植物頂端發育相關的cDNA以及減弱植物頂端優勢增加分枝數目的新方法
2023-06-09 10:31:51
專利名稱：植物頂端發育相關的cDNA以及減弱植物頂端優勢增加分枝數目的新方法
技術領域：
本發明涉及植物基因工程領域，具體地說，涉及一種來自於穀子未成熟種子的cDNA文庫的與植物頂端發育相關的cDNA(pf40)。本發明還涉及利用所述基因減弱植物頂端優勢增加分枝數目的新方法。
背景技術：
植物主莖頂端生長抑制側芽的現象稱之為頂端優勢。但植物之間頂端優勢存在著明顯的差異，很早以來人們根據需要對植物頂端優勢進行幹擾控制，如棉花整枝、果樹修剪等措施來減弱頂端優勢，以有利於農業生產，研究表明頂端優勢與植物體內激素的調節有關。植物體內存在自上而下的生長素濃度梯度和自下而上的細胞分裂素濃度梯度，兩者協調作用，維持著植物的正常生長和分枝。
為了研究植物頂端優勢形成的機理，人們利用了突變體和轉基因技術。Klee等人將農桿菌中生長素合成基因導入植物，結果引起轉基因植物內源生長素含量明顯提高，頂端優勢增強(Klee et al.，1987；Romano et al.，1993，1995)。Medford等將農桿菌中細胞分裂素合成基因ipt導入菸草，引起轉基因菸草中細胞分裂素含量增加，頂端優勢減弱，側芽增多(Medford et al 1989)，Chaughurg等獲得擬南芥突變體amp1，其細胞分裂素水平比野生型高6倍，其側枝顯著增多(Chaughurg et al 1991)。Romano等人將來自真菌的編碼催化生長素生成賴氨酸酶的基因iaaL轉化菸草，結果游離的IAA水平降低，頂端優勢減弱(Romanoet al 1991)。這些研究都說明IAA和細胞分裂素的含量與植物頂端優勢的形成有密切關係。
1995年Abel等對具有葉片發生改變，側芽顯著增加，生長素不敏感的擬南芥突變體AXR1的分析研究結果表明，突變體中的被IAA迅速誘導的基因對生長素的敏感性下降，說明AXR1蛋白是生長素信號傳遞所必須的(Abel etal，1995；Timpte et al.，199)。Stirnberg等人通過比較野生型和IAA不敏感突變體axr1-12腋芽的發育以及側生花序對生長素的敏感性，發現axr1-12突變體不影響早期腋芽的發育，卻促進後期腋芽的生長，同時也使側生花序能夠抵抗生長素的抑制作用。說明生長素對側芽發育的影響是在腋生分生組織形成後以及一些腋生葉片原基形成後(Stirnberg et al，1999)。
發明內容
本發明目的之一是提供一種與植物頂端發育相關的新的cDNA，稱之為pf40基因，它來自於穀子未成熟種子的cDNA文庫。該cDNA與植物生長素調節有關。
本發明的另一目的是提供一種利用所述基因減弱植物頂端優勢增加分枝的新方法。
發明詳述本發明從穀子花序cDNA文庫中篩選得到一個cDNA克隆，稱之為pf40基因。該cDNA的序列長度為1274bp，為雙鏈核酸類型，線性，其序列示於附
圖1。通過三大資料庫的檢索，發現是一個未見報導的新基因。Southern印跡研究表明該基因在穀子基因組中以單拷貝存在，而菸草中不存在該基因。Northern印跡和RT-PCR分析pf40基因的表達模式，表明其在穀子根中不表達，在葉片、花，莖等其他組織中均可檢測到其轉錄產物的存在。
本發明構建了含有pf40 cDNA的菸草表達載體。在一個優選的實施方式中，其表達盒是由花椰菜花葉病毒35S啟動子和來自胭脂鹼合成酶(nos)基因的轉錄終止區域構成，選擇標記基因為新黴素磷酸轉移酶II(NPTII)。所述的表達載體優選的是重組質粒pBI40S，其中pf40 cDNA正向插入並且在35S啟動子驅動下。
本發明還構建了含有pf40 cDNA的穀子表達載體。在一個優選的實施方式中，其表達盒是由玉米花粉特異啟動子和來自胭脂鹼合成酶(nos)基因的轉錄終止區域構成，選擇標記基因為潮黴素磷酸轉移酶基因，編碼氨基核糖苷4-磷酸轉移酶APH(4)--1。所述的表達載體優選的是pROK219HPF40。
本發明將上述含有所述pf40 cDNA的重組表達載體轉化植物，如菸草和穀子，獲得了頂端優勢減弱，分枝增加的轉基因植物。
在一個優選的實施方式中，將含有所述cDNA的表達載體轉化菸草，獲得的植株頂端優勢減弱，側枝叢生，葉片衰老延遲，植株矮化。
在另一個優選的實施方式中，將含有所述cDNA的表達載體轉化穀子，獲得的植物比對照分枝數目顯著增加。
有益效果本發明找到了與植物頂端發育相關的cDNA(稱為pf40基因)，將所述的基因轉化到植物中可使植物本身減弱頂端優勢，增加分枝數目。本發明提供了一種利用所述基因減弱植物頂端優勢增加分枝的新方法。有利於農業生產。
附圖簡述
圖1表示來自穀子的pf40 cDNA序列，以及推導的胺基酸序列。
圖2表示含有pf40 cDNA的菸草表達載體構建過程。
