一種依託泊苷長循環乳劑及其製備方法

2023-05-26 21:13:01 1

專利名稱：一種依託泊苷長循環乳劑及其製備方法
技術領域：
本發明屬於藥物製劑領域，涉及一種依託泊苷長循環乳劑及其製備方法，更具體的說，本發明涉及一種用聚乙二醇(PEG)修飾的、可避免體內的網狀內皮系統吞噬並可穩定貯存的依託泊苷長循環乳劑及其製備方法。
背景技術：
依託泊苷(Etoposide)，又名鬼臼乙叉甙、足葉乙甙、VP-16，為鬼臼毒素的糖代謝產物，屬細胞周期特異性抗腫瘤藥物，作用於DNA拓撲異構酶II，形成藥物-酶-DNA穩定的可逆性複合物，阻礙DNA修復，發揮抗腫瘤效果。不同的濃度下，依託泊苷對細胞分裂的作用不同，高濃度(》10yg/mL)依託泊苷使進入有絲分裂期的細胞溶解，而低濃度(0. 3 10yg/mL)時則抑制細胞進入有絲分裂的前期。依託泊苷主要用於治療肺癌、淋巴癌、急性白血病、睪丸癌，尤其是對早期擴散、預後惡劣的小細胞肺癌效果良好，是治療小細胞肺癌和睪丸癌的最強活性單體。由於依託泊苷為細胞毒性藥物，這使得該藥物的毒副作用也很大，其主要毒性為骨髓抑制，使嗜中性白細胞嚴重減少，血中濃度較高時還可能產生神經毒性。此外還會產生胃腸道反應。該藥物的療效及毒性與藥物濃度及作用時間有較強的相關性。依託泊苷於1971年開始臨床試用，1983年獲美國FDA批准。由於具有明確的藥效和較低的副作用，WHO推薦將其作為一個常用的抗腫瘤藥物。目前，臨床上使用的有兩種劑型注射液和口服軟膠囊。由於依託泊苷在水中溶解度極小，溶解速度慢，酸性條件下不穩定，通常採用乙醇、聚乙二醇400等助溶劑製成注射劑，血管刺激性較大，且聚乙二醇易透過人紅細胞膜使紅細胞變性和溶血，易引起血壓下降或支氣管痙攣，甚至可致死亡；該注射液靜脈給藥時，只能用生理鹽水稀釋後儘可能及時使用，用藥前、用藥中應觀察藥物是否透明，如果混濁沉澱，則不能使用。靜注時藥液不能外漏，以免引起局部壞死。同時由於本品易引起低血壓，注射速度儘可能要慢，至少30分鐘。為了彌補這一缺點，Bristol Myers SquilA公司對其進行修飾，研製了磷酸依託泊苷，大大增強了藥物的溶解性能。磷酸依託泊苷為依託泊苷前體藥物，該藥進入體內後立即水解為依託泊苷，療效、安全性與依託泊苷注射劑相當。但是，磷酸依託泊苷採用凍幹技術製成粉針，不僅價格昂貴而且需要低溫保存。為使依託泊苷更好的發揮臨床療效，提高其抗腫瘤活性和穩定性，降低其刺激性和毒副作用，就需要利用製劑學新手段、新方法，改進位劑技術，開發新劑型。唐星等人(中國專利文獻，申請號200610169149. 8)公開了一種依託泊苷脂微球注射液及其製備方法， 將依託泊苷包裹於油相和界面膜中，提高了依託泊苷的穩定性，降低了血管刺激性。李亞軍等人(中國專利文獻，申請號200810038114. χ)公開了一種依託泊苷固體脂質納米粒及其製備方法，採用脂質材料、乳化劑將依託泊苷包封製得粒徑小、包封率高、穩定性好、毒性低的依託泊苷脂質納米粒，降低了血管刺激性，延長了藥物在血液中的循環時間，有望提高藥物的療效。但以長循環乳劑為載體解決上述問題，未見相關報導。
