具有天然植物活性成分的局部化妝品組合物及其使用方法

2023-05-28 17:09:01 1

專利名稱：具有天然植物活性成分的局部化妝品組合物及其使用方法
背景技術：
1.發明領域本發明涉及具有源自天然植物材料的活性組分的局部組合物。更具體地，本發明涉及改善皮膚、頭髮和/或指甲美學外觀的局部組合物。成分更具體地，本發明涉及使用局部組合物的方法。
2.現有技術說明源自植物和植物種子的活性成分通常已經用於無數醫學、治療和化妝目的用的局部組合物。這樣的活性物質得自植物的各種部分，例如種子、針、葉、根、樹皮、球果、莖、根莖、愈傷組織細胞、原生質體、器官和器官系統，以及分生組織。活性成分以各種形式摻入這樣的組合物。這樣的形式包括純或半純組分，固體或液體提取物或衍生物，或者固體植物物質。植物物質可以種種衍生形式摻入，例如整個、粉碎的、磨碎或壓碎。
使用源自植物和植物種子的活性成分時通常遇到的問題是它們天然存在的濃度較低。這樣低的濃度常常需要處理相對大量的植物葉子/組織或種子，以便獲得期望的或有效數量的活性物質。對於珍貴的植物或植物種子，如此巨大數量是難以獲得的或難於得到的。
在化妝品工業發展可以局部施用於皮膚以提供抗老化、水合和/或皮膚肌理優點的產品目前有積極的興趣。對增強皮膚外觀的化妝品需要日益增長。消費者對減輕或延遲年齡的、激素的和/或光一老化皮膚的體徵感興趣，例如細紋、皺紋、皮膚乾燥，和皮膚下垂。老化過程中，皮膚的膚色，即皮膚的顏色和外觀，由於本身老化和/或暴露於陽光緩慢惡化。美容外科手術可用作老化皮膚的治療，但是這種治療成本昂貴，並具有一般與麻醉和手術有關的風險。選擇性地，對於製造者和消費者，能夠促進抗老化優點的化妝品是極度希望的。
涉及幫助消費者皮膚看上去更年輕和皺紋更少的化妝品的數量穩定增加。通常地，這種產品含有有機酸作為活性成分。這種抗老化活性成分包括，例如α-羥基酸(即，乳酸鹽，乙醇酸鹽，枸椽酸鹽)，β-羥基酸(即，水楊酸鹽；5-正-辛醯基水楊酸鹽)和類維生素A(retinoid)(視黃酸；視黃醇)。已知這些抗老化活性成分具有顯著的缺點，由於它們常常與消費者施用後的不適有關，這些不適特徵是燒傷、刺痛、發癢或緊縮感。在化妝品工業保持對延遲或抗皮膚老化作用產品的普通需要，更準確地說，需要產生延遲或抗皮膚老化作用且無不希望的副作用的產品。
更具體地，考慮到先前化妝品工業內需要和限制的討論，需要適於局部施用的、化妝品組合物，它採用天然成分作為活性組分，具有抗老化和皮膚肌理優點。
植物提取物通常用於各種具有治療用途的草藥組合物。例如，U.S.專利No.6,168,795涉及抗癌治療，包括服用草藥提取物基的組合物，該組合物具有絞股藍(Gynostemma pentaphyllum)提取物和其它植物提取物。D』Jang的U.S.專利No.5,910,308還涉及包括絞股藍的草藥提取物基組合物。
印度楝(Azadirachta indica)(印楝樹)，以及其它楝科植物提取物，已知具有殺蟲活性。印苦楝子素，這些提取物中的主要活性成分，是用於商業殺蟲劑的四正三萜(tetranortriterpenoid)型liminoid，它已經顯示是有效的昆蟲生長調節劑和取食抑制劑。由印度楝(印楝)種子原料製備azadirachin(印苦楝子素)濃縮物的方法是本領域已知的。Holowach-Keller等的U.S.專利No.5,698,423涉及通過印度楝的細胞培養生產azadiractin(印苦楝子素)的方法。
儘管市場上各種皮膚治療用於抗老化化妝品，仍然需要有效局部施用化妝品組合物以便採用天然成分作為活性組分提供皮膚、頭髮和/或指甲抗老化或恢復青春的優點。
發明概述本發明的一個目的是提供釋放有效濃度源自天然植物材料的活性成分的局部化妝品組合物。
本發明的另一個目的是提供局部化妝品組合物，它在藥學上或化妝上可接受的載體中具有天然植物活性成分或天然植物活性成分的混合物。
本發明進一步的目的是提供局部施用這些組合物的方法。
本發明的又一目的是提供通過局部施用具有一種或多種天然植物活性成分的組合物，向皮膚、指甲和/或頭髮釋放一致濃度的活性成分的方法。
