一種調節血脂的藥物組合物的製作方法

2023-06-09 17:49:36

專利名稱：一種調節血脂的藥物組合物的製作方法
技術領域：
本發明屬於醫藥領域。
背景技術：
薯蕷科(D/tMcweflcefle)薯蕷屬(DzYwcwefl)植物全球約650種，其中30多種藥 用薯蕷屬植物的根狀莖中含有薯蕷皂苷元(diosgenin)。薯蕷皂苷元是用於合成多 種甾體激素和避孕類藥物的重要藥源，目前世界上60%以上的甾體激素以它為原 料。甾體激素藥物廣泛應用於避孕、抗炎、抗風溼、心臟病、抗腫瘤、止血、抗 過敏等症，需求量大，發展迅速，是藥品生產一個重要領城，因此該屬植物具有 重要的經濟價值。
高脂血症是中老年常見病，也是導致動脈粥樣硬化和心腦血管疾病的重要原 因。動脈粥樣硬化指主動脈、中等動脈(如腦、腎、冠狀動脈內膜)的脂類、碳水 化合物及血液成分沉積壞死形成粥瘤，平滑肌細胞和膠原纖維增生、鈣化和硬化， 形成血栓而致管腔閉塞。有時還可導致高血壓、糖尿病、冠心病等疾病的發生， 由此引起的心腦血管疾病嚴重危害人類健康。隨著人口的老齡化和人們生活水平 的提高，高脂血症引起的相關疾病已排在我國城市居民死亡原因的第一位，因此 大力開發相關藥品，預防心腦血管疾病的發生具有重要的現實意義。
血脂，指血液中所含脂類的總稱，包括甘油三酯(TG)、膽固醇(TC)、 A-脂蛋白、磷脂和游離脂酸等。正常情況下大部分血脂可由動脈內膜滲入動脈壁， 再由動脈外膜的淋巴管排出，所以不至於沉積在動脈壁上。當血脂代謝或運轉異 常使血漿一種或多種脂質高於正常，即導致高脂血症的發生。當前常用的治療高 脂血症西藥有他汀類和貝特類，它們療效肯定，但長期服用有一定副作用，停藥 後血脂容易反彈。而中藥在治療高脂血症方面雖然起效慢，但療效肯定、作用持 久、毒副作用小，具有西藥不可比擬的獨特優勢。
中醫認為高脂血症多歸於肝腎虧虛，脾虛痰濁，氣滯血瘀，治療時應從補益肝腎、健脾益氣、滋陰養血、活血化瘀、清熱通便、消食化痰等方面開始施治。 穿龍薯蕷性味甘、平，主要用於:健脾、補肺、固腎、益精，治脾虛瀉洩、久痢、 虛勞咳嗽、消渴等症。可見穿龍薯蕷的性味與功能適用於治療高脂血症，穿龍薯 蕷根狀莖的調節血脂活性已有文獻報導，其地上部分的活性研究至今未見報導， 鑑於地上部分的資源更為豐富，本文研究了穿龍薯蕷地上部分水提物及其總皂苷 對高血脂模型小鼠血脂的調節作用。
中醫用薯蕷屬植物治療疾病的歷史悠久,我國第一部醫藥專著《神農本草經》 中就有相關記載，薯蕷屬植物主要用於健脾、補肺、固腎、益精，治脾虛瀉洩、 久痢、虛勞咳嗽、消渴等症。實踐證明該屬植物具有抗腫瘤、保護心臟、調節血 脂、降血糖、調節機體免疫力等多種生物活性，
現有研究表明薯蕷屬植物中除了含有主要的活性成分甾體皂苷類化合物以 外，還含有多種類型的化合物，如黃酮類、木質素類、二萜內酯類、二芳基庚酮 類、多糖類、胺基酸類、異香豆素類等其它成分。

發明內容
本發明提供一種調節血脂的藥物組合物，目的在於拓寬了薯蕷屬植物在醫藥
領域的應用範圍。本發明採取的技術方案是是由下列按重量百分比的化合物組 成的
3，7-二羥棊-2，4，6-三甲氧基菲10°/『35%，
l'(2，7-二羥基-4,6-二甲氧基菲)-2，7-二羥基-4，6-二甲氧基菲10%~35%, 7-羥基-2，6-二甲氧基-l，4-菲醌10%^35%， 山奈酚，3-Ov5-D，吡喃葡萄糖苷10%~35% 山奈酚-3-(9弄芸香糖苷10%~35%, 戸丁 10%~35%。
本發明的優點是本發明中的藥物組合物成分均從穿龍薯蕷地上部分提取分 離得到，屬於天然產物，調節血脂生物活性強，發現了治療高血脂症藥物用途組 合物各成分之間的最佳比例。用法用量口服，每天2次，每次30-100mg，最佳劑量為40-60mg/人/天。


圖l是提取分離流程圖。
具體實施例方式
下面能過具體實施方式
進一步說明本發明。 實驗例1本發明各化合物的製備方法
實驗材料、儀器與試劑
穿龍薯蕷地上部分採自吉林省靖宇縣，由吉林大學藥學院生藥教研室張繼敏
教授鑑定為穿龍薯蕷wjopo"/cfl Makino的地上部分。