長循環乳劑(long-circulating emulsion)是指對靜脈注射用脂肪乳劑表面進行適當的結構修飾，以避免單核吞噬細胞系統(mononuclear phagocytsystem, MPS)的吞噬， 延長體循環時間的乳劑。乳滴表面被柔順而親水的聚乙二醇(PEG)鏈覆蓋可增強親水性， 減少血漿蛋白與其相互作用的機率，降低被MPS吞噬的可能性。有文獻報導，以3種不同鏈長PEG-PE(PEG-PE1000/2000/5000)作為乳化劑所得脂肪乳的體內分布，發現PEG鏈分子質量為2000時，所得乳劑的體循環時間最長，而在加入含有PEG的化合物後，乳劑表面的疏水性和空間位阻增加，是延長其體循環時間的原因之一。靜脈乳劑是簡單的膠體型藥物輸送載體，包裹油滴的磷脂單分子層分散在連續的水相中，具備很多脂質體的性質，靜脈乳劑是脂溶性藥物的良好載體，可以大量生產，容易滅菌，在室溫可保存1 2年。依託泊苷具有如下特點藥物療效與作用時間成正比，其水溶性和脂溶性都很差，且在水溶液中快速降解。針對依託泊苷的上述特點，嘗試設計成長循環亞微乳劑，目的在於提高其溶解度、降低藥物的刺激性和毒副作用，同時延長藥物的血液循環時間，改善體內分布，以增加腫瘤組織對它的攝取，提高療效。

發明內容
本發明的目的是提供一種性質穩定且可產業化的依託泊苷長循環乳劑，該乳劑將依託泊苷包裹於油相和界面膜中，增加了藥物的水溶性，阻止藥物析出，可有效降低血管刺激性，同時，該乳劑的乳滴表面被柔順而親水的聚乙二醇(PEG)鏈覆蓋，可增強親水性，減少血漿蛋白與其相互作用的機率，降低被MPS吞噬的可能性，延長藥物在血液中循環時間， 改善體內分布，達到對腫瘤組織的被動靶向，提高生物利用度及治療指數。本發明的另一個目的是在於提供的依託泊苷長循環亞微乳脂質載體，可以克服水溶性和脂溶性都較差的藥物的載藥困難問題，包封率高、製劑可穩定貯存。本發明的又一個目的是提供一種製備依託泊苷長循環亞微乳劑的製備方法。為實現上述目的，本發明提供了一種依託泊苷長循環亞微乳劑，其基本上由治療有效劑量的依託泊苷、液態油、乳化劑、PEG修飾的酯類和注射用水組成。
成分

具體而言，在上述技術方案中，本發明提供的依託泊苷長循環亞微乳劑含有以下
依託泊苷
液態油
乳化劑
PEG修飾的酯類附加劑注射用水
0. 01 lwt% 5 40wt% 1 ~ 5wt % 0. 01 5wt% 0. 5 20wt% 餘量
優選的是，本發明的依託泊苷長循環亞微乳劑含有以下成分
依託泊苷0. 01 0. 5wt%
液態油10 30wt%
乳化劑1 3wt%
PEG修飾的酯類0. 01 Iwt %
附加劑0.5 IOwt %
注射用水餘量所述液態油選自天然植物油，如大豆油、花生油、紅花油、橄欖油；鏈長在C8 Cltl 之間的中等鏈長脂肪酸甘油酯(medium-chain glyceride，簡稱MCT)；維生素Ε、維生素A等維生素脂類；及其任意組合。優選的是，該液態油為大豆油、鏈長在C8 Cltl之間的中等鏈長脂肪酸甘油酯或維生素Ε。所述乳化劑包括脂溶性乳化劑和水溶性乳化劑。所述脂溶性乳化劑選自磷脂類， 如卵磷脂、大豆磷脂，及其任意組合；膽固醇；聚山梨酯類，如TWeen60、TweenSO，及任意組合。所述水溶性乳化劑選自聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物類，如Poloxamer系列、Pluronic系列；聚氧乙烯脂肪酸酯類；聚氧乙烯脂肪醇醚類；及其任意組合。優選的是，該乳化劑為卵磷脂、豆磷脂、Pluronic F68、Tween80。