通過具有單一天然植物成分或天然植物成分的混合物的組合物，以及這些組合物用於局部施用的用途獲得本發明的這些和其它目的和優點，和其等價物。本發明的化妝品組合物具有源自下組的活性植物成分絞股藍；椰子汁；印度楝；或紅景天(Rhodeola)，和藥學上或化妝上可接受的載體。優選地，當本發明的組合物具有作為印度楝(印楝)種子細胞培養物的印度楝時，該組合物還具有至少一種附加的活性成分，它選自絞股藍、Rhodeola和椰子汁。本發明額外的組合物具有源自以下組的植物成分絞股藍，椰子汁和Rhodeola；和藥學上或化妝上可接受的載體。還提供通過局部施用本發明的組合物改善皮膚、頭髮和/或指甲美學外觀的方法。
附圖描述

圖1表示各種試驗樣品體外對角質化細胞內熱休克蛋白生成的影響。
圖2表示各種試驗樣品對角質化細胞培養中細胞凋亡的影響。
圖3表示Gymnostemma對角質化細胞培養中ATP生成的影響。
圖4表示Rhodeola對角質化細胞培養中熱休克蛋白生成的影響。
圖5表示椰子汁對角質化細胞培養中熱休克蛋白生成的影響。
圖6表示印度楝對角質化細胞培養中熱休克蛋白生成的影響。
圖7表示絞股藍對角質化細胞培養中熱休克蛋白生成的影響。
發明詳述本發明提供具有天然植物成分或天然植物成分混合物的局部組合物，它可通過修改在皮膚、頭髮和/或指甲內細胞對彈性蛋白、尤其熱休克蛋白的反應恢復和增強皮膚、頭髮和/或指甲。本發明的組合物提供多種抗老化和皮膚肌理優點。
皮膚、頭髮和/或指甲的美學外觀的改善通過局部施用本發明的組合物獲得。這些組合物具有單一天然植物成分或天然植物成分的混合物。
植物成分優選包括以下組分絞股藍；椰子汁；印度楝(包括其細胞培養物、肉湯和/或提取物的印度楝(印楝))；和Rhodeola。特別優選的植物成分混合物是印度楝和一種或多種其它成分，特別是絞股藍、椰子汁和/或Rhodeola。本發明組合物內活性植物成分的含量是組合物總重量的約0.0001百分數以重量計或重量百分比(wt％)至約50wt％，優選約0.001wt％至約10wt％，更優選約0.01wt％至約5wt％，又優選約0.1wt％至約3wt％。
印度楝(印楝)源於楝科植物印度楝(Azadirachta indica)。印度楝(印楝)種子細胞特別優選適用於本發明，由於它們是豐富的並能產生寬範圍的活性成分。在本發明中，印度楝(印楝)種子細胞通常通過從種子提取細胞獲得，優選種子胚芽，接著體外培養和均化。這種方法顯著增加了種子細胞的含量和數量。優選地，在促進未分化狀態的培養基中培養種子細胞。更優選地，均化之後，保藏種子細胞和植物細胞組分。由印度楝(印楝)種子細胞產生的活性成分例子包括，但不限於，17-β-羥基印苦楝二酮(azadirdione)；17-表印苦楝二酮(epiazadiradione)；1α-甲氧基-1，2-二氫 印苦楝二酮(azadiradione)；1β，2β-二環氧-印苦楝二酮(azadiradione)；22，23-二氫-23β-甲氧基-印苦楝二酮(azadiradione)，7-脫乙醯基-gedunin；印苦楝子素；印苦楝酮；環氧印苦楝二酮(azadiradione)；蜜爾得寧；苦楝三醇；nimolicinol；和vepinin。2001年11月9日提交的、名為具有皮膚復原優點的局部化妝品組合物的共同未決的申請顯示了具有一種或多種印度楝(印楝)種子細胞和印度楝(印楝)種子細胞肉湯的教導，本文通過參考引入。
印度楝(印楝)種子細胞肉湯通過由印度楝(印楝)種子分離出的細胞的組織培養物製備。在含有適當養料和成分的組織培養基中培養印度楝(印楝)種子細胞。這種方法從印度楝(印楝)種子細胞提供快速細胞生長和關鍵活性化合物的產生。植物組織培養形式的細胞生物工程學的使用提供本發明成分標準的可預言的高效供應。本發明的體外研究已經顯示印度楝(印楝)種子細胞肉湯改善角質化細胞細胞增殖，增加成纖維細胞代謝，減少皮膚色素沉著，增加前膠原合成，並且有效結合至雌激素受體。印度楝(印楝)種子培養物/肉湯或其提取物的優選數量是組合物總重量的約0.001wt％至約10wt％。印度楝(印楝)種子細胞肉湯具有組織培養的印度楝(印楝)種子細胞和培養基。