柱色譜用矽膠(400 500目)為青島海洋化工廠產品，薄層色譜用矽膠板(IOO
mmxlOOmm)青島海洋化工廠產品。常壓ODS g所用填料為天津市化學試劑工廠
色譜技術開發公司生產。所用試劑均為分析純，其中石油醚為中沸程(6(TC-90'C)。
紙層析採用新華一號濾紙。薄層層析採用矽膠板。
熔點測定釆用Kofler顯微熔點測定儀。螢光檢測採用ZF-I型三用紫外分析
儀，上海顧村電光儀器廠生產。核磁共振譜採用ARX-500型核磁共振儀(TMS
內標)，美國Bruker公司生產。HRMS譜採用APEX II FT-ICRMS高分辨質譜
儀，德國Bruker Daltonnics公司生產。
實驗方法
化合物分離分離用矽膠柱採用矽膠柱和ODS柱，裝柱方法採用幹法和溼 法裝柱。在常壓及低壓下洗脫。矽膠柱層析洗脫劑石油醚-乙酸乙酯(20:1~1:1)， 氯仿-甲醇(40:1~1:1)，石油醚-丙酮(20:1~1:1)，氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(2:2:4:l)。 ODS柱層析洗脫劑甲醇-水(2:1~20:1)。層析分離監測採用TLC檢測法，顯色 方法包括螢光顯色法和以10。/。H2S04為顯色劑105。C下加熱顯色法。化合物純化採用重結晶、活性炭脫色及升華等方法。
化合物鑑定採用熔點測定、化學方法、紙層析法、核磁共振波譜、高分辨質 譜等方法。
提取與分離
穿龍薯蕷地上部分的提取工藝未見報導，本研究選擇70%乙醇為溶劑。將粉 碎後穿龍薯蕷地上部分5kg用70%乙醇回流提取3次，每次提取3小時。合併提 取液，減壓回收溶劑至相對密度1.12,濾過，濾液依次用石油醚、氯仿、乙酸乙 酯、正丁醇萃取，減壓回收溶劑至幹，得到石油醚(67.0g，待研究)、氯仿(102.0g)、 乙酸乙酯(44.0g)、正丁醇(31.0g，待研究)四個極性不同的部分。
氯仿萃取物經反覆矽膠柱色譜，以石油醚-丙酮、石油醚-乙酸乙酯、氯仿-甲醇等溶劑系統進行梯度洗脫，ODS柱以甲醇-水溶劑系統進行梯度洗脫，分離 得到的粗提物經反覆重結晶、活性炭脫色及升華等方法處理得到化合物1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10、 12、 13、 14、 16、 22、 25。
乙酸乙酯萃取物(40.0g)經反覆矽膠柱色譜，氯仿-甲醇、氯仿-乙酸乙酯-甲醇 -水等溶劑系統進行梯度洗脫，ODS柱以甲醇-水溶劑系統進行梯度洗脫，分離得 到的粗提物經反覆重結晶、活性炭脫色及升華等方法處理得到化合物11、 15、 17~21、 23、 24。
提取分離流程如圖l所示。
化合物的結構鑑定
化合物l 3，7-二羥基-2，4,6-三甲氧基菲棕色固體(CHCl3)。三氯化鐵-鐵氰化鉀反應陽性，提示結構中有酚羥基存在。 化合物6的^ NMR(500MHz， CD3C1)譜與化合物5的相似，低場給出5個 芳香質子信號，高場給出3個甲氧基質子單峰信號。化合物6的13C NMR(125.8MHz,CD3Cl)譜給出13個芳香碳信號，其中&146.5的碳信號峰度明 顯高於其它季碳信號，提示可能為化學位移相同的兩個碳的信號累加所致，因此 化合物6與化合物5 —樣有14個芳香碳信號和3個甲氧基碳信號，推斷化合物 I亦為菲類化合物。
從HMBC譜可見有2個甲氧基氫信號知3.97(3H， s)和&3.93(3H， s)同時與^c 146.5存在相關信號，進一步證實前述<5146.5信號代表兩個碳信號的推斷。位於 低場的質子信號^/8.90(lH, s, H-5)與& 146.5(C-6)、 144.6(C-7)、 123.4(C-4b)、 127.8(C-8a)、 118.5(C-4a)和111.0(C-8)存在相關信號，質子信號知7.23(1H， s, H-8) 與^:146.5(C隱6)、 144.6(C-7)、 124.7(C-9)、 123.4(C-4b)、 118.5(C-4a)和106.7(C-5) 存在相關信號；因為這兩個質子信號是單峰，與4個相同的碳信號相關，同時兩 者的碳氫信號又分別相關，故推斷它們位於同一個苯環上的對位。質子信號& 6.96(1H,s,H-l)與(5cl46.5(C-2)、143.5(C-4)、138.7(C-3)、124.9(C-10)和U8.5(C-4a) 存在相關信號；t^7.39(2H, s， H-9， IO)與& 127.8(C-8a)， 126.1(C曙10a)、 123.4(C-4b)、 U8.5(C-4a)、 1U.0(C-8)和104.6(C-l)存在相關信號；以上相關信息確定化合物是 菲類化合物。
