一種注射用卡巴他賽脂質體劑型及其製備方法與流程

2023-05-29 09:25:37 2

本發明涉及一種卡巴他賽液體製劑及其製備方法，具體涉及一種卡巴他賽脂質體注射劑及其製備方法。
背景技術：
：卡巴他賽(cabazitaxol)屬於紫杉烷類抗腫瘤藥物，是由紫杉的針葉中提取的化合物半合成的紫杉醇衍生物，由sanofi-aventis公司開發並上市。其作用機理與其它紫杉烷類藥物相似，通過促進微管雙聚體裝配成微管，同時防止去多聚化過程而使微管穩定，阻滯細胞於g2和m期，抑制細胞進一步分裂，從而抑制癌細胞的有絲分裂和增殖。卡巴他賽與多藥耐藥蛋白atp依賴的藥物外排泵p-糖蛋白(p-gp)的親和力較差，因此可以克服由於p-gp的表達而造成的腫瘤細胞的耐藥。2010年6月，美國fda批准卡巴他賽與潑尼松聯合用於治療經多西他賽治療過的激素難治性轉移性前列腺癌。卡巴他賽抗瘤譜廣、抗腫瘤作用強，對難治性的乳腺癌、非小細胞肺癌、轉移性胃癌等的療效均較突出，臨床應用潛力深厚。sanofi-aventis公司開發的卡巴他賽注射液，存在以下缺陷：(1)溶媒的毒性和致敏性：卡巴他賽水溶性太差，現有注射劑是採用100％的吐溫-80作溶劑。研究發現，吐溫-80誘導的短暫適中的超敏反應與吐溫-80可能造成的體液滯留有關。因此，在使用前須使用抗組胺類藥物和非甾體抗炎藥物進行預處理，即使處理後，患者仍有可能出現不同程度的過敏反應，需隨時進行觀察。此外，吐溫-80還具有輕微的溶血性。(2)穩定性比較差：上市的卡巴他賽製劑僅有法國賽諾菲公司研製的卡巴他賽注射液(商品名為jevtan)。該注射液先將藥物溶解於吐溫-80中，臨床使用前，用13％乙醇稀釋至10mg/ml，而在給藥前，進一步用5％葡萄糖或生理鹽水稀釋至臨床使用濃度，稀釋後注射液需在4小時內使用，否則將會產生沉澱。另外，卡巴他賽吐溫-80溶液在低溫15℃以下易析出。本品臨床使用前需進行兩步稀釋，即先用13％乙醇稀釋，再用葡萄糖稀釋，且需過濾，臨床使用步驟繁瑣，易析出，存在用藥方面的安全隱患。(3)臨床劑量準確性較差：本品臨床使用前需進行兩步稀釋，且裝量比較小，存在不同護士在配藥時劑量有差異，存在影響療效和安全性。專利cn201210394958.4公開了一種卡巴他賽脂質體注射劑及其製備方法，該脂質體包括卡巴他賽、磷脂、膽固醇、甘露醇或葡萄糖，該技術方案解決了原研普通注射液配方中含有吐溫-80的過敏風險，並提高了藥物在動物體內的暴露量。但是該組成製備的脂質體成品質量可控性較差，穩定性不佳。本發明針對上述缺陷，提供了一種注射用卡巴他賽脂質體，解決了原研注射液存在的問題：降低溶媒引發的過敏風險；增強藥物在體內的靶向性，提高體內生物利用度；改善臨床順應性和藥物的穩定性。同時，進一步提高了卡巴他賽脂質體成品質量可控性和穩定性。技術實現要素：本發明提供了一種注射用卡巴他賽脂質體劑型的製備方法，包括卡巴他賽、磷脂、膽固醇、凍幹支撐劑、水性介質、穩定劑，六者的重量比為1∶20～80∶0.2～4∶12～32∶200～1000∶0.5～10；優選上述六者的重量比為1∶30～60∶0.25～2.5∶16～28∶300～600∶1.0～6；更優選上述六者的重量比為1∶40～50∶0.35～0.8∶18～24∶400～500∶1.5～3.0。