圖3R0代轉基因菸草的Southern雜交，部分轉pBI40S菸草植株的Southern雜交檢測結果，其中2.陽性對照；3.未轉化的菸草對照；4-16.轉化的菸草。
圖4R0代轉基因菸草的RT-PCR分析。RT-PCR分析PF40基因在轉pBI40S菸草中的轉錄情況，其中1.λ/H標記物；2.未轉化的菸草；3.陽性質粒；4-9.轉化的菸草。
圖5轉基因菸草的表型分析，其中A對照株；B轉pBI40S植株，箭頭所指是主莖。
圖6轉基因菸草的表型。
圖7表示含有pf40 cDNA的穀子表達載體構建過程。
圖8轉基因穀子的表型分析。左非轉基因植株；右上右下轉pF40正義載體植株。
下面是實現本發明的具體實施方式
。
實施例1植物頂端優勢相關基因pf40的克隆選取穀子授粉後5、7及12天的未成熟種子，材料混合後，提取總RNA，磁珠法富集mRNA(Promega)，採用Stratagene公司cDNA Synthesis Kit反轉錄合成cDNA，雙鏈cDNA補平後，連接EcoRI adapter，將其構建至λZAPII(Stratagene公司)載體上，使用ZAP-cDNA Gigapack III Gold CloningKit(Stratagene公司)進行體外包裝。包裝完畢後，加入SM溶液和氯仿，離心後，上清即為構建好的文庫。取1μl文庫上清液進行滴度測定，結果表明構建的文庫容量為2×107pfu/ml。原始文庫構建完成後，擴增一次備用。
以來源於馬鈴薯的花粉發育相關基因SB401cDNA(Liu JQ等，Plant MolBiol 1997，33291～300)在大腸桿菌中表達的蛋白免疫兔子，獲得抗血清進行抗原-抗體反應篩選cDNA表達文庫，雜交技術為公知技術，經過兩輪篩選後，得到陽性克隆。將所得陽性克隆利用輔助噬菌體從λDNA上環化得到重組質粒，利用通用引物T7對重組質粒上的插入片段進行序列分析，該序列示於
圖1中，稱之為pf40。
實施例2用於菸草中表達pf40的表達載體的構建和轉化農桿菌表達盒是由花椰菜花葉病毒35S啟動子和來自胭脂鹼合成酶(nos)基因的轉錄終止區域(Depickere等人(1982)J.Mol.Appl.Genet.1561-570)組成，選擇標記基因為新黴素磷酸轉移酶II(NPTII)。具體構建過程示於圖2將pf40 cDNA用限制性內切酶KpnI和SmaI從文庫構建載體λZAPII上切下，回收片段，構建至pGEMEX-3Z載體上(購自Promega公司)，得到中間載體pGEMEX-3Z40，PstI酶切後，T4DNA聚合酶補平，再用SacI酶切後，回收切下的cDNA片段；將雙元表達載體pBI121((購自Clontech公司)用SacI和SmaI雙酶切，除去報告基因GUS，回收載體大片段，將載體和目的片段連接，轉化後，得到構建在pBI121載體上，由35S啟動子驅動的pf40 cDNA正向插入的重組質粒pBI40S。將pBI40S採用凍融法直接轉化農桿菌LBA4404，獲得含有重組質粒pBI40S的農桿菌LBA4404(pBI40S)。農桿菌轉化技術為公知技術。
實施例335S啟動子/pf40表達載體轉化菸草取溫室生長的菸草葉片，流水下衝洗，再用蒸餾水洗滌；70％的乙醇滅菌30秒後，無菌水衝洗一次；2.5％次氯酸鈉處理8～10分鐘；無菌水衝洗三次；將滅菌的菸草葉片切去邊緣和主要葉脈，切成0.4×0.6cm2大小；切好的外植體在農桿菌LBA4404(pBI40S)菌液中浸泡10分鐘；用無菌濾紙吸乾植物材料表面的菌液，轉入上鋪一層濾紙的MS基本培養基，28℃暗培養；三天後，將材料轉到含有抗生素的分化培養基(MS+3mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+Kan75～100μg/ml+Cb(羧苄青黴素)500μg/ml)中進行培養；待抗性芽生長至2～3cm高時，切下小芽轉入生根培養基(MS基本培養基+Kan 100μg/ml+Cb 500μg/ml)中誘導生根。
實施例4轉基因菸草葉片中RNA的檢測提取轉基因菸草葉片總RNA，採用Oligo(dT)引物進行反轉錄合成第一鏈cDNA。RNA的提取及反轉錄採用現有公知的技術。以此cDNA為模板，根據PF40 cDNA兩端的序列設計引物P15』GGTGTTCTACAGGGCGCTGATGCT3』和P25』CTGCTTTGACAGCTCGCTTCTGGC 3』進行PCR擴增，擴增條件為94℃變性1分鐘；55℃退火1分鐘；72℃延伸1分鐘；擴增循環數30。結果參見圖4。圖中結果表明目的基因在菸草中得到正常轉錄。轉基因菸草植株表現頂端生長受到抑制，頂端優勢減弱，側枝發育(圖5，圖6)。
實施例5用於穀子中表達pf40的表達載體的構建表達盒是由玉米花粉特異啟動子和來自胭脂鹼合成酶(nos)基因的轉錄終止區域(Depickere等人(1982)J.Mol.Appl.Genet.1561-570)組成，選擇標記基因為潮黴素磷酸轉移酶基因，編碼氨基核糖苷4-磷酸轉移酶APH(4)--1。具體構建過程示於圖7。