在HMBC譜中，甲氧基質子信號^3.93(3H， s)與^146.5(C-2)存在相關信號 的同時又與104.6(C-l)存在較弱相關信號，因此確定為2位取代甲氧基；同理知 3.97(3H, s)與& 146.6(C-6)存在相關信號的同時又與104.6(C-5)存在較弱相關信 號，因此該甲氧基在6位。最後1個甲氧基由於與之相連接的碳(3143.5)與同環 的另一個連氧碳O 138.7)相比處於低場，因此確定這個甲氧基是連在C-4位， C-3(》138.7)位連接羥基。綜合以上分析，並與文獻報導的波譜數據比較，鑑定化 合物I為3 ， 7- 二羥基-2 ， 4 ， 6-三甲氧基菲(3， 7-dihydroxy-2， 4, 6-trimethoxyphenanthrene)。為首次從本屬植物獲得的化合物。化合物2 l-(2,7-二羥基-4,6-二甲氧基菲)-2，7-二羥基-4,6-二甲氧基菲
OCH3 OCH3
黃色粉末(acetone)。TLC檢測，365rnn下顯藍色螢光；以10%硫酸為顯色劑， 105'C下加熱顯黃綠色斑點。
NMR(500MHz, DMSO-^)譜中，3 9.29(1H， br s)和<5 9.01(1H， br s)給出兩 個酚羥基質子信號，示結構中含有酚羥基。低場區的信號3 9.08(lH,s)為菲類化 合物H-4或H-5質子信號，通常菲類化合物的H-4或H-5的質子信號在<5 9.5左 右，當它們的鄰位或對位有供電子基團-OH或-OCH3取代時，它們的質子信號向 高場移動0.5ppm。 (5 6.79(1H, d, J-9.0Hz)和(5 7.26(1H， d， J二9.0Hz)為苯環上兩個 相鄰質子信號。<5 4.14(3H， s, -OCH;O和3.98(3H， s, -0013)給出兩個甲氧基單峰信 號。
13r 、TiV/fWi，s TT\Aer\丄、說々厶山，Am智甘-您A總j A水龍TT卜iVt
L 丄、丄vxA、、jL^J,o丄VjJTL^， i^丄VuvJ-w6, k日山厶 i , I ■ ^T-Vi^rT^C l口 3 ， ， i yy "j' )jv
連氧碳(M57.9、 153.4、 147.9、 145.1)，其它為芳香季碳信號及未取代的芳香碳
信號，其中M26.4峰度較同類碳信號低，根據HMBC譜可知為化學位移相同的
叔碳信號和季碳信號重合所致，因為在^CNMR(DEPTQSP)譜中季碳信號向下。 在HMBC譜中，可見位於低場的質子信號知9.08(1& s)與<5C 147.9(C-6)、 145.1(C-7)、
126.4(C-8a)、 124.2(04b)、 114.2(C-4a)和U1.8(C，8)存在相關信號，質子信號<^ 7.08(1H， s)
與5C 147.9(C-6)、 145.1(C-7)、 126.4(C-9)、 126.4(C-8a)、 124.2(C-4b)和109.2(C-5)存在相關信
號，這兩個質子信號是單峰並且與4個相同的碳信號相關，同時兩者的碳氫信號又分別相關，
故推斷它們位於同一個苯環上的對位，3h9.08和3h7.06分別連在C-5和C-8位。兩個鄰位
質子<5 7.26(1H, d, J-9.0Hz)和<5 6.79(1H, d, J-9.0Hz)中，知7.26與<5C 133.9(C-10a)、
