用NOTCH和PD-1或PD-L1抑制劑的組合治療的製作方法

2023-06-09 20:00:36

用notch和pd-1或pd-l1抑制劑的組合治療
1.本技術是申請日為2017年5月16日的中國專利申請201780044786.9「用notch和pd-1或pd-l1抑制劑的組合治療」的分案申請。
技術領域
2.本發明涉及用4,4,4-三氟-n-[(1s)-2-[[(7s)-5-(2-羥乙基)-6-氧代-7h-吡啶並[2,3-d][3]苯並氮雜-7-基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]丁醯胺或其藥學上可接受的鹽或水合物(化合物a)和程序性死亡受體1(pd-1)抑制劑或程序性死亡受體配體1(pd-l1)抑制劑的癌症治療，以及使用組合治療癌症的方法。


背景技術：

[0003]
4,4,4-三氟-n-[(1s)-2-[[(7s)-5-(2-羥乙基)-6-氧代-7h-吡啶並[2,3-d][3]苯並氮雜-7-基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]丁醯胺或其藥學上可接受的鹽或水合物是notch途徑信號傳導抑制劑化合物。notch信號傳導在發育和組織穩態期間起重要作用。由於配體和/或受體的突變、擴增或過表達導致的notch信號傳導的失調涉及許多惡性腫瘤。抑制notch信號傳導是開發癌症療法的潛在目標。化合物a及製備和使用該化合物的方法(包括用於治療t細胞急性淋巴細胞白血病、急性淋巴細胞白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、紅白血病、乳腺癌、卵巢癌、黑素瘤、肺癌、胰腺癌、膠質母細胞瘤、結直腸癌、頭頸癌、宮頸癌、前列腺癌、肝癌、鱗狀細胞癌(口腔)、皮膚癌和成神經管細胞瘤)在wo2013/016081中公開，且在pct/us2016/026119中公開治療平滑肌肉瘤。化合物a正在具有限定的分子途徑改變或基於組織的惡性腫瘤的第1期臨床試驗和擴展組中，並與針對顯示與notch途徑信號傳導有關的突變、擴增或基因表達改變的特定腫瘤類型的其他特異性識別的抗癌劑組合，以及在患有t細胞急性淋巴細胞白血病或t細胞淋巴細胞淋巴瘤(t-all/t-lbl)的患者中的臨床試驗中被研究。
[0004]
腫瘤細胞通過各種機制逃避免疫系統的檢測和消除。從內源上看，免疫檢查點途徑用於維持自身耐受和控制t細胞活化。pd-1配體pd-l1和pd-l2與t細胞上發現的pd-1受體的結合抑制t細胞增殖和細胞因子產生。pd-1配體的上調發生在一些腫瘤中且通過該途徑的信號傳導有助於抑制腫瘤的活性t細胞免疫監視。已經顯示抑制pd-1或pd-l1恢復腫瘤的免疫介導破壞。臨床研究發現，用拮抗劑抗體靶向pd-l或pd-l1釋放pd-1途徑介導的免疫反應(包括抗腫瘤反應)抑制。
[0005]
據報導，notch途徑信號傳導是活化的cd8
+ t細胞對pd-1表達的調節因子，mathieu等，immunology and cell biology，2013,91：82-88。儘管存在針對患有癌症的患者的治療選擇，但仍然需要提供增強功效和較低毒性中的一種或兩種的新的和不同的療法。目前的免疫療法已經在一部分癌症類型中且僅在一部分患者中顯示益處。需要新的療法或組合策略來改善針對特定癌症的總反應或促進這些治療延伸至目前可以對單獨的任一種試劑反應較小的癌症。


技術實現要素：

[0006]
據信，本發明提供與由單獨的任一種試劑提供的治療效果相比，來自化合物a和抗pd-1或pd-l1單克隆抗體抑制劑活性對t細胞急性淋巴細胞白血病、急性淋巴細胞白血病、慢性淋巴細胞白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、紅白血病、三陰性乳腺癌、乳腺癌、卵巢癌、黑素瘤、肺癌、非小細胞肺癌、胰腺癌、膠質母細胞瘤、結直腸癌、頭頸癌、宮頸癌、前列腺癌、肝癌、口腔鱗狀細胞癌、皮膚癌、成神經管細胞瘤、肝細胞癌、肝內和肝外膽管癌、硬纖維瘤、軟組織肉瘤和腺樣囊性癌的組合活性的有益治療效果。
[0007]
本發明的一個方面提供治療在患者中的t細胞急性淋巴細胞白血病、急性淋巴細胞白血病、慢性淋巴細胞白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、紅白血病、三陰性乳腺癌、乳腺癌、卵巢癌、黑素瘤、肺癌、非小細胞肺癌、胰腺癌、膠質母細胞瘤、結直腸癌、頭頸癌、宮頸癌、前列腺癌、肝癌、口腔鱗狀細胞癌、皮膚癌、成神經管細胞瘤、肝細胞癌、肝內和肝外膽管癌、硬纖維瘤、軟組織肉瘤或腺樣囊性癌的方法，其包括向需要治療的患者施用有效量的4,4,4-三氟-n-[(1s)-2-[[(7s)-5-(2-羥乙基)-6-氧代-7h-吡啶並[2,3-d][3]苯並氮雜-7-基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]丁醯胺或其藥學上可接受的鹽或水合物和有效量的選自帕姆單抗(pembrolizumab)、納武單抗(nivolumab)、阿特朱單抗(atezolizumab)、度伐單抗(durvalumab)和阿維魯單抗(avelumab)的pd-1或pd-l1抑制劑。
[0008]
本發明的另一方面提供治療患者中的結直腸癌的方法，其包括向需要治療的患者施用有效量的4,4,4-三氟-n-[(1s)-2-[[(7s)-5-(2-羥乙基)-6-氧代-7h-吡啶並[2,3-d][3]苯並氮雜-7-基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]丁醯胺或其藥學上可接受的鹽或水合物，和有效量的選自帕姆單抗、納武單抗、阿特朱單抗、度伐單抗和阿維魯單抗的pd-1或pd-l1抑制劑。