絞股藍是黃瓜科成員。它還被稱為5-葉人參、絞股藍或南方人參。它習慣上生長於中國中南部多山區域。這種藥草與通常稱為人參的植物相比是一種不同的植物。它是稱為″絞股藍皂甙″的皂甙的豐富來源，它類似於，某些情形中等同於人參中發現的人參皂甙，除此之外還發現濃度上比人參中發現的那些高几倍。這些皂甙已經顯示具有抗氧化劑或細胞保護作用。絞股藍(Jiaogulan)以粉末形式購得。在本發明的化妝品組合物中，基於組合物總重量絞股藍優選含量是約0.001wt％至約10wt％。
椰子汁是液體或粉末形式，特別是凍幹形式。在本發明的化妝品組合物中，基於組合物總重量，椰子汁優選含量是約0.001wt％至約10wt％。椰子汁是椰子中間的水。椰子果實成熟時，水″乾涸″或者由植物/果實利用。
Rhodeola以粉末形式購得。在本發明的化妝品組合物中，基於組合物的總重量，Rhodeola優選含量是約0.001wt％至約10wt％。
本發明提供源自以上植物來源(包括植物種子)的醫學、治療學和化妝品活性成分的有效釋放。種子通常具有種皮和由胚乳環繞的胚胎。植物種子細胞主要由胚胎的組織提取。位於植物的「非種子」部分(即根莖)的胚細胞還意圖用於本發明。提供整個種子細胞(即全部成員)是優選的。全部種子細胞通過粉碎或破裂細胞壁粉碎以釋放大範圍的植物細胞組分。植物種子細胞，以及其它植物原料或植物原料混合物，接著摻入藥學上或化妝上可接受的載體和/或局部組合物。
植物種子細胞通常具有或得到植物的所有植物細胞組分的最高潛力，包括任何治療、化妝或醫學活性。具有最高潛力的植物種子細胞是基本上未分化的那些。在本文使用時，術語「基本上未分化」包括已經分化成具體植物細胞的種子細胞，例如葉細胞、根細胞、木質部(xylum)和/或韌皮部細胞，具有特定的功能或化學成分(未分化的種子細胞)；分化程度有限使種子細胞保留較寬範圍的基本上等同於未分化的植物組分的細胞(接近未分化的種子細胞)；和已經去分化成為未分化種子細胞的種子細胞(去分化種子細胞)。換言之，術語「基本上未分化」植物種子細胞包括未分化種子細胞、接近未分化種子細胞和去分化種子細胞。基本上，這些三種類型的種子細胞是多種作用的並顯示寬範圍的植物細胞成分。本發明中，術語「植物學的」和「植物」意思相同地使用。
去分化指在分化的種子細胞中逆轉分化水平至認為它們未分化或接近未分化的程度。分化的逆轉通常增強種子細胞內植物細胞成分的範圍和發生率，包括治療、化妝和醫學活性。
影響未分化的條件包括營養組合物(以上所述)、溫度、光或無光、氣體頂部空間組成(gas headspace composition)、工作模式和持續時間。光條件包括自然光(寬波譜或頻譜)，限制或窄波譜或頻譜，或者無光(黑暗)。光還可在強度上變化。氣體頂部空間組成可在氧氣、二氧化碳和乙烯含量(以及其它氣體)中變化或者沒有氣體。操作模式可在如分批相、半分批相、連續相和前述多相的方法操作中變化。例如，細胞生長/增生和活性物質的生物合成的分離相是可行的。持續時間隨時間變化。
培養通常指植物種子細胞暴露於適當的營養培養基。培養可通過加入整個種子或其部分，例如胚乳和胚胎，至營養培養基中進行。細胞可在液體、半固體和固體營養培養基中培養。營養培養基可以與鹽、營養基、激素和激發劑配製以促使細胞生長、細胞代謝和增生、細胞維護、活性成分生物合成或前述的組合。U.S.專利No.6,127,181的表4和U.S.專利No.5,407,816的例1至9闡明了有效的培養基配方的例子，這些例子在此引入以供參考。
U.S.專利Nos.5,407,816；5,885,826；和6,127,181公開了培養和未分化植物種子細胞的方法，這些文獻在此引入以供參考。
均化通常指植物種子細胞壁的破碎和碎裂。均化通過促進它們由種子細胞釋放，增強了細胞種子成分(包括治療、化妝和醫學活性組分)的可利用性。均化可通過由任何本領域已知的方式或方法或者本領域亦已知的凍熔技術機械破碎細胞進行。
保藏植物種子細胞通常指在希望的活性物質的功效在摻入至本局部組合物之前基本上不消失的條件下保存它們。由於在營養培養基，即肉湯中的種子細胞可直接局部施用，保藏對於本發明不是必需的。事實上，保藏對於確保質量和對於防止在培養之後和製造規模上生產局部組合物之前變質是重要的。
保藏可通過本領域任何已知的方式完成，例如冷卻，低pH下貯藏，即約4或更低，優選約3.6至約4.0。優選地，種子細胞通過在低pH的營養肉湯中保存和冷卻而保藏。