126,4(C-8a)、 124.2(C-4b)和111.8(C-8)存在相關信號，<5H6.79與<5c157.9(C-4)、 133.9(C-10a)、乜6.4(C-8a)、 114.2(C-4a)和111.2(C-l)存在相關信號，故分別歸屬為菲的C-9和C-10質子信 號。另外一個質子信號&6.97(lH，s)與3c157.9(04)、 153.4(C-2)、 124.2(C-4b)、 114.2(C-4a) 和111.2(C-l)存在相關信號，而與菲的C-IO 0122.7)、 C-10a(5U3.9)不相關，故該質子應該 連在C-3位。
根據HMBC譜進一步確定甲氧基和羥基的取代位置，甲氧基質子信號 4.14(3H, s)與& 157.9(C-4)存在相關信號的同時又與99.6(C-3)存在較弱相關信 號，羥基質子信號5 9.01(lH，brs)與(5cl53.4(C-2)、 & 111.2(C-l)、 3c99.6(C-3)相 關，因此確定為C-4位甲氧基取代，C-2位羥基取代；同樣，知3.98(3H, s)與& 147.9(C-6)存在相關信號的同時又與109.2(C-5)存在較弱相關信號，羥基質子信號 (5 9.29(1H,brs)與^:147.9(C-6)、 <5c145.1(C-7)、 & 1U.8(C-8)相關，因此確定另一 個苯環上為C-6位甲氧基取代，C-7位羥基取代。
至此，只有碳信號&111.2(C-1)上的取代基沒有確定，13C NMR(DEPTQSP) 譜中顯示^111.2(01)為季碳信號，根據化學位移可知它不能連氧原子，由於在 HMBC譜中只有知9.01(3-OH)、 6.97(H-3)和6.79(H-10)與它存在相關信號，因 此推斷連接一個與之相同的結構片段。
綜合以上分析鑑定化合物n為l-(2，7-二羥基-4,6-二甲氧基菲)-2，7-二羥基 -4，6-二甲氧基菲[1-(2, 7-dihydroxy-4， 6-dimethoxyphenanthrenyl)-2， 7-dihydroxy-4， 6-dimethoxyphenanthrene]，經Sciencefounder檢索證明為一未見文獻報導的新化 合物。
化合物3 7-羥基-2， 6-二甲氧基-l， 4-菲醌
棕紅色針狀結晶(CHCl3)。遇鹼呈紫紅色反應，示為含有游離羥基的醌類化 合物。可溶於氯仿、二甲基亞碸，微溶於甲醇、乙醇，不溶於水。
& NMR(500MHz, DMSO-^)譜中，位於低場的M0.33(1H， br s)信號為羥基質子信號，進一步證明有酚羥基存在；低場還給出5個芳香質子信號峰，其中(5 7.86(1H, d, _/=8.5 Hz)和《5 8.02(1H, d， J-8.5Hz)為苯環上的兩個相鄰質子信號，兩 個甲氧基質子信號氾.86(3H, s)和《3.96(3H， s)。
13C NMR(DMSO-^)譜給出16個碳信號，低場區的兩個羰基碳信號(5180.4 和3188.5進一步證明化合物為醌類化合物；三個連氧碳信號158.3、 152.4、 149.5; 兩個甲氧基碳信號^56.3、 55.4。
根據HMBC譜確證化合物時結構，知9.00(1H, s, H-5)與<5C 152.4(C-6)、 149.5(C-7)、 134.3(08a)、 124.95(C-4a)有相關信號存在，知7.26(1H,s，H-8)與3C 152.4(C-6)、 149.5(C-7)、 131.6(C-9)、 124.98(C-4b)有相關信號存在，為同一苯環 上的對位質子信號；兩個相鄰質子知S.02(1H， d, ^8.5Hz)與3c128.6(C-10a)、 124.98(C-4b)、 110.2(C-8)有相關信號存在，& .86(1H， d， J-8.5Hz)與& 180.4(C-1)、 134.3(C-8a)、 124.95(C-4a)有相關信號存在，為菲醌上的H-9和H-10; 另一個芳香質子信號^ 6.23(1H， s3)與(5c 188.5(C-4)、 180.4(C-1)、 158.3(C-2)、 124.95(C-4a)有相關信號存在，歸屬位H"3;甲氧基質子知3.86(3H， s)與& 158.3(C-2)有相關信號存在，3w3.96(3H,s)與&152.4(C-6)有相關信號存在，因此 兩個甲氧基分別取代在2位和6位。以上波譜數據與參考文獻W基本一致，因此 鑑定化合物III為7-羥基-2， 6-二甲氧基-l， 4-菲醌。為首次從本屬植物獲得的化 合物。
