治療腫瘤的注射製劑的質量控制方法

2023-06-28 03:47:36 2

專利名稱：治療腫瘤的注射製劑的質量控制方法
技術領域：
本發明涉及一種治療腫瘤的注射製劑的質量控制方法，屬於對藥品進行質量控制的技術領域。
背景技術：
人類發現腫瘤已有3000年以上的歷史。上皮性的惡性腫瘤稱為癌，約佔所有惡性腫瘤的90％以上。癌症是嚴重威脅人類健康的一大類疾病，並且患者在不斷上升。由本申請人研製的一種治療腫瘤的藥物，它主要由斑蝥、人參、黃芪、刺五加製備而成，該產品具有清熱解毒，消瘀散結的作用，在治療原發性肝癌，肺癌，直腸癌，惡性淋巴瘤，婦科惡性腫瘤等疾病方面取得良好的效果。但是如何有效控制該產品的質量，確保該產品的臨床療效，是本申請人長期以來一直研究的問題。

發明內容
本發明的目的在於提供一種治療腫瘤的注射製劑的質量控制方法，該注射製劑包括注射液、凍乾粉和大輸液，本發明對製劑中主要有效成分人參皂苷Re和斑蝥素的含量測定以及人參和黃芪的薄層鑑別進行了研究和篩選，所制定的質量控制方法能全面有效地控制產品的質量，從而確保了該製劑的臨床療效。
本發明所述治療腫瘤的注射製劑是這樣構成的按照重量組份計算它主要由斑蝥0.5-5、人參20-80、黃芪50-150、刺五加100-200製備而成。
本發明所述注射製劑這樣製備人參切片，用20-85％乙醇加熱回流提取1-5次，合併提取液，濾過，回收乙醇，藥液備用；藥渣與其餘斑蝥等三味加水煎煮1-6次，合併煎液，濾過，濾液與人參提取液合併，以石硫法沉澱處理1-3次，所得上清液加乙醇使含醇量達50-99％，靜置過夜，取上清液減壓回收乙醇至無醇味，再按照常規方法分別製成注射液、大輸液或凍乾粉製劑。
所述質量控制方法主要包括性狀、檢查、鑑別、含量測定項目中的部分或全部；其中鑑別包括與α-萘酚的顯色反應、以人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品為對照的薄層鑑別；含量測定包括對製劑中人參皂苷Re和斑蝥素的含量測定。
本製劑中人參和黃芪的鑑別方法是以人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品為對照，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10、10℃以下放置的下層溶液為展開劑的薄層鑑別方法。
鑑別方法包括以下項目的部分或全部
(1)分別取凍乾粉加注射用水溶解、或取大輸液濃縮、或直接取注射液；加入乙醇攪勻，濾過，沉澱物用乙醇洗滌1-5次，將沉澱物用蒸餾水溶解，取0.5-3ml置試管中，微熱後加入2-10％α-萘酚乙醇溶液，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸，在二液面接界處顯紫紅色環；(2)分別取凍乾粉加注射用水溶解、或取大輸液濃縮、或直接取注射液；置分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇提取1-5次，合併提取液，置水浴上蒸乾，殘渣用蒸餾水溶解，加入預先製備好的DA-201樹脂柱上，用水洗滌，再用20-85％甲醇液洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣加入甲醇使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液，分別點於同一矽膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10％硫酸乙醇溶液，加熱，置紫外光燈200-500nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點。
更具體的鑑別方法包括以下項目的部分或全部(1)取凍乾粉30-100g加注射用水5-20ml使溶解、或取大輸液30-100ml濃縮至5-20ml；或取注射液5-20ml；分別取上述藥品，加乙醇20-100ml，攪勻，濾過，沉澱物用乙醇洗滌1-5次，將沉澱物用蒸餾水2-10ml溶解，取0.5-3ml置試管中，微熱後加入2-10％α-萘酚乙醇溶液2-10滴，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸0.2-2ml，在二液面接界處顯紫紅色環；(2)取凍乾粉200-400g加注射用水40-60ml使溶解、或取大輸液200-400ml濃縮至40-60ml；或取注射液40-60ml；分別取上述藥品，置分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇提取1-5次，合併提取液，置水浴上蒸乾，殘渣用蒸餾水1-10ml溶解，加入預先製備好的內徑1～1.5cm、長15cm、填充12cm的DA-201樹脂後，再填充2g中性氧化鋁的DA-201樹脂柱上，用水50-150ml洗滌，再用20-85％甲醇液30-100ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣加甲醇0.5-3ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇製成每1ml各含0.5-3mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各3-20μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱，置紫外光燈200-500nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點。
本製劑中人參皂苷Re的含量測定方法是以人參皂苷Re對照品為對照的分光光度法。
本製劑中斑蝥素的含量測定方法是以斑蝥素對照品為對照，以聚乙二醇20M及甲基矽橡膠SE-30為固定液的氣相色譜法。
含量測定方法包括(1)人參皂苷Re對照品溶液的製備精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇溶解，搖勻，即得；標準曲線的製備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加入2-10％香草醛冰醋酸溶液和高氯酸，搖勻，置水浴中加熱，取出，用水冷卻，加入冰醋酸，搖勻，照中國藥典分光光度法，測定吸收度，以吸收度為縱坐標、濃度為橫坐標，繪製標準曲線；供試品溶液的製備分別取凍乾粉加注射用水溶解、或取大輸液濃縮、或直接取注射液；置分液漏鬥中，用氯仿提取1-5次，合併氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1-5次，棄去氯仿液，洗液與上述水層合併，置分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇提取1-6次，合併正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發皿中，用正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液併入蒸發皿中，蒸乾，用蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層後，用蒸餾水洗脫，棄去洗液，用40-90％乙醇洗脫，收集洗脫液於蒸發皿中，置水浴上蒸乾，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法精密量取供試品溶液100μl，照標準曲線的製備項下的方法，自「置10ml具塞試管中」起依法測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射製劑中，注射液中含人參以人參皂苷Re計，不得少於0.15mg/ml；凍乾粉中含人參以人參皂苷Re計，不得少於2％；大輸液製劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少於0.02mg/ml；(2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定色譜條件與系統適用性試驗以聚乙二醇20M及甲基矽橡膠SE-30為固定液，塗布濃度分別為5-20％和2-10％，1-9∶9-1混合裝柱；柱溫為160±10℃；理論板數按斑蝥素峰計算，應不低於1500；對照品溶液的製備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿溶解，搖勻，作為對照品溶液；供試品溶液的製備分別取凍乾粉加注射用水溶解、或取大輸液濃縮、或直接取注射液；置具塞試管中，加入1-3mol/L硫酸溶液，搖勻，再精密加入氯仿，密塞，振搖，靜置分層，必要時離心，取下層液即得；測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，計算；該注射製劑中，注射液中含斑蝥素為0.0005～0.004mg/ml；凍乾粉中含斑蝥素為0.01～0.1％；大輸液製劑中含斑蝥素為0.00008～0.0008mg/ml。