用HindIII將潮黴素磷酸轉移酶基因2.0Kb從pUChyg(Gritz，L and DaviesJ.1983)載體上切下來，然後用HindIII單切ROK219載體(其製備見下文)，將潮黴素磷酸轉移酶基因與經HindIII單切的ROK219載體連接得到重組質粒pROK219H。
將PF40質粒(同實施例2中的pGEMEX-3Z40)用限制性內切酶KpnI和SacI雙酶切，回收片段，與經KpnI和SacI消化的pROK219H載體連接，得到pROK219HPF40。
製備過程質粒pBI121(購自Clontech公司)用HindIII/XbaI雙酶切，將得到的片段即35S啟動子插入到質粒pUC19(Messing J.1983)HindIII/XbaI位點，得到質粒pUC35S，將pBI121用SacI/EcoRI雙酶切，將得到的小片段插入到質粒pUC35S的SacI/EcoRI位點，得到質粒ROK219。
實施例635S啟動子/pf40表達載體轉化穀子取溫室生長的穀子幼穗，70％的乙醇滅菌30秒後，無菌水衝洗一次；2.5％次氯酸鈉處理8～10分鐘；無菌水衝洗三次；剝離幼穗，切成2mm長，在LS培養基(添加物0.69g/l脯氨酸，0.8g/L酸水解酪蛋白，4mg/LAgNO3，2.5mg/L2，4-D，0.5mg/LKT)誘導愈傷，用於基因槍轉化。基因槍轟擊採用BioRad BiolisticPDS-1000/Helium系統。在基因槍轟擊前4小時，將愈傷切成小塊，轉移到含0.4M甘露醇的培養基A上，將實施例5製備的pROK219HPF40用於轟擊，然後，使愈傷組織在該培養基上繼續培養過夜，然後轉移到培養基A上培養4-6天，轉移至含潮黴素(20mg/L)抗性培養基A上，每周繼代一次，2個月後，轉化至分化培養基上(LS培養基，含2mg/L6-BA+0.2mg/L1NAA)。
愈傷分化分化培養基上一個月的時間長出幼芽。
愈傷生根1/2 LS培養基，誘導生根一個月。
轉基因穀子植株表現分櫱增加(圖8)。
實施例7轉基因菸草中生長素和細胞分裂素測定樣品處理取轉基因菸草主枝莖尖、側枝莖尖和根各1g，加4ml PBS提取液(0.8％NaCl，0.02％KH2PO4，0.296％Na2HPO4·12H2O，pH7.5)，冰浴下研磨成勻漿。4℃下提取4h，3500～4000rpm離心15min，取上清液。上清液過C18柱純化後，在40～45℃水浴下用N2氣吹乾，用樣品稀釋液(100ml PBS中加0.1mlTween-20，0.1g白明膠)定容，搖勻後測定。
樣品測定包被按照給定的稀釋倍數進行稀釋，各激素的包被條件為IAA4℃過夜；ZR+Z為37℃ 3hr；洗板後，加標準物，待測樣和抗體；競爭條件IAA4℃4hr，ZR+Z為37℃ 0.5hr；洗板；加IgG-HRP按給定的稀釋倍數稀釋IgG-HRP，條件為37℃ 30min；洗板；加底物顯色，用酶聯免疫儀測定。
激素測定結果(表1)表明，轉基因菸草頂端組織生長素水平顯著比對照降低，根中生長素水平明顯提高。pf40基因在頂端優勢形成中起激素調節作用。
表1菸草植株生長素和細胞分裂素的含量
參考文獻Abel S，Nguyen MD，Theologis A(1995)The PS-IAA4/5-like family of earlyauxin-inducible mRNAs in Arabidopsis thaliana.J Mol Biol 251533-549。
Cline MG(1991)Apical dominance.Bot Rev 57318-358。
Cline MG(1994)The role of hormones in apical dominancenew approaches toan old problem in plant development.Physiol Plant 90230-237。
Chaudhury AM，Letham S et al.(1993)amp1a mutant with high cytokininlevels and altered embryonic pattern，faster vegetative growth，constitutivephotormorphogenesis and precocious flowering.Plant J 4907-916。
Klee HJ，Horsch RB et al.(1987)the effects of overproduction of twoAgrobacterium tumefaciens T-DNA auxin biosynthetic gene products in transgenicpetunia plants.Genes Dev 186-96。