化合物4山奈酚-3-0^-"-吡喃葡萄糖苷
黃色粉末(MeOH)。三氯化鐵-鐵氰化鉀反應陽性，提示結構中有酚羥基存在； 鹽酸鎂粉反應陽性，Molish反應陽性，提示為黃酮苷類化合物；酸水解檢出D-葡萄糖。'H NMR(500MH， CD3OD)， 《5: 6.11(1H, d, J-2.0 Hz， H-6)， 6.31(1H， d, J=2.0 Hz, H-8), 7.99(1H, d, /=9.0 Hz， H-2'， H-6')， 6.78(1H, d, J^9.0他，HJ', H-5')， 5.05(1H, d， 《/=7.5 Hz, Glc- H-l)， 3.72~3.33為葡萄糖上的其它質子信號。13C 畫R(125.8廳，CD3OD), <5: 158.6(C-2), 135.6(C-3)， 179.7(C-4) ， 163.1(C-5)， 99.9(C-6), 166.1(C-7)， 94.8(C-8), 159.1(C-9), 105.7(C-10)， 122.7(C-l'), 132.4(C-2'), 116.1(C-3'), 161.6(C-4')， 116.1(C-5'), 132.4(C-6')， Glc: 105.0(01)， 73.1(C-2)， 75.1(C-3), 70.0(C-4)， 77.2(C-5), 62.0(C-6)。鑑定化合物IV結構為山奈酚-吡喃葡萄糖苷。
化合物5山奈酚-3-0-^芸香糖苷
淡黃色針晶(MeOH)。與鹽酸鎂粉反應陽性，Molish試驗陽性，推斷化合物 為黃酮苷。]H NMR(500MH， CD3OD)， J: 6.12(1H， d， J-1.5 Hz, H-6), 6.32(1H， d, /二1.5 Hz, H-8)， 7.97(1H， d, 7=9.0 Hz， H-2', H畫6,)， 6.80(1H， d， 《/=9.0 Hz^ H-3', H-5')， 5.04(1H， d， 《/=7.5 Hz^ Glu- H-l ), 4.42(1H， s， Rha- H-l )， 1.02(3H， d, /=6.5 Hz),為 鼠李糖末端甲基質子信號，3.72~3.30為葡萄糖和鼠李糖的其它質子信號。13C 畫R(125.8MH， CD3OD), J: 159.5(C-2)， 135,6(C-3), 179,5(C-4)， 163.1(C-5)， 100.1(06), 166.2(C-7)， 94.9(C-8), 158.7(C-9)， 105.8(C-10), 122.9(C-1')， 132.4(C-2'): 116.2(C-3')， 161.6(C-4'), 116.2(C-5')， 132.4(C-6'), Glc: 104.7(C-1), 75.9(C-2)， 78.2(C-3)， 71.5(C-4), 77.3(C-5)， 68.6(C-6), Rha: 102.5(C-1)， 72.2(C-2)， 72.4(C-3)， 74.0(C-4), 69.8(C-5)， 18.0(C-6)。鑑定化合物V結構為山奈酚-3-CH -芸香糖苷。
化合物6蘆丁
黃色針晶(MeOH)， mp.l88-19(TC。三氯化鐵-鐵氰化鉀反應陽性，提示結構 中有酚羥基存在；鹽酸鎂粉反應陽性，Molish反應陽性，提示為黃酮苷類化合物； 酸水解檢出D-葡萄糖和L-鼠李糖。NMR(500MH^ CD3OD)， & 6.11(1H, d， A2-0Hz， H-6), 6.30(1H, d， /=2.0Hz， H-8), 7.57(1H， d, /=2.0Hz, H-2'), 6.78(1H， d， 7=8.5Hz, H-5'), 7.54(1H, dd， 2.0Hz, H-6'), 5.01(1H， d, /=7.5Hz， Glu國H-l"),