所述PEG修飾的酯類為聚乙二醇-二硬脂醯磷脂醯乙醇胺(PEG-DSPE)，聚乙二醇-聚己內酯(PEG-PCL)，聚乙二醇-聚乙交酯丙交酯(PEG-PLGA)，聚乙二醇-聚乳酸 (PEG-PLA)，聚乙二醇-聚十六烷基氰基丙烯酸酯(PEG-PHDCA)。優選聚乙二醇-二硬脂醯磷脂醯乙醇胺(PEG-DSPE)。本發明提供的依託泊苷長循環亞微乳劑進一步包括0. 5 20wt%的附加劑，優選包括0. 5 10wt%的附加劑。所述附加劑可起到增加製劑穩定性、調節滲透壓、抗氧化等作用，選自滲透壓調節劑，如甘油、丙二醇、甘露醇等；界面膜穩定劑，如油酸、油酸鈉、去氧膽酸、去氧膽酸鈉等；抗氧化劑如維生素C、維生素E等；及其任意組合物。優選的是，該附加劑為甘油、甘露醇、油酸、油酸鈉、維生素C、維生素E及其任意組合。本發明提供的依託泊苷長循環亞微乳劑，具有以下優點1、與依託泊苷注射液相比，本發明中的依託泊苷長循環亞微乳劑，不再採用乙醇、 聚乙二醇400等為溶劑，降低了血管刺激性和潛在毒性；依託泊苷水溶液很不穩定，室溫即迅速降解，臨床應用時，加到生理鹽水注射液中立即使用。乳劑可直接靜脈給藥，也可用注射用水或生理鹽水或葡萄糖注射液進行稀釋或分散後靜脈給藥，避免了注射劑因稀釋產生藥物沉澱或發生藥物降解等問題，臨床上更安全有效。2、與常規的依託泊苷乳劑、脂質體相比，本發明的製劑通過PEG對亞微乳劑的微球表面進行修飾，有助於避免體內肝脾網狀內皮系統的吞噬，延長藥物在體內的循環時間， 改善體內分布，降低毒性，提高藥物的治療指數。採用總體液平衡反向透析法測定藥物的體外釋放，結果顯示以PEG修飾後的亞微乳劑表現出明顯的緩釋特徵。使用大鼠進行藥動學評價和組織分布試驗研究，結果顯示以PEG修飾後的亞微乳劑與注射液相比，血液循環時間明顯延長；藥物在肺組織的濃度明顯增加，分布時間延長，藥物在其他組織的分布無明顯變化。3、依託泊苷在水和油中的溶解度均較小，25°C條件下，其在水、PH3.0的磷酸緩衝液、pH5. 0的磷酸緩衝液、pH6. 8的磷酸緩衝液中的平衡溶解度分別為148. 3 μ g · ml—1、 104. 2 μ g · πιΓ\112. 5 μ g · πιΓ1、144. 6 μ g · πιΓ1,在大豆油和油酸中的平衡溶解度為 361 μ g · πιΓ1和493 μ g · πιΓ1。ρΗ在1. 0 9. 0內依託泊苷的油水分配係數在6. 5左右， PH值影響很小，與親水性相比，依託泊苷表現出相對好一些親脂性。載藥亞微乳劑更適合親脂性藥物的製備，將藥物溶於油相中，製備水包油型乳劑。本發明通過系統詳實的研究，解決了水溶性脂溶性都比較差的藥物的載藥問題，存放期間穩定，無藥物析出。
4、本發明的製劑，乳滴粒徑平均約在200nm，分布較窄，其多分散性小於0. 2，且藥物包封率高，有助於提高注射安全性。本發明提供了上述依託泊苷長循環亞微乳劑的製備方法，該方法包括以下步驟(1)將依託泊苷、脂溶性乳化劑、PEG修飾的脂類、脂溶性抗氧劑加入到液態油中， 超聲並加熱(40°C 80°C)，使上述固體成分溶解分散，構成油相。(2)將水溶性乳化劑、水溶性界面膜穩定劑、水溶性抗氧劑、滲透壓調節劑加入到注射用水中，超聲並加熱(40°C 80°C)，使上述固體成分溶解分散，構成水相。(3)在40°C 80°C的溫度下，在攪拌或/和高剪切條件下將所述油相和水相混合， 以製備初乳，調PH，補足注射用水。(4)對所述的初乳進行高壓均質處理或高壓微射流均質處理，灌裝，通氮氣，熔封或密封，高溫旋轉熱壓滅菌，得到終乳。


