一種複雜基質水體樣品中雌激素及壬基酚、辛基酚、雙酚a的共檢測方法

2023-05-29 10:04:11 1

專利名稱：一種複雜基質水體樣品中雌激素及壬基酚、辛基酚、雙酚a的共檢測方法
技術領域：
本發明涉及一種水環境中有機汙染物的檢測技術領域，特別是涉及複雜基質水體樣品中雌激素及壬基酚、辛基酚、雙酚A的提取、淨化和儀器檢測方法。
背景技術：
近年來,天然與合成雌激素雌酮(Estrone, El)、17 β-雌二醇(17 β-Estradiol,E2)、17 α -乙炔基雌二醇(17 a -Ethinyl Estradiol, EE2)，以及類雌激素活性物質壬基酚(Nonylphenol, NP)、辛基酌· (Octylphenol, 0P)雙酌· A (BisphenolA, BPA)作為典型的環境中內分泌幹擾物引起了學術界的廣泛關注。相關調查研究表明，水環境中ng/L濃度水平的雌激素足以導致水生生物的雌性化。而由人和哺乳動物的尿液和糞便排放的雌激素以及製造奶瓶等食具、電子器件的包覆材料、紙水杯、金屬飲料罐的保護塗層、食品包裝材料等產生的類雌激素物質壬基酚、辛基酚和雙酚A等的排放是不可避免的。生活汙水的集中處理和排放以及規模化畜禽養殖，是造成河流或土壤環境中雌激素汙染的最重要原因。歐美等國對多家汙水處理廠雌激素濃度及去除效率的調查結果顯示，在汙水處理廠出水及受納水體中殘留著ng/L濃度水平的雌激素。因此，調查和研究汙水和畜禽養殖廢水中的雌激素及類雌激素物質濃度對於該類物質的控制和去除具有重要意義。但這些廢水基質組成複雜，而雌激素又痕量存在，這對樣品前處理提出了較高的要求。近年來，痕量有機物的儀器檢測技術有了很大的提高，如氣相色譜-質譜聯用(GC/MS)、氣相色譜-串聯質譜聯用(GC/MS/MS)、液相色譜-質譜聯用(LC/MS)、液相色譜-串聯質譜聯用(LC/MS/MS)等，具有較高的靈敏度和精確度。然而，對於實際環境樣品，由於基質幹擾作用，使分析方法的精確性和精密性大大降低。如何將複雜水樣中痕量存在的雌激素富集並淨化，成了水環境中雌激素分析的一個瓶頸。因次，建立回收率高、重現性好的適用於分析複雜基質水體中痕量存在的雌激素及壬基酚、辛基酚、雙酚A的前處理方法是十分必要的。

