玉屏風散在製備抗衰老或老年性痴呆症藥物中的用途的製作方法

2023-06-10 03:20:06

本發明涉及中藥應用技術領域，具體涉及玉屏風散在製備抗衰老或老年性痴呆症藥物中的用途。

背景技術：

衰老是人類生命過程中的必然規律，會導致腦部的神經元的數目逐漸減少，甚至產生老年性痴呆症等與衰老密切相關的神經退行性疾病。衰老可能是老年痴呆症等神經系統退行性改變的最初級階段。衰老是整個機體、多個方面的功能退化，這正與中醫藥的作用特點相契合，深入挖掘傳統補益中藥，並將傳統抗衰老理論與現代醫藥學測試手段有機結合，將有助於找到理想的抗衰老方法（宋朝春,等. 衰老及抗衰老藥物的研究進展. 中國生化藥物雜誌, 2015, 35(1): 163-170）。

老年性痴呆症系發生於老年期或老年前期的一種慢性進行性精神衰退性疾病，病理改變是以大腦的萎縮和變性為主，發病機制複雜，發病過程涉及環節較多。20世紀80年代開始了中醫藥防治老年痴呆的研究，現已取得很大進展，對老年性痴呆病因病理達成了較為一致的觀點：痴呆病位在腦，病性屬本虛標實。中醫認為老年性痴呆病因是因年老腎衰，五臟氣衰終至髓虧，而髓虧又耗及腎精，進而「腎虛髓虧」發病。腎虛水無所主，脾虛不運水溼，溼聚生痰，痰擾清靈則昏蒙呆鈍。因此，補腎填精益髓功效的中藥可以抗衰延年；逐瘀化痰，疏通脈絡，以祛邪之法破除痰瘀互結，得以清竅安神（蘇芮，等. 中醫對老年性痴呆病因病機及中藥治療研究. 中華中醫藥雜誌, 2011, 26(9): 1917-1920.）。

玉屏風散系中醫扶正固本的經典名方，始創於元代，藥雖三味，然藥簡效宏，集治療與預防與一體，倍受歷代醫藥學家推崇。玉屏風散具有益氣，固表，止汗之功效，用於表虛不固，自汗惡風，面色咣白，或體虛易感風邪者，還可以用以防治過敏性鼻炎、上呼吸道感染等疾病，臨床療效顯著（中國藥典（2015年版，一部），2015：743-746）。黃芪具有補氣昇陽，生津養血之功效；白朮健脾益氣。防風祛風散寒，增強方劑的滲透力，以這三味藥組成的玉屏風散具有補氣健脾之功效。針對老年性痴呆的腎虛髓虧之病本，玉屏風散能通過補氣特別是補充人體之元氣而起激發全身臟腑經絡形體官竅的生理活動；脾主運化水谷精微，腎中之精氣有賴於水谷精微不斷充養，而髓由腎精所化生，玉屏風能通過健脾而運化水谷精微，讓腎中之精氣充盛，腦髓亦得以充養。玉屏風可以從物質與功能兩方面對腎虛髓虧起到治療作用。而對於老年性痴呆的痰瘀阻滯之表，玉屏風能通過健脾補氣起到脾運水谷，使體內水不聚而成溼生痰，氣盛血行不留瘀。根據傳統中醫的「補腎填精益髓」理論，玉屏風存在基於健脾益腎、生精補髓機制的抗衰老和防治老年性痴呆症的潛力。

端粒酶（Telomerase）是一種核酸蛋白複合體，是端粒複製所必須的一種特殊的DNA聚合酶，若激活端粒酶，就可以增加細胞分裂次數，從而延長壽命。在老年性痴呆（Alzheimer’s Disease，AD）病人及實驗模型中發現，端粒縮短是引發澱粉樣蛋白（Aβ）聚集和Tau蛋白過度磷酸化以及認知功能障礙的重要因素，通過清除氧化應激和神經炎症以及激活端粒酶等手段，延長端粒長度或延緩端粒縮短的速度，有可能對防治老年性痴呆症具有重要意義（Jaskelioff et al., Telomerase reactivation reverses tissue degeneration in aged telomerase-deficient mice, Nature, 2010, 469, 102–106 ; Cai et al., Telomere Shortening and Alzheimer’s Disease, Neuromol Med, 2013, 15: 25–48）。