Liu JQ，Seul U and Thompson R.(1997)Cloning and characterization of apollen-specific cDNA encoding a glutamic-acid-rich protein(GARP)from potatoSolanum Berthaultii.Plant Mol Biol，33291～300Medford JI，Horgan R et al.(1989)Alterations of endogenous cytokinins intransgenic plants using a chimeric isopentenyl transferase gene.Plant Cell 1403-413。
Philips IDJ(1975)Apical dominance.Annu Rev Plant Physiol 26341-367。
Romano CP，Cooper ML，Klee HJ(1993)Uncoupling auxin and ethylene effectsin transgenic tobacco and Arabidopsis plants.Plant Cell 5181-189。
Romano CP，Hein MB，Klee HJ(1991)Inactivation of auxin in tobaccotransformedwith the indoleacetic acid-lysine synthetase gene of Pseudomonassavastanoi.Genes Dev 5438-446。
Romano CP，Robson PRH，等人(1995)Transgene-mediated auxinoverproduction in Arobidopsishypocotyls elongation phenotype and interactionswith the hy6-1 hypocotyl elongation and axr1 auxin-resistant mutants.Plant Mol Biol271071-207。
Stirnberg P，Chatfield SP and Leyser HMO(1999)AXR1 acts after lateral budformation to inhibit lateral bud growth in Arobidopsis.Plant Physiol 121839-847。
Timpte C，Lincoln C et al.(1995)The AXR1 and AUX1 genes of Arobidopsisfunction in separate auxin response pathways.Plant J 8；561-569。
Trewavas A(1981)How do plant growth substances work？Plant Cell Environ4203-228。
Gritz，L and Davies，J(1983)Plasmid-encoded hygromycin B resistance thesequence of hygromycin B phosphotransferase gene and its expression in Escherichiacoli and Saccharomyces cerevisiae.Gene 25179-188。
序列表紙件(1)序列表110中國農業大學120植物頂端發育相關的cDNA以及減弱植物頂端優勢增加分枝數目的新方法130PCT08-11602170PatentIn version 3.121012111274212DNA213rice220
221CDS222(146)..(979)223
4001gttcaattca atcactcccc cagccatcgc ctcgcgcagg ctcacgacaa gctcaccctc 60ctctccctcc cctcccctcc ccttccccgc ttcagcctcg aatcccccaa agcccaaacc 120ctagcgtagg ctgcgtgggg ggaga atg gag tcg cag gtg ttc tac agg gcg 172Met Glu Ser Gln Val Phe Tyr Arg Ala1 5ctg atg ctc tcg gcc gtc ggc ggg ctc agc acc gcc atc ggt gcg ctg 220Leu Met Leu Ser Ala Val Gly Gly Leu Ser Thr Ala Ile Gly Ala Leu10 15 20 25ttt gtg gtt ttg aat cct gcc cct aac ctt aag atg ctt ggg ctt