[0009]
本發明的另一方面提供治療患者中的t細胞急性淋巴細胞白血病、急性淋巴細胞白血病、慢性淋巴細胞白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、紅白血病、三陰性乳腺癌、乳腺癌、卵巢癌、黑素瘤、肺癌、非小細胞肺癌、胰腺癌、膠質母細胞瘤、結直腸癌、頭頸癌、宮頸癌、前列腺癌、肝癌、口腔鱗狀細胞癌、皮膚癌、成神經管細胞瘤、肝細胞癌、肝內和肝外膽管癌、硬纖維瘤、軟組織肉瘤或腺樣囊性癌的方法，其包括向需要治療的患者同時、分開或依次施用有效量的4,4,4-三氟-n-[(1s)-2-[[(7s)-5-(2-羥乙基)-6-氧代-7h-吡啶並[2,3-d][3]苯並氮雜-7-基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]丁醯胺或其藥學上可接受的鹽或水合物，和有效量的選自帕姆單抗、納武單抗、阿特朱單抗、度伐單抗和阿維魯單抗的pd-1或pd-l1抑制劑。
[0010]
本發明的另一方面提供治療患者中的結直腸癌的方法，其包括向需要治療的患者同時、分開或依次施用有效量的4,4,4-三氟-n-[(1s)-2-[[(7s)-5-(2-羥乙基)-6-氧代-7h-吡啶並[2,3-d][3]苯並氮雜-7-基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]丁醯胺或其藥學上可接受的鹽或水合物，和有效量的選自帕姆單抗、納武單抗、阿特朱單抗、度伐單抗和阿維魯單抗的pd-1或pd-l1抑制劑。
[0011]
本發明的另一方面提供用於同時、分開或依次用於治療以下疾病的化合物4,4,4-三氟-n-[(1s)-2-[[(7s)-5-(2-羥乙基)-6-氧代-7h-吡啶並[2,3-d][3]苯並氮雜-7-基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]丁醯胺或其藥學上可接受的鹽或水合物；和選自帕姆單抗、納
武單抗、阿特朱單抗、度伐單抗和阿維魯單抗的pd-1或pd-l1抑制劑：t細胞急性淋巴細胞白血病、急性淋巴細胞白血病、慢性淋巴細胞白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、紅白血病、三陰性乳腺癌、乳腺癌、卵巢癌、黑素瘤、肺癌、非小細胞肺癌、胰腺癌、膠質母細胞瘤、結直腸癌、頭頸癌、宮頸癌、前列腺癌、肝癌、口腔鱗狀細胞癌、皮膚癌、成神經管細胞瘤、肝細胞癌、肝內和肝外膽管癌、硬纖維瘤、軟組織肉瘤或腺樣囊性癌。
[0012]
本發明的另一方面提供用於同時、分開或依次用於治療結直腸癌的化合物4,4,4-三氟-n-[(1s)-2-[[(7s)-5-(2-羥乙基)-6-氧代-7h-吡啶並[2,3-d][3]苯並氮雜-7-基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]丁醯胺或其藥學上可接受的鹽或水合物；和選自帕姆單抗、納武單抗、阿特朱單抗、度伐單抗和阿維魯單抗的pd-1或pd-l1抑制劑。
[0013]
本發明的另一方面提供：4,4,4-三氟-n-[(1s)-2-[[(7s)-5-(2-羥乙基)-6-氧代-7h-吡啶並[2,3-d][3]苯並氮雜-7-基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]丁醯胺或其藥學上可接受的鹽或水合物用於製造藥物的用途；和選自帕姆單抗、納武單抗、阿特朱單抗、度伐單抗和阿維魯單抗的pd-1或pd-l1抑制劑在製造藥物中的用途；所述藥物用於同時、分開或依次治療t細胞急性淋巴細胞白血病、急性淋巴細胞白血病、慢性淋巴細胞白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、紅白血病、三陰性乳腺癌、乳腺癌、卵巢癌、黑素瘤、肺癌、非小細胞肺癌、胰腺癌、膠質母細胞瘤、結直腸癌、頭頸癌、宮頸癌、前列腺癌、肝癌、口腔鱗狀細胞癌、皮膚癌、成神經管細胞瘤、肝細胞癌、肝內和肝外膽管癌、硬纖維瘤、軟組織肉瘤或腺樣囊性癌。
[0014]
本發明的另一方面提供：4,4,4-三氟-n-[(1s)-2-[[(7s)-5-(2-羥乙基)-6-氧代-7h-吡啶並[2,3-d][3]苯並氮雜-7-基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]丁醯胺或其藥學上可接受的鹽或水合物用於製造藥物的用途；和選自帕姆單抗、納武單抗、阿特朱單抗、度伐單抗和阿維魯單抗的pd-1或pd-l1抑制劑在製造藥物中的用途；所述藥物用於同時、分開或依次治療結直腸癌。
[0015]
本發明的另一方面是商業包裝，其包含每種治療劑的單獨組合物以及同時、分開或依次施用的說明書，用於治療t細胞急性淋巴細胞白血病、急性淋巴細胞白血病、慢性淋巴細胞白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、紅白血病、三陰性乳腺癌、乳腺癌、卵巢癌、黑素瘤、肺癌、非小細胞肺癌、胰腺癌、膠質母細胞瘤、結直腸癌、頭頸癌、宮頸癌、前列腺癌、肝癌、口腔鱗狀細胞癌、皮膚癌、成神經管細胞瘤、肝細胞癌、肝內和肝外膽管癌、硬纖維瘤、軟組織肉瘤或腺樣囊性癌。
[0016]
本發明的又一個方面是商業包裝，其包含每種治療劑的單獨組合物以及同時、分開或依次施用的說明書，用於治療結直腸癌。