更具體的含量測定方法包括(1)人參皂苷Re對照品溶液的製備精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇溶解使每1ml中含人參皂苷Re1-2mg，搖勻，即得；標準曲線的製備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液0.1-1ml、高氯酸0.5-1.5ml，搖勻，置40-80℃水浴中加熱10-30分鐘，取出，用水冷卻0.5-5分鐘，加冰醋酸2-10ml，搖勻，照中國藥典分光光度法，在300-700nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標、濃度為橫坐標，繪製標準曲線；供試品溶液的製備取凍乾粉60-150g加注射用水10-30ml使溶解、或取大輸液50-200ml濃縮至10-30ml；或取注射液10-30ml；分別精密量取上述藥品，置分液漏鬥中，用氯仿提取1-5次，合併氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1-5次，棄去氯仿液，洗液與上述水層合併，置分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇提取1-6次，合併正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉1-10g，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發皿中，用正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液併入蒸發皿中，蒸乾，用蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層後，用蒸餾水100ml洗脫，棄去洗液，用40-90％乙醇洗脫，收集洗脫液於蒸發皿中，置水浴上蒸乾，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法精密量取供試品溶液100μl，照標準曲線的製備項下的方法，自「置10ml具塞試管中」起依法測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射製劑中，注射液中含人參以人參皂苷Re計，不得少於0.15mg/ml；凍乾粉中含人參以人參皂苷Re計，不得少於2％；大輸液製劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少於0.02mg/ml；(2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定色譜條件與系統適用性試驗以聚乙二醇20M及甲基矽橡膠SE-30為固定液，塗布濃度分別為5-20％和2-10％，1-9∶9-1混合裝柱；柱溫為160±10℃；理論板數按斑蝥素峰計算，應不低於1500；對照品溶液的製備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿製成每1ml含0.05-0.1mg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的製備取凍乾粉30-100g加注射用水5-20ml使溶解、或取大輸液30-100ml濃縮至5-20ml；或取注射液5-20ml；分別取上述藥品，置具塞試管中，加入1-3mol/L硫酸溶液0.5-3ml，搖勻，再精密加入0.5-3ml氯仿，密塞，振搖1-10分鐘，靜置分層，必要時離心，取下層液即得；測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各2-15μl，注入氣相色譜儀，計算；該注射製劑中，注射液中含斑蝥素為0.0005～0.004mg/ml；凍乾粉中含斑蝥素為0.01～0.1％；大輸液製劑中含斑蝥素為0.00008～0.0008mg/ml。
所述質量控制方法包括性狀對於注射液產品為淺棕色的澄明液體；對於大輸液產品為黃色至淺棕色的澄明液體；對於凍乾粉產品為黃色至淺棕色疏鬆塊狀物；鑑別(1)分別取凍乾粉加注射用水溶解、或取大輸液濃縮、或直接取注射液；加入乙醇攪勻，濾過，沉澱物用乙醇洗滌1-5次，將沉澱物用蒸餾水溶解，取0.5-3ml置試管中，微熱後加入2-10％α-萘酚乙醇溶液，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸，在二液面接界處顯紫紅色環；(2)分別取凍乾粉加注射用水溶解、或取大輸液濃縮、或直接取注射液；置分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇提取1-5次，合併提取液，置水浴上蒸乾，殘渣用蒸餾水溶解，加入預先製備好的DA-201樹脂柱上，用水洗滌，再用20-85％甲醇液洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣加入甲醇使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液，分別點於同一矽膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10％硫酸乙醇溶液，加熱，置紫外光燈200-500nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點；檢查PH值應為3.0-6.0；重金屬取凍乾粉40-80g加注射用水10ml使溶解、或取大輸液2ml、或取注射液2ml，置坩堝中，水浴上蒸乾，依照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五；熱原分別取凍乾粉100-200g加注射用水30ml使溶解、或取大輸液30ml、或取注射液30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至80-150ml，按家兔體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應符合規定；其他本發明的注射液、凍乾粉或大輸液應符合中國藥典關於注射劑項下的有關規定；含量測定(1)人參皂苷Re對照品溶液的製備精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇溶解，搖勻，即得；標準曲線的製備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加入2-10％香草醛冰醋酸溶液和高氯酸，搖勻，置水浴中加熱，取出，用水冷卻，加入冰醋酸，搖勻，照中國藥典分光光度法，測定吸收度，以吸收度為縱坐標、濃度為橫坐標，繪製標準曲線；供試品溶液的製備分別取凍乾粉加注射用水溶解、或取大輸液濃縮、或直接取注射液；置分液漏鬥中，用氯仿提取1-5次，合併氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1-5次，棄去氯仿液，洗液與上述水層合併，置分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇提取1-6次，合併正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發皿中，用正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液併入蒸發皿中，蒸乾，用蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層後，用蒸餾水洗脫，棄去洗液，用40-90％乙醇洗脫，收集洗脫液於蒸發皿中，置水浴上蒸乾，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法精密量取供試品溶液100μl，照標準曲線的製備項下的方法，自「置10ml具塞試管中」起依法測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射製劑中，注射液中含人參以人參皂苷Re計，不得少於0.15mg/ml；凍乾粉中含人參以人參皂苷Re計，不得少於2％；大輸液製劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少於0.02mg/ml；(2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定色譜條件與系統適用性試驗以聚乙二醇20M及甲基矽橡膠SE-30為固定液，塗布濃度分別為5-20％和2-10％，1-9∶9-1混合裝柱；柱溫為160±10℃；理論板數按斑蝥素峰計算，應不低於1500；對照品溶液的製備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿溶解，搖勻，作為對照品溶液；供試品溶液的製備分別取凍乾粉加注射用水溶解、或取大輸液濃縮、或直接取注射液；置具塞試管中，加入1-3mol/L硫酸溶液，搖勻，再精密加入氯仿，密塞，振搖，靜置分層，必要時離心，取下層液即得；測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，計算；該注射製劑中，注射液中含斑蝥素為0.0005～0.004mg/ml；凍乾粉中含斑蝥素為0.01～0.1％；大輸液製劑中含斑蝥素為0.00008～0.0008mg/ml。
