一種當歸有效成分的提取方法
2023-05-27 18:27:36 2
專利名稱：一種當歸有效成分的提取方法
技術領域：
本發明屬於中藥有效成分提取工藝。
背景技術：
藥材當歸為傘形科多年生草本植物的根，是著名的一味中藥。目前從當歸中進行提取所涉及的工藝主要包括上述最主要的三種活性成分，即 以藁本內酯為代表的脂溶性成分和以阿魏酸及當歸多糖為代表的水溶性成分。相關的研究證實以藁本內酯為代表的當歸脂溶性成分和以阿魏酸為代表的當歸水溶性成分均不穩定， 容易發生脫氫、氧化、水解、降解等異構化反應，因此對提取、分離純化和保存條件要求比較苛刻。基於中藥當歸有效成分阿魏酸的提取方法主要是傳統的水蒸氣蒸餾和有機溶劑提取。但是阿魏酸為熱不穩定物質，長時間受熱，會引起阿魏酸的分解，所以採用這種加熱方式提取當歸中阿魏酸的收率不高。當歸揮髮油的提取方法主要包括有機溶劑浸取法、水蒸汽蒸餾法、超臨界(X)2萃取法。有機溶劑浸取法提取當歸揮髮油具有處理量大、能耗較低、易於連續操作等特點，但此法溶劑用量大，而且在處理過程中容易造成水溶性成分的損失。水蒸汽蒸餾法提取當歸揮髮油的收率較低，同時由於提取過程溫度高，易造成對熱不穩定及易氧化成分的破壞。當歸多糖由D-半乳糖、L阿拉伯糖、D-木糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸等組成，目前當歸多糖通常採用水煮醇沉的傳統方法提取。中藥所含成分十分複雜，既有有效成分，又有無效成分和有毒成分。為了提高中藥製劑的內在質量，增強其治療效果，降低毒副作用，選用合理的提取工藝非常重要。目前當歸活性部分常用的提取方法有傳統水蒸氣蒸餾提取和有機溶劑提取。這些傳統方法已經走過了漫長的歷史歲月，由於其合理適用的科學技術內核，綿延至今仍是當歸提取常用的方法，但這些方法存在著明顯的不足和問題，集中表現在，現代藥理研究表明低極性類化合物 (包括揮髮油)是當歸發揮其某些藥效的重要物質基礎，然而傳統採取水蒸汽蒸餾提取，如此高溫不利於不穩定的低極性類化合物的提取，另外中藥的藥效不是來自某一單一的活性化學成分，而是來自多種活性成分之間的協同作用，甚至與某些非活性成分相關，但傳統提取工藝大多針對某一種(或某一類)組分，並以某一組分(或某一類)組分的提取量為指標來對不同提取方法進行評價，因此藥材的利用率不高，活性成分的收率低。超臨界萃取、 超聲和微波輔助提取等方法屬於新技術在藥材提取中的應用，其實現製藥大生產還需要一定的時間，儘管可以避免高溫高壓對有效成分的破壞，但對設備要求較高，且製取設備前期投入較大，維護費用較高。另外，植物中藥中有藥用價值的成分往往是藥用植物本身的一些次生代謝產物，而藥用植物的絕大部分是它賴以生長發育的結構物質，如纖維素、半纖維素、木質素、果膠，不具有藥用價值，不論是我國傳統的中藥炮製方法，還是現代大企業的提取工藝，都是採用水煮或用大量的有機溶劑設法將中藥有藥用價值的成分與無藥用價值的結構物質分開，其局限是有效成分提取不充分或只針對某個或某些成分的提取，而使療效降低，有限的中藥資源大量浪費。儘管現有的工藝能滿足現有企業中藥材加工中當歸活性成分的分離，但是，現有的工藝都是針對其中的某種藥效成分，例如提取阿魏酸，不管是採用加熱蒸餾或者有機溶劑提取，都會導致對藁本內酯的損失，即採用現有報導工藝提取阿魏酸後不能再提取藁本內酯；同樣，不論是採用蒸餾法或者採用有機溶劑法提取藁本內酯，剩餘殘渣都不能用於阿魏酸的提取。
發明內容