所述的磷脂可以選自大豆磷脂、蛋黃卵磷脂、氫化大豆磷脂、聚乙二醇磷脂、磷脂醯甘油等中的一種或幾種。所述的凍幹支撐劑可以選自甘露醇、葡萄糖、蔗糖、乳糖、胺基酸、海藻糖等中的一種或幾種所述的水性介質包括不同ph值的緩衝液，可以選自磷酸鹽緩衝液、枸櫞酸鹽緩衝液、碳酸鹽緩衝液、硫酸銨緩衝鹽、兩性離子有機化學緩衝液等，ph值可介於4.5～9.0之間。所述的穩定劑可以選自edta-2na、油酸、聚氧乙烯氫化蓖麻油、羥丙基倍他環糊精等。本發明所述卡巴他賽純度要求在95％～105％之間。本發明注射用卡巴他賽脂質體製備工藝可用真空薄膜濃縮法、旋轉蒸發法、高速剪切法、高壓均質法等。本發明製備過程中所用有機溶劑可以選自乙醇、二氯甲烷、氯仿、甲醇、乙醚、異丙醇、丙酮等中的一種或幾種。本發明提供了一種製備注射用卡巴他賽脂質體的方法：稱取處方量的磷脂、膽固醇、卡巴他賽，溶於有機溶劑後蒸乾，使混合物成膜。加入水性介質，在30～70℃下水化，取出脂質體冷卻後，於細胞破碎儀的探頭下超聲分散或高速分散機中攪拌，加入凍幹支撐劑，依次經0.45μm、0.22μm濾膜過濾，分裝，冷凍乾燥。本發明製備的注射用卡巴他賽脂質體粒徑控制範圍為50nm～100nm；包封率大於90％；配伍穩定性考察8h無沉澱析出；24h內體外釋放度小於15％；比格犬體內暴露量增加約0.85倍；長期放置6個月穩定性良好。本發明的注射用卡巴他賽脂質體為細胞毒類抗腫瘤藥物，可用於轉移性激素難治性前列腺癌、腦癌、乳腺癌、非小細胞肺癌等疾病。本發明提供的注射用卡巴他賽脂質體，加入了水性介質和穩定劑，改善了脂質體雙分子層的表面張力，降低了脂質體膜的流動性，不僅提高動物體內暴露量、降低溶媒引起的過敏風險、改善臨床順應性，而且提高了脂質體的質量可控性和穩定性。同時，脂質體中的藥物持續釋放，延長了在血液中的循環時間，提高了藥物有效成分的利用率。因此，本品開發成注射用卡巴他賽脂質體新劑型意義重大。附圖說明圖1為卡巴他賽脂質體粒徑圖；圖2為不含水性介質和穩定劑的卡巴他賽脂質體粒徑圖；圖3為卡巴他賽脂質體zeta電位圖；圖4為不含水性介質和穩定劑的卡巴他賽脂質體zeta電位圖；圖5為卡巴他賽標準曲線圖；圖6為卡巴他賽藥物含量檢測圖譜；圖7為卡巴他賽脂質體體外釋放曲線對比圖；圖8為卡巴他賽藥時曲線對比圖。具體實施方式實施例1製備：稱取處方量的蛋黃卵磷脂1000mg、膽固醇10mg、卡巴他賽25mg，用無水乙醇500ml於55～60℃水浴攪拌下使溶解，後旋轉蒸發，使磷脂的乙醇液在壁上成膜。55～60℃減壓除去無水乙醇後加入同溫度水性介質0.01mol/l的pbs溶液(ph值5.7)100ml，60℃水浴中水化(水化時可加入適當玻璃珠攪拌，水化均勻為止，注意水化時攪拌不可過於劇烈)，取出脂質體放入燒杯中。冷卻至40℃後，於細胞破碎儀的探頭下超聲分散5min(450w×5min，工作3s，間歇1s)，加入5％乳糖凍幹支撐劑，依次經0.45μm、0.22μm濾膜過濾，分裝於西林瓶中，冷凍乾燥，即得。質控：外觀為白色疏鬆塊狀，粒徑為79.16nm，含量為標示量的97.39％，包封率為94.31％。