因此，本申請中提供了玉屏風散在製備基於端粒酶機制的抗衰老和抗老年性痴呆症藥物中的應用。

技術實現要素：

本發明的目的在於克服現有技術中的缺陷，提供玉屏風散用於抗衰老和防治老年痴呆症的醫藥新用途，為臨床用藥提供精準的依據。

本發明所述的玉屏風散包含下列重量份的原料：1-3份黃芪，1-3份白朮，1-2份防風。

本發明所述的玉屏風散可以製成多種製劑：如口服液、顆粒劑、片劑、膠囊劑等。

所述的藥物製劑包括藥學上可接受的載體或輔料，所述載體和/或輔料為本領域技術人員所知曉，在此不做贅述。

本發明所述的玉屏風散，其製備技術屬於現有技術，可以從現有專利公開文獻中獲得或根據公開的藥品標準製備。

本發明提供的玉屏風散在抗衰老和老年性痴呆方面的新用途，是基於端粒酶以及與端粒酶相關的氧化應激及神經炎症機制，具有溫和有效的激活端粒酶作用，在抗衰老和抗老年性痴呆方面具有良好的應用潛力。玉屏風散是傳統中藥，具有長期的臨床使用記錄，安全有效，長期使用未出現明顯的副作用。

附圖說明

圖1為玉屏風散對BJ成纖維細胞生長的促進作用結果；左圖為對22PD的BJ細胞（BJ 22PD）的細胞增長率的影響；右圖為對27PD的BJ細胞（BJ 27PD）的的細胞增長率的影響。

圖2為玉屏風散對端粒酶活性的影響結果，圖中，A為凝膠成像的結果；B為玉屏風散對端粒酶激活影響的數據直觀圖。

具體實施方式

下面結合具體實施方式和附圖來對本發明的技術方案進行描述，以使本發明技術人員更好的理解，下列實施例用來說明本發明，但不限制本發明的範圍。

本發明中涉及的藥材均購自藥材公司，經專業藥師鑑定均符合《中華人民共和國藥典》標準。

BJ 成纖維細胞購自美國ATCC；

TRAPEZE®端粒酶試劑盒購自美國EMD millipore；

黑腹果蠅 購自第二軍醫大學；

CAT、SOD和MDA試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

實施例1：

將黃芪、炒白朮、防風按質量份數 1:1:1 配製而成的玉屏風散組方，乾燥後粉碎至20目，將3 kg 該組方藥材浸泡於30 L蒸餾水中，回流提取2 h，抽濾後藥渣再加入30 L 蒸餾水，回流提取 2h抽濾。兩次濾液合併濃縮至稠膏。該稠膏經真空減壓乾燥機(60℃，-0.06 MPa) 後粉碎，過100 目篩，即得玉屏風散組方提取物。

實施例2：

取上述實施例1中的組方提取物製備成片劑，包括以下具體步驟：組方提取物中加入其質量的 3％糊精、3％澱粉，混合均勻後用體積濃度為 60-70％的乙醇為粘合劑，依次經高速混合制粒機制粒、沸騰乾燥機乾燥、振蕩篩整粒，並加入組方提取物質量的 0.1％滑石粉，混合均勻後用壓片機壓片，即得玉屏風散片劑。 實施例3：

取上述實施例1中的組方提取物製備成膠囊劑，包括以下具體步驟： 60 g組方提取物乾燥粉末，加入30 g可溶性澱粉和90 mL 70%乙醇，混勻，60℃烘乾，粉碎。按每粒0.45 g 製成膠囊。

實施例4：

玉屏風散口服液的製備，具體步驟：實施例1中合併後的濾液500 mL，濃縮至100 mL後，離心，上清液中加入蔗糖糖漿適量，罐裝，滅菌，即得。

實施例5：

將黃芪、炒白朮和防風按3:1:1 的比例配伍。防風單獨提取揮髮油，所得藥渣與黃芪和炒白朮加10倍質量的蒸餾水煎煮，煎煮兩次，時間分別為1.5 h和1 h，合併煎液。過濾後濃縮，加乙醇至70%，靜置，過濾，濾液減壓回收乙醇，所得濃縮液與防風的水露混勻，靜置，取上清，濃縮至相對密度1.30-1.33（70℃），加適量輔料製成顆粒，冷卻後噴灑上述防風揮髮油，混勻後即得。

實施例6：

玉屏風散對BJ成纖維細胞生長的促進作用：BJ成纖維細胞是一種快速衰老的細胞，經常用來做為一種篩選用的細胞模型，評價抗衰老物質，故本實施例選用BJ細胞模型測定玉屏風散的抗衰老作用。