經研究發現，採用以下質量控制方法將更容易控制本發明製劑的質量，更利於保證本製劑的臨床療效。故所述質量控制方法還可包括性狀對於注射液產品為淺棕色的澄明液體；對於大輸液產品為黃色至淺棕色的澄明液體；對於凍乾粉產品為黃色至淺棕色疏鬆塊狀物；鑑別(1)取凍乾粉30-100g加注射用水5-20ml使溶解、或取大輸液30-100ml濃縮至5-20ml；或取注射液5-20ml；分別取上述藥品，加乙醇20-100ml，攪勻，濾過，沉澱物用乙醇洗滌1-5次，將沉澱物用蒸餾水2-10ml溶解，取0.5-3ml置試管中，微熱後加入2-10％α-萘酚乙醇溶液2-10滴，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸0.2-2ml，在二液面接界處顯紫紅色環；(2)取凍乾粉200-400g加注射用水40-60ml使溶解、或取大輸液200-400ml濃縮至40-60ml；或取注射液40-60ml；分別取上述藥品，置分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇提取1-5次，合併提取液，置水浴上蒸乾，殘渣用蒸餾水1-10ml溶解，加入預先製備好的內徑1～1.5cm、長15cm、填充12cm的DA-201樹脂後，再填充2g中性氧化鋁的DA-201樹脂柱上，用水50-150ml洗滌，再用20-85％甲醇液30-100ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣加甲醇0.5-3ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇製成每1ml各含0.5-3mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各3-20μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱，置紫外光燈200-500nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點；檢查PH值應為3.0-6.0；重金屬取凍乾粉40-80g加注射用水10ml使溶解、或取大輸液2ml、或取注射液2ml，置坩堝中，水浴上蒸乾，依照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五；熱原分別取凍乾粉100-200g加注射用水30ml使溶解、或取大輸液30ml、或取注射液30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至80-150ml，按家兔體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應符合規定；其他本發明的注射液、凍乾粉或大輸液應符合中國藥典關於注射劑項下的有關規定；含量測定(1)人參皂苷Re對照品溶液的製備精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇溶解使每1ml中含人參皂苷Re1-2mg，搖勻，即得；標準曲線的製備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液0.1-1ml、高氯酸0.5-1.5ml，搖勻，置40-80℃水浴中加熱10-30分鐘，取出，用水冷卻0.5-5分鐘，加冰醋酸2-10ml，搖勻，照中國藥典分光光度法，在300-700nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標、濃度為橫坐標，繪製標準曲線；供試品溶液的製備取凍乾粉60-150g加注射用水10-30ml使溶解、或取大輸液50-200ml濃縮至10-30ml；或取注射液10-30ml；分別精密量取上述藥品，置分液漏鬥中，用氯仿提取1-5次，合併氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1-5次，棄去氯仿液，洗液與上述水層合併，置分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇提取1-6次，合併正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉1-10g，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發皿中，用正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液併入蒸發皿中，蒸乾，用蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層後，用蒸餾水100ml洗脫，棄去洗液，用40-90％乙醇洗脫，收集洗脫液於蒸發皿中，置水浴上蒸乾，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法精密量取供試品溶液100μl，照標準曲線的製備項下的方法，自「置10ml具塞試管中」起依法測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射製劑中，注射液中含人參以人參皂苷Re計，不得少於0.15mg/ml；凍乾粉中含人參以人參皂苷Re計，不得少於2％；大輸液製劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少於0.02mg/ml；(2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定色譜條件與系統適用性試驗以聚乙二醇20M及甲基矽橡膠SE-30為固定液，塗布濃度分別為5-20％和2-10％，1-9∶9-1混合裝柱；柱溫為160±10℃；理論板數按斑蝥素峰計算，應不低於1500；對照品溶液的製備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿製成每1ml含0.05-0.1mg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的製備取凍乾粉30-100g加注射用水5-20ml使溶解、或取大輸液30-100ml濃縮至5-20ml；或取注射液5-20ml；分別取上述藥品，置具塞試管中，加入1-3mol/L硫酸溶液0.5-3ml，搖勻，再精密加入0.5-3ml氯仿，密塞，振搖1-10分鐘，靜置分層，必要時離心，取下層液即得；測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各2-15μl，注入氣相色譜儀，計算；該注射製劑中，注射液中含斑蝥素為0.0005～0.004mg/ml；凍乾粉中含斑蝥素為0.01～0.1％；大輸液製劑中含斑蝥素為0.00008～0.0008mg/ml。
本製劑中，人參具有增強免疫力的作用，斑蝥具有抗腫瘤的作用。人參和斑蝥均為該產品中起主要作用的藥物，而人參皂苷Re和斑蝥素又分別是人參和斑蝥中的主要有效成分，故本發明應對人參皂苷Re及斑蝥素進行含量測定，方能有效控制該產品的質量，但是如何有效測定該製劑中人參皂苷Re和斑蝥素的含量，是本發明的難點所在。經過研究，我們發現，採用分光光度法，並採用氯仿提取藥物，然後再用水飽和的正丁醇提取，加入無水硫酸鈉後過大孔吸附樹脂的方法製備供試品溶液，可有效測定該製劑中人參皂苷Re的含量；採用氣相色譜法，色譜條件與系統適用性試驗為以聚乙二醇20M及甲基矽橡膠SE-30為固定液，塗布濃度分別為5-20％和2-10％，1-9∶9-1混合裝柱；柱溫為160±10℃；用該方法可有效測定製劑中斑蝥素的含量。另外在製備斑蝥素供試品溶液的方法中，我們沒有使用K-D濃縮器，減少了檢驗成本。
本發明還對人參和黃芪進行了薄層鑑別研究，並以人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品為對照，採用水飽和的正丁醇提取，然後過樹脂柱的方法提取藥物，製備供試品溶液；以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，用該方法鑑別製劑中的人參和黃芪藥材，其分離度好，斑點顯色清晰，陰性對照無幹擾，方法重現性好。所以用本發明方法可有效控制治療腫瘤的注射製劑的質量，保證該製劑的臨床療效。
本發明的質量控制方法是經過大量的篩選得到的最佳方案，以下實驗研究為本發明的優選過程。
一、人參皂苷Re含量測定方法研究1、供試品溶液製備方法研究方法1取藥物，置分液漏鬥中，用氯仿提取，合併氯仿提取液，用蒸餾水洗滌，棄去氯仿液，洗液與上述水層合併，置分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇提取，合併正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發皿中，用正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液併入蒸發皿中，蒸乾，用蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層後，用蒸餾水洗脫，棄去洗液，用70％乙醇洗脫，收集洗脫液於蒸發皿中，置水浴上蒸乾，用甲醇溶解殘渣，搖勻，即得。
方法2取藥物，置蒸發皿中，於水浴上濃縮，加氯仿振搖提取，棄去氯仿，再加水飽和的正丁醇振搖提取3次，合併正丁醇，加氨試液洗1次，棄去鹼液，正丁醇溶液置水浴上蒸乾，殘渣加甲醇溶解，即得。