4.42(1H, br s, Rha- H-l'〃)， 3.71(1H， d, J-10.5Hz, Glu- H-6"), 3.53(1H, br s, Rha-H-3'〃)， 3.44(1H, dd， */=9.5, 3.0Hz, Rha- H-2"'), 3.39 3.28為葡萄糖和鼠李糖上的 其它質子信號，M.02(3H， d， ^6.0Hz)為鼠李糖末端甲基質子信號。3C 畫R(125.8MHz, CD3OD)， A 159.4(C-2), 135.7(C-3)， 179.5(C-4)， 163.1(C國5), 101.1(C-6), 166.3(C曙7), 94.9(C-8)， 158.6(C-9)， 105'7(C-10)， 123.2(C-1')， 117，7(C-2'): 145.9(C-3'), 149.9(C-4'), 116.1(C-5')， 123.6(C-6'); Glc: 104.8(C-1"), 78.3(C-2")， 75.8(C-3")， 71.5(C隱4")， 77.3(C-5"), 68.6(C-6"); Rha; 102.5(C-l"')， 72.3(C-2'〃)， 72.2(C-3'〃), 74.0(C-4'〃), 69.0(C-5"'), 18.0(C-6"')。鑑定化合物VI結構為蘆丁。
實驗例2本發明對高脂血症小鼠血脂的影響試驗
材料與方法動物ICR小鼠，120隻，雄性80隻，雌性40隻，體重18-20g。購自吉林 大學基礎醫學院動物實驗中心，動物合格證號SCXK-(吉)-2003-0001。 藥品及試劑血脂康膠囊，規格300mg/粒，批號20060305，北京北大維信生 物科技有限公司生產；
非諾貝特組，規格200mg/粒，批號89396，法國利博福尼製藥公司生產； 膽固醇，規格生化試劑，25g/瓶，批號070516，天津市光復精細化工研 究所；
膽酸鈉，規格生化試劑，批號20070525，北京化學試劑公司； 豬油，由本研究室提供；
血清總膽固醇(TC)含量測定試劑盒，批號070501，中生北控生物科技 股份有限公司；
甘油三酯(TG)含量測定試劑盒，批號071831,中生北控生物科技股份 有限公司；
高密度脂蛋白膽固醇(HDL^ho)含量測定試劑盒，批號070171，中生北 控生物科技股份有限公司；
低密度脂蛋白膽固醇(LDL^;ho)含量測定試劑盒，批號070171，中生北 控生物科技股份有限公司產品。
本發明組合物，由本發明人提供。
儀器酶標儀，型號t PECAN A-5082， Austria SUNRISE公司產品。
方法
高脂飼料配製方法參照有關文獻，在88.7%的基礎詞料中加10%豬油、1% 膽固醇和0,3%膽酸鈉。將豬油加溫溶化，加入膽固醇和膽酸鈉，攪拌均勻後倒 入飼料中，拌勻，加適量溫水拌勻，平鋪在方盤中，厚度約1.5cm,用壁紙刀劃 成2cmx3cm大小的小塊，放置8(TC恆溫乾燥箱中烘乾。
配藥方法分別根據各組給藥劑量、動物體重、給藥天數計算出所需要量， 精密稱定，先加少量蒸餾水，研磨均勻，再加蒸餾水至所需濃度即可。
動物購入後適應環境3天，按體重隨機分為正常對照組；高脂模型組；陽性對照藥血脂康膠囊組(240mg/kg);陽性對照藥非諾貝特組(40mg/kg);組合
物高劑量組(400mg/kg)、中劑量組(200mg/kg)和低劑量組(100mg/kg);共7
組，每組12隻。雌性每組4隻，雄性每組8隻。
實驗過程中，正常對照組動物飼以常規飼料，其他各組動物均飼以高脂飼料。
實驗動物每天上午灌胃給藥1次。灌胃體積均為20ml/kg。正常對照組及高脂模
型組動物灌胃蒸餾水，給藥組分別給予相應的藥物溶液。連續給藥2周，最後l
次給藥當晚，動物禁食不禁水16小時，次日眼球取血0.5ml，離心(3000r/min)
分離血清；採用酶比色法測定血清總膽固醇(TC)含量、採用酶比色法測定血
清甘油三酯(TG)含量、採用磷鎢酸-鎂沉澱法測定血清高密度脂蛋白膽固醇
(HDL-cho)含量、採用聚乙烯硫酸沉澱法測定血清低密度脂蛋白膽固醇