實施例2製備：稱取處方量的大豆磷脂1000mg、膽固醇50mg、卡巴他賽28mg，用二氯甲烷550ml於30℃水浴攪拌下使溶解，後旋轉蒸發，使磷脂的二氯甲烷溶液在壁上成膜。30℃減壓除去二氯甲烷後加入同溫度水性介質0.1mol/l的檸檬酸鹽(ph值6.6)溶液100ml，30℃水浴中水化(水化時可加入適當玻璃珠攪拌，水化均勻為止，注意水化時攪拌不可過於劇烈)，取出脂質體放入燒杯中。冷卻至室溫後，於高速分散機中10000rpm分散5min，加入4％葡萄糖凍幹支撐劑，依次經0.45μm、0.22μm濾膜過濾，分裝於西林瓶中，冷凍乾燥，即得。質控：外觀為白色疏鬆塊狀，粒徑為77.54nm，含量為標示量的99.01％，包封率為93.55％。實施例3製備：稱取處方量的蛋黃卵磷脂800mg、dspe-mpeg2000200mg，膽固醇20mg、卡巴他賽30mg，用無水乙醇400ml和二氯甲烷1ooml混合溶液於45～50℃水浴攪拌下使溶解，後旋轉蒸發，使磷脂的混合溶液在壁上成膜。45～50℃減壓除去混合溶劑後加入同溫度水性介質0.02mol/l的pbs溶液(ph值7.4，含1.o％油酸)100ml，50℃水浴中水化(水化時可加入適當玻璃珠攪拌，水化均勻為止，注意水化時攪拌不可過於劇烈)，取出脂質體放入燒杯中。冷卻至40℃後，於細胞破碎儀的探頭下超聲分散5min(450w×5min，工作3s，間歇1s)，加入6％甘露醇凍幹支撐劑，依次經0.45μm、0.22μm濾膜過濾，分裝於西林瓶中，冷凍乾燥，即得。質控：外觀為白色疏鬆塊狀，粒徑為79.41nm，含量為標示量的98.63％，包封率為93.60％。實施例4製備：稱取處方量的大豆卵磷脂700mg、dspe-mpeg2000300mg，膽固醇40mg、卡巴他賽25mg，用甲醇350ml和二氯甲烷150ml混合溶液於40～45℃水浴攪拌下使溶解，後旋轉蒸發，使磷脂的混合溶液在壁上成膜。40～45℃減壓除去混合溶劑後加入同溫度水性介質0.025mol/l的pbs溶液(ph值8.0，含0.5％rh-40)100ml，45℃水浴中水化(水化時可加入適當玻璃珠攪拌，水化均勻為止，注意水化時攪拌不可過於劇烈)，取出脂質體放入燒杯中。冷卻至室溫後，於高速分散機中10000rpm分散5min，加入2％甘露醇和2％葡萄糖凍幹支撐劑，依次經0.45μm、0.22μm濾膜過濾，分裝於西林瓶中，冷凍乾燥，即得。質控：外觀為白色疏鬆塊狀，粒徑為80.78nm，含量為標示量的97.99％，包封率為94.05％。實施例5製備：稱取處方量的氫化大豆卵磷脂600mg、蛋黃卵磷脂300mg、dspe-mpeg20001oomg，膽固醇25mg、卡巴他賽25mg，用甲醇500ml溶液於45～50℃水浴攪拌下使溶解，後旋轉蒸發，使磷脂的甲醇溶液在壁上成膜。45～50℃減壓除去甲醇溶劑後加入同溫度水性介質0.5％的nahco3溶液100ml，50℃水浴中水化(水化時可加入適當玻璃珠攪拌，水化均勻為止，注意水化時攪拌不可過於劇烈)，取出脂質體放入燒杯中。冷卻至室溫後，於高速分散機中10000rpm分散5min，加入4％甘露醇和2％乳糖凍幹支撐劑，依次經0.45μm、0.22μm濾膜過濾，分裝於西林瓶中，冷凍乾燥，即得。