圖1為依託泊苷長循環亞微乳劑的粒徑分布2為依託泊苷長循環亞微乳劑的體外釋放的釋放百分率-時間曲線。圖3為大鼠分別靜脈注射5mg/kg的依託泊苷長循環亞微乳劑與依託泊苷注射液血藥濃度-時間曲線比較圖4為大鼠分別靜脈注射5mg/kg的依託泊苷長循環亞微乳劑與依託泊苷注射液血藥濃度-時間半對數曲線比較圖5為大鼠分別靜脈注射依託泊苷長循環乳劑和注射劑5mg/kg後各時間點在各組織中分布比較
具體實施例方式實施例1取卵磷脂1. 0g、PEG-DSPEO. 02g、油酸0. 05g、依託泊苷0. Olg加入到IOg大豆油中，超聲水浴加熱(40°C )溶解，得油相。取甘油2. 25g加入70ml注射用水中溶解作為水相，在50°C水浴中，將油相加入水相，邊加邊攪拌，15000rpm剪切20min，得到初乳，調pH約 4. 5 5，補足注射用水至100ml，在微射流儀，壓力SOMPa乳勻5遍，灌裝，通氮氣，熔封， 121°C旋轉熱壓滅菌10分鐘，得到終乳。平均粒徑=193.7nm, PI = 0. 092，包封率=95. 8%實施例2取豆磷脂1. 2g、PEG_DSPE0. lg、油酸0. 10g、依託泊苷0. 05g加入到20g大豆油中， 超聲水浴加熱(50°C)溶解，得油相。取甘油2. 25g加入70ml注射用水中溶解作為水相，在 60°C水浴中，將油相加入水相，邊加邊攪拌，15000rpm剪切20min，得到初乳，調pH約4. 5 5，補足注射用水至IOOml，在微射流儀，壓力SOMPa乳勻5遍，灌裝，通氮氣，熔封，121°C旋轉熱壓滅菌10分鐘，得到終乳。平均粒徑=196.9nm, PI = 0. 052，包封率=96. 7%實施例3取大豆油和MCT，按1 1製備混合液態油20g，取大豆磷脂1. 4g、PEG_DSPE0. 4g、油酸0. 05g、依託泊苷0. Ig加入到上述混合油相中，超聲水浴加熱(50°C )溶解，得油相。取甘油2. 25g加入70ml注射用水中溶解作為水相，在70°C水浴中，將油相加入水相，邊加邊攪拌，15000rpm剪切20min，得到初乳，調pH約4. 5 5，補足注射用水至100ml，在微射流儀， 壓力SOMPa乳勻5遍，灌裝，通氮氣，熔封，121°C旋轉熱壓滅菌10分鐘，得到終乳。平均粒徑=191.7nm, PI = 0. 082，包封率=97. 8%實施例4取大豆油和MCT，按1 1製備混合液態油20g，取大豆磷脂1. 8g、PEG_DSPE0. 3g、 去氧膽酸0.08g、依託泊苷0. Ig加入到上述混合油相中，超聲水浴加熱(60°C )溶解，得油相。取甘油2. 25g、Poloxamerl880. 5g加入70ml注射用水中溶解作為水相，在70°C水浴中， 將油相加入水相，邊加邊攪拌，15000rpm剪切20min，得到初乳，調pH約4. 5 5，補足注射用水至100ml，在微射流儀，壓力SOMPa乳勻5遍，灌裝，通氮氣，熔封，121°C旋轉熱壓滅菌 10分鐘，得到終乳。平均粒徑=205.4nm, PI = 0. 078，包封率=91. 6%實施例5取大豆油和MCT，按1 1製備混合液態油20g，取大豆磷脂2. 2g、PEG_DSPE0. 3g、 維生素Elg，依託泊苷0. 2g加入到上述混合油相中，超聲水浴加熱(70°C)溶解，得油相。 取甘油2. 25g、Tween800. 