基於電子媒介體硒雜二茂鐵的葡萄糖電極及其製備方法
2023-06-09 21:35:31 1
專利名稱：基於電子媒介體硒雜二茂鐵的葡萄糖電極及其製備方法
技術領域：
本發明涉及一種以硒雜二茂鐵衍生物和葡萄糖氧化酶為關鍵修飾物的葡萄糖電極及其製備方法和應用，屬於電分析化學檢測技術領域。
背景技術：
生物傳感器是由生物識別原件和換能器兩個部分組成的分析工具或系統，其中生物識別元件包括酶、抗體、微生物等生物活性物質。這些活性物質被固定在一定基質裡，並且與適當的轉換器密切接觸。當被測物通過擴散進入到生物敏感膜層中，經分子識別、發生生化反應以後，所產生的信息被相應的換能器轉化為定量的物理信號如光、電等，從而實現對特定底物的快速檢測。電化學生物傳感器是以電化學傳感器作為基礎電極與生物活性材料組成的生物傳感器，簡稱生物電極。電化學生物傳感器主要包括酶電極、微生物電極、免疫電極、組織電極、細胞器電極和DNA電極等，其中酶電極的發展在生物傳感器領域最具有代表性。生物傳感器的研究經歷了三個發展階段即第一代生物傳感器以氧為中繼體的電催化，第二代生物傳感器基於人造媒介體的電催化，第三代生物傳感器的直接電催化。利用人為加入具有電催化作用的電子媒介體，在酶與電極之間傳遞電子是第二代生物傳感器的一大特點，其中電子媒介體的性質是傳感器性能的決定性因素之一。但是，現有葡萄糖電極穩定性差，靈敏度不高，亟需一種催化性能好，穩定性高，對葡萄糖的檢測靈敏度顯著提高的葡萄糖電極。
發明內容
本發明的目的是提供一種基於電子媒介體硒雜二茂鐵的葡萄糖電極，具體利用硒雜二茂鐵、葡萄糖氧化酶共同修飾的玻碳電極作為葡萄糖傳感器。本發明通過硒雜二茂鐵良好的氧化還原作用降低傳感器的工作電壓，顯著提高傳感器對葡萄糖的響應靈敏度。本發明的另一個目的是提供該葡萄糖電極的製備方法。本發明的目的是通過以下方式實現的一種基於電子媒介體硒雜二茂鐵的葡萄糖電極，該葡萄糖電極包括媒介體層和酶反應層，所述的媒介體層為硒雜二茂鐵媒介體層，其中，媒介體硒雜二茂鐵選用FcSeSeFc、 FcSeCH2SeFc和FcS^中的一種，硒雜二茂鐵質量百分含量為媒介體複合修飾劑的8 % 9. 6%。媒介體複合修飾劑是用硒雜二茂鐵乙腈溶液、表面活性劑水溶液和Nafion水溶液混合製備得到。所述的表面活性劑優選為聚乙烯基吡咯烷酮、司班60、吐溫20或OP中的一種，質量百分含量為媒介體複合修飾劑的2. 7% 12. 5%。所述的Nafion水溶液中 Nafion質量百分含量為媒介體複合修飾劑的1. 35% 8. 33%。本發明所述的酶反應層由葡萄糖氧化酶(glucose oxidase)、牛血清白蛋白與戊二醛交聯製備得到。酶反應層優選由體積比為1 3 2 3 1 2的葡萄糖氧化酶溶液、質量百分濃度為的牛血清白蛋白溶液和質量百分濃度為的戊二醛溶液混合製成。葡萄糖氧化酶溶液是用pH 6. 0 7. 0的磷酸鹽緩衝溶液製成2000 2500活力單位/ mL的葡萄糖氧化酶溶液；質量百分比濃度為的牛血清白蛋白溶液和質量百分比濃度為的戊二醛溶液分別用pH 6. 0 7. 0的磷酸鹽緩衝溶液配製。