ctc 268Phe Val Val Leu Asn Pro Ala Pro Asn Leu Lys Met Leu Gly Leu Leu30 35 40cag ggt ttt gct gct ggg ctt atg ctg agc atc tcc ttt cta gac ttg 316Gln Gly Phe Ala Ala Gly Leu Met Leu Ser Ile Ser Phe Leu Asp Leu45 50 55gca cac aat gcg atg aat tct att ggc ttc ttg aag ggc aac ctc tgg 364Ala His Asn Ala Met Asn Ser Ile Gly Phe Leu Lys Gly Asn Leu Trp60 65 70ttt ttt gca gga gtt ctt ttc ttt ggt ttt atc gtc aaa ttt att cca 412Phe Phe Ala Gly Val Leu Phe Phe Gly Phe Ile Val Lys Phe Ile Pro75 80 85gag cca gac ttt tca cca gaa gct gat cca agt gag aaa aag gct gat 460Glu Pro Asp Phe Ser Pro Glu Ala Asp Pro Ser Glu Lys Lys Ala Asp90 95 100 105gat ggt ggc tcg ggt aaa gat atg atg aga aaa cat cgc cgg caa gtg 508Asp Gly Gly Ser Gly Lys Asp Met Met Arg Lys His Arg Arg Gln Val110 115 120tta ttc agt ggt att atc act gct gtt gga att agc ttg cac aat ttt 556Leu Phe Ser Gly Ile Ile Thr Ala Val Gly Ile Ser Leu His Asn Phe125 130 135cca gag gga atg gct gta ttt ctt ggg tct gtg aag ggt ctt cat gtg 604Pro Glu Gly Met Ala Val Phe Leu Gly Ser Val Lys Gly Leu His Val140 145 150ggt ctg aac ttg gct gtt gct att gct tta cat aac ata cca gag ggg 652Gly Leu Asn Leu Ala Val Ala Ile Ala Leu His Asn Ile Pro Glu Gly155 160 165gtt gct gta gct ctt cca att tat ttt gct acc aag agc aaa tgg aag 700Val Ala Val Ala Leu Pro Ile Tyr Phe Ala Thr Lys Ser Lys Trp Lys170 175 180 185
序列表紙件(1)gca ttt tat atg gca gca gga tcc ggt ttg gcc gag cca gta gga gta 748Ala Phe Tyr Met Ala Ala Gly Ser Gly Leu Ala Glu Pro Val Gly Val190 195 200att gct gta gct tac ttg ttt cca agc agc ttg aat cct gac att ctt 796Ile Ala Val Ala Tyr Leu Phe Pro Ser Ser Leu Asn Pro Asp Ile Leu205 210 215gaa ggt tta ctt gga tct gtt ggt ggt gtt atg gct ttc ctc act ctg 844Glu Gly Leu Leu Gly Ser Val Gly Gly Val Met Ala Phe Leu Thr Leu220 225 230cat gaa atg ctg cct ctt gca ttt gac tat tgt ggc cag aag cga gct 892His Glu Met Leu Pro Leu Ala Phe Asp Tyr Cys Gly Gln Lys Arg Ala235 240 245gtc aaa gca gtc ttt gtg ggc atg gcc tgc atg tct gca agc ttg tac 940Val Lys Ala Val Phe Val Gly Met Ala Cys Met Ser Ala Ser Leu Tyr250 255 260 265ttc ttg gag atc agc