BJ 成纖維細胞（20-25 PD）接種於 12 孔板中，置於37 ℃，5% CO2孵箱培養36 h，加入實施例1中製備的玉屏風散，濃度為0.01，0.1，1.0，10，100 μg/mL，空白組為0.1% DMSO，復孔。繼續孵育36 h後用MTT法測定其吸光度，結果如圖1所示，可見，玉屏風散對22PD的BJ細胞（BJ 22PD）的細胞增長率相對空白對照組分別為：-1.6%，4.8%，0%，5.1%和-3.3%（圖1A），說明玉屏風散在0.1-10 μg/mL範圍內對BJ 22PD細胞具有微弱的促生長作用；對27PD的BJ細胞（BJ 27PD）的細胞增長率相對空白對照組分別為：2.7%，12.0%，11.4%，14.4%和14.4%（圖1B），說明在0.01-100 μg/mL範圍內對BJ 27PD細胞具有溫和的促生長作用。

採用TRAP實驗評價玉屏風散對端粒酶活性的影響：BJ 成纖維細胞（30-35 PD）接種於 12 孔板中，分別加入加入實施例1中製備的玉屏風散（0.01，0.1，1，10，100 μg/mL），37 ℃下 5% CO2 孵箱培養，每 24 h 更換一半含藥物的培養基。細胞增加至 75%時收集細胞，離心除去培養液，PBS 洗滌，Chaps 裂解，離心，取上清液，參照TRAPEZE®端粒酶試劑盒操作說明，凝膠在 Storm®成像系統中掃描，利用 ImageQuant TL 軟體計算玉屏風散對端粒酶激活的影響，空白組為 0.1 % DMSO，結果見圖2A。

在0.01，0.1，1.0，10和100 μg/mL濃度下，端粒酶活性分別增加14.9%，42.3%，43.4%，-11.4%和-16.0%（圖2B）。說明玉屏風散在0.01μg/mL-1.0 μg/mL 濃度下具有顯著的激活端粒酶的作用，但在較高濃度下（10 μg/mL 和100 μg/mL）反而表現抑制端粒酶的作用。上述結果表明玉屏風散在合適的濃度範圍內具有基於端粒酶機制的抗神經細胞衰老和防治衰老及與衰老相關的疾病的潛力。

實施例7：

採用果蠅實驗評價玉屏風散對氧化應激效應的影響：採用果蠅培養基（HB8590）飼養黑腹果蠅；設置空白組，藥物組（玉屏風散組）：在培養基中分別添加濃度為100 mg/L和30 mg/L的玉屏風散。

果蠅壽命實驗 收集48 h羽化黑腹果蠅成蟲，隨機分組，每組果蠅400隻，雌雄各半。每96 h更換新鮮培養基。實驗開始後，每天定點觀察，記錄果蠅死亡數，直到各組果蠅全部死亡為止。計算果蠅的半數死亡時間、最高壽命、平均壽命和平均延壽率，其中平均延壽率(% )= (給藥組平均壽命-對照組平均壽命) /對照組平均壽命×100%。實驗數據見表1，說明玉屏風散具有良好的延長果蠅壽命的作用。

表1. 玉屏風散對果蠅壽命的影響

**與對照組比較，p<0.01, *與對照組比較，p<0.05

過氧化氫酶（Catalase ，CAT）、超氧物歧化酶（Superoxide dismutase ，SOD）和丙二醛（malondialdehvde，MDA）的測定：收集48 h羽化黑腹果蠅成蟲，隨機分組試驗。每組果蠅200隻，雌雄各半。每96 h更換新鮮培養基。在給藥後第30天時，用生理鹽水製成8%的組織勻漿；以4000 rpm 離心10 min，按照CAT、 SOD 和MDA試劑盒說明分別測定每組上清液CAT、SOD及MDA水平，實驗數據見表2。

表2. 玉屏風散對果蠅中CAT、SOD及MDA的影響

**為與對照組比較，p<0.01；*為與對照組比較，p<0.05。

由表1和2可見，玉屏風散可以延長果蠅壽命，可以提高果蠅體內CAT和SOD的水平，降低脂質過氧化物的降解產物MDA的含量，表明玉屏風散有較好的抗ROS能力。

以上實驗結果說明玉屏風散具有良好的激活端粒酶和抗體內氧化應激能力，在抗衰老和防治老年痴呆症方面具有良好的應用潛力。