根據試驗結果可知，採用方法1製備供試品溶液，人參皂苷Re提取更為完全。
二、斑蝥素含量測定方法研究1、供試品溶液製備方法研究方法1取藥物，置具塞試管中，加入1.8mol/L硫酸溶液，搖勻，再加入氯仿，密塞，振搖3分鐘，靜置分層，必要時離心，取下層液即得。
方法2取藥物，加入1.8mol/L硫酸溶液，用氯仿提取3次，合併氯仿液，用K-D濃縮器濃縮並定容，即得。

根據實驗結果可知，兩種方法所提取的斑蝥素含量無明顯差別。但是由於方法2中使用了K-D濃縮器，增加了檢驗成本。另據本申請人了解，由於K-D濃縮器多用於食品的檢測，在藥品檢測中使用的不多，且國內大多數藥物檢驗所均無K-D濃縮器，故本發明中採用方法1檢測本產品中斑蝥素的含量，不僅可以相對減少檢驗成本，還方便各省藥檢所對該產品進行檢測。
三、人參、黃芪薄層鑑別研究供試品溶液製備方法一取藥物，置分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇提取2次，合併提取液，置水浴上蒸乾，殘渣用蒸餾水溶解，加入預先製備好的DA-201樹脂柱上，用水洗滌，再用40％甲醇液洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣加入甲醇溶解，作為供試品溶液；同法製備缺人參、黃芪陰性對照液。
供試品溶液製備方法二取藥物，裝入濾紙筒內，置索氏提取器中，加乙醚提取至無色，棄去乙醚液，加甲醇浸泡過夜後再加甲醇提取至無色，用少量甲醇洗滌容器，合併提取液及洗滌液，水浴蒸乾，殘渣用水微熱熔解，用0.1mol/L氫氧化鈉飽和的正丁醇提取6次，合併正丁醇提取液，水浴蒸乾，殘渣加甲醇溶解；同法製備缺人參、黃芪陰性對照液。
展開劑選擇分別以氯仿、醋酸乙酯、乙腈、水不同比例的混合溶液；氯仿、醋酸乙酯、甲醇、水不同比例的混合溶液；氯仿、甲醇、水不同比例的混合溶液為展開劑。
結果採用方法一製備供試品溶液，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，其分離度好，斑點顯色清晰，陰性對照無幹擾，方法重現性好。最佳展開劑為氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝4∶8∶3∶4、10℃以下放置的下層溶液。
與現有技術相比，本發明對製劑中主要有效成分人參皂苷Re和斑蝥素的含量測定以及人參和黃芪的薄層鑑別進行了研究和篩選，所採用的質量控制方法科學合理，準確度高，重現性好，不僅能全面有效地控制治療腫瘤的注射製劑的質量，確保該製劑的臨床療效，而且所採用的方法相對減少了檢驗成本。
具體實施例方式以下通過實施例進一步說明本發明，但不作為對本發明的限制。
本發明的實施例1性狀對於注射液產品為淺棕色的澄明液體；對於大輸液產品為黃色至淺棕色的澄明液體；對於凍乾粉產品為黃色至淺棕色疏鬆塊狀物；鑑別(1)取凍乾粉60g加注射用水10ml使溶解、或取大輸液60ml濃縮至10ml；或取注射液10ml；分別取上述藥品，加乙醇50ml，攪勻，濾過，沉澱物用乙醇洗滌2次，將沉澱物用蒸餾水5ml溶解，取1ml置試管中，微熱後加入5％α-萘酚乙醇溶液50滴，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸0.5ml，在二液面接界處顯紫紅色環；(2)取凍乾粉300g加注射用水50ml使溶解、或取大輸液300ml濃縮至30ml；或取注射液50ml；分別取上述藥品，置分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇提取2次，每次30ml，合併提取液，置水浴上蒸乾，殘渣用蒸餾水3ml溶解，加入預先製備好的DA-201樹脂柱(內徑1～1.5cm，長15cm，填充12cm的DA-201樹脂後，再填充2g中性氧化鋁)上，用水100ml洗滌，再用40％甲醇液50ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇製成每1ml各含1mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝4∶8∶3∶4，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱數分鐘，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點；檢查PH值應為3.8-5.0；重金屬取凍乾粉20g加注射用水2ml使溶解、或取大輸液2ml、或取注射液2ml，置坩堝中，水浴上蒸乾，依照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五；熱原分別取凍乾粉150g加注射用水30ml使溶解、或取大輸液30ml、或取注射液30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至100ml，按家兔體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應符合規定；其他本發明的注射液、凍乾粉或大輸液應符合中國藥典關於注射劑項下的有關規定；含量測定(1)人參皂苷Re對照品溶液的製備精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇溶解使每1ml中含人參皂苷Re1.6mg，搖勻，即得；標準曲線的製備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，用水冷卻2分鐘，加冰醋酸5ml，搖勻，照中國藥典分光光度法，在544nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標、濃度為橫坐標，繪製標準曲線；供試品溶液的製備取凍乾粉100g加注射用水20ml使溶解、或取大輸液120ml濃縮至20ml；或取注射液20ml；分別精密量取上述藥品，置分液漏鬥中，用氯仿提取3次，每次20ml，合併氯仿提取液，用蒸餾水洗滌2次，每次5ml，棄去氯仿液，洗液與上述水層合併，置分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇提取3次，每次50ml，合併正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉3g，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發皿中，用正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液併入蒸發皿中，蒸乾，用蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層後，用蒸餾水100ml洗脫，控制流速為0.4ml/min，棄去洗液，用70％乙醇80ml洗脫，收集洗脫液於蒸發皿中，置水浴上蒸乾，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；
測定法精密量取供試品溶液100μl，照標準曲線的製備項下的方法，自「置10ml具塞試管中」起依法測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算。該注射製劑中，注射液中含人參以人參皂苷Re計，不得少於0.15mg/ml；凍乾粉中含人參以人參皂苷Re計，不得少於2％；大輸液製劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少於0.02mg/ml；(2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定色譜條件與系統適用性試驗以聚乙二醇20M及甲基矽橡膠SE-30為固定液，塗布濃度分別為10％和5％，1∶1混合裝柱；柱溫為160±10℃；理論板數按斑蝥素峰計算，應不低於1500；對照品溶液的製備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿製成每1ml含0.01mg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的製備取凍乾粉60g加注射用水10ml使溶解、或取大輸液60ml濃縮至10ml；或取注射液10ml；分別取上述藥品，置具塞試管中，加入1.8mol/L硫酸溶液1ml，搖勻，再精密加入1ml氯仿，密塞，振搖3分鐘，靜置分層，必要時離心，取下層液即得；測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各4μl，注入氣相色譜儀，計算；該注射製劑中，注射液中含斑蝥素為0.0005～0.004mg/ml；凍乾粉中含斑蝥素為0.01～0.1％；大輸液製劑中含斑蝥素為0.00008～0.0008mg/ml。
本發明的實施例2性狀對於注射液產品為淺棕色的澄明液體；對於大輸液產品為黃色至淺棕色的澄明液體；對於凍乾粉產品為黃色至淺棕色疏鬆塊狀物；鑑別取凍乾粉30g加注射用水5ml使溶解、或取大輸液30ml濃縮至5ml；或取注射液5ml；分別取上述藥品，加乙醇20ml，攪勻，濾過，沉澱物用乙醇洗滌1次，將沉澱物用蒸餾水2ml溶解，取0.5ml置試管中，微熱後加入2％α-萘酚乙醇溶液2滴，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸0.2ml，在二液面接界處顯紫紅色環；檢查PH值應為3.0-5.0；熱原分別取凍乾粉100g加注射用水30ml使溶解、或取大輸液30ml、或取注射液30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至80ml，按家兔體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應符合規定；
