一種暗紫貝母的促生栽培方法

2023-05-29 08:19:46

一種暗紫貝母的促生栽培方法
【專利摘要】本發明公開了一種暗紫貝母的促生栽培方法，包括材料的選擇與消毒、材料的處理、初代培養、繼代培養、生根培養、生根試管苗溫室煉苗移栽、土壤基質管理等步驟，本發明採用新鮮的暗紫貝母鱗莖球作為外植體進行繁殖，鱗莖球的利用率很高，達到95%以上，並且培育出來的植株枝葉茂盛，根系發達，植株生長旺盛；一個直徑4cm鱗莖球大約能夠繁殖150-200個小鱗莖，即能夠利用有限的資源進行繁殖，繁殖係數很高。在繼代培養過程中當愈傷組織分化出細芽後，升高培養溫度，提高光照周期和光照強度，提高土壤肥力、病蟲害控制率，這樣縮短了培養時間。
【專利說明】一種暗紫貝母的促生栽培方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種貝母的組織培養方法，尤其涉及一種適用於暗紫貝母的快速繁殖方法。
【背景技術】
[0002]暗紫貝母(F.unibiacteata Hsiao et K.C.Hsia)是貝母屬中較名貴的中藥材，其鱗莖可以有效止咳、祛痰、清熱潤肺，尤其適合於老年人和兒童久治不愈的頑固性虛寒咳嗽。暗紫貝母在中藥材市場上的需求量特別高，但是其鱗莖生長速度特別慢，從種子長成商品藥材一般需要四年的時間，由於貝母藥效好、價值高，加上人工種植難度大、繁殖係數低、生長周期長，因此商品藥材價格一直居高不下，並且近年來需求量越來越大，導致暗紫貝母的價格也越來越高。野生的暗紫貝母主要分布在地勢高亢寒冷、日照強烈、空氣乾燥、春秋短暫的地區生長。主產區若爾蓋、紅原兩縣因受地形、寒流等影響，常年無夏，這種氣候特點構成了暗紫貝母生長的特殊環境條件，所以這種特殊的生長環境決定了暗紫貝母在田間及人工種植比較困難，為了擴大暗紫貝母的繁殖，利用組織培養技術進行快速繁殖十分必要。目前對貝母的組織培養技術的研究已經初具規模，但是對暗紫貝母的研究還不是很多，並且繁殖方法還沒有成規模，沒有形成一套完整的繁殖體系。

【發明內容】

[0003]本發明主要解決的技術問題是提供一種利用組織培養技術繁殖暗紫貝母的方法，為暗紫貝母的快速增殖提供一套完整的組織培養繁殖體系。
[0004]為解決上述技術問題，本發明採用的一個技術方案是:
一種暗紫貝母的促生栽培方法，`其特徵在於，包括以下步驟:
(1)材料的選擇與消毒:首先選用生長健壯、成熟的新鮮的暗紫貝母鱗莖球，剝去鱗莖最外層幹皺的鱗片和基部殘餘老根，流水衝洗30 min後放入清水中浸泡15min，用50%多菌靈500倍液浸泡20-30 min後，將鱗莖球一層一層的剝開，再在紫外燈下照射20 min，繼而轉入超淨工作檯，在超淨工作檯上先用70-75 %的乙醇浸泡10秒，然後用無菌水衝洗，再轉入滴加了 2-3滴土溫80的0.1 %的升萊溶液中浸泡5min,用無菌水衝洗4次；
(2)材料的處理:將消毒處理好的鱗片用無菌濾紙吸乾，在無菌條件下將材料按照上、中、下部還有基部分割開來，分別切成4-6mm的小塊；
(3)初代培養:在無菌的條件下將步驟(2)得到的外植體接種在初代培養基上，該培養基是在在MS常規培養基中添加了 1.0mg/L的6-BA、1.2mg/L的NAA、0.4mg/L的ZT ;培養溫度為26°C，光照時間14 h/d，光照強度22 00 Lx, PH為6.5，瓊脂5 g/L，經過15-20天形成愈傷組織；
(4)繼代培養:將初代培養的愈傷組織切下接種在繼代培養基上，該培養基是在3/4MS常規培養基中添加了 0.5mg/L的6-BA、0.4 mg/L的NAA、0.3mg/L的KT和30mg/L的鹿糖，培養溫度為22°C，光照周期13h/d，光強度為25001ux，PH 6.5，經過4_5天時間分化出細芽後，升高培養溫度到25°C，光照周期為14h/d，光強度為28001ux，繼續培養6-10天便可分化出一簇一簇的小鱗莖；
(5)生根培養:將分化出來的小鱗莖一個個分別接種於下列誘導培養基中進行生根誘導:MS培養基、1.5mg/L的活性炭、6g/L的瓊脂、0.3mg/L的IBA、0.4mg/L的KT，培養溫度為23°C，光照周期12h/d，光強度為20001ux，PH值為6.0，經過20-25天待小鱗莖長至3cm高，當根系比較健壯並且長出6-10個根時，即開始下一個階段；
(5)土壤基質管理:調節土壤pH值為7.0-8.2，將硫磺粉過篩後與5倍體積細土混勻後施用，除了用硫磺粉調節土壤PH值外，硫磺粉與草炭混合施用效果則更佳，或者使用松針配合硫磺粉對土壤進行改良，其中松針、原土、糞肥、硫磺粉按照重量份數比2:3:1:2,或者土壤中施入鋸未、草炭、苔蘚和硫磺粉進行土壤改良，其中鋸未、草炭、苔蘚和硫磺粉的重量份數比為1:1:1:2;
增加土壤有機質含量:挖寬50 cm、深40 cm的定植溝,有機質、有機肥、原土按1:1:1的比例進行改土，有機質用酸性草炭，如果用鋸末、樹皮必須先堆放I月以上，完全腐熟分解後再使用，如用人畜糞尿腐熟或植物秸杆葉子腐爛腐熟後形成的天然肥料，注意不要摻入草木灰、石灰鹼性物質，含量達到3%-5%以上，以增加土壤的通透性；
土壤覆蓋:土壤覆蓋在苗木定植後即可進行，將覆蓋物均勻覆蓋在床面，寬I米、厚5-10釐米，以後每年再覆蓋2釐米厚，以保持原有厚度，如果應用未腐爛分解的新鋸末，需增施50%的氮肥，腐爛分解好的鋸末，氮肥用量應相應地減少，覆蓋黑地膜可以防止土壤水分蒸發，控制雜草，提高地溫，最好是在有滴灌設施的果園應用，覆蓋黑地膜與覆蓋有機物相結合效果更佳或者定植前用除草劑殺滅雜草，定植後全墾園地播撒綠肥白三葉、紅三葉等豆科植物，3月後可完全覆蓋園地，又能增加土壤肥力；
(6)生根試管苗溫室煉苗移栽:
將生根的試管苗開瓶後置溫室溫度在25-28 °C，溼度80-85 %，光照強度在5000-55001x條件下煉苗3-5天後，洗掉苗上的培養基，將其移栽到上述步驟(5)中的土壤基質中；當外界夜間溫度在10-15°C，白天溫度在18-25之間時把試管苗進行移栽，在移栽初期的5天內，用塑料薄膜覆蓋，以保持溼度在80%以上，並且控制光照強度在2700-33001X，之後逐漸揭去薄膜並適當增加光照，直至將移栽苗置於自然條件下。
[0005]本發明的有益效果是:
(