發明內容
本發明的目的是針對複雜基質水體樣品中雌激素痕量存在、基質幹擾大、前處理技術難度大等問題，擬開發一種回收率高、靈敏度高、準確、快速的分析技術，實現對雌酮、17 β -雌二醇、雌三醇、17 α -乙炔基雌二醇、壬基酚、辛基酚和雙酚A的定量測定。本發明的技術方案如下—種檢測複雜基質水體樣品中痕量雌酮、17 β_雌二醇、雌三醇、17 α-乙炔基雌二醇、壬基酚、辛基酚和雙酚A的定量測定方法。其特徵在於該方法包括如下部分(I)HLB 柱富集水樣採用GF/F玻璃纖維濾膜進行過濾，並用鹽酸調節pH為3 ;利用固相萃取裝置活化Waters公司的HLB固相萃取柱(200mg,6cc),活化的順序為5mL色譜純乙酸乙酯、5mL色譜純甲醇及IOmL超純水，流速為lmL/min ;採用已活化的固相萃取柱對水樣進行固相萃取富集，控制流速為3mL/min ；富集完成後，首先用40%甲醇水溶液淋洗，再用甲醇/氨/水溶液淋洗，所述甲醇/氨/水溶液v/V/V= 10/2/88 ;淋洗結束後真空抽乾lOmin，然後用甲醇洗脫，並將洗脫 液氮吹乾。(2)Florisil 柱淨化用正己烷/ 二氯甲烷=3/1 (v/v)溶液重新溶解氮吹乾後的殘渣，然後通過預先用正己燒活化好的Florisil固相萃取柱(500mg,6cc),再用正己燒/ 二氯甲燒=3/1 (v/v)淋洗，最後用丙酮/ 二氯甲烷=2/8 (v/v)為洗脫劑進行洗脫，洗脫液用氮氣吹乾；殘渣用甲醇定容，漩渦混合後過O. 22 μ m的尼龍濾頭待測。(3)液相色譜-串聯質譜分析液相色譜-串聯質譜聯用儀器為Agilent 1100高效液相色譜系統，包括四元輸液泵，美國Agilent公司的自動進樣器；3200QTRAP型液相色譜/串聯質譜儀，配有電噴霧離子化源(ESI)以及Analyst I. 4. I數據處理軟體；色譜柱Nova_PakC18, 3. 9mmX 150mmX 4 μ m, Waters 公司；離子源電噴霧離子化源(ESI)，負離子方式檢測；離子噴射電壓-4500V ;溫度450°C;源內氣體1(GS1)，N2，壓力45psi ;源內氣體2(GS2)，N2，壓力45psi ;氣簾氣體為N2，壓力20psi ;掃描方式為多重反應監測(MRM);碰撞氣N2的壓力為Medium ;HPLC流動相梯度洗脫條件如表I所示表IHPLC流動相梯度洗脫條件
時間流速乙腈氨水(1%。)甲醇
minpL/min%%%
00.006507.585.07.5
10.206507.585.07.5
21.20 650 10.0 80.0 10.0
32.0065015.070.015.0
43.0065049.02.049.0
56.1065050.0o.O50.0
66.206507.585.07.5
7_IOOO_650_TJ_85 _ 7.5(4)標準曲線的繪製，以外標法進行定量測定所述的外標法標準曲線的繪製利用分析天平準確稱量4種雌激素及壬基酚、辛基酚、雙酚A，溶於色譜純乙腈內，配置成系列濃度的標準溶液，採用液相色譜-串聯質譜聯用進行分析，分別以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標進行回歸，得到標準曲線，用於測定樣品中分析物的量。(5)樣品及回收率的測定採集某汙水處理廠水樣，按步驟I對水樣中的目標化合物進行富集，再按步驟2進行提取物的淨化，然後用液相色譜-串聯質譜聯用檢測，並與步驟4得到的標準曲線比較，通過換算最終得到待測水體樣品中雌激素及壬基酚、辛基酚、雙酚A的含量。採用同樣的汙水樣品，按50ng/L的添加量加入標準溶液，進行上述預處理並測定雌激素及壬基酚、辛基酚、雙酚A含量，按照下式進行回收率計算
權利要求
1. 一種複雜基質水體樣品中雌酮、170-雌二醇、雌三醇、17a-乙炔基雌二醇、壬基酚、辛基酚和雙酚A的共檢測方法，其特徵在於該方法包括如下步驟 (1)HLB柱富集 水樣採用GF/F玻璃纖維濾膜進行過濾，並用鹽酸調節pH為3 ;利用固相萃取裝置活化Waters公司的HLB固相萃取柱，活化的順序為5mL色譜純乙酸乙酯、5mL色譜純甲醇及IOmL超純水,流速為lmL/min ;採用已活化的固相萃取柱對水樣進行固相萃取富集,控制流速為3mL/min ;富集完成後，首先用6mL 40%甲醇水溶液淋洗，再用6mL甲醇/氨/水溶液淋洗，所述甲醇/氨/水溶液v/V/V = 10/2/88 ;淋洗結束後真空抽乾lOmin，然後用6mL甲醇洗脫，並將洗脫液氮吹乾；(2)Florisil柱淨化 用6mL正己烷/ 二氯甲烷=3/1 (v/v)溶液重新溶解氮吹乾後的殘渣，然後通過預先用正己燒活化好的Waters公司的Florisil固相萃取柱,再用6mL正己燒/二氯甲燒=3/1 (v/v)淋洗，最後用6mL丙酮/ 二氯甲烷=2/8 (v/v)為洗脫劑進行洗脫，洗脫液用氮氣吹乾；殘渣用0. 5mL甲醇定容，漩渦混合後過0. 22 y m的尼龍濾頭待測； (3)液相色譜-串聯質譜分析 液相色譜-串聯質譜聯用儀器為=Agilent 1100高效液相色譜系統，包括四元輸液泵，美國Agilent公司的自動進樣器；3200QTRAP型液相色譜/串聯質譜儀，配有電噴霧離子化源(ESI)以及Analyst I. 4. I數據處理軟體； 色譜柱Nova_Pak C18, 3. 9mmX 150mmX4 u m,, Waters公司；離子源電噴霧離子化源(ESI)，負離子方式檢測；離子噴射電壓-4500V ;溫度4500C ;源內氣體I (GSl)，N2，壓力45psi ;源內氣體2(GS2)，N2，壓力45psi ;氣簾氣體為N2，壓力20psi ;掃描方式為多重反應監測(MRM);碰撞氣N2的壓力為Medium ;HPLC流動相梯度洗脫條件如表I所示 表I HPLC流動相梯度洗脫條件
全文摘要
本發明涉及一種水環境中內分泌幹擾物的檢測技術，特別是涉及一種採用液相色譜-串聯質譜聯用技術對複雜基質水體樣品中雌酮、17β-雌二醇、雌三醇、17α-乙炔基雌二醇、壬基酚、辛基酚和雙酚A定量分析的技術。本方法將採集好的水體樣品，採用HLB固相萃取小柱富集並用甲醇洗脫，再將洗脫液氮吹乾，用Florisil淨化，最後利用液相色譜-串聯質譜聯用分析。該方法環境友好、易於操作、且回收率較高，能夠快速分析複雜基質水體樣品中痕量存在的雌酮、17β-雌二醇、雌三醇、17α-乙炔基雌二醇、壬基酚、辛基酚和雙酚A。
文檔編號G01N30/88GK102636611SQ20121012755
公開日2012年8月15日 申請日期2012年4月27日 優先權日2012年4月27日
發明者劉曉薇, 史江紅, 吳唯, 張暉, 薄婷, 賈彥舶, 陳慶彩 申請人:北京師範大學