cta cca aag gag ata agc ttg tag catcacatct 989Phe Leu Glu Ile Ser Leu Pro Lys Glu Ile Ser Leu270 275gtagcgccgc aagtcctcca cagtgtcaca gcagcatctg aattctaaag ctgagctttt1049cagtcagtgt gttcctggag gatttcatcc gacaatgtgt ttaggcagta ggcactacac1109caaaacatca gaaaggagcc aggaacaatg gctacatgta tcggaggggg gaaactgcat1169ttccccagga tgtaaaaact gaattagttg ccagacgatt cgtggcaact gtaacaatcg1229aaaaattgta gtcctcagtt ggtcgacaaa aaaaaaaaaa aaaaa12742102211277212PRT213rice4002Met Glu Ser Gln Val Phe Tyr Arg Ala Leu Met Leu Ser Ala Val Gly1 5 10 15Gly Leu Ser Thr Ala Ile Gly Ala Leu Phe Val Val Leu Asn Pro Ala20 25 30Pro Asn Leu Lys Met Leu Gly Leu Leu Gln Gly Phe Ala Ala Gly Leu35 40 45Met Leu Ser Ile Ser Phe Leu Asp Leu Ala His Asn Ala Met Asn Ser50 55 60Ile Gly Phe Leu Lys Gly Asn Leu Trp Phe Phe Ala Gly Val Leu Phe65 70 75 80Phe Gly Phe Ile Val Lys Phe Ile Pro Glu Pro Asp Phe Ser Pro Glu85 90 95Ala Asp Pro Ser Glu Lys Lys Ala Asp Asp Gly Gly Ser Gly Lys Asp100 105 110Met Met Arg Lys His Arg Arg Gln Val Leu Phe Ser Gly Ile Ile Thr115 120 125Ala Val Gly Ile Ser Leu His Asn Phe Pro Glu Gly Met Ala Val Phe
序列表紙件(1)130 135 140Leu Gly Ser Val Lys Gly Leu His Val Gly Leu Asn Leu Ala Val Ala145 150 155 160Ile Ala Leu His Asn Ile Pro Glu Gly Val Ala Val Ala Leu Pro Ile165 170 175Tyr Phe Ala Thr Lys Ser Lys Trp Lys Ala Phe Tyr Met Ala Ala Gly180 185 190Ser Gly Leu Ala Glu Pro Val Gly Val Ile Ala Val Ala Tyr Leu Phe195 200 205Pro Ser Ser Leu Asn Pro Asp Ile Leu Glu Gly Leu Leu Gly Ser Val210 215 220Gly Gly Val Met Ala Phe Leu Thr Leu His Glu Met Leu Pro Leu Ala225 230 235 240Phe Asp Tyr Cys Gly Gln Lys Arg Ala Val Lys Ala Val Phe Val Gly245 250 255Met Ala Cys Met Ser Ala Ser Leu Tyr Phe Leu Glu Ile Ser Leu Pro260 265 270Lys Glu Ile Ser Leu27權利要求
1.一種與植物頂端發育相關的cDNA(pf40)，其序列如下所示1gttcaattcaatcactcccccagccatcgcctcgcgcaggctcacgacaagctcaccctc61ctctccctcccctcccctccccttccccgcttcagcctcgaatcccccaaagcccaaacc121 ctagcgtaggctgcgtggggggagaATGGAGTCGCAGGTGTTCTACAGGGCGCTGATGCT1M E S Q V F Y R A L M L181 CTCGGCCGTCGGCGGGCTCAGCACCGCCATCGGTGCGCTGTTTGTGGTTTTGAATCCTGC13 S A V G G L S T A I G A L F V V L