5g加入70ml注射用水中溶解作為水相，在70°C水浴中，將油相加入水相，邊加邊攪拌，15000rpm剪切20min，得到初乳，調pH約4. 5 5，補足注射用水至 100ml，在微射流儀，壓力SOMPa乳勻5遍，灌裝，通氮氣，熔封，121°C旋轉熱壓滅菌10分鐘， 得到終乳。平均粒徑=213.4nm, PI = 0. 092，包封率=92. 3%實施例6取大豆油和MCT，按1 1製備混合液態油30g，取大豆磷脂1. 5g、PEG_DSPE0. 3g、 依託泊苷0. Ig加入到上述混合油相中，超聲水浴加熱(70°C)溶解，得油相。取甘油2. 25g、 油酸鈉0. 5g加入70ml注射用水中溶解作為水相，在80°C水浴中，將油相加入水相，邊加邊攪拌，15000rpm剪切20min，得到初乳，調pH約4. 5 5，補足注射用水至100ml，採用高壓均質機，壓力1300bar均質5遍，灌裝，通氮氣，熔封，121°C旋轉熱壓滅菌10分鐘，得到終乳。平均粒徑=195.9nm, PI = 0. 137，包封率=89. 3%實施例7取大豆油和MCT，按1 1製備混合液態油30g，取卵磷脂2. 5g、PEG_DSPE0. 5g、膽固醇0. 05g、依託泊苷0. 3g加入到上述混合油相中，超聲水浴加熱(70°C )溶解，得油相。取甘油2. 25g、油酸鈉0. 5g、維生素C 0. Ig加入70ml注射用水中溶解作為水相，在80°C水浴中，將油相加入水相，邊加邊攪拌，15000rpm剪切20min，得到初乳，調pH約4. 5 5，補足注射用水至IOOml，採用高壓均質機，壓力1300bar均質5遍，灌裝，通氮氣，熔封，121°C旋轉熱壓滅菌10分鐘，得到終乳。平均粒徑=197.3nm, PI = 0. 103，包封率=92. 5%實施例8 總體液平衡反向透析法測定釋放度採用與血漿pH接近的pH7. 4的磷酸鹽緩衝液(取磷酸二氫鉀1. 36g，加0. lmol/L 的NaOH溶液79ml，用水稀釋至200ml，即得)為釋放介質。照中國藥典溶出度測定法(2005版二部附錄)(C第二法)，取500ml釋放介質置溶出杯中，轉速IOOr · mirT1，溫度37°C，將7 個大小形狀相同，內含2ml釋放介質的透析袋完全浸入釋放介質中，平衡池。精密吸取載藥乳劑適量加至釋放介質中。分別於預定取樣時間各取出一個透析袋，倒出袋內溶液，用HPLC 法測定袋內介質中的藥物濃度。待7個透析袋都取出後，取溶出杯中溶液，同法測定杯中介質中的藥物濃度，作為藥物從微乳中完全釋放後介質中的藥物總濃度。計算累計釋藥百分率，實施例3和實施例6的體外釋放的釋放百分率-時間曲線見圖2。實施例9 大鼠藥代動力學試驗大鼠靜脈給藥5mg/kg依託泊苷普通注射劑和實施例3中的依託泊苷長循環乳劑組中，每個組6隻成年Wistar大鼠，雌雄各半。於靜注給藥後0. 033,0. 167,0. 333,0. 667、 1、1· 5、2、2· 5、3、3. 5、4、5h眼眶後靜脈叢取血0. 3ml，樣品經處理後進行LC-UV分析測定全血藥物濃度，試驗數據見表1和圖3、圖4。表1大鼠分別靜脈注射5mg/kg的普通注射劑、PEG化長循環乳劑後全血藥物濃度數據比較(n = 6)
悄^ 時(
全血藥物濃度(Wg/ml)
普通注射劑
PEG化長循環乳劑
權利要求
1.一種依託泊苷長循環乳劑，其由依託泊苷、液態油、乳化劑、PEG修飾的酯類和注射用水組成。