(LDL-cho)含量。指標數據以均數加減標準差(^t5)表示，統計學處理方法
採用組間t-檢驗。 結果
實驗結果表明，小鼠在連續飼以高脂飼料造模2周後，模型組動物的血清 TC、TG、LDL-cho含量均較正常對照組明顯升高，TC含量正常對照組為3.16:t0.48 mmol/L，模型組為6.54±0.84mmol/L (PO.01); TG含量正常對照組為0.69±0.20 mmol/L，模型組為0.85±0.21 mmol/L (PO.05); LDL《ho含量正常對照組為 0.30±0.28 mmol/L，模型組為1.92±1.09mmol/L (P<0.01);模型組動物的血清 HDL-cho含量明顯降低，正常對照組為3.90±1.63 mmol/L ，模型組為 2.40±0.79mmol/L (PO.05);模型組動物的血清TC與HDL-cho含量的比值 (TC/HDL-cho)明顯升高，正常對照組為0.90i0.24，模型組為2.89士1.53(P〈0.01); 結果表明高血脂症動物模型已形成。
給藥兩周後，組合物400mg/kg給藥劑量組動物血清TC含量(4.97±1.37 mmo!7L)均明顯低於高脂模型組(6，54±0.84 mmol/L) (PO.05);給藥組動物血 清LDL-cho含量(1.13±0.82 mmol/L)也較高脂模型組(1.92±1.09 mmol/L)明 顯降低(PO.05);給藥組動物血清HDL-cho含量(3.54±0.99 mmol/L)較模型 組(2.40士0.79 mmol/L)明顯升高，相應的給藥組血清的TC/HDL-cho值(1.30士0.28 mmol/L)也明顯低於高脂模型組(2.89±1.53) (P<0,05)。組合物200mg/kg給藥劑量組動物血清TC含量(6.23±1.11 mmo冗)與高脂 模型組比較有降低趨勢，但無顯著差別(PX).05);給藥組動物血清LDL-cho含量 (1.69±2.19mmol/L)與高脂模型組比較有降低趨勢，但無顯著差別(PX).05);給 藥組動物血清TG含量及TC/HDL-cho比值與模型組動物相比無明顯差別。
組合物lOOmg/kg給藥劑量組動物血清TC、 TG、 LDL-cho、 HDL-cho含量 及TC/HDL-cho比值與模型組動物相比也無顯著差別。
上述試驗結果表明，本發明組合物物具有降低高脂模型小鼠血清TC、 LDL-cho含量、升高血清HDL-cho含量的作用，並使血清TC與HDL-cho含量 的比值(TC/HDL-cho)也隨之降低。各組動物TC、 TG、 LDL-cho、 HDL-cho 含量及TC/HDL-cho比值見表。
討論
血脂類成分不溶於水，在體內運輸時必須與蛋白質結合在一起，以增加與水 的親和，這種與脂類結合在一起的蛋白質叫脂蛋白。脂蛋白常見的包括極低密度 脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)，不同脂蛋白的脂質 組成主要是量的不同，較少有質的差異。極低密度脂蛋白在肝臟內合成，其化學 組成80% 90%是甘油三酯，是機體轉運內源性甘油三酯的重要形式，所以當極 低密度脂蛋白升高時，甘油三酯也必然升高；低密度脂蛋白是將肝臟合成的膽固 醇轉運到全身組織的主要形式，它的膽固醇含量最高，約佔其化學組成的45% 50%，所以低密度脂蛋白增高時，血液中的膽固醇總量必然增高；高密度脂蛋白 顆粒較小，蛋白質含量最高，約佔45% 55%，能夠比較自由地出入動脈，可把 外周組織和動脈壁上的膽固醇逆向轉運到肝臟中進行代謝後排出體外，減少膽固 醇在動脈壁上的沉積，高密度脂蛋白的減少就意味著膽固醇總量的增高。本發明 的藥物組合物可降低高脂模型小鼠血清TC、 LDL-cho含量，升高血清HDL-cho 含量，因而具有調節血脂，預防動脈粥樣硬化等心血管疾病的作用。表組合物對實驗性高脂血症小鼠血脂含量的影響(x±s)
分組給藥劑量 (nig/kg)動物數 (只)TC含量 (mmol/L)TG含量 (mmol/L)HDL-cho含量 (mmol/L)LDL-cho含量 (mmol/L)TC/HDL-cho