N P A241 CCCTAACCTTAAGATGCTTGGGCTTCTCCAGGGTTTTGCTGCTGGGCTTATGCTGAGCAT33 P N L K M L G L L Q G F A A G L M L S I301 CTCCTTTCTAGACTTGGCACACAATGCGATGAATTCTATTGGCTTCTTGAAGGGCAACCT53S F L D L A H N A M N S I G F L K G N L361 CTGGTTTTTTGCAGGAGTTCTTTTCTTTGGTTTTATCGTCAAATTTATTCCAGAGCCAGA73W F F A G V L F F G F I V K F I P E P D421 CTTTTCACCAGAAGCTGATCCAAGTGAGAAAAAGGCTGATGATGGTGGCTCGGGTAAAGA93F S P E A D P S E K K A D D G G S G K D481 TATGATGAGAAAACATCGCCGGCAAGTGTTATTCAGTGGTATTATCACTGCTGTTGGAAT113M M R K H R R Q V L F S G I I T A V G I541 TAGCTTGCACAATTTTCCAGAGGGAATGGCTGTATTTCTTGGGTCTGTGAAGGGTCTTCA133S L H N F P E G M A V F L G S V K G L H601 TGTGGGTCTGAACTTGGCTGTTGCTATTGCTTTACATAACATACCAGAGGGGGTTGCTGT153V G L N L A V A I A L H N I P E G V A V661 AGCTCTTCCAATTTATTTTGCTACCAAGAGCAAATGGAAGGCATTTTATATGGCAGCAGG173A L P I Y F A T K S K W K A F Y M A A G721 ATCCGGTTTGGCCGAGCCAGTAGGAGTAATTGCTGTAGCTTACTTGTTTCCAAGCAGCTT193S G L A E P V G V I A V A Y L F P S S L781 GAATCCTGACATTCTTGAAGGTTTACTTGGATCTGTTGGTGGTGTTATGGCTTTCCTCAC213N P D I L E G L L G S V G G V M A F L T841 TCTGCATGAAATGCTGCCTCTTGCATTTGACTATTGTGGCCAGAAGCGAGCTGTCAAAGC233L H E M L P L A F D Y C G Q K R A V K A901 AGTCTTTGTGGGCATGGCCTGCATGTCTGCAAGCTTGTACTTCTTGGAGATCAGCCTACC253V F V G M A C M S A S L Y F L E I S L P961 AAAGGAGATAAGCTTGTAGcatcacatctgtagcgccgcaagtcctccacagtgtcacag273K E I S L *1021 cagcatctgaattctaaagctgagcttttcagtcagtgtgttcctggaggatttcatccg1081 acaatgtgtttaggcagtaggcactacaccaaaacatcagaaaggagccaggaacaatgg1141 ctacatgtatcggaggggggaaactgcatttccccaggatgtaaaaactgaattagttgc1201 cagacgattcgtggcaactgtaacaatcgaaaaattgtagtcctcagttggtcgacaaaa1261 aaaaaaaaaaaaaa
2.一種表達載體，含有權利要求1所述基因和一種啟動子。
3.根據權利要求2所述的表達載體，其中所述啟動子是組成型啟動子。
4.一種減弱植物頂端優勢增加分枝數目的方法，包括將權利要求2所述的表達載體轉化植物。
5.根據權利要求4所述的減弱植物頂端優勢增加分枝數目的方法，其中所述的植物是雙子葉和單子葉植物。
6.根據權利要求5所述的減弱植物頂端優勢增加分枝數目的方法，其中所述的植物是菸草和穀子。
全文摘要
本發明公開了一種新的與植物頂端發育相關的cDNA(pf40)，該cDNA是從穀子授粉後的未成熟種子cDNA文庫中篩選得到。該cDNA(pf40)與植物生長素調節有關。利用轉基因技術將所述基因轉化到植物中可減弱植物頂端優勢，增加分枝數目。適用於需要減弱主莖生長，增加分枝數目的植物。
文檔編號A01H1/00GK1523109SQ0315663
公開日2004年8月25日 申請日期2003年9月5日 優先權日2003年9月5日
發明者敖光明, 趙倩, 於靜娟, 馮曉燕, 劉穎慧 申請人:中國農業大學