含量測定斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定色譜條件與系統適用性試驗以聚乙二醇20M及甲基矽橡膠SE-30為固定液，塗布濃度分別為5％和2％，1∶9混合裝柱；柱溫為160±10℃；理論板數按斑蝥素峰計算，應不低於1500；對照品溶液的製備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿製成每1ml含0.05mg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的製備取凍乾粉30g加注射用水5ml使溶解、或取大輸液30ml濃縮至5ml；或取注射液5ml；分別取上述藥品，置具塞試管中，加入1mol/L硫酸溶液0.5ml，搖勻，再精密加入0.5ml氯仿，密塞，振搖1分鐘，靜置分層，必要時離心，取下層液即得；測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各2μl，注入氣相色譜儀，計算；該注射製劑中，注射液中含斑蝥素為0.0005～0.004mg/ml；凍乾粉中含斑蝥素為0.01～0.1％；大輸液製劑中含斑蝥素為0.00008～0.0008mg/ml。
本發明的實施例3性狀對於注射液產品為淺棕色的澄明液體；對於大輸液產品為黃色至淺棕色的澄明液體；對於凍乾粉產品為黃色至淺棕色疏鬆塊狀物；鑑別取凍乾粉200g加注射用水40ml使溶解、或取大輸液200ml濃縮至40ml；或取注射液40ml；分別取上述藥品，置分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇提取1次，合併提取液，置水浴上蒸乾，殘渣用蒸餾水1ml溶解，加入預先製備好的DA-201樹脂柱(內徑1～1.5cm，長15cm，填充12cm的DA-201樹脂後，再填充2g中性氧化鋁)上，用水50ml洗滌，再用20％甲醇液30ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣加甲醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇製成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各3μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝10∶5∶0.5∶10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱，置紫外光燈200nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點；含量測定人參皂苷Re對照品溶液的製備精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇溶解使每1ml中含人參皂苷Re1mg，搖勻，即得；
標準曲線的製備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加2％香草醛冰醋酸溶液0.1ml、高氯酸0.5ml，搖勻，置40℃水浴中加熱10分鐘，取出，用水冷卻0.5分鐘，加冰醋酸2ml，搖勻，照中國藥典分光光度法，在300nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標、濃度為橫坐標，繪製標準曲線；供試品溶液的製備取凍乾粉60g加注射用水10ml使溶解、或取大輸液50ml濃縮至10ml；或取注射液10ml；分別精密量取上述藥品，置分液漏鬥中，用氯仿提取1次，合併氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1次，棄去氯仿液，洗液與上述水層合併，置分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇提取1次，合併正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉1g，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發皿中，用正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液併入蒸發皿中，蒸乾，用蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層後，用蒸餾水100ml洗脫，控制流速為0.4ml/min，棄去洗液，用40％乙醇洗脫，收集洗脫液於蒸發皿中，置水浴上蒸乾，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法精密量取供試品溶液100μl，照標準曲線的製備項下的方法，自「置10ml具塞試管中」起依法測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射製劑中，注射液中含人參以人參皂苷Re計，不得少於0.15mg/ml；凍乾粉中含人參以人參皂苷Re計，不得少於2％；大輸液製劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少於0.02mg/ml。
本發明的實施例4性狀對於注射液產品為淺棕色的澄明液體；對於大輸液產品為黃色至淺棕色的澄明液體；對於凍乾粉產品為黃色至淺棕色疏鬆塊狀物；檢查重金屬取凍乾粉40g加注射用水10ml使溶解、或取大輸液2ml、或取注射液2ml，置坩堝中，水浴上蒸乾，依照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五；其他本發明的注射液、凍乾粉或大輸液應符合中國藥典關於注射劑項下的有關規定；含量測定(1)人參皂苷Re對照品溶液的製備精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇溶解使每1ml中含人參皂苷Re2mg，搖勻，即得；標準曲線的製備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加10％香草醛冰醋酸溶液1ml、高氯酸1.5ml，搖勻，置80℃水浴中加熱30分鐘，取出，用水冷卻5分鐘，加冰醋酸10ml，搖勻，照中國藥典分光光度法，在700nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標、濃度為橫坐標，繪製標準曲線；供試品溶液的製備取凍乾粉150g加注射用水30ml使溶解、或取大輸液200ml濃縮至30ml；或取注射液30ml；分別精密量取上述藥品，置分液漏鬥中，用氯仿提取5次，每次10ml，合併氯仿提取液，用蒸餾水洗滌5次，每次5ml，棄去氯仿液，洗液與上述水層合併，置分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇提取6次，每次30ml，合併正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉10g，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發皿中，用正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液併入蒸發皿中，蒸乾，用蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層後，用蒸餾水100ml洗脫，控制流速為0.4ml/min，棄去洗液，用90％乙醇洗脫，收集洗脫液於蒸發皿中，置水浴上蒸乾，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法精密量取供試品溶液100μl，照標準曲線的製備項下的方法，自「置10ml具塞試管中」起依法測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射製劑中，注射液中含人參以人參皂苷Re計，不得少於0.15mg/ml；凍乾粉中含人參以人參皂苷Re計，不得少於2％；大輸液製劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少於0.02mg/ml；(2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定色譜條件與系統適用性試驗以聚乙二醇20M及甲基矽橡膠SE-30為固定液，塗布濃度分別為20％和10％，9∶1混合裝柱；柱溫為160±10℃；理論板數按斑蝥素峰計算，應不低於1500；對照品溶液的製備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿製成每1ml含0.1mg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的製備取凍乾粉100g加注射用水20ml使溶解、或取大輸液100ml濃縮至20ml；或取注射液20ml；分別取上述藥品，置具塞試管中，加入3mol/L硫酸溶液3ml，搖勻，再精密加入3ml氯仿，密塞，振搖10分鐘，靜置分層，必要時離心，取下層液即得；測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各15μl，注入氣相色譜儀，計算；該注射製劑中，注射液中含斑蝥素為0.0005～0.004mg/ml；凍乾粉中含斑蝥素為0.01～0.1％；大輸液製劑中含斑蝥素為0.00008～0.0008mg/ml。