[0017]
化合物4,4,4-三氟-n-[(1s)-2-[[(7s)-5-(2-羥乙基)-6-氧代-7h-吡啶並[2,3-d][3]苯並氮雜-7-基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]丁醯胺或其藥學上可接受的鹽或其水合物(化合物a)具有cas登記號142138-81-4。或者，該化合物可以命名為：n-[(1s)-2-[[(7s)-6,7-二氫-5-(2-羥乙基)-6-氧代-5h-吡啶並[3,2-a][3]苯並氮雜-7-基]氨基]-1-甲基-2-氧代乙基]-4,4,4-三氟丁醯胺。其他名稱可用於明確識別化合物a。
[0018]
如本文所用，術語「pd-1抑制劑」和「pd-l1抑制劑」是指完全人或人源化igg單克隆抗體，任選優化的單克隆抗體。
[0019]
pd-1抑制劑包括納武單抗和帕姆單抗。納武單抗(opdivo
®
)也稱為imdx
‑ꢀ
1106、mdx-1106-04、ono-4538或bms-936558並具有cas登記號：946414-94-4。納武單抗是完全人igg4單克隆抗體，其特異性阻斷pd-1。納武單抗(克隆5c4)和特異性結合到pd-1的其他人單克隆抗體公開於us8,008,449和wo2006/121168中。帕姆單抗(keytruda
®
)(以前稱為lambrolizumab)，也稱為merck 3745、mk-3475或sch-900475，是結合到pd-1的人源化igg4單克隆抗體。帕姆單抗公開於hamid, o.等, new england journal of medicine, 2013, 369(2): 134-44；wo2009/114335；和us 8,354,509。其他抗pd-1抗體公開於us 8,609,089；us 2010028330；和/或us 20120114649。
[0020]
pd-l1抑制劑包括yw243.55.s70、mpdl3280a、medi-4736、msb-0010718c和mdx-1105。yw243.55.s70是描述於wo2010/077634和us20100203056中的抗pd-l1抗體。mdpl3280a(也稱為rg7446，ro5541267，阿特朱單抗，tecentriq
™
)是結合到pd-l1的完全人源化的fc優化的igg1單克隆抗體。mpdl3280a和針對pd-l1的其他人單克隆抗體公開於us 7,943,743和us 20120039906中。medi-4736(也稱為度伐單抗)是針對pd-l1的fc優化的igg1單克隆抗體並描述於wo2011/066389中。msb-0010718c(也稱為阿維魯單抗)是針對pd-l1的完全人igg1單克隆抗體並描述於wo2013/079174中。mdx-1105，也稱為bms-936559，是wo2007/005874中描述的完全人igg4單克隆抗pd-l1抗體。
[0021]
如本文所用，術語「患者」是指哺乳動物，優選人。
[0022]「治療有效量」或「有效量」是指化合物a或其藥學上可接受的鹽或水合物或含有化合物a或其藥學上可接受的鹽或水合物的藥物組合物的劑量，以及pd-1或pd-l1抑制劑或含有pd-1或pd-l1抑制劑的藥物組合物的劑量，所述劑量是抑制腫瘤細胞生長和消除或減緩或阻止患者中癌症進展所必需的。化合物a或其藥學上可接受的鹽或水合物的劑量範圍為在5天的時間內每隔一天每天一次2.5mg/患者至75mg/患者，接著兩天不給藥(t.i.w.)。除非標籤上另有說明，否則pd-1或pd-l1抑制劑的劑量範圍為每14-21天一次在30至60分鐘內靜脈內輸注1-3mg/kg。化合物a或其藥學上可接受的鹽或水合物的優選劑量為10mg至50mg t.i.w範圍。治療患者所需的確切劑量和治療時間長度將由醫師根據疾病的階段和嚴重性以及個體患者的具體需要和反應來確定。可以調整給藥施用以向患者提供更優化的治療益處並控制或改善任何藥物相關的毒性。備選給藥方案例如每天一次(qd)、每天兩次(b.i.d.)、每天三次(t.i.d.)；每隔一天(q2d)或每三天(q3d)每天給藥一次可能適合於化合物a。可以調整pd-1或pd-l1抑制劑的給藥施用，包括拒絕給予劑量或永久停用進一步給藥以控制或改善藥物相關的毒性。
[0023]
本發明的組合治療通過向需要治療的t細胞急性淋巴細胞白血病、急性淋巴細胞白血病、慢性淋巴細胞白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、紅白血病、三陰性乳腺癌、乳腺癌、卵巢癌、黑素瘤、肺癌、非小細胞肺癌、胰腺癌、膠質母細胞瘤、結直腸癌、頭頸癌、宮頸癌、前列腺癌、肝癌、口腔鱗狀細胞癌、皮膚癌、成神經管細胞瘤、肝細胞癌、肝內和肝外膽管癌、硬纖維瘤、軟組織肉瘤和腺樣囊性癌優選軟組織肉瘤患者，在28天的周期內每周(7天)在5天內每隔一天每天一次且兩天不給藥的方式施用有效量的化合物a或其藥學上可接受的鹽或水合物，和每14-21天一次在30-60分鐘內以1-3 mg/kg施用pd-1或pd-l1抑制劑而進行。
[0024]
術語「治療(treatment)」、「療法(treat)」和「治療(treating)」意在包括對患者所
患癌症的全方位幹預，例如施用化合物a和pd-1或pd-l1抑制劑以緩解、減緩、停止或逆轉一種或多種症狀，並延遲、停止或逆轉癌症的進展，即使癌症實際上沒有被消除。
[0025]