一種基於電子媒介體硒雜二茂鐵的葡萄糖電極的製備方法，包括電極的預處理， 該方法包括以下步驟a.在預處理後的玻碳電極表面滴加硒雜二茂鐵電子媒介體複合修飾劑，使其完全覆蓋玻碳電極，晾乾，得到表面覆蓋電子媒介體硒雜二茂鐵層的玻碳電極；硒雜二茂鐵質量百分含量為媒介體複合修飾劑的8% 9. 6%。b.將葡萄糖氧化酶和牛血清白蛋白與戊二醛交聯後修飾在硒雜二茂鐵層上，在 0 4°C下乾燥18 Mh，在電極表面形成一層均勻的複合膜，即製得修飾玻碳電極。上述基於電子媒介體硒雜二茂鐵的葡萄糖電極的製備方法具體包括以下步驟a.在預處理後的玻碳電極上滴加硒雜二茂鐵電子媒介體複合修飾劑，使其完全覆蓋玻碳電極，晾乾，得到表面覆蓋電子媒介體層的玻碳電極；該硒雜二茂鐵電子媒介體複合修飾劑是通過以下方法製備得到的選用 FcSeSeFc, FcSeCH2SeFc, FcSe3中的一種用乙腈配成硒雜二茂鐵乙腈溶液；將硒雜二茂鐵乙腈溶液、表面活性劑水溶液和Nafion水溶液混合；其中，硒雜二茂鐵質量百分含量為媒介體複合修飾劑的8% 9. 6% ；b.將葡萄糖氧化酶溶於pH 6. 0 7. 0的磷酸鹽緩衝液中配成2000 2500活力單位/mL的葡萄糖氧化酶溶液；用pH 6. 0 7. 0的磷酸鹽緩衝溶液分別配製成質量百分比濃度為的牛血清白蛋白溶液和質量百分比濃度為的戊二醛溶液；體積比為1 3 2 3 1 2的葡萄糖氧化酶溶液、牛血清白蛋白溶液與 1 %戊二醛溶液交聯後，滴加在已覆蓋電子媒介體層的玻碳電極上並使其完全覆蓋，將電極在0 4°C下乾燥18 24h。該方法中所述的表面活性劑為聚乙烯基吡咯烷酮、司班60、吐溫20、0P中的一種， 質量百分含量為媒介體複合修飾劑的2. 7% 12. 5%。所述的Nafion水溶液中Nafion質量百分含量為媒介體複合修飾劑的1. 35% 8. 33%。該方法中所述的玻碳電極的預處理是通過以下步驟首先將玻碳電極拋光，再依次用粒徑為1. 0 μ m、0. 3 μ m和0. 05 μ m的Al2O3水懸浮液拋光至鏡面，最後依次在體積濃度為40 60%的HNO3水溶液、無水乙醇和蒸餾水中超聲洗淨。所述的媒介體複合修飾劑製備方法優選將質量濃度為0. 的硒雜二茂鐵乙腈溶液、質量百分濃度為1 %的表面活性劑水溶液和質量濃度為5%的Nafion水溶液混合得到。本發明所採用的原料均市售可得。本發明利用在電極與酶反應層之間加入硒雜二茂鐵衍生物作為電子媒介體。二茂鐵是一種具有夾心結構的金屬有機物，兩個戊二烯環所夾的鐵離子為正二價。作為氧化還原中心，二茂鐵可以在多數溶液中發生多次可逆的單電子氧化還原反應，是一種理想的氧化還原修飾基團。通過實驗發現，硒比氧原子具有更大的電負性，硒雜二茂鐵衍生物比二茂鐵具有更低的氧化還原電位和傳遞電子的能力。標準速率常數k°可以簡單的理解為氧化還原電對對動力學難易程度的度量。一個具有較大k°值的體系將在較短時間內達到平衡，而k°值較小的體系達到平衡很慢。通過實驗交流阻抗實驗可得到Fc及Fc^^eFc、FcSeCH2SeFc, FcSe3作為媒介體的標準速率常數分別為4. 88X l(T5s/cm，9. 