本發明的實施例5
性狀對於注射液產品為淺棕色的澄明液體；對於大輸液產品為黃色至淺棕色的澄明液體；對於凍乾粉產品為黃色至淺棕色疏鬆塊狀物；鑑別(1)取凍乾粉100g加注射用水20ml使溶解、或取大輸液100ml濃縮至20ml；或取注射液20ml；分別取上述藥品，加乙醇100ml，攪勻，濾過，沉澱物用乙醇洗滌5次，將沉澱物用蒸餾水10ml溶解，取3ml置試管中，微熱後加入10％α-萘酚乙醇溶液10滴，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸2ml，在二液面接界處顯紫紅色環；(2)取凍乾粉400g加注射用水60ml使溶解、或取大輸液400ml濃縮至60ml；或取注射液60ml；分別取上述藥品，置分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇提取5次，每次15ml，合併提取液，置水浴上蒸乾，殘渣用蒸餾水10ml溶解，加入預先製備好的DA-201樹脂柱(內徑1～1.5cm，長15cm，填充12cm的DA-201樹脂後，再填充2g中性氧化鋁)上，用水150ml洗滌，再用85％甲醇液100ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣加甲醇3ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇製成每1ml各含3mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各20μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1∶15∶6∶1，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱，置紫外光燈500nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點；檢查PH值應為3.8-6.0；重金屬取凍乾粉80g加注射用水10ml使溶解、或取大輸液2ml、或取注射液2ml，置坩堝中，水浴上蒸乾，依照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五；熱原分別取凍乾粉200g加注射用水30ml使溶解、或取大輸液30ml、或取注射液30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至150ml，按家兔體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應符合規定；其他本發明的注射液、凍乾粉或大輸液應符合中國藥典關於注射劑項下的有關規定。
權利要求
1.一種治療腫瘤的注射製劑的質量控制方法，該注射製劑包括注射液、凍乾粉和大輸液，其特徵在於所述質量控制方法主要包括性狀、檢查、鑑別、含量測定項目中的部分或全部；其中鑑別包括與α-萘酚的顯色反應、以人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品為對照的薄層鑑別；含量測定包括對製劑中人參皂苷Re和斑蝥素的含量測定。
2.按照權利要求1所述治療腫瘤的注射製劑的質量控制方法，其特徵在於本製劑中人參和黃芪的鑑別方法是以人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品為對照，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10、10℃以下放置的下層溶液為展開劑的薄層鑑別方法。
3.按照權利要求1或2所述治療腫瘤的注射製劑的質量控制方法，其特徵在於鑑別方法包括以下項目的部分或全部(1)分別取凍乾粉加注射用水溶解、或取大輸液濃縮、或直接取注射液；加入乙醇攪勻，濾過，沉澱物用乙醇洗滌1-5次，將沉澱物用蒸餾水溶解，取0.5-3ml置試管中，微熱後加入2-10％α-萘酚乙醇溶液，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸，在二液面接界處顯紫紅色環；(2)分別取凍乾粉加注射用水溶解、或取大輸液濃縮、或直接取注射液；置分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇提取1-5次，合併提取液，置水浴上蒸乾，殘渣用蒸餾水溶解，加入預先製備好的DA-201樹脂柱上，用水洗滌，再用20-85％甲醇液洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣加入甲醇使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液，分別點於同一矽膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10％硫酸乙醇溶液，加熱，置紫外光燈200-500nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點。
4.按照權利要求3所述治療腫瘤的注射製劑的質量控制方法，其特徵在於具體的鑑別方法包括以下項目的部分或全部(1)取凍乾粉30-100g加注射用水5-20ml使溶解、或取大輸液30-100ml濃縮至5-20ml；或取注射液5-20ml；分別取上述藥品，加乙醇20-100ml，攪勻，濾過，沉澱物用乙醇洗滌1-5次，將沉澱物用蒸餾水2-10ml溶解，取0.5-3ml置試管中，微熱後加入2-10％α-萘酚乙醇溶液2-10滴，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸0.2-2ml，在二液面接界處顯紫紅色環；(2)取凍乾粉200-400g加注射用水40-60ml使溶解、或取大輸液200-400ml濃縮至40-60ml；或取注射液40-60ml；分別取上述藥品，置分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇提取1-5次，合併提取液，置水浴上蒸乾，殘渣用蒸餾水1-10ml溶解，加入預先製備好的內徑1～1.5cm、長15cm、填充12cm的DA-201樹脂後，再填充2g中性氧化鋁的DA-201樹脂柱上，用水50-150ml洗滌，再用20-85％甲醇液30-100ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣加甲醇0.5-3ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇製成每1ml各含0.5-3mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各3-20μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱，置紫外光燈200-500nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點。
5.按照權利要求1所述治療腫瘤的注射製劑的質量控制方法，其特徵在於本製劑中人參皂苷Re的含量測定方法是以人參皂苷Re對照品為對照的分光光度法。
6.按照權利要求1所述治療腫瘤的注射製劑的質量控制方法，其特徵在於本製劑中斑蝥素的含量測定方法是以斑蝥素對照品為對照，以聚乙二醇20M及甲基矽橡膠SE-30為固定液的氣相色譜法。