本發明目的是提供一種當歸有效成分的提取方法。本發明是一種當歸有效成分的提取方法，其步驟為(1)將乾燥的當歸塊根在粉碎機中粉碎至100目顆粒；(2)稱取粉碎後的當歸，以1 8不同料液比或質量比加入pH5. 5的溶劑A溶液；(3)向(2)的溶液中再加入0. 3mg · mL—1的纖維素酶，充分攪拌；(4)將(3)所得溶液於55°C恆溫條件下酶解6小時；(5)向(4)的溶液中再加入0. 3mg · mL-1的異澱粉酶，充分攪拌；(6)將(5)所得溶液繼續在55°C進行恆溫酶解，時間持續6小時；(7)酶解完成後減壓過濾，所得濾液即為阿魏酸溶液，該溶液避光保存；(8)將(7)過濾所得濾渣用於提取藁本內酯，每次加入8倍量的溶劑B，回流提取 2次，每次2小時；將初次濾液與第二次濾液合併，合併後的濾液即為藁本內酯溶液，該溶液避光低溫保存；(9)將⑶過濾所得濾渣用於提取當歸多糖，濾渣中加入15倍量的溶劑C，提取3 小時，提取溫度為80士5°C ；(10)提取完成後用8層紗布過濾，棄去濾渣，將濾液體積濃縮5倍；(11)向(10)濃縮液中加入溶劑D，充分攪拌，至溶劑濃度達到75%，產生大量絮狀沉澱，用離心機3000rpm離心10分鐘，分離得到當歸多糖。所述的溶劑A為冰醋酸；溶劑B為70%乙醇；溶劑C為蒸餾水；溶劑D為95%乙與傳統方法相比，傳統方法提取阿魏酸得率為0. 52mg/g,藁本內酯得率為 120. 6mg/g，多糖得率為76. 9mg/g，且阿魏酸與藁本內酯無法進行共提取；本發明阿魏酸得率為0. 55mg/g，藁本內酯得率為119. lmg/g，多糖得率為93. 6mg/g，本發明可實現當歸中主要活性成分阿魏酸、藁本內酯的共提取以及後期當歸多糖的提取。本發明的提取方法具有以下的優點由於生物酶的高效性和專一性，作用條件溫和，本發明的提取條件更簡單、設備更簡化，既降低能耗又節約成本；相對已有技術，該方法在有效提阿魏酸得率的同時，實現對藁本內酯的共提取及後期當歸多糖的提取，具有確保藥物質量、降低提取成本、減少中藥資源浪費。
圖1是阿魏酸標準品HPLC色譜圖，圖2是樣品中阿魏酸色譜圖，圖3是藁本內酯標準品HPLC色譜圖，圖4是樣品中藁本內酯色譜圖。
具體實施例方式本發明是一種當歸有效成分的提取方法，其步驟為(1)將乾燥的當歸塊根在粉碎機中粉碎至100目顆粒；(2)稱取粉碎後的當歸，以不同料液比或質量比加入pH5. 5的溶劑A溶液；(3)向(2)的溶液中再加入0. 3mg · mL—1的纖維素酶，充分攪拌；(4)將(3)所得溶液於55°C恆溫條件下酶解6小時；(5)向(4)的溶液中再加入0. 3mg · mL—1的異澱粉酶，充分攪拌；(6)將(5)所得溶液繼續在55°C進行恆溫酶解，時間持續6小時；(7)酶解完成後減壓過濾，所得濾液即為阿魏酸溶液，該溶液避光保存；(8)將(7)過濾所得濾渣用於提取藁本內酯，每次加入8倍量的溶劑B，回流提取 2次，每次2小時；將初次濾液與第二次濾液合併，合併後的濾液即為藁本內酯溶液，該溶液避光低溫保存；(9)將⑶過濾所得濾渣用於提取當歸多糖，濾渣中加入15倍量的溶劑C，提取3 小時，提取溫度為80士5°C ；(10)提取完成後用紗布過濾，棄去濾渣，將濾液體積濃縮5倍；(11)向(10)濃縮液中加入溶劑D，充分攪拌，至溶劑濃度達到75%，產生大量絮狀沉澱，用離心機3000rpm離心10分鐘，分離得到當歸多糖。所述的溶劑A為冰醋酸；溶劑B為70%乙醇；溶劑C為蒸餾水；溶劑D為95%乙以上所述的複合酶為纖維素酶，或者果膠酶，或者異澱粉酶，或者木聚糖酶，或者以上所述的兩種或兩種以上的組合。所述的複合酶優選的是纖維素酶和異澱粉酶，按1 1的比例組合。