有益地，基本上未分化的植物種子細胞與化妝上可接受的載體混合形成本組合物。細胞從營養培養基中分離出並與載體混合，或者，更優選地，細胞和/或本發明其它天然植物活性組分和營養培養基一起在載體中混合。選擇性地，本組合物可採用不含額外載體的營養培養基中細胞的形式，使含有種子細胞的營養肉湯可直接局部施用。肉湯優選20wt％植物種子細胞，儘管具有較高或較低植物種子細胞含量的肉湯在本發明的範圍內。
單獨或結合採用本發明的活性成分通過多途徑增加了身體對應激反應的天然防衛機制。通過天然再生的復原，將保護提供給皮膚、頭髮和指甲免除應激反應誘導的損傷和真正的抗老化優點效果。具有本發明活性植物成分的組合物提供應激性防應激性反應或應激性平衡優點，從而防止皮膚、頭髮和指甲應激性反應誘導的早熟老化，並且同時提供真正的抗老化皮膚、頭髮和指甲護理優點。
體外研究已經顯示單獨或組合含有絞股藍，印度楝，Rhodeola和椰子汁的本發明的組合物，通過天然應激反應防衛機制提供皮膚、頭髮和指甲復原優點。更具體地，在基於體外細胞試驗的報導中，這些活性成分增加了應激蛋白，尤其是熱休克蛋白的產生。然而，它們未增加天然具有較高熱休克蛋白的細胞內熱休克蛋白的濃度。本發明的活性物質在試驗量是無毒的，不會誘發細胞凋亡。研究已經顯示熱休克蛋白隨應激反應升高，超過對照組。活性成分上調彈性蛋白作為對應於生理需要對應激的自然防禦。此外，體外絞股藍意想不到地增加細胞ATP水平，從而產生激勵作用。因此，通過在攻擊之前應激性調節能保護細胞和/或刺激細胞從先前的攻擊中復原。換言之，當本發明用於和，例如，皮膚護理有關時，本發明不僅用於處理已經處於應激反應的皮膚，而且作為每日皮膚護理方案的一部分，本發明還「預處理」皮膚不與應激物反應。「應激反應」意圖包括任何由內在和/或外在因子(例如汙染、溫度變化，和UV輻射)引起的失調。應激皮膚的例子包括，但不限於，有斑皮膚(patchy skin)、黑眼袋、敏感性皮膚和發疹。敏感性皮膚對應激反應和其它損害特別具有反應性。
本發明的活性成分在處理皮膚、指甲、唇和/或頭髮的醫學和/或化妝症狀中進一步有效，所述的處理包括預防、停止、改善、減輕或減少。這種症狀通常包括，但不限於，痤瘡、牛皮癬、溼疹、皮脂溢、皮炎、皮膚和頭髮易裂、脫髮、多毛症、紅斑痤瘡、搔癢症(pruritis)、老繭、疣、雞眼、幹皮膚、皺裂的皮膚、頭皮屑、皮膚缺陷、老化斑、敏感性皮膚、色素沉著過多或色素減退，薄皮、脂肪團、萎縮紋、黑眼圈、雀斑、黃化、粗糙、角化症、炎症、變色、皮膚萎縮、皺紋、紋、增生、蜘蛛血管(毛細管擴張)、脫髮、碰傷、擴大毛孔、纖維症、曬斑、皮膚老化(隨年齡老化、激素老化和/或光化老化)、病毒感染、真菌感染、細菌感染，和它們的任意組合。本發明的活性成分還可用於增強公共健康，皮膚、指甲和頭髮的活力和外觀。
具有這些活性成分的局部組合物能夠改善皮膚的美學和/或化妝外觀。這些改善能夠以以下任何一種方式顯現減少皮膚病學老化症狀，它歸因於，例如，隨年齡老化，激素老化和/或光老化；減少皮膚脆性；減少毛孔的尺寸；膠原和/或彈性蛋白損失的預防和/或逆轉；改善雌激素失調的效應；皮膚萎縮的預防；預防和/或減少包括細紋和/或皺紋的紋/或皺紋的外觀和/或深度；預防、減少和/或治療色素沉著過度；膚色、光澤、清晰和/或緊縮度的改善；預防、減少和改善皮膚下垂；促進抗氧化活性；改善皮膚韌性、豐滿彈性、柔度和/或柔軟度；增加前膠原和/或膠原生成；改善皮膚肌理和/或促進恢復原來的肌理狀態；促進皮膚屏障修復和/或功能；皮膚輪廓外觀的改善；恢復皮膚光澤和/或亮度；最小化疲勞和應激性反應的皮膚病學症狀，例如皮膚發疹和/或對環境影響所引起的應激性反應(例如，汙染和/或溫度變化)的抵抗力；補充由於老化和/或絕經減少的皮膚內基本營養和/或成分；增強皮膚細胞間的聯繫；增加細胞增生和/或增殖；增強由於老化和/或絕經下降的皮膚細胞新陳代謝；延緩細胞老化；抑制皮膚內加速皮膚細胞老化的酶；最小化皮膚乾燥和/或增加皮膚水分；最小化皮膚變色，包括黑眼圈；促進和/或加速細胞更新；增加皮膚厚度；增加皮膚彈性和/或彈力；藉助於或不藉助於α羥基酸或其它剝離劑，增加表皮剝脫；預防和逆轉葡糖胺聚糖(GAG)、膠原和/或彈性蛋白損失；微循環改善；減少和/或預防脂肪團形成；減少痤瘡形成。