47Xl(T5s/cm， 7. 24X10-5s/cm,6. 38X 10_5s/cm，硒雜二茂鐵衍生物具有更大的標準速率常數，更易發生氧化還原反應。本發明基於電子媒介體硒雜二茂鐵的葡萄糖電極可直接用於葡萄糖濃度的電化學測定。使用方法即測定方法如下將硒雜二茂鐵修飾的玻碳電極作為工作電極，飽和甘汞電極作為參比電極，鉬電極作為輔助電極，組成三電極體系；測定時，將所述修飾電極置於恆定速率攪拌的PH 7.0的磷酸鹽緩衝液中，在工作電極上施加一定的電位，記錄電流-時間曲線，當背景電流達到穩態後，用微量進樣器加葡萄糖溶液樣品，並記錄電流響應。本發明方法製備得到的電極在不同的葡萄糖濃度下測定傳感器對葡萄糖的電流響應(見圖1)， 響應時間3-5秒，並在濃度0. 02 10. Ommol/L範圍內，得到電流與葡萄糖濃度的線性關係曲線(見圖2)，利用該線性關係曲線及相應的線性方程，可得葡萄糖溶液試樣的濃度。與現有技術比較本發明的有益效果本發明的修飾電極運用了一種新的電子媒介體，它的催化性能好，穩定性高，對葡萄糖的檢測靈敏度高，所製得修飾電極不用時，可在磷酸鹽緩衝液中或4°C冰箱中保存，一個月內傳感器仍能保持93%的初始電流響應。
圖1為本發明修飾電極對0. 02 10. Ommol/L的葡萄糖溶液的電流-時間響應曲線2為本發明中修飾電極對葡萄糖響應的標準曲線3為本發明中所用硒雜二茂鐵衍生物的結構式
具體實施例方式以下通過具體實施例對本發明做進一步闡述。實施例1本實施例中的製備過程和步驟如下(1)玻碳電極的預處理首先將直徑為3mm的玻碳電極用金相砂紙拋光，再依次用粒徑為1. 0 μ m、0. 3 μ m和0. 05 μ m的Al2O3水懸浮液滴在麂皮上，將玻碳電極表面拋光至鏡面，最後依次用體積濃度為50%的HNO3水溶液、無水乙醇和蒸餾水超聲清洗各2min，備用；(2)製備Fc^^eFc電子媒介體修飾玻碳電極在預處理好的玻碳電極上滴加 30uLFcSeSeFc電子媒介體複合修飾劑，使得電子媒介體複合修飾劑覆蓋住玻碳電極，自然晾乾，得到表面覆蓋電子媒介體層的玻碳電極；該複合修飾劑的配製方法是將Fc^^eFc溶於乙腈中，配成質量濃度0. 的硒雜二茂鐵乙腈溶液，在上述硒雜二茂鐵乙腈溶液中加入聚乙烯基吡咯烷酮水溶液和 5%的Nafion水溶液，三者體積比為0. 硒雜二茂鐵乙腈溶液聚乙烯基吡咯烷酮溶液5% Nafion溶液=60 2. 5 1，攪拌混合均勻，得電子媒介體複合修飾劑。其中， 硒雜二茂鐵質量百分含量為媒介體複合修飾劑的9. 4%，表面活性劑聚乙烯基吡咯烷酮質量百分含量為媒介體複合修飾劑的3.9%，Nafion質量百分含量為媒介體複合修飾劑的 1. 57%。(3)製備FdekFc電子媒介體和葡萄糖氧化酶共同的修飾玻碳電極將葡萄糖氧化酶溶於PH 6. 0 7. 0的磷酸鹽緩衝液中配成2000 2500活力單位/mL的葡萄糖氧化酶溶液；用pH 6. 0 7. 0的磷酸鹽緩衝溶液分別配製質量百分比濃度為的牛血清白蛋白溶液和質量百分比濃度為的戊二醛溶液。