對本發明的方法採用HPLC法檢測當歸中主要活性成分1、用HPLC法對酶法提取阿魏酸的提取率變化進行檢測，色譜條件為，色譜柱0DS 反向柱 G.6ymX250mm，5ym)；流動相甲醇-0.085% 磷酸(55 45, ν/ν)；流速1ml/ min ；進樣量20 μ 1 ；檢測波長322nm ；柱溫室溫。在此色譜條件下，目標峰與樣品中雜質峰得到較好分離。阿魏酸標準品色譜圖、樣品中阿魏酸色譜圖如圖1、2所示。製作標準曲線準確稱取FA標準品lmg，溶解於Iml流動相中，配製成1000 μ g/ml標準儲備液。取適量標準儲備液用流動相稀釋成濃度分別為0.5、l、5、10、25、50、100yg/ml的標準溶液， 分別進樣檢測。以標準品濃度為橫坐標，HPLC峰面積為縱坐標進行線性回歸，製作阿魏酸標準曲線。該方法所得回歸方程為y = 117053x+32234,相關性R2 = 0. 9999，結果表明HPLC 法可準確檢測樣品中阿魏酸含量。2、用HPLC法對當歸中藁本內酯的提取率變化進行檢測，色譜條件為，色譜柱0DS 反向柱(4. 6 μ mX 250mm，5 μ m)；流動相甲醇-水(70 30，ν/ν)；流速lml/min，進樣量 2(^1;檢測波長32711111[1]。在此色譜條件下，目標峰與樣品中雜質峰得到較好分離。藁本內酯標準品色譜圖、樣品中藁本內酯色譜圖如圖3、4所示。
製作標準曲線準確稱取藁本內酯標準品lmg，加入500 μ 1流動相溶解，並梯度稀釋得濃度為5、 10、25、50、100、250、500、1000、2000μ g/ml的標準溶液，進樣檢測。以稿本內酯濃度為橫坐標，HPLC峰面積為縱坐標進行線性回歸，製作藁本內酯標準曲線。該方法所得回歸方程為y = 3453. 3χ-4070. 2，相關性R2 = 0. 9997，結果表明HPLC 法可準確檢測樣品中藁本內酯含量。下面用更為具體的實施例進一步展開本發明。實施例1酶法提取當歸中主要活性成分稱取粉碎後的當歸粉10g，以料液比為1 8的比例(質量比)加入pH5.5的冰醋酸溶液，再加入0. 3mg · mL-1的纖維素酶，充分攪拌，於55°C恆溫下酶解他；再加入 0. 3mg · mL-1的異澱粉酶，充分攪拌，繼續55°C恆溫酶解他。酶解完成後減壓過濾，所得濾液即為阿魏酸溶液，該溶液避光保存，並用HPLC法檢測阿魏酸得率。將過濾所得濾渣用於提取藁本內酯，以傳統醇提法(即70%乙醇回流提取2次，2h/次)進行提取，將初次濾液與第二次濾液合併，合併後的濾液即為藁本內酯溶液，該溶液避光低溫保存，並用HPLC法檢測藁本內酯得率。本步驟所得濾渣繼而用傳統水提醇沉法提取當歸多糖，用硫酸-苯酚法檢測多糖得率。本發明中阿魏酸得率為0. 55mg/g,藁本內酯得率為119. lmg/g,多糖得率為 93. 6mg/g,當歸中主要活性成分的得率均與傳統方法相當，但對原藥材的利用率遠高於傳統方法。實施例2複合酶法提取當歸中主要活性成分稱取粉碎後的當歸粉10g，以料液比為1 8的比例(質量比)加入pH5.5的冰醋酸溶液，再加入0. 2mg · mL-1的纖維素酶，充分攪拌，於55°C恆溫下酶解5h，再加入 0. 2mg · mL-1的果膠酶，充分攪拌，繼續55°C恆溫酶解證。酶解完成後減壓過濾，所得濾液即為阿魏酸溶液，該溶液避光保存，並用HPLC法檢測阿魏酸得率。將過濾所得濾渣用於提取藁本內酯，以傳統醇提法(即70%乙醇回流提取2次，2h/次)進行提取，將初次濾液與第二次濾液合併，合併後的濾液即為藁本內酯溶液，該溶液避光低溫保存，並用HPLC法檢測藁本內酯得率。本步驟所得濾渣繼而用傳統水提醇沉法提取當歸多糖，用硫酸-苯酚法檢測多糖得率。本發明中阿魏酸得率為0. 