尤其是，具有本發明植物活性組分的局部組合物能夠改善皮膚的美學外觀、健康和活力。這樣一種改善能夠顯現在以下的至少一種中預防和/或逆轉膠原和/或彈性蛋白損失；皮膚肌理改善；膚色、透明度，和/或緊固度改善；促進/加速細胞更新；和增加皮膚厚度。
本發明的局部組合物能夠製備成任何適當的產品形式。這些產品形式包括，但不限於，氣溶膠噴射劑、霜、分散體、乳劑、泡沫、凝膠、液體、洗劑、摩絲、軟膏、貼、髮蠟、粉劑、泵式噴霧劑、固體、溶液、棒和小毛巾。
本組合物優選包括載體。有效的載體是藥學上或化妝上可接受的適於局部施用的。有效的載體包括，但不限於，一種或多種含水體系，甘油、Cl-4醇、脂肪醇、脂肪醚、脂肪酯、多元醇、乙二醇、植物油、礦物油、脂質體、層狀類脂材料、矽油、水，或者它們的組合。
此外，按照本發明的組合物的載體可以是均相製劑形式或者包括但不限於的水包油、油包水的乳劑，以及包括三個的多相乳劑。這些乳劑能夠覆蓋寬範圍的稠度，包括稀洗劑(它還可適於噴霧或氣溶膠輸送)、乳狀洗劑、清霜和濃霜。其它適當的局部載體包括無水液體溶劑，例如油和醇；水基單相液體溶劑(例如，水—醇溶劑系統)；無水固體和半固體(例如凝膠和棒)；和水基凝膠和摩絲體系。以下四篇參考文獻描述了用於本發明的載體系統的例子，所有文獻整個通過參考引入本文″Sun ProductsFormulary″，Cosmetics Toiletries，105卷，122-139頁(1990年12月)；″Sun ProductsFormulary″，Cosmetics Toiletries，102卷，117-136頁(1997年3月)；Figueroa等的U.S.專利No.4,960,764，1990年10月2日出版；和Fukuda等的U.S.專利No.4,254,105，1981年3月出版。
任選地，本局部組合物包括一種或多種麻醉劑、抗變應原、抗真菌、抗微生物、抗炎劑、抗氧化劑、防腐劑、螯合劑、著色劑、脫色劑、軟化劑、乳化劑、脫落劑(exfollient)、成膜劑、芳香劑、溼潤劑、驅蟲劑、潤滑劑、增溼劑、藥劑、光穩定劑、防腐劑、皮膚保護劑、皮膚滲透增強劑、防曬劑、穩定劑、表面活性劑、增稠劑、粘度調節劑、維生素，或者它們的任何組合。
本組合物用於產品，特別是化妝品，它能改善皮膚、指甲和/或頭髮的狀況。藉助於本發明，提供具有較高純度，以及多種治療特效的組合物和標準活性成分供應品是可行的。此外，可配製本組合物以釋放穩定濃度活性成分，或成分混合物，這樣以便於獲得希望的化妝效果，尤其在成批生成商業產品中。
本發明的組合物可方便地用於任何適於皮膚護理、化妝、個人護理、頭髮護理或指甲護理的化妝品。
以下是本發明的非限制性實例。除非另外說明，所有比例和百分比以重量計。
實施例1生物測定熱休克蛋白的生成評價在生物測定中各種物質對熱休克蛋白的作用。熱休克70蛋白水平通過採用商業上可得到的測定試劑盒-EKS-700(StressGenBiotechnologies，Victoria，B.C.，Canada)測量。初生的角質化細胞以試驗樣品處理約18小時。細胞接著溶解。細胞溶解產物一式雙份流入提供的ELISA HSP-70免疫測定板並培養2小時。洗滌板並加入抗-HSP-70生物素抗體。板接著培養另外1小時。洗滌板，加入抗生物素蛋白-HRP(辣根過氧化物酶)共軛物，並培養1小時。再次洗滌板。加入TMB(四甲苯)底物並培養10分鐘；接著加入停止液。在450nm光度計測量板，並測定Hsp70蛋白。
熱休克蛋白的生成與培養基中角質化細胞對照比較。評價以下試樣亞砷酸鈉(0.001％wt./vol.+對照)；絞股藍(0.01％wt./vol.+對照)；Rhodeola(0.01％wt./vol.+對照)；和椰子汁(0.01％wt./vol.+對照)。以％wt./vol給出的濃度基於每體積培養基成分的總重量。亞砷酸鈉已知刺激熱休克蛋白的生成。該試驗結果如圖1所示。這些數據顯示與亞砷酸鈉產生的熱休克蛋白相比，本發明的植物成分在0.01％wt./vol濃度對初生人角質化細胞是無毒的。