再將葡萄糖氧化酶溶液、牛血清白蛋白溶液與戊二醛溶液混合後，滴加在已覆蓋電子媒介體層的玻碳電極上並使其完全覆蓋，滴加量為30uL ；在4°C下乾燥Mh，電極表面形成一層均勻的複合膜，即製得修飾玻碳電極。所用各修飾劑的體積比為葡萄糖氧化酶溶液牛血清白蛋白溶液戊二醛溶液=2 2 1。修飾玻碳電極作為葡萄糖傳感器對葡萄糖溶液濃度的測定方法和過程如下將硒雜二茂鐵修飾的玻碳電極作為工作電極，飽和甘汞電極作為參比電極，鉬電極作為輔助電極，組成三電極體系。測定時，將所述修飾電極置於恆定速率攪拌的PH 7.0 的磷酸鹽緩衝液中，在工作電極上施加一定的電位，記錄電流-時間曲線，當背景電流達到穩態後，用微量進樣器加葡萄糖溶液樣品，並記錄電流響應。按照本方法製備得到的電極在不同的葡萄糖濃度下測定傳感器對葡萄糖的電流響應(見圖1)，響應時間3-5秒。並在濃度0. 02 10. Ommol/L範圍內，得到電流與葡萄糖濃度的線性關係曲線(見圖2)，利用該線性關係曲線及相應的線性方程，得到葡萄糖溶液試樣的濃度。所製得修飾電極不用時，在磷酸鹽緩衝液中或4°C冰箱中保存，一個月內傳感器仍能保持93 %的初始電流響應。實施例2本實施例中的製備過程和步驟如下(1)玻碳電極的預處理首先將直徑為3mm的玻碳電極用金相砂紙拋光，再依次用粒徑為1. 0 μ m、0. 3 μ m和0. 05 μ m的Al2O3水懸浮液滴在麂皮上，將玻碳電極表面拋光至鏡面，最後依次用體積濃度為50%的HNO3水溶液、無水乙醇和蒸餾水超聲清洗各2min，備用；(2)製備FdeCHjeFc電子媒介體修飾玻碳電極在預處理好的玻碳電極上滴加 30uLFcSeCH2SeFc電子媒介體複合修飾劑，使得電子媒介體複合修飾劑覆蓋住玻碳電極，自然晾乾，得到表面覆蓋電子媒介體層的玻碳電極；該複合修飾劑的配製方法是將FdeCHjeFc溶於乙腈中，配成質量濃度0. 1 % 的硒雜二茂鐵乙腈溶液，在上述硒雜二茂鐵乙腈溶液中加入司班60水溶液和5%的 Nafion水溶液，三者體積比為0. 硒雜二茂鐵乙腈溶液司班60溶液5% Nafion 溶液=50 3 1，攪拌混合均勻，得電子媒介體複合修飾劑。其中，硒雜二茂鐵質量百分含量為媒介體複合修飾劑的9. 25%，表面活性劑司班60質量百分含量為媒介體複合修飾劑的5. 5%, Nafion質量百分含量為媒介體複合修飾劑的1. 88%。(3)製備FdeCHjeFc電子媒介體和葡萄糖氧化酶共同的修飾玻碳電極將葡萄糖氧化酶溶於PH 6. 0 7. 0的磷酸鹽緩衝液中配2000 2500活力單位/mL的葡萄糖氧化酶溶液；用pH 6. 0 7. 0的磷酸鹽緩衝溶液分別配製質量百分比濃度為的牛血清白蛋白溶液和質量百分比濃度為的戊二醛溶液；再將葡萄糖氧化酶溶液、牛血清白蛋白溶液與戊二醛溶液混合後，滴加在已覆蓋電子媒介體層的玻碳電極上並使其完全覆蓋，滴加量為30uL ；在4°C下乾燥Mh，在電極表面形成一層均勻的複合膜，即製得修飾玻碳電極。所用各修飾劑的體積比為葡萄糖氧化酶溶液牛血清白蛋白溶液戊二醛溶液=1 3 1。
7