質控：外觀為白色疏鬆塊狀，粒徑為72.61nm，含量為標示量的97.58％，包封率為94.53％。實施例6製備：稱取處方量的氫化大豆卵磷脂200mg、蛋黃卵磷脂900mg，膽固醇20mg、卡巴他賽30mg，用甲醇200ml和無水乙醇350ml混合溶液於50～55℃水浴攪拌下使溶解，後旋轉蒸發，使磷脂的混合溶液在壁上成膜。50～55℃減壓除去混合溶劑後加入同溫度水性介質0.5％的nahco3+0.1mol/l的羥丙基倍他環糊精的混合水溶液1ooml，55℃水浴中水化(水化時可加入適當玻璃珠攪拌，水化均勻為止，注意水化時攪拌不可過於劇烈)，取出脂質體放入燒杯中。冷卻至室溫後，於細胞破碎儀的探頭下超聲分散5min(450w×5min，工作3s，間歇1s)，加入4.5％乳糖凍幹支撐劑，依次經0.45μm、0.22μm濾膜過濾，分裝於西林瓶中，冷凍乾燥，即得。質控：外觀為白色疏鬆塊狀，粒徑為78.16nm，含量為標示量的98.37％，包封率為93.84％。實施例7製備：稱取處方量的氫化大豆卵磷脂800mg、dspe-mpeg2000300mg，膽固醇50mg、卡巴他賽35mg，用無水乙醇500ml和二氯甲烷50ml混合溶液於45～50℃水浴攪拌下使溶解，後旋轉蒸發，使磷脂的混合溶液在壁上成膜。45～50℃減壓除去混合溶劑後加入同溫度水性介質0.2mol/l硫酸銨溶液(ph值7.4)100ml，50℃水浴中水化(水化時可加入適當玻璃珠攪拌，水化均勻為止，注意水化時攪拌不可過於劇烈)，取出脂質體放入燒杯中。冷卻至室溫後，於細胞破碎儀的探頭下超聲分散5min(450w×5min，工作3s，間歇1s)，加入7％甘露醇凍幹支撐劑，依次經0.45μm、0.22μm濾膜過濾，分裝於西林瓶中，冷凍乾燥，即得。質控：外觀為白色疏鬆塊狀，粒徑為79.41nm，含量為標示量的98.11％，包封率為93.26％。實施例8製備：稱取處方量的大豆卵磷脂100mg、蛋黃卵磷脂900mg、dspe-mpeg200050mg，膽固醇10mg、卡巴他賽25mg，用無水乙醇400ml和甲醇100ml以及二氯甲烷50ml混合溶液於45～50℃水浴攪拌下使溶解，後旋轉蒸發，使磷脂的混合溶液在壁上成膜。45～50℃減壓除去混合溶劑後加入同溫度水性介質0.1mol/lpbs溶液(ph值5.0，含0.2％油酸)100ml，50℃水浴中水化(水化時可加入適當玻璃珠攪拌，水化均勻為止，注意水化時攪拌不可過於劇烈)，取出脂質體放入燒杯中。冷卻至室溫後，於高速分散機中10000rpm分散5min，加入2％甘露醇和3％蔗糖凍幹支撐劑，依次經0.45μm、0.22μm濾膜過濾，分裝於西林瓶中，冷凍乾燥，即得。質控：外觀為白色疏鬆塊狀，粒徑為77.70nm，含量為標示量的97.57％，包封率為93.08％。實施例9製備：稱取處方量的氫化大豆卵磷脂125mg、dspe-mpeg200050mg、dspg-na50mg，膽固醇10mg、卡巴他賽25mg，用無水乙醇400ml混合溶液於55～60℃水浴攪拌下使溶解，後旋轉蒸發，使磷脂的混合溶液在壁上成膜。55～60℃減壓除去混合溶劑後加入同溫度水性介質0.01mol/lpbs溶液(ph值7.4，含hepes100mg)100ml，50℃水浴中水化(水化時可加入適當玻璃珠攪拌，水化均勻為止，注意水化時攪拌不可過於劇烈)，取出脂質體放入燒杯中。