化合物a或其藥學上可接受的鹽或水合物優選使用藥學上可接受的載體配製成藥物組合物，並通過各種途徑施用。優選地，這種組合物用於口服施用。pd-1或pd-l1抑制劑優選使用藥學上可接受的載體配製成藥物組合物，並通過胃腸外途徑施用，優選靜脈內輸注。優選地，這種組合物可以是凍乾粉末或液體組合物。根據標籤或通過本領域的常規技術，重組或稀釋至準備施用劑量。這樣的藥物組合物和製備它們的方法是本領域熟知的。參見，例如，handbook of pharmaceutical excipients, 第5版, rowe等編輯, pharmaceutical press (2006)；和remington: the science and practice of pharmacy (troy等編輯, 第21版, lippincott williams wilkins (2006)。
[0026]
化合物a能夠與許多無機和有機抗衡離子反應以形成藥學上可接受的鹽。這些藥學上可接受的鹽和製備它們的常用方法是本領域熟知的。參見，例如，p. stahl等, handbook of pharmaceutical salts: properties, selection and use, (vcha/wiley-vch, 2002); s.m. berge等,
ꢀ「
pharmaceutical salts,
ꢀ「ꢀ
journal of pharmaceutical sciences, 第66卷第1期, 1977年1月。
[0027]
本發明的組合治療的功效可以通過評估癌症治療中常用的各種終點來測量，包括但不限於腫瘤消退，腫瘤重量或尺寸縮小，至進展的時間，總體存活，無進展存活，總反應速率，反應持續時間，抑制轉移性擴散而沒有腫瘤消退，以及pet/ct成像。
[0028]
術語「組合」、「治療組合」和「藥物組合」是指非固定劑量組合，任選地與組合施用的說明書一起包裝，其中各種治療劑、化合物a或其藥學上可接受的鹽或水合物和pd-1或pd-l1抑制劑可以同時獨立施用或在允許治療劑發揮協同作用的時間間隔內分開施用。
[0029]
術語「同時」施用意指以單一操作向患者施用化合物a和pd-1或pd-l1抑制劑中的每一種，例如其中化合物a和pd-1或pd-l1抑制劑中的每一種在基本相同的時間獨立施用或在允許化合物a和pd-1或pd-l1抑制劑顯示協同治療效果的時間間隔內分開施用。
[0030]
術語「分開」施用意指從非固定劑量劑型向患者同時、基本上並行或以任何順序依次施用化合物a和pd-1或pd-l1抑制劑中的每一種。對於施用每種化合物a和pd-1或pd-l1抑制劑可以有或可以沒有規定的時間間隔。
[0031]
術語「依次」施用是指在分開的操作中從非固定(分開)劑型向患者施用化合物a和pd-1或pd-l1抑制劑中的每一種。兩個施用操作可以或可以不通過規定的時間間隔連接。例如，施用化合物a t.i.w.並在規定的時間內例如每14至21天一次施用pd-1或pd-l1抑制劑。
[0032]
短語「與......組合」包括向需要治療的癌症患者，特別是結直腸癌患者同時、分開和依次施用化合物a和pd-1或pd-l1抑制劑中的每一種。
[0033]
術語「共同施用」或「組合施用」包括向單個患者施用治療劑，且包括治療方案，其中可以通過不同施用途徑或在不同時間施用試劑。
[0034]
可以例如使用本領域已知的合適方法例如sigmoid-emax方程(holford和scheiner, clin. pharmacokinet., 1981, 6: 429-453)、loewe加性方程(the equation of loewe additivity)(loewe和muischenk, arch. exp. pathol. pharmacol., 1926, 114: 313-326)、中值效應方程(median-effect equation)(chou和talalay, adv. enzyme regul., 1984, 22: 27-55)和bliss獨立性(independence)方法或已知的等同物計算在單
個患者中產生效果的兩種治療劑的有益作用，所述效果大於單獨施用的每種試劑的簡單累加效果。每個方程可以應用於實驗數據以產生相應的圖來幫助將藥物組合的效果評估為加性、在加性的生物學相關範圍內、小於加性或大於加性。
[0035]
notch的致癌作用首先報導在人t細胞白血病中，t細胞白血病涉及notch1細胞內結構域向t細胞受體-β啟動子區域的易位，導致notch1細胞內結構域的過表達(grabher等. nature review cancer, 2006(6):347-359；weng等. science, 2004(306):269-271)。小鼠造血祖細胞中的notch1細胞內結構域的過表達導致小鼠表現出與人類類似的t細胞急性淋巴細胞白血病。除了t細胞急性淋巴細胞白血病外，越來越多的證據表明notch信號通過包括受體擴增和配體和/或受體的過表達的多種機制在其他癌症中致癌，包括急性淋巴細胞白血病、慢性淋巴細胞白血病(rosati等, blood, 2009(113): 856-865)、急性髓性白血病(sliwa等. int j clin exp pathol, 2014(7(3)): 882-889)、慢性髓性白血病(nakahara等. blood, 2010(115(14)): 2872-2881)和紅白血病(robert-moreno等, leukemia, 2007(21): 1496-1503)。