修飾玻碳電極作為葡萄糖傳感器對葡萄糖溶液濃度的測定方法和過程如下將硒雜二茂鐵修飾的玻碳電極作為工作電極，飽和甘汞電極作為參比電極，鉬電極作為輔助電極，組成三電極體系；測定時，將所述修飾電極置於恆定速率攪拌的PH 7.0 的磷酸鹽緩衝液中，在工作電極上施加一定的電位，記錄電流-時間曲線，當背景電流達到穩態後，用微量進樣器加葡萄糖溶液樣品，並記錄電流響應。所製得修飾電極不用時，在磷酸鹽緩衝液中或4°C冰箱中保存，一個月內傳感器仍能保持93 %的初始電流響應。實施例3本實施例中的製備過程和步驟如下(1)玻碳電極的預處理首先將直徑為3mm的玻碳電極用金相砂紙拋光，再依次用粒徑為1. 0 μ m、0. 3 μ m和0. 05 μ m的Al2O3水懸浮液滴在麂皮上，將玻碳電極表面拋光至鏡面，最後依次用體積濃度為50%的HNO3水溶液、無水乙醇和二次蒸餾水超聲清洗各2min，(2)製備Fde3電子媒介體修飾玻碳電極在預處理好的玻碳電極上滴加Fde3電子媒介體複合修飾劑，使得電子媒介體複合修飾劑覆蓋住玻碳電極，自然晾乾，得到表面覆蓋電子媒介體層的玻碳電極；該修飾劑的配製方法是將一定量的Fck3溶於乙腈中，配成質量濃度0. 的硒雜二茂鐵乙腈溶液，在上述硒雜二茂鐵乙腈溶液中加入吐溫20水溶液和5%的Nafion 水溶液，三者體積比為硒雜二茂鐵乙腈溶液吐溫20溶液5% Nafion溶液== 55 2 1，攪拌混合均勻，得電子媒介體複合修飾劑。其中，硒雜二茂鐵質量百分含量為媒介體複合修飾劑的9. 48%，表面活性劑吐溫20質量百分含量為媒介體複合修飾劑的 3. 4%, Nafion質量百分含量為媒介體複合修飾劑的1. 7%。(3)製備FcSe53電子媒介體和葡萄糖氧化酶共同的修飾玻碳電極將葡萄糖氧化酶溶於PH 6. 0 7. 0的磷酸鹽緩衝液中配成2000 2500活力單位/mL的葡萄糖氧化酶溶液；用PH6. 0 7. 0的磷酸鹽緩衝溶液分別配製成質量百分比濃度為的牛血清白蛋白溶液和質量百分比濃度為的戊二醛溶液；再將葡萄糖氧化酶溶液、牛血清白蛋白溶液與戊二醛溶液混合後，滴加在已覆蓋電子媒介體層的玻碳電極上並使其完全覆蓋，滴加量為30uL ；在4°C下乾燥Mh，在電極表面形成一層均勻的複合膜，即製得修飾玻碳電極。所用各修飾劑的體積比為葡萄糖氧化酶溶液牛血清白蛋白溶液戊二醛溶液=3 1 2。修飾玻碳電極作為葡萄糖傳感器對葡萄糖溶液濃度的測定方法和過程如下將硒雜二茂鐵修飾的玻碳電極作為工作電極，飽和甘汞電極作為參比電極，鉬電極作為輔助電極，組成三電極體系；測定時，將所述修飾電極置於恆定速率攪拌的PH 7.0 的磷酸鹽緩衝液中，在工作電極上施加一定的電位，記錄電流-時間曲線，當背景電流達到穩態後，用微量進樣器加葡萄糖溶液樣品，並記錄電流響應。響應時間3 5秒。所製得修飾電極不用時，在磷酸鹽緩衝液中或4°C冰箱中保存，一個月內傳感器仍能保持93 %的初始電流響應。上述實施方式中，牛血清白蛋白(BR)購自於Fluka，USA ;Nafion(5wt. 購自於南京慧宇能源科技有限公司；OP購自於上海凌峰化學試劑有限公司。