2.根據權利要求1所述的依託泊苷長循環乳劑，其含有以下成分依託泊苷液態油乳化劑PEG修飾的脂類附加劑注射用水0. 01 lwt% 5 40wt% 1 ~ 5wt % 0. 01 5wt% 0. 5 20wt% 餘量
3.根據權利要求2所述的依託泊苷長循環乳劑，其含有以下成分依託泊苷液態油乳化劑PEG修飾的脂類附加劑注射用水
4.根據權利要求1 植物油、鏈長在C8 C100. 01 0. 5wt% 10 30wt% 1 3wt% 0. 01 lwt% 0. 5 IOwt % 餘量3任一項所述的依託泊苷長循環乳劑，其中所述液態油選自天然之間的中等鏈長脂肪酸甘油酯、維生素E、維生素A、維生素脂類及其任意組合。優選的是，該液態油為大豆油、鏈長在C8 Cltl之間的中等鏈長脂肪酸甘油酯或維生素E。
5.根據權利要求1 3任一項所述的依託泊苷長循環乳劑，其中所述包括脂溶性乳化劑和水溶性乳化劑。所述脂溶性乳化劑選自磷脂類、膽固醇、聚山梨酯類及其任意組合；所述水溶性乳化劑選自聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物類、聚氧乙烯脂肪酸酯類、聚氧乙烯脂肪醇醚類及其任意組合。優選的是，卵磷脂、豆磷脂、TweenSO脂溶性乳化劑和Pluronic F68水溶性乳化劑。
6.根據權利要求1 3任一項所述的依託泊苷長循環乳劑，其中所述PEG修飾的酯類為聚乙二醇-二硬脂醯磷脂醯乙醇胺(PEG-DSPE)，聚乙二醇-聚己內酯(PEG-PCL)，聚乙二醇-聚乙交酯丙交酯(PEG-PLGA)，聚乙二醇-聚乳酸(PEG-PLA)，聚乙二醇-聚十六烷基氰基丙烯酸酯(PEG-PHDCA)。優選聚乙二醇-二硬脂醯磷脂醯乙醇胺(PEG-DSPE)。
7.根據權利要求1 3任一項所述的依託泊苷長循環乳劑，其中所述的附加劑選自滲透壓調節劑、界面膜穩定劑、抗氧化劑及其任意組合物。
8.根據權利要求1 7任一項所述的依託泊苷長循環乳劑的製備方法，該方法包括以下步驟(1)將依託泊苷、脂溶性乳化劑、PEG修飾的脂類、脂溶性抗氧劑加入到液態油中，超聲並加熱(40°C 80°C)，使上述固體成分溶解分散，構成油相。(2)將水溶性乳化劑、水溶性界面膜穩定劑、水溶性抗氧劑、滲透壓調節劑加入到注射用水中，超聲並加熱(40°C 80°C )，使上述固體成分溶解分散，構成水相。(3)在40°C 80°C的溫度下，在攪拌或/和高剪切條件下將所述油相和水相混合，以製備初乳，調PH，補足注射用水。(4)對所述的初乳進行高壓均質處理或高壓微射流均質處理，灌裝，通氮氣，熔封或密封，高溫旋轉熱壓滅菌，得到終乳。
全文摘要
本發明屬於藥物製劑領域，涉及一種可用於注射的依託泊苷長循環乳劑及其製備方法。該依託泊苷長循環乳劑由依託泊苷、液態油、乳化劑、PEG修飾的酯類等組成，具有包封率高、穩定性好、毒性低的特點。本發明製備的依託泊苷長循環乳劑提高了依託泊苷的溶解度和穩定性，降低了其血管刺激性，延長了藥物在血液中的循環時間，改善體內分布，從而提高了藥物的療效。本發明的依託泊苷長循環乳劑的製備方法，解決了水溶性脂溶性都比較差的藥物的載藥問題，存放期間穩定，無藥物析出。該製備工藝簡單、成本低廉，適合工業化生產。
文檔編號A61P35/00GK102247320SQ20101017799
公開日2011年11月23日 申請日期2010年5月21日 優先權日2010年5月21日
發明者司端運, 尹東東, 王杏林, 陸榕 申請人:天津藥物研究院