種(Listeriaspp.)、葡萄球菌屬物種(Staphylococcusspp.)、鏈球菌屬物種(Streptococcusspp.)、沙門氏菌屬物種(Salmonellaspp.)、志賀氏菌屬物種(Shigellassp.)、大腸桿菌(E.coli)、耶爾森氏菌屬物種(Yersiniaspp.)、鼠疫耶爾森氏菌(Y.pestis)、弗朗西絲氏菌屬物種(Francisellaspp.)、土拉熱弗朗西絲氏菌(F.tularensis)、Camplyobacterssp.、弧菌屬物種(Vibriospp.)、布魯氏菌屬物種(Brucellaspp.)、隱孢子蟲屬物種(Cryptosporidiumspp·)、賈第蟲屬物種(Giardiaspp.)、環孢子蟲屬物種(Cyclosporaspp.)和毛線蟲屬物種(Trichinellaspp.)。24.權利要求16的方法，其中所述物品選自硬表面、織物、食品、飼料、衣服、小地毯、地毯、紡織品、醫療儀器和獸醫儀器。25.包含水溶性容器的系統，所述容器包含根據權利要求1至15中任意一項的穩定組合物。26.權利要求25的系統，其中所述容器是囊、安瓿、膠囊或小球。27.權利要求26的系統，其中所述水溶性容器由水溶性聚合物材料聚乙烯醇、聚環氧乙烷、源於纖維素的水溶性糖類和聚交酯製成。28.製備去汙溶液的方法，所述方法包括將權利要求26的系統加入到水中並進行混I=Iο29.用於去汙的試劑盒，所述試劑盒在包裝中包含權利要求1至15中任意一項的穩定組合物。30.權利要求29的試劑盒，其中所述組合物在水溶性容器中。31.權利要求30的試劑盒，其中所述水溶性容器是囊、安瓿、膠囊或小球。32.權利要求30的試劑盒，其中所述水溶性容器由選自聚乙烯醇、聚環氧乙烷、源於纖維素的水溶性糖類和聚交酯的水溶性聚合物材料製成。33.權利要求29的試劑盒，其還包含空的混合容器，用於將所述組合物與水混合。34.權利要求29的試劑盒，其還包含處於密封容器中的水，其中所述水是經滅菌的。35.權利要求29的試劑盒，其還包含用於在根據權利要求16的方法中使用的說明書。全文摘要本發明提供了包含過水解酶、過氧化氫來源和酯底物的穩定組合物，其能高效產生水性過酸溶液。產生的過酸溶液適於對被病原體或毒性化學品汙染的寬範圍的材料和設備進行去汙和/或衛生處理。在一種優選的實施方式中，所述穩定組合物包含醯基轉移酶、過碳酸鈉和丙二醇二乙酸酯，並可穩定30天或更長。加入水中後，組合物被活化，產生具有高的過乙酸對乙酸比例的水溶液。文檔編號C12N9/50GK101821385SQ200880015489公開日2010年9月1日申請日期2008年5月5日優先權日2007年5月10日發明者C·C·巴耐特申請人:丹尼斯科美國公司