52mg/g,藁本內酯得率為121. 3mg/g,多糖得率為 90.lmg/g,實施例3複合酶法提取當歸中主要活性成分稱取粉碎後的當歸粉10g，以料液比為1 8的比例(質量比)加入pH5.5的冰醋酸溶液，再加入0. 3mg · mL-1的纖維素酶，充分攪拌，於55°C恆溫下酶解5h，再加入 0. 3mg · mL-1的木聚糖酶，充分攪拌，繼續55°C恆溫酶解證。酶解完成後減壓過濾，所得濾液即為阿魏酸溶液，該溶液避光保存，並用HPLC法檢測阿魏酸得率。將過濾所得濾渣用於提取藁本內酯，以傳統醇提法(即70%乙醇回流提取2次，2h/次)進行提取，將初次濾液與第二次濾液合併，合併後的濾液即為藁本內酯溶液，該溶液避光低溫保存，並用HPLC法檢測藁本內酯得率。本步驟所得濾渣繼而用傳統水提醇沉法提取當歸多糖，用硫酸-苯酚法檢測多糖得率。 本發明中阿魏酸得率為0. 51mg/g,藁本內酯得率為118. 2mg/g,多糖得率為 87. 3mg/g。
權利要求
1.一種當歸有效成分的提取方法，其步驟為(1)將乾燥的當歸塊根在粉碎機中粉碎至100目顆粒；(2)稱取粉碎後的當歸，以1 8的料液比或質量比加入pH5. 5的溶劑A溶液；(3)向O)的溶液中再加入0.3mg · mL—1的纖維素酶，充分攪拌；(4)將(3)所得溶液於55°C恆溫條件下酶解6小時；(5)向的溶液中再加入0.3mg · mL—1的異澱粉酶，充分攪拌；(6)將(5)所得溶液繼續在55°C進行恆溫酶解，時間持續6小時；(7)酶解完成後減壓過濾，所得濾液即為阿魏酸溶液，該溶液避光保存；(8)將(7)過濾所得濾渣用於提取藁本內酯，每次加入8倍量的溶劑B，回流提取2次， 每次2小時；將初次濾液與第二次濾液合併，合併後的濾液即為藁本內酯溶液，該溶液避光低溫保存；(9)將( 過濾所得濾渣用於提取當歸多糖，濾渣中加入15倍量的溶劑C，提取3小時， 提取溫度為80 士 5°C ；(10)提取完成後用紗布過濾，棄去濾渣，將濾液體積濃縮5倍；(11)向(10)濃縮液中加入溶劑D，充分攪拌，至溶劑濃度達到75%，產生大量絮狀沉澱，用離心機3000rpm離心10分鐘，分離得到當歸多糖；所述的溶劑A為冰醋酸；溶劑B為70%乙醇；溶劑C為蒸餾水；溶劑D為95%乙醇。
2.根據權利要求1所述的當歸有效成分的提取方法，其特徵在於所述的複合酶為纖維素酶，或者果膠酶，或者異澱粉酶，或者木聚糖酶，或者以上所述的兩種或兩種以上的組合。
3.根據權利要求1所述的當歸有效成分的提取方法，其特徵在於所述的複合酶優選的是纖維素酶和異澱粉酶，按1 1的比例組合。
全文摘要
一種當歸有效成分的提取方法，將粉碎的當歸加入pH5.5的溶劑A溶液，向該溶液中再加入0.3mg·mL-1的纖維素酶，將所得溶液於55℃恆溫條件下酶解6小時，在溶液中再加入0.3mg·mL-1的異澱粉酶，然後將所得溶液繼續在55℃進行恆溫酶解，時間持續6小時，酶解完成後減壓過濾，所得濾液避光保存；將過濾所得濾渣用於提取藁本內酯，每次加入8倍量的溶劑B，回流提取2次，每次2小時；將初次濾液與第二次濾液合併，合併後的濾液即為藁本內酯溶液，該溶液避光低溫保存；將過濾所得濾渣用於提取當歸多糖，濾渣中加入15倍量的溶劑C進行提取，將濾液體積濃縮，向濃縮液中加入溶劑D，至溶劑濃度達到75％，用離心機分離得到當歸多糖。
文檔編號C07C51/42GK102381962SQ20111031810
公開日2012年3月21日 申請日期2011年10月19日 優先權日2011年10月19日
發明者張應鵬, 張新國, 李春雷, 王強林 申請人:蘭州理工大學