7.按照權利要求1、5或6所述治療腫瘤的注射製劑的質量控制方法，其特徵在於含量測定方法包括(1)人參皂苷Re對照品溶液的製備精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇溶解，搖勻，即得；標準曲線的製備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加入2-10％香草醛冰醋酸溶液和高氯酸，搖勻，置水浴中加熱，取出，用水冷卻，加入冰醋酸，搖勻，照中國藥典分光光度法，測定吸收度，以吸收度為縱坐標、濃度為橫坐標，繪製標準曲線；供試品溶液的製備分別取凍乾粉加注射用水溶解、或取大輸液濃縮、或直接取注射液；置分液漏鬥中，用氯仿提取1-5次，合併氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1-5次，棄去氯仿液，洗液與上述水層合併，置分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇提取1-6次，合併正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發皿中，用正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液併入蒸發皿中，蒸乾，用蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層後，用蒸餾水洗脫，棄去洗液，用40-90％乙醇洗脫，收集洗脫液於蒸發皿中，置水浴上蒸乾，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法精密量取供試品溶液100μl，照標準曲線的製備項下的方法，自「置10ml具塞試管中」起依法測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射製劑中，注射液中含人參以人參皂苷Re計，不得少於0.15mg/ml；凍乾粉中含人參以人參皂苷Re計，不得少於2％；大輸液製劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少於0.02mg/ml；(2)斑蝥素 照中國藥典氣相色譜法測定色譜條件與系統適用性試驗以聚乙二醇20M及甲基矽橡膠SE-30為固定液，塗布濃度分別為5-20％和2-10％，1-9∶9-1混合裝柱；柱溫為160±10℃；理論板數按斑蝥素峰計算，應不低於1500；對照品溶液的製備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿溶解，搖勻，作為對照品溶液；供試品溶液的製備分別取凍乾粉加注射用水溶解、或取大輸液濃縮、或直接取注射液；置具塞試管中，加入1-3mol/L硫酸溶液，搖勻，再精密加入氯仿，密塞，振搖，靜置分層，必要時離心，取下層液即得；測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，計算；該注射製劑中，注射液中含斑蝥素為0.0005～0.004mg/ml；凍乾粉中含斑蝥素為0.01～0.1％；大輸液製劑中含斑蝥素為0.00008～0.0008mg/ml。
8.按照權利要求7所述治療腫瘤的注射製劑的質量控制方法，其特徵在於具體的含量測定方法包括(1)人參皂苷Re對照品溶液的製備精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇溶解使每1ml中含人參皂苷Re1-2mg，搖勻，即得；標準曲線的製備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液0.1-1ml、高氯酸0.5-1.5ml，搖勻，置40-80℃水浴中加熱10-30分鐘，取出，用水冷卻0.5-5分鐘，加冰醋酸2-10ml，搖勻，照中國藥典分光光度法，在300-700nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標、濃度為橫坐標，繪製標準曲線；供試品溶液的製備取凍乾粉60-150g加注射用水10-30ml使溶解、或取大輸液50-200ml濃縮至10-30ml；或取注射液10-30ml；分別精密量取上述藥品，置分液漏鬥中，用氯仿提取1-5次，合併氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1-5次，棄去氯仿液，洗液與上述水層合併，置分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇提取1-6次，合併正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉1-10g，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發皿中，用正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液併入蒸發皿中，蒸乾，用蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層後，用蒸餾水100ml洗脫，棄去洗液，用40-90％乙醇洗脫，收集洗脫液於蒸發皿中，置水浴上蒸乾，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法精密量取供試品溶液100μl，照標準曲線的製備項下的方法，自「置10ml具塞試管中」起依法測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射製劑中，注射液中含人參以人參皂苷Re計，不得少於0.15mg/ml；凍乾粉中含人參以人參皂苷Re計，不得少於2％；大輸液製劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少於0.02mg/ml；(2)斑蝥素 照中國藥典氣相色譜法測定色譜條件與系統適用性試驗以聚乙二醇20M及甲基矽橡膠SE-30為固定液，塗布濃度分別為5-20％和2-10％，1-9∶9-1混合裝柱；柱溫為160±10℃；理論板數按斑蝥素峰計算，應不低於1500；對照品溶液的製備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿製成每1ml含0.05-0.1mg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的製備取凍乾粉30-100g加注射用水5-20ml使溶解、或取大輸液30-100ml濃縮至5-20ml；或取注射液5-20ml；分別取上述藥品，置具塞試管中，加入1-3mol/L硫酸溶液0.5-3ml，搖勻，再精密加入0.5-3ml氯仿，密塞，振搖1-10分鐘，靜置分層，必要時離心，取下層液即得；測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各2-15μl，注入氣相色譜儀，計算；該注射製劑中，注射液中含斑蝥素為0.0005～0.004mg/ml；凍乾粉中含斑蝥素為0.01～0.1％；大輸液製劑中含斑蝥素為0.00008～0.0008mg/ml。
9.按照權利要求1所述治療腫瘤的注射製劑的質量控制方法，其特徵在於所述質量控制方法包括性狀對於注射液產品為淺棕色的澄明液體；對於大輸液產品為黃色至淺棕色的澄明液體；對於凍乾粉產品為黃色至淺棕色疏鬆塊狀物；鑑別(1)分別取凍乾粉加注射用水溶解、或取大輸液濃縮、或直接取注射液；加入乙醇攪勻，濾過，沉澱物用乙醇洗滌1-5次，將沉澱物用蒸餾水溶解，取0.5-3ml置試管中，微熱後加入2-10％α-萘酚乙醇溶液，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸，在二液面接界處顯紫紅色環；(2)分別取凍乾粉加注射用水溶解、或取大輸液濃縮、或直接取注射液；置分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇提取1-5次，合併提取液，置水浴上蒸乾，殘渣用蒸餾水溶解，加入預先製備好的DA-201樹脂柱上，用水洗滌，再用20-85％甲醇液洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣加入甲醇使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液，分別點於同一矽膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10％硫酸乙醇溶液，加熱，置紫外光燈200-500nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點；檢查PH值應為3.0-6.0；重金屬取凍乾粉40-80g加注射用水10ml使溶解、或取大輸液2ml、或取注射液2ml，置坩堝中，水浴上蒸乾，依照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五；熱原分別取凍乾粉100-200g加注射用水30ml使溶解、或取大輸液30ml、或取注射液30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至80-150ml，按家兔體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應符合規定；其他本發明的注射液、凍乾粉或大輸液應符合中國藥典關於注射劑項下的有關規定；含量測定(1)人參皂苷Re對照品溶液的製備精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇溶解，搖勻，即得；標準曲線的製備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加入2-10％香草醛冰醋酸溶液和高氯酸，搖勻，置水浴中加熱，取出，用水冷卻，加入冰醋酸，搖勻，照中國藥典分光光度法，測定吸收度，以吸收度為縱坐標、濃度為橫坐標，繪製標準曲線；供試品溶液的製備分別取凍乾粉加注射用水溶解、或取大輸液濃縮、或直接取注射液；置分液漏鬥中，用氯仿提取1-5次，合併氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1-5次，棄去氯仿液，洗液與上述水層合併，置分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇提取1-6次，合併正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發皿中，用正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液併入蒸發皿中，蒸乾，用蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層後，用蒸餾水洗脫，棄去洗液，用40-90％乙醇洗脫，收集洗脫液於蒸發皿中，置水浴上蒸乾，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法精密量取供試品溶液100μl，照標準曲線的製備項下的方法，自「置10ml具塞試管中」起依法測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射製劑中，注射液中含人參以人參皂苷Re計，不得少於0.15mg/ml；凍乾粉中含人參以人參皂苷Re計，不得少於2％；大輸液製劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少於0.02mg/ml；(2)斑蝥素 