由於配體和/或受體的突變或過表達導致的異常組成型notch信號傳導也涉及許多實體瘤惡性腫瘤，包括三陰性乳腺癌(stoeck等, cancer discovery, 2014(4): 1154-1167)、乳腺癌、卵巢癌(park等. cancer research, 2006(66):6312-6318)、黑素瘤(gast等. genes, chromosomes cancer, 2010(49):733-745)、肺癌、非小細胞肺癌(westhoff等. pnas, 2009(106):22293-22298)、胰腺癌、膠質母細胞瘤、結直腸癌、頭頸癌、宮頸癌、前列腺癌、肝癌、鱗狀細胞癌(口腔)、皮膚癌和成神經管細胞瘤(rangathan等, nature review cancer, 2011(11):338-351和補充信息s1(表))。由於配體和/或受體的突變或過表達引起的異常組成型notch信號傳導也涉及血管肉瘤(ravi等, j clin oncol, 2007, (25(18s, 六月20日增刊)): 摘要10030)、橫紋肌肉瘤(belyea等, clin cancer res, 2011(17(23)): 7324-7336; roma等, clin cancer res, 2011(17(3)): 505-513)、脂肪肉瘤(j clin oncol, 2009, (27(15s, 增刊)): 摘要10526)、惡性纖維組織細胞瘤(wang等, cancer res, 2012, (72): 1013-1022)、肝細胞癌(villanueva等, gastroenterology, 2012, (143): 1660-1669)、肝內和肝外膽管癌(wu等, int j exp pathol, 2014, (7(6)): 3272-3279; sekiya等, j clin invest, 2012, (122(11)): 3914-3918; yoon等, world j gastroenterol, 2011, (17(35)): 4023-4030)和腺樣囊性癌(bell等, annals of diagnostic pathology, 2014, (18): 10-13; stoeck等, cancer discov, 2014, (4): 1154-1167)。
[0036]
癌症的性質是多因素的。在適當的情況下，可以組合具有不同作用機制的治療劑。然而，僅考慮具有不同作用模式的治療劑的組合不一定導致具有有利效果的組合。提供與僅一種治療劑的單一療法相比表現出的有益效果(治療效果，例如增強的功效和/或較低的毒性)的特定治療劑是優選的。
[0037]
認為本發明的組合適用於治療t細胞急性淋巴細胞白血病、急性淋巴細胞白血病、慢性淋巴細胞白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、紅白血病、三陰性乳腺癌、乳腺癌、卵巢癌、黑素瘤、肺癌、非小細胞肺癌、胰腺癌、膠質母細胞瘤、結直腸癌、頭頸癌、宮頸癌、前列腺癌、肝癌、口腔鱗狀細胞癌、皮膚癌、成神經管細胞瘤、肝細胞癌、肝內和肝外膽管癌、硬纖維瘤、軟組織肉瘤和腺樣囊性癌，且特別適用於治療標準治療失敗的軟組織肉瘤患者。這包括患有表現對單一療法的抗性或表現對不同於本發明的那些的組合的抗性的癌症
的患者。
[0038]
術語「完全反應」(cr)、「部分反應」(pr)、「進展性疾病」(pd)、「穩定疾病」(sd)、「客觀反應」(or)與根據recist v1.1, eisenhauer等, european journal of cancer, 2009, 45, 228-247的定義一致使用。
[0039]
術語「至疾病進展的時間」(ttp)是指從初始治療時間到癌症進展的通常以周或月測量的時間(參見recist v1.1關於進展性疾病的定義)，癌症進展為目標病變直徑總和至少增加20%，其以研究中的最小總和為參考(如果基線總和在研究中最小，則這包括基線總和)。除了相對增加20%外，總和還必須表明絕對增加至少5mm。一個或多個新病變的出現也被認為是進展。這種進展由熟練的臨床醫生評估。
[0040]
術語「延長ttp」是指相對於i)未治療的患者，或ii)用少於化合物a和pd-1或pd-l1抑制劑兩者治療的患者，增加治療患者的至疾病進展的時間。
[0041]
術語「存活」是指患者保持存活，且包括總體存活以及無進展存活。
[0042]
術語「總體存活」是指患者從診斷或治療時起保持存活一段限定的時間段，例如1年、5年等。
[0043]
術語「無進展存活」是指患者在沒有癌症進展的情況下保持存活。
[0044]
如本文所用，術語「延長存活」是指相對於i)未治療的患者、ii)用少於化合物a和pd-1或pd-l1抑制劑兩者治療的患者或iii)對照治療方案，增加治療患者的總體或無進展存活。在開始治療之後或在癌症的初始診斷之後，監測存活一段限定的時間段，例如一個月、六個月、1年、5年或10年等。
[0045]
術語「原發性腫瘤」或「原發性病變」是指原始癌症，而不是位於患者體內另一組織、器官或位置的轉移性腫瘤或病變。
[0046]
在一個實施方案中，升高化合物a的劑量直至達到最大耐受劑量，且以固定劑量施用本發明的pd-1或pd-l1抑制劑。或者，化合物a可以固定劑量施用，且pd-1或pd-l1抑制劑的劑量可以升高。每個患者可以每天或間歇地接受化合物a和/或pd-1或pd-l1抑制劑的劑量。在這些研究中通過每6周評估症狀評分，例如在12、18或24周後，可以確定治療功效。
[0047]
化合物a可以通過wo2013/016081中描述的程序製備。
[0048]