FcSe3可通過以下方法製備得到將一個250mL的三口燒瓶抽真空充氮氣，反覆三次，加入二茂鐵(3. 7272g，20mmol)，再抽真空充氮氣重複兩次，然後將四氫呋喃(150mL)在氮氣保護下注入燒瓶中，冰浴攪拌，用注射器在氮氣保護下加入(1.6M in hexane)的正丁基鋰25mL (40mmol)，冰浴下反應30分鐘，之後室溫下反應2小時，溶液顏色由橙紅色變為深紅色，再緩慢加入硒粉(3. 2006g，40mmol)，反應半個小時，再加入硒粉(1. 5812g, 20mmol), 反應一個小時。之後，冷卻並過濾，取濾液蒸乾，用正己烷做流動相，將所得固體過100 200目的矽膠柱，取第二段產物，蒸乾得橙紅色固體為Fde3 (2. 2788g，5. 4mmol)，產率27%。FcSeSeFc可通過以下方法製備得到同FcSii3反應過程，不同的是過矽膠柱後，取第三段產物，蒸乾得紅棕色固體，產率48%。FcSeCH2SeFc可通過以下方法製備得到取IOOml的三口瓶，抽真空，通氮氣，加入 60ml 的 95% 乙醇，再加入 Fcje2O. 528g (Immol)，冰浴下加入 NaBH4O. 1513g (4mmol)，室溫反應池，加入Immol的二溴丙烷0. 43ml，溶液由橙紅色變為暗黃色，室溫下反應過夜。旋幹溶劑，水洗，用CH2Cl2萃取三次，萃取液乾燥後，過300-400目的矽膠柱，用3 1(正己烷二氯甲烷)做洗脫液洗脫，取第二段紅色油狀物，放置為固體，即得。
9
權利要求
1.一種基於電子媒介體硒雜二茂鐵的葡萄糖電極，該葡萄糖電極包括媒介體層和酶反應層，其特徵在於所述的媒介體層為硒雜二茂鐵媒介體層，其中，媒介體硒雜二茂鐵選用 FcSeSeFc, FcSeCH2SeFc和Fde3中的一種，硒雜二茂鐵質量百分含量為媒介體複合修飾劑的 8% 9. 6%。
2.根據權利要求1所述的基於電子媒介體硒雜二茂鐵的葡萄糖電極，其特徵在於媒介體複合修飾劑是用硒雜二茂鐵乙腈溶液、表面活性劑水溶液和Nafion水溶液混合製備得到。
3.根據權利要求2所述的基於電子媒介體硒雜二茂鐵的葡萄糖電極，其特徵在於所述的表面活性劑為聚乙烯基吡咯烷酮、司班60、吐溫20或OP中的一種，質量百分含量為媒介體複合修飾劑的2. 7% 12. 5%。
4.根據權利要求2所述的基於電子媒介體硒雜二茂鐵的葡萄糖電極，其特徵在於所述的Nafion水溶液中，Nafion質量百分含量為媒介體複合修飾劑的1. 35% 8. 33%。
5.根據權利要求1所述的基於電子媒介體硒雜二茂鐵的葡萄糖電極，其特徵在於所述的酶反應層由葡萄糖氧化酶、牛血清白蛋白與戊二醛交聯製備得到。
6.根據權利要求5所述的基於電子媒介體硒雜二茂鐵的葡萄糖電極，其特徵在於所述的酶反應層由體積比為1 3 2 3 1 2的葡萄糖氧化酶溶液、質量百分濃度為的牛血清白蛋白溶液和質量百分濃度為的戊二醛溶液混合製備得到；其中，葡萄糖氧化酶溶液是用PH 6. O 7. O的磷酸鹽緩衝溶液製成2000 2500活力單位/mL的葡萄糖氧化酶溶液；質量百分比濃度為的牛血清白蛋白溶液和質量百分比濃度為的戊二醛溶液分別用pH 6. O 7. O的磷酸鹽緩衝溶液配製。