冷卻至室溫後，於高速分散機中10000rpm分散5min，加入4％蔗糖凍幹支撐劑，依次經0.45μm、0.22μm濾膜過濾，分裝於西林瓶中，冷凍乾燥，即得。質控：外觀為白色疏鬆塊狀，粒徑為84.33nm，含量為標示量的98.70％，包封率為93.28％。試驗例1：注射用卡巴他賽脂質體質量控制1.試驗藥物注射用卡巴他賽脂質體(按照實施例3製備)不含水性介質和穩定劑的卡巴他賽脂質體(自製，參照實施例3)，將配方中水性介質和穩定劑刪除，製備即得。2.質量控制(1)外觀本品為白色疏鬆塊狀物。(2)粒徑儀器：zetasize動態光散射粒度儀，型號：nanozs型，廠家：malvern。樣品製備：取注射用卡巴他賽脂質體適量，加pbs緩衝液稀釋至2.5ml，經0.22μm微孔濾膜過濾，吸取其1ml於樣品池中，用粒度分析儀進行測定，結果如表1，附圖1和圖2所示。表1卡巴他賽脂質體粒徑檢測結果樣品注射用卡巴他賽脂質體卡巴他賽脂質體(不含水性介質和穩定劑)平均粒徑79.41nm125.2nm註：脂質體平均粒徑越小，靶向性越強，膜的穩定性越好。(3)zeta電位儀器：zetasize動態光散射粒度儀，型號：nanozs型，廠家：malvern。樣品製備：取注射用卡巴他賽脂質體適量，加pbs緩衝液稀釋至2.5ml，經0.22μm微孔濾膜過濾，吸取其1ml於樣品池中，用電位分析儀進行測定，結果如表2，附圖3和圖4所示。表2卡巴他賽脂質體zeta電位檢測結果樣品注射用卡巴他賽脂質體卡巴他賽脂質體(不含水性介質和穩定劑)zetapotential-43.5mv-12.5mv註：脂質體電荷能夠減少相互間的聚集和融合，增加穩定性，zeta電位絕對值在30-60mv時，荷電位子比較穩定。(4)含量儀器：高效液相色譜儀，型號：agilent1260。色譜柱：zorbaxeclipseplusc18，150*4.6mm，5um樣品製備：取注射用卡巴他賽脂質體適量，加注射用水使其溶解，精密量取樣品溶液0.2ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，經0.22μm微孔濾膜過濾，進樣，hplc測定，如附圖5和圖6所示。結果：本品含量為標示量的98.63％。(5)包封率透析法：精密量取卡巴他賽脂質體2ml，置透析袋中，將透析袋置於燒杯中，加入水合介質200ml，放入攪拌子，密封好，將燒杯置於磁力攪拌器上，啟動攪拌，分別於0.5、1、2、4、6、8、10、12、24h取透析外液2ml，並同時補充水合介質2ml。透析外液經0.22μm濾過，取續濾液按上述色譜條件進樣。計算各時間點累計含量，並對時間作圖，尋找透析平衡點。結果：本品包封率為93.60％。(6)體外釋放度裝置：模範體內環境進行無菌操作，將樣品置透析袋中，再置37℃水浴中，取透析外液進行測定。釋放介質：用牛血清白蛋白模仿體內蛋白環境，用磷酸鹽緩衝液(pbs，ph＝7.4)維持細胞滲透壓，調節培養液酸鹼平衡，故選用含5％小牛血清的pbs作為體外釋放介質。