實施例2生物測定細胞凋亡產生評價生物測定中各種物質對細胞凋亡的作用。以各種試驗樣品處理初生角質化細胞。在細胞生理學中細胞凋亡是嚴重事件。細胞應激反應或損傷期間，複合級聯過程的程序性細胞死亡發生，稱為細胞凋亡。細胞凋亡的特徵為一系列描述為編程性細胞死亡的形態學和分子變化。細胞凋亡中最早的事件之一是稱為天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶的特異性蛋白酶的活化。
健康細胞中，線粒體在它們的外細胞膜上表達兩種蛋白質Bcl-2和Apaf-1。Bcl-2蛋白質通常與蛋白質Apaf-1結合。細胞除去應激性反應開始，Bcl-2和Apaf-1蛋白分離。此外，線粒體膜開始漏細胞色素C至細胞液。釋放的Apaf-1蛋白和細胞色素C結合至其它稱為天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶(特別是天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶9)的細胞液分子。大多數細胞中天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶(半胱氨酸-天門冬氨酸-蛋白酶)廣泛表達在惰性酶原形式中。天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶9，細胞色素C和Apaf-1結合形成稱為凋亡體的複合物。在這種複合物中，天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶9變得有活性，開始其它天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶(例如天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶8)蛋白水解激活的級聯。這種級聯是可行的，由於活性天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶通常激活其它原天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶。最終通過這種級聯，激活天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶3。天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶3初步激活在蛋白質降解中是主要效應物，並且看起來是朝向細胞死亡不可逆的參與。
細胞凋亡(天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶3)測量採用商業上可得到的分析試劑盒(E-13183；Molecular Probes Eugene，OR)進行。在溶解緩衝液中溶解和一個「凍-熔」周期之前將初生人角質化細胞處理1小時。將細胞溶解產物離心，除去上清液用於分析。上清液加入底物儲液，蓋蓋子，室溫培養30分鐘，接著以螢光板閱讀器測量(激發/發射342/441nm)。增加的螢光性是增加的天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶3活化的指示。
在初生角質化細胞生物測定中，通過試驗物誘導的細胞凋亡與培養基內角質化細胞的對照比較。評價以下試樣亞砷酸鈉(0.001％wt./vol.+對照)；紫外光(+對照)；絞股藍(0.01％wt./vol.+對照)；Rhodeola(0.01％wt./vol.+對照)；和椰子汁(0.01％wt./vol.+對照)。以培養基的總體積為基準，給出的濃度為植物成分的％wt。紫外輻射已知誘導細胞凋亡。試驗結果如圖2所示。這些數據顯示與紫外輻射誘導的凋亡相比，通過誘導凋亡測定，本發明的植物成分在0.01％wt./vol的濃度體外對初生人角質化細胞是無毒的。
實施例3ATP生成的生物測定評價在細胞培養生物測定中絞股藍(Gynostesmma)對ATP生成的影響。採用商業上可得到的試劑盒(ATPLite-M)，它得自PackardBioscience，Meriden，CT的，測量細胞ATP濃度。初生人角質化細胞以試驗材料或培養基單獨處理18小時。細胞在溶解溶液中溶解並置入96孔微板。加入底物溶液(螢光素)，板搖晃一分鐘。該板通過放入不透光的盒中適應黑暗10分鐘，繼之以光度計測量。測量的發光數量越大，ATP濃度越高。