pd-1或pd-l1抑制劑可以通過以下中描述的程序製備：us 8,008,449和wo2006/121168；hamid, o.等, new england journal of medicine, 2013, 369 (2): 134-44；wo2009/114335，和us 8,354,509；us 8,609,089、us 2010028330和/或us 20120114649；wo2010/077634；us2010203056；us 7,943,743；us 20120039906；wo2011/066389；wo2013/079174；和wo2007/005874；或通過本領域技術人員熟知和常規使用的程序製備。
具體實施方式
[0049]
本發明還涉及以下實施方案：1. 一種治療患者中的癌症的方法，所述癌症是t細胞急性淋巴細胞白血病、急性淋巴細胞白血病、慢性淋巴細胞白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、紅白血病、三陰性乳腺癌、乳腺癌、卵巢癌、黑素瘤、肺癌、非小細胞肺癌、胰腺癌、膠質母細胞瘤、結直腸癌、頭頸癌、宮頸癌、前列腺癌、肝癌、口腔鱗狀細胞癌、皮膚癌、成神經管細胞瘤、肝細胞癌、肝內和肝外膽管癌、硬纖維瘤、軟組織肉瘤或腺樣囊性癌，所述方法包括向需要治療的患者施
用有效量的4,4,4-三氟-n-[(1s)-2-[[(7s)-5-(2-羥乙基)-6-氧代-7h-吡啶並[2,3-d][3]苯並氮雜
ꢀ‑
7-基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]丁醯胺或其藥學上可接受的鹽或水合物，和有效量的選自帕姆單抗、納武單抗、阿特朱單抗、度伐單抗和阿維魯單抗的pd-1或pd-l1抑制劑。
[0050]
2. 實施方案1的方法，其中所述癌症是結直腸癌。
[0051]
3. 一種治療需要這種治療的患者中的癌症的方法，所述癌症是t細胞急性淋巴細胞白血病、急性淋巴細胞白血病、慢性淋巴細胞白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、紅白血病、三陰性乳腺癌、乳腺癌、卵巢癌、黑素瘤、肺癌、非小細胞肺癌、胰腺癌、膠質母細胞瘤、結直腸癌、頭頸癌、宮頸癌、前列腺癌、肝癌、口腔鱗狀細胞癌、皮膚癌、成神經管細胞瘤、肝細胞癌、肝內和肝外膽管癌、硬纖維瘤、軟組織肉瘤或腺樣囊性癌，所述方法包括同時、分開或依次施用有效量的4,4,4-三氟-n-[(1s)-2-[[(7s)-5-(2-羥乙基)-6-氧代-7h-吡啶並[2,3-d][3]苯並氮雜-7-基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]丁醯胺或其藥學上可接受的鹽或水合物，和有效量的選自帕姆單抗、納武單抗、阿特朱單抗、度伐單抗和阿維魯單抗的pd-1或pd-l1抑制劑。
[0052]
4. 實施方案3的方法，其中所述癌症是結直腸癌。
[0053]
5. 化合物4,4,4-三氟-n-[(1s)-2-[[(7s)-5-(2-羥乙基)-6-氧代-7h-吡啶並[2,3-d][3]苯並氮雜-7-基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]丁醯胺或其藥學上可接受的鹽或水合物；和選自帕姆單抗、納武單抗、阿特朱單抗、度伐單抗和阿維魯單抗的pd-1或pd-l1抑制劑，其用於同時、分開或依次用於治療t細胞急性淋巴細胞白血病、急性淋巴細胞白血病、慢性淋巴細胞白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、紅白血病、三陰性乳腺癌、乳腺癌、卵巢癌、黑素瘤、肺癌、非小細胞肺癌、胰腺癌、膠質母細胞瘤、結直腸癌、頭頸癌、宮頸癌、前列腺癌、肝癌、口腔鱗狀細胞癌、皮膚癌、成神經管細胞瘤、肝細胞癌、肝內和肝外膽管癌、硬纖維瘤、軟組織肉瘤或腺樣囊性癌。
[0054]
6. 實施方案5的用途，其中所述癌症是結直腸癌。
[0055]
7. 4,4,4-三氟-n-[(1s)-2-[[(7s)-5-(2-羥乙基)-6-氧代-7h-吡啶並[2,3-d][3]苯並氮雜-7-基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]丁醯胺或其藥學上可接受的鹽或水合物用於製造藥物的用途；和選自帕姆單抗、納武單抗、阿特朱單抗、度伐單抗和阿維魯單抗的pd-1或pd-l1抑制劑用於獨立製造藥物的用途；所述藥物用於同時、分開或依次治療t細胞急性淋巴細胞白血病、急性淋巴細胞白血病、慢性淋巴細胞白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、紅白血病、三陰性乳腺癌、乳腺癌、卵巢癌、黑素瘤、肺癌、非小細胞肺癌、胰腺癌、膠質母細胞瘤、結直腸癌、頭頸癌、宮頸癌、前列腺癌、肝癌、口腔鱗狀細胞癌、皮膚癌、成神經管細胞瘤、肝細胞癌、肝內和肝外膽管癌、硬纖維瘤軟組織肉瘤或腺樣囊性癌。
[0056]
8. 實施方案7的用途，其中所述癌症是結直腸癌。
[0057]
以下實施例說明單獨的化合物a、單獨的pd-1抑制劑或單獨的pd-l1抑制劑中的每一種以及化合物a和pd-1或pd-l1抑制劑的組合的活性。
[0058]
生物學實施例1體內研究：對於體內研究，在6-8周齡balb/c雌性小鼠(harlan laboratories)的後腿中通過皮下注射植入在0.2ml hank平衡鹽溶液(hbss)中的1
×
106個ct26細胞(atcc
®
crl2639
tm
)結
直腸癌細胞系。隨意餵食小鼠正常食物。在腫瘤植入的第6天用口服施用(管飼)在0.25% tween