7.—種權利要求1所述的基於電子媒介體硒雜二茂鐵的葡萄糖電極的製備方法，包括電極的預處理，其特徵在於該方法包括以下步驟a.在預處理後的玻碳電極表面滴加硒雜二茂鐵電子媒介體複合修飾劑，使其完全覆蓋玻碳電極，晾乾，得到表面覆蓋電子媒介體硒雜二茂鐵層的玻碳電極；硒雜二茂鐵質量百分含量為媒介體複合修飾劑的8% 9.6%。b.將葡萄糖氧化酶、牛血清白蛋白與戊二醛交聯後修飾在硒雜二茂鐵層上，在O 4°C 下乾燥18 Mh。
8.根據權利要求7所述的基於電子媒介體硒雜二茂鐵的葡萄糖電極的製備方法，包括電極的預處理，其特徵在於該方法具體包括以下步驟a.在預處理後的玻碳電極表面滴加硒雜二茂鐵電子媒介體複合修飾劑，使其完全覆蓋玻碳電極，晾乾，得到表面覆蓋電子媒介體層的玻碳電極；該硒雜二茂鐵電子媒介體複合修飾劑是通過以下方法製備得到的選用FcSeSeFc、 FcSeCH2SeFc, FcSe3中的一種用乙腈配成硒雜二茂鐵乙腈溶液；將硒雜二茂鐵乙腈溶液、表面活性劑水溶液和Nafion水溶液混合；其中，硒雜二茂鐵質量百分含量為媒介體複合修飾劑的8% 9. 6% ；b.將葡萄糖氧化酶溶於pH6. O 7. O的磷酸鹽緩衝液中配成2000 2500活力單位 /mL的葡萄糖氧化酶溶液；用pH 6. O 7. O的磷酸鹽緩衝溶液分別配製成質量百分比濃度為的牛血清白蛋白溶液和質量百分比濃度為的戊二醛溶液；體積比為1 3 2 3 1 2的葡萄糖氧化酶溶液、牛血清白蛋白溶液與戊二醛溶液交聯後，滴加在已覆蓋電子媒介體層的玻碳電極上並使其完全覆蓋，將電極在 0 4°C下乾燥18 24h。
9.根據權利要求8所述的基於電子媒介體硒雜二茂鐵的葡萄糖電極的製備方法，其特徵在於所述的表面活性劑為聚乙烯基吡咯烷酮、司班60、吐溫20、0P中的一種，質量百分含量為媒介體複合修飾劑的2. 7% 12. 5%;所述的Nafion質量百分含量為媒介體複合修飾劑的 1. 35% 8. 33%。
10.根據權利要求7或8所述的基於電子媒介體硒雜二茂鐵的葡萄糖電極的製備方法， 其特徵在於所述的玻碳電極的預處理是通過以下步驟首先將玻碳電極拋光，再依次用粒徑為1. O μ m、0. 3 μ m和0. 05 μ m的Al2O3水懸浮液拋光至鏡面，最後依次在體積濃度為40 60%的HNO3水溶液、無水乙醇和蒸餾水中超聲洗淨。
全文摘要
本發明公開了一種基於電子媒介體硒雜二茂鐵的葡萄糖電極，屬電分析化學檢測技術領域。該電極的製備是先將硒雜二茂鐵修飾在玻碳電極表面，再將葡萄糖氧化酶和牛血清白蛋白與戊二醛交聯後修飾在硒雜二茂鐵層上，在0～4℃下乾燥18～24h，在電極表面形成一層均勻的複合膜，即製得修飾玻碳電極。本發明主要是利用硒雜二茂鐵為電子媒介體，促進電極與酶反應層之間的電子傳遞，製備得到的葡萄糖電極直接用於葡萄糖濃度的快速測定，催化性能好，穩定性高，對葡萄糖的檢測靈敏度高。
文檔編號G01N27/30GK102297886SQ201110134758
公開日2011年12月28日 申請日期2011年5月24日 優先權日2011年5月24日
發明者景蘇, 李成東, 耿燕, 金青, 陳國松, 黃穎 申請人:南京工業大學