測定方法：取注射用卡巴他賽脂質體適量，置透析袋中，將透析袋置50ml含5％牛血清白蛋白的pbs中，再將上述溶液置37℃水浴中，磁力攪拌，分別於0.5h、1.0h、2.0h、4.0h、6.0h、8.0h、10.0h、12.0h、24.0h時取1ml滲出液，同時補充1ml原液。按hplc法測定，計算釋放度，結果如表3、表4和附圖7所示。表3注射用卡巴他賽脂質體體外釋放度數據時間(h)0.51.02.04.06.08.010.012.024.0釋放度(％)0.001.131.512.503.664.575.626.4012.89表4卡巴他賽脂質體(不含水性介質和穩定性)體外釋放度數據時間(h)0.51.02.04.06.08.010.012.024.0釋放度(％)0.002.563.785.046.858.7210.2111.9322.63結果表明：脂質體中藥物的釋放有明顯的緩釋效果，且本發明脂質體緩釋效果更好。(7)配伍穩定性取注射用卡巴他賽脂質體適量，加5％葡萄糖或0.9％氯化鈉注射液稀釋至含卡巴他賽0.12mg/ml，考察放置8小時的穩定性，結果如表5所示。表5注射用卡巴他賽脂質體配伍穩定性數據時間(h)外觀粒徑(nm)含量(％)包封率(％)0無色至乳白色澄明液體，無沉澱析出82.3297.8594.381無色至乳白色澄明液體，無沉澱析出81.5697.9694.263無色至乳白色澄明液體，無沉澱析出83.4198.7293.606無色至乳白色澄明液體，無沉澱析出83.8998.2692.968無色至乳白色澄明液體，無沉澱析出83.5397.6491.13結果表明：本品配伍穩定性良好。試驗例2：注射用卡巴他賽脂質體與卡巴他賽注射液藥動學參數比較1.試驗藥物注射用卡巴他賽脂質體(按照實施例3製備)卡巴他賽注射液(自製，參考jevtana說明書)製備方法：處方量吐溫-80與卡巴他賽超聲加熱溶解後，用13％乙醇水溶液稀釋定容，再用5％葡萄糖水溶液稀釋至給藥濃度，經0.22μm微孔濾膜過濾，即得。2.試驗動物spf級beagle犬，雄雌各半，購於：北京瑪斯生物技術有限公司，北京市昌平區流村鎮瓦窯村，許可證號：scxk(京)2011-0003，發證機關：北京市科學技術委員會。3.試驗方法將注射用卡巴他賽脂質體與卡巴他賽注射液通過比格犬採用前肢外側靜脈給藥(n＝2)，給藥劑量1.0mg/kg，分布於給藥前後0min，2min，5min，15min，30min，1h，2h，4h，6h，8h，10h，24h，48h。比格犬後肢外側小隱靜脈取血0.5ml至1.5mlep管中，肝素抗凝。4℃，條件下10000rpm離心分離血漿。上述含藥血漿經處理後，用hplc/ms/ms測定血漿藥物濃度，繪製血藥濃度-時間曲線。藥動學數據經das軟體包進行分析，兩製劑的藥動學參數結果如表6和附圖8所示。表6注射用卡巴他賽脂質體與卡巴他賽注射液藥動學參數比較結果表明：脂質體與注射液相比比格犬體內半衰期延長約1倍，暴露量增加約0.85倍。試驗例3：注射用卡巴他賽脂質體穩定性試驗數據比較按本發明專利(實施例3)製得成品分別置於4℃和25℃條件下放置6個月，考察注射用卡巴他賽脂質體穩定性，結果如表7所示。表7注射用卡巴他賽脂質體穩定性試驗數據結果表明：本品放置6個月穩定性良好。當前第1頁12