® 80中的含化合物a的1%羧甲基纖維素鈉(na-cmc)，或腹膜內注射磷酸鹽緩衝鹽水(pbs)中的小鼠抗pd-l1抗體(10f.9g2，bioxcell目錄號：be0101)或腹膜內注射0.2ml體積的pbs或其各自的載體中的小鼠抗pd-1(cd279)抗體(克隆：rmp1-14，bioxcell#：bp0146-r)開始治療。化合物a在周一、周三和周五的時間表以8mg/kg施用，持續2周，而10f.9g2和rmp1-14在周一和周四的時間表以250μg/劑量/動物施用，持續2周。
[0059]
隨時間監測腫瘤生長和體重以評估功效和毒性跡象。腫瘤的二維測量每周進行兩次，且腫瘤體積基於下式計算：(腫瘤體積)= [(l) x (w2) x (π/6)]，其中l是中軸長度且w是中軸寬度。將腫瘤體積數據轉換為對數標度以均衡跨時間和治療組的方差。使用sas
™
軟體(版本8.2)中的mixed
™
程序用按照時間和治療的雙向重複測量的方差分析來分析對數體積數據。重複測量的相關模型是空間功率(spatial power)。對腫瘤體積標度進行逆對數的來自重複測量分析的最小二乘法平均值在表1中顯示。在研究第20天比較每對組的p值顯示在表2中。測試組是：1：1% cmc/0.25% tween
® 80/0.05%消泡劑，周一-周三-周五x2，po/pbs周一-周四x2，ip2：化合物a，8 mg/kg，周一-周三-周五x2，po3：化合物b(pd-l1)，250μg/劑量，周一-周四x2，ip4：化合物c(pd-1)，250μg/劑量，周一-周四x2，ip5：化合物a，8mg/kg，周一-周三-周五x2，po/化合物b(pd-l1)，250μg/劑量，周一-周四x2，ip6：化合物a，8mg/kg，周一-周三-周五x2，po/化合物c(pd-1)，250μg/劑量，周一-周四x2，ip隨時間監測腫瘤生長和體重以評估功效和毒性跡象。腫瘤的二維測量每周進行兩次，且腫瘤體積基於下式計算：(腫瘤體積)= [(l) x (w2) x (π/6)]，其中l是中軸長度，且w是中軸寬度。將腫瘤體積數據轉換為對數標度以均衡跨時間和治療組的方差。使用sas
™
軟體(版本8.2)中的mixed
™
程序用按照時間和治療的雙向重複測量的方差分析來分析對數體積數據。重複測量的相關模型是空間冪。在每個時間點將治療組與對照組進行比較。也將mixed
™
程序單獨用於每個治療組以計算每個時間點的調整平均值和標準誤差。兩種分析都考慮每隻動物內的自相關性以及早期從研究中移除具有大腫瘤的動物時發生的數據丟失。針對每個治療組繪製調整的平均值和標準誤差相對於時間的曲線。抗腫瘤活性表示為治療相對於對照的腫瘤體積百分比(%t/c)，並通過比較治療組中的腫瘤體積與載體治療組來計算。治療組的t/c百分比和統計學顯著性值(p值)基本上如上所述測量並總結在表2中。
[0060]
表1. 腫瘤體積(mm3)：幾何平均值
表2.腫瘤體積所有成對比較p值表2顯示在該測試中，化合物a和pd-l1(組5)的組合表現出相對於單獨的化合物a(組2)和pd-l1(組3)中的每一種的統計學顯著的腫瘤生長抑制結果。化合物a和pd-1(組6)
的組合表現出相對於單獨的化合物a(組2)統計學顯著的生長抑制結果，而相對於單獨的pd-1(組4)則未表現出。
[0061]
組合分析使用先前描述的重複測量分析，對比陳述(contrast statement)用於使用組合的兩種特定治療(化合物a和pd-l1)測試研究第20天的相互作用效應。該測試是統計學顯著的(p = 0.008)，表現出優於加性或協同活性，因為組合組中評估的平均腫瘤體積(298mm3)小於根據bliss independence方法的預期加性腫瘤體積(1134 x 1069 / 1448 = 837 mm3)。
[0062]
使用先前描述的重複測量分析，對比陳述用於使用組合的兩種特定治療(化合物a和pd-1)測試研究第20天的相互作用效應。該測試沒有統計學顯著性(p = 0.769)，表現出加性效應，因為組合組中評估的平均腫瘤體積(431mm3)接近於根據bliss independence方法的預期加性腫瘤體積(526 x 1069 / 1448 = 389 mm3)。
[0063]
機制分析對於機制分析，在第20天在最後一劑的化合物a後1h切除ct-26腫瘤。切下約30mg的小塊並儲存在rnalater中用於基因表達分析。處理腫瘤的其餘部分用於流式細胞術分析。
[0064]
流式細胞術將腫瘤稱重，然後在5ml 4℃完全培養基(cm；rpmi-1640/10%胎牛血清(fbs))中通過100μm過濾器均質化以產生單細胞懸浮液。將細胞在466 x g, 4℃下離心5分鐘；將沉澱重新懸浮於新鮮cm(0.5-3ml，取決於沉澱體積)中，並使用vi-cell xr(beckman coulter)計數細胞。將每個腫瘤的相同數目的全部細胞(10 x 106)轉移到96孔v底微型板(fisher scientific)。將細胞離心(700 x g, 3 min., 4℃)並在冰上重新懸浮於cm中的100μl 1μg/ml fc封閉物(抗cd16/32(克隆2.4g2)；tonbo biosciences)達30分鐘。將細胞離心(700 x g, 3分鐘, 4℃)並重新懸浮於含有可固定的活力染料(ebioscience)的100μl幾種螢光染料綴合的表面標記抗體混合物中的一種[抗-cd3 (克隆145-2c11)，-ly-6g (克隆1a8)，-cd11c (克隆hl3)，-cd45 (克隆30-f11) (bd biosciences)，抗-cd8 (克隆53-6.7) (biolegend)，-cd11b (克隆m1/70)，-cd3 (克隆145-2c11)，-f4/80 (克隆bm8)，-cd4 (克隆rm4-5)(ebioscience)]並在冰上避光培養30分鐘。