正常對照123.16土0.480.69±0.203.卯±1.630.30±0.280.90±0.24
高脂模型126.54士0.84雜* 0.85±0.21*2.40±0.79*1.92士1.09**2.89±1.53**
血脂康240125.49士0.97"10.59±0.18*2.28士0.612.28±0.952.63±1.08
非諾貝特40125.38±0.92*0.98±0.233.29土0,82'1.39±1.201.75±0.34
柳124.97±1.37*0.86±0.263.54士0.99'1.13士0.82'1.30±0.28'
組合輛200126.23士l.il1.02±0.482.05±0.671.69±2.193.25土1.00
賺126.29±1.390.86±0.282.44±1.571.98±1.483.31±1.66
注與正常組比較，#p<0.05;M lf| w 胖pO.01;鵬p<0.001;與模型組比較'p〈0.05; "p<0.01。實驗例1本發明片劑的製備 是由下列按重量百分比的化合物組成的 3，7-二羥基-2，4,6-三甲氧基菲20%,
1 -(2,7-二羥基-4,6-二甲氧基菲)-2，7-二羥基-4，6-二甲氧基菲20%, 7-羥基-2,6-二甲氧基-l，4-菲醌15%， 山奈酚-3-0^-/>吡喃葡萄糖苷15% 山奈酚-3-0^-芸香糖苷15% 盧丁 15%。
將上述化合物中加入製備片劑的常規輔料，製成片劑。
實驗例3本發明顆粒劑的製備
是由下列按重量百分比的化合物組成的
3,7-二羥基-2，4,6-三甲氧基菲15%，
l-(2，7-二羥基-4，6-二甲氧基菲)-2，7-二羥基-4,6-二甲氧基菲15%， 7-羥基-2,6-二甲氧基-l，4-菲醌10%， 山奈酚-3-(9-P-D-吡喃葡萄糖苷15% 山奈酚-3-0-々-芸香糖苷15% 盧丁 35%。
將上述化合物中加入製備顆粒劑的常規輔料，製成顆粒劑。 實驗例4本發明膠囊劑的製備 是由下列按重量百分比的化合物組成的 3，7-二羥基-2，4，6-三甲氧基菲30%,
l-(2,7-二羥基-4，6-二甲氧基菲)-2,7-二羥基-4,6-二甲氧基菲20%, 7-羥基-2，6-二甲氧基-l,4-菲醌15%， 山奈酚-3-0^-￡>-吡喃葡萄糖苷10% 山奈酚-3-0^-芸香糖苷15% 盧丁 10%。將上述化合物中裝入膠囊，製成膠囊劑。
權利要求
1、一種調節血脂的藥物組合物，其物徵在於是由下列按重量百分比的化合物組成的3，7-二羥基-2，4，6-三甲氧基菲10％～35％，1-(2，7-二羥基-4，6-二甲氧基菲)-2，7-二羥基-4，6-二甲氧基菲10％～35％，7-羥基-2，6-二甲氧基-1，4-菲醌10％～35％，山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷10％～35％山奈酚-3-O-β-芸香糖苷10％～35％，蘆丁10％～35％。
全文摘要
本發明涉及一種調節血脂的藥物組合物，屬於醫藥領域。是由下列按重量百分比的化合物組成的3，7-二羥基-2，4，6-三甲氧基菲10％～35％，1-(2，7-二羥基-4，6-二甲氧基菲)-2，7-二羥基-4，6-二甲氧基菲10％～35％，7-羥基-2，6-二甲氧基-1，4-菲醌10％～35％，山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷10％～35％山奈酚-3-O-β-芸香糖苷10％～35％，蘆丁10％～35％。本發明的優點是藥物組合物成分均從穿龍薯蕷地上部分提取分離得到，屬於天然產物，調節血脂生物活性強，發現了治療高血脂症藥物用途組合物各成分之間的最佳比例。
文檔編號A61K31/122GK101584685SQ20081005072
公開日2009年11月25日 申請日期2008年5月20日 優先權日2008年5月20日
發明者劉金平, 丹 盧, 李平亞 申請人:李平亞