照中國藥典氣相色譜法測定色譜條件與系統適用性試驗以聚乙二醇20M及甲基矽橡膠SE-30為固定液，塗布濃度分別為5-20％和2-10％，1-9∶9-1混合裝柱；柱溫為160±10℃；理論板數按斑蝥素峰計算，應不低於1500；對照品溶液的製備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿溶解，搖勻，作為對照品溶液；供試品溶液的製備分別取凍乾粉加注射用水溶解、或取大輸液濃縮、或直接取注射液；置具塞試管中，加入1-3mol/L硫酸溶液，搖勻，再精密加入氯仿，密塞，振搖，靜置分層，必要時離心，取下層液即得；測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，計算；該注射製劑中，注射液中含斑蝥素為0.0005～0.004mg/ml；凍乾粉中含斑蝥素為0.01～0.1％；大輸液製劑中含斑蝥素為0.00008～0.0008mg/ml。
10.按照權利要求9所述治療腫瘤的注射製劑的質量控制方法，其特徵在於所述質量控制方法包括性狀對於注射液產品為淺棕色的澄明液體；對於大輸液產品為黃色至淺棕色的澄明液體；對於凍乾粉產品為黃色至淺棕色疏鬆塊狀物；鑑別(1)取凍乾粉30-100g加注射用水5-20ml使溶解、或取大輸液30-100ml濃縮至5-20ml；或取注射液5-20ml；分別取上述藥品，加乙醇20-100ml，攪勻，濾過，沉澱物用乙醇洗滌1-5次，將沉澱物用蒸餾水2-10ml溶解，取0.5-3ml置試管中，微熱後加入2-10％α-萘酚乙醇溶液2-10滴，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸0.2-2ml，在二液面接界處顯紫紅色環；(2)取凍乾粉200-400g加注射用水40-60ml使溶解、或取大輸液200-400ml濃縮至40-60ml；或取注射液40-60ml；分別取上述藥品，置分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇提取1-5次，合併提取液，置水浴上蒸乾，殘渣用蒸餾水1-10ml溶解，加入預先製備好的內徑1～1.5cm、長15cm、填充12cm的DA-201樹脂後，再填充2g中性氧化鋁的DA-201樹脂柱上，用水50-150ml洗滌，再用20-85％甲醇液30-100ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣加甲醇0.5-3ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇製成每1ml各含0.5-3mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各3-20μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱，置紫外光燈200-500nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點；檢查PH值應為3.0-6.0；重金屬取凍乾粉40-80g加注射用水10ml使溶解、或取大輸液2ml、或取注射液2ml，置坩堝中，水浴上蒸乾，依照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五；熱原分別取凍乾粉100-200g加注射用水30ml使溶解、或取大輸液30ml、或取注射液30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至80-150ml，按家兔體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應符合規定；其他本發明的注射液、凍乾粉或大輸液應符合中國藥典關於注射劑項下的有關規定；含量測定(1)人參皂苷Re對照品溶液的製備精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇溶解使每1ml中含人參皂苷Re1-2mg，搖勻，即得；標準曲線的製備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液0.1-1ml、高氯酸0.5-1.5ml，搖勻，置40-80℃水浴中加熱10-30分鐘，取出，用水冷卻0.5-5分鐘，加冰醋酸2-10ml，搖勻，照中國藥典分光光度法，在300-700nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標、濃度為橫坐標，繪製標準曲線；供試品溶液的製備取凍乾粉60-150g加注射用水10-30ml使溶解、或取大輸液50-200ml濃縮至10-30ml；或取注射液10-30ml；分別精密量取上述藥品，置分液漏鬥中，用氯仿提取1-5次，合併氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1-5次，棄去氯仿液，洗液與上述水層合併，置分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇提取1-6次，合併正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉1-10g，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發皿中，用正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液併入蒸發皿中，蒸乾，用蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層後，用蒸餾水100ml洗脫，棄去洗液，用40-90％乙醇洗脫，收集洗脫液於蒸發皿中，置水浴上蒸乾，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法精密量取供試品溶液100μl，照標準曲線的製備項下的方法，自「置10ml具塞試管中」起依法測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射製劑中，注射液中含人參以人參皂苷Re計，不得少於0.15mg/ml；凍乾粉中含人參以人參皂苷Re計，不得少於2％；大輸液製劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少於0.02mg/ml；(2)斑蝥素 照中國藥典氣相色譜法測定色譜條件與系統適用性試驗以聚乙二醇20M及甲基矽橡膠SE-30為固定液，塗布濃度分別為5-20％和2-10％，1-9∶9-1混合裝柱；柱溫為160±10℃；理論板數按斑蝥素峰計算，應不低於1500；對照品溶液的製備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿製成每1ml含0.05-0.1mg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的製備取凍乾粉30-100g加注射用水5-20ml使溶解、或取大輸液30-100ml濃縮至5-20ml；或取注射液5-20ml；分別取上述藥品，置具塞試管中，加入1-3mol/L硫酸溶液0.5-3ml，搖勻，再精密加入0.5-3ml氯仿，密塞，振搖1-10分鐘，靜置分層，必要時離心，取下層液即得；測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各2-15禡，注入氣相色譜儀，計算；該注射製劑中，注射液中含斑蝥素為0.0005～0.004mg/ml；凍乾粉中含斑蝥素為0.01～0.1％；大輸液製劑中含斑蝥素為0.00008～0.0008mg/ml。
全文摘要
本發明提供了一種治療腫瘤的注射製劑的質量控制方法，所述質量控制方法主要包括性狀、檢查、鑑別、含量測定項目中的部分或全部；其中鑑別包括與α－萘酚的顯色反應、以人參皂苷Re、Rg
文檔編號A61K9/19GK1823887SQ20051020088
公開日2006年8月30日 申請日期2005年12月29日 優先權日2005年12月29日
發明者葉湘武, 張梅 申請人:貴州益佰製藥股份有限公司