將細胞用200μl cm洗滌兩次並離心(700 x g, 3 min., 4℃)。在第二次洗滌後，遵循具有所述修改的製造商的說明書，將細胞固定，滲透，並對ki67(克隆sola15) (ebioscience)使用foxp3/轉錄因子染色緩衝液組(ebioscience)進行細胞內染色。簡言之，將細胞以100μl/孔固定30min，然後在具有或不具有細胞內染料(取決於所用的染色組)的100μl/孔滲透緩衝液中固定30分鐘。將細胞用200μl 1x滲透緩衝液洗滌兩次並離心(700 x g, 3 min., 4℃)，然後重新懸浮於具有2% fbs的pbs中。使用10通道lsr ii細胞計數器(bd biosciences)針對每個樣品捕獲1
×
106個事件(不包括碎片)，並使用flowjo v.10.0.8軟體進行分析。數據表示為腫瘤細胞的百分比，其中註明的例外情況表示為親本群體的百分比。anova後的事後t檢驗用於載體和治療組之間的統計學分析。結果總結在表3中。
[0065]
表3中的數據顯示如通過腫瘤內cd4+ki67+ (活化的cd4+ t細胞)，cd8+ki67+ (活化的cd8+ t細胞)，cd11b+(骨髓細胞)，cd11b+f4/80+(巨噬細胞)，cd11c +(樹突細胞)和cd11b+ly-6g+f4/80
‑ꢀ
(嗜中性粒細胞)所表現出的炎症反應升高。
[0066]
基因表達分析對於從腫瘤分離rna，切下約30mg組織。使用rneasy 96孔柱板(qiagen, valencia, ca; cat# 74182)和qiavac 96真空歧管在15psi真空下通過rneasy方案(2002年1月版)提取rna。簡言之，將組織在fp120(thermofisher scientific, waltham, ma；cat# 6001-120)或fastprep-24 (mp biomedicals; cat#116003500)中在2ml lysing matrix-d
®
管(mp biomedicals, solon, oh；cat# 6913-500, 批號6913-500-120156)中在含有1% β-巰基乙醇的800μl buffer
‑ꢀ
rlt中以速度6.0進行兩次混合，每次30秒而均質化。管在14,000轉/分鐘(rpm)下離心30分鐘。除去400-600μl上清液並與等體積的70%乙醇(decon labs, king of prussia, pa; cat#2401)混合，並轉移到96孔rneasy板上。根據供應商的方案，通過柱上的額外dna酶-i消化(qiagen，cat#79254)除去任何潛在的汙染dna。在兩個40μl等分試樣的無dna酶/rna酶的水中提取總rna。使用nanodrop nd-1000分光光度計(thermo scietific)通過260nm的吸光度評估總rna濃度。總rna在-80℃下儲存直至需要用於cdna合成。
[0067]
將高容量cdna逆轉錄試劑盒(applied biosystems, framingham, ma; cat# 4368813)用於使用具有以下參數的geneamp pcr system 9700 (applied biosystems)在96孔pcr板(molecular bioproducts, san diego, ca; cat# 3419)中以100μl的終體積逆轉錄3μg總rna：25℃進行10分鐘，37℃進行2小時，和4℃進行無限長。對於長期儲存，cdna儲存在-30℃下，且總rna儲存在-80℃下。
[0068]
對於taqman程序，在96孔透明光學反應板(applied biosystems, cat# 4306737)
中用200μl無rna酶/dna酶的水稀釋100μl cdna並轉移到2ml無rna酶/dna酶的管(ambion, cat# am12475)。使用2x通用緩衝液(applied biosystems, cat# 4318157)在384孔透明光學反應板(applied biosystems, cat# 4309849)中以20μl的終體積進行taqman反應。樣品用tecan automated pipetting workstation (tecan us inc., durham, nc；型號：freedom evo-100或evo-150)分配，並在具有以下方案設置的abi prism 9700ht sds板讀數器中讀取板：50℃進行2分鐘，95℃進行10分鐘，和在95℃下進行15秒和60℃進行1分鐘的40個循環。基於基於標準曲線的方法對絕對c
t
值進行歸一化。所有計算均在microsoft excel電子表格模板中完成，且%抑制由對照值計算。在版本11 jmp software(sas，gary，nc)上分析統計學顯著性。結果在表4中描述為與載體對照相比的倍數變化。顯示≥1.5倍(1.5x)的統計學顯著值。在化合物a和pd-l1單獨治療組中沒有檢測到基因表達上的顯著變化。數據表明當化合物a與pd-l1或pd1抗體組合時，與腫瘤內炎症和t細胞活化相關的基因表達增加。下面列出的所有taqman引物和探針均購自applied biosystems inc.(abi)且其目錄號作為abi＃與結果摘要一起在表中列出。
[0069]
表4