以培養基總體積為基準的植物成分濃度為0.001％wt./vol.和0.01％wt./vo的絞股藍在人角質化細胞培養基生物測定中試驗，並且與培養基中角質化細胞的對照比較。測定發光背景。該實驗的結果如圖3所示。這些數據顯示，與對照培養物相比，0.001％wt./vol和0.01％wt/vol數量的絞股藍顯著增加了體外人角質化細胞內ATP生成。
實施例4生物測定熱休克蛋白70報導子的活化在初生人角質化細胞培養生物測定中，評價本發明組合物對熱休克70蛋白(Hsp70)啟動子激化的作用。初生人角質化細胞通過藉助於質粒(pCMV/Bsd)報導系統的電穿孔轉染，該系統含有與編碼螢光素酶的基因連接的Hsp70啟動子，它充當報導子。轉染之後，含有該質粒的細胞通過暴露於殺稻瘟菌素選擇。轉染細胞殺稻瘟菌素。未轉染的角質化細胞死亡。抗殺稻瘟菌素是質粒內發現的殺稻瘟菌素脫氨基酶基因轉染和表達的確認。轉染的角質化細胞接著以試驗材料處理24小時。相對於NaAsO2(13μg/ml)、Rhodeola(0.10μg/ml；1.0μg/ml；和100μg/ml)、椰子汁(0.10μg/ml；1.0μg/ml；和100μg/ml)、印度楝(Azadiracta)(0.10μg/ml；1.0μg/ml；和100μg/ml)，和絞股藍(0.10μg/ml；1.0μg/ml；和100μg/ml)試驗角質化細胞培養物。接著洗滌細胞並暴露於螢光素。螢光素酶通過Hsp70啟動子激化轉錄，隨後轉化為與底物螢光素反應的酶活性蛋白。螢光素酶蛋白氧化螢光素產生由發光計測量的光能。測量的發光量越大，Hsp70啟動子活性越大。Hsp70啟動子檢測和螢光素酶活性的光檢測是熱休克70蛋白的指示。培養基內的角質化細胞作為對照(載體)。該試驗的結果如圖4、圖5(椰子汁)、圖6(印度楝)和圖7(絞股藍)所示。這些數據清楚顯示本發明的植物成分顯著引起角質化細胞培養物內熱休克蛋白70的生成。
前述的說明應當理解為僅僅是說明本發明。各種選擇和修正可由本領域熟練人員不背離本發明而設計。從而，本發明意圖包括所有落入以下權利要求範圍內的這種選擇和修正以及變化。
權利要求
1.一種局部組合物，包括至少一種選自絞股藍、椰子汁、印度楝和Rhodeola的植物成分；和藥學上或化妝上可接受的載體，其中當植物成分來自印度楝種子時，該組合物進一步包括至少一種選自絞股藍、椰子汁和Rhodeola的其它成分。
2.權利要求1的組合物，其中至少一種植物成分含量是組合物總重的約0.0001wt％至約50wt％。
3.權利要求1的組合物，其中至少一種植物成分含量是組合物總重的約0.001wt％至約10wt％。
4.權利要求1的組合物，其中至少一種植物成分含量是組合物總重的約0.01wt％至約5wt％。
5.權利要求1的組合物，其中至少一種植物成分含量是組合物總重的約0.1wt％至約3wt％。
6.權利要求1的組合物，其中至少一種植物成分是絞股藍。
7.權利要求6的組合物，其中絞股藍含量是組合物總重的約0.001wt％至約10wt％。
8.權利要求1的組合物，其中至少一種植物成分是椰子汁。
9.權利要求8的組合物，其中椰子汁含量是組合物總重的約0.001wt％至約10wt％。
10.權利要求1的組合物，其中至少一種植物成分是印度楝種子細胞培養物或其提取物，含量是組合物總重的約0.001wt％至約10wt％。
11.權利要求1的組合物，其中至少一種植物成分是Rhodeola。
12.權利要求11的組合物，其中Rhodeola含量是組合物總重的約0.001wt％至約10wt％。
13.權利要求1的組合物，其中所述植物成分是絞股藍、椰子汁、印度楝和Rhodeola。
14.權利要求1的組合物，其中載體是一種或多種選擇含水系統、甘油、C1-4醇、脂肪醇、脂肪醚、脂肪酯、多元醇、乙二醇、植物油、礦物油、脂質體、層狀類脂材料、矽油、水和它們的任意組合。
15.權利要求1的組合物，其中該組合物是選自氣溶膠噴射劑、霜劑、乳劑.固體、液體、分散體、泡沫、凝膠、洗劑、摩絲、軟膏、粉劑、貼、髮蠟、溶液、泵式噴霧劑、棒和小毛巾的產品形式。
16.權利要求1的組合物，其中植物成分選自絞股藍、椰子汁和Rhodeola。
17.一種改善皮膚、頭髮和/或指甲美學外觀的方法，包括向皮膚、頭髮和/或指甲局部施用化妝有效量的權利要求1的組合物。
18.權利要求17的方法，其中改善是至少一種選自以下的改善年齡老化、激素老化和/或光老化的皮膚病學症狀減少；皮膚脆性減少；毛孔縮小；膠原和/或彈性蛋白損失的預防和/或逆轉；改善雌激素失調的效應；預防皮膚萎縮；預防和/或減少紋和/或皺紋的外觀；預防、減少和/或治療色素沉著過度；膚色、光澤、清晰和/或緊固度的改善；預防、減少和改善皮膚下垂；促進抗氧化活性；改善皮膚韌性、豐滿彈性、柔度和/或柔軟度；增加前膠原和/或膠原生成；改善皮膚肌理和/或促進恢復原來的肌理狀態；促進皮膚屏障修復和/或功能；皮膚輪廓外觀的改善；恢復皮膚光澤和/或亮度；最小化疲勞和/或應激性反應的皮膚病學症狀；抗環境影響所引起的應激性反應；補充由於老化和/或絕經減少的皮膚內成分；增強皮膚細胞間的聯繫；增加細胞增生和/或增殖；增強由於老化和/或絕經下降的皮膚細胞新陳代謝；延緩細胞老化；抑制皮膚內加速皮膚細胞老化的酶；最小化皮膚乾燥和/或增加皮膚水分；最小化皮膚變色；促進和/或加速細胞更新；增加皮膚厚度；增加皮膚彈性和/或彈力；增加表皮剝脫；預防和逆轉葡糖胺聚糖、膠原和/或彈性蛋白損失；微循環改善；減少和/或預防脂肪團形成；減少痤瘡形成；和它們的任何組合。
19.權利要求17的方法，其中的改善是至少一種選自以下的改善年齡老化、激素老化和/或光老化的皮膚病學症狀減少；預防和/或減少紋/或皺紋的外觀和或深度；膚色、光澤、清晰和/或緊固度的改善；改善皮膚韌性、豐滿彈性、柔度和/或柔軟度；改善皮膚肌理和/或促進恢復原來的肌理狀態；和它們的任何組合。
20.權利要求17的方法，其中改善是至少一種選自以下的改善最小化疲勞和/或應激性反應的皮膚病學症狀；抗環境影響所引起的應激性反應；抗皮膚發疹；抗汙染和/或溫度變化；最小化皮膚乾燥和/或增加皮膚水分；增加皮膚彈性和/或彈力；改善汙染、皮膚發疹、溫度變化和/或太陽幅射對皮膚的影響；和它們的任何組合。
21.權利要求17的方法，其中所述組合物含有絞股藍、椰子汁、印度楝和Rhodeola。
22.改善皮膚、頭髮和/或指甲美學外觀的方法，包括向皮膚、頭髮和/或指甲局部施用化妝有效量的權利要求16的組合物。
23.權利要求22的方法，其中改善是至少一種選自以下的改善最小化疲勞和應激性反應的皮膚病學症狀；抗環境影響所引起的應激性反應；抗皮膚發疹；抗汙染和/或溫度變化；最小化皮膚乾燥和/或增加皮膚水分；增加皮膚彈性和/或彈力；改善汙染、皮膚發疹、溫度變化和/或太陽幅射對皮膚的影響；和它們的任何組合。
24.權利要求22的方法，其中至少一種植物成分是組合物總重的約0.0001wt％至約50wt％。
25.處理皮膚、頭髮和/或指甲的方法，包括向皮膚、頭髮和/或指甲局部施用有效量的權利要求1的組合物，以預防、改善、抑制和/或減少皮膚病學老化的症狀。
26.權利要求25的方法，其中老化症狀與由疲勞、生理學上應激反應、環境影響所引起的應激性反應、汙染、溫度變化、皮膚發疹、太陽幅射和它們的任何組合組成的組的一種或多種有關。
27.權利要求26的方法，其中老化症狀是一種或多種選自疲勞、生理學上應激發反性和環境影響所引起的應激性反應的症狀。
28.權利要求26的方法，其中老化症狀與一種或多種選自汙染、皮膚發疹、溫度變化和/或太陽幅射的症狀有關。
29.一種治療應激性皮膚的方法，包括向皮膚局部施用有效量的權利要求1的組合物。
30.一種治療應激性皮膚的方法，包括向皮膚局部施用有效量的權利要求16的組合物。
全文摘要
本發明公開了局部化妝品組合物，具有至少一種天然活性組分和藥學上或化妝上可接受的載體。這裡還有改善皮膚、頭髮和/或指甲美學外觀的方法，它包括局部施用本發明的組合物。
文檔編號A61K8/34GK1607956SQ02826039
公開日2005年4月20日 申請日期2002年12月20日 優先權日2001年12月28日
發明者G·K·梅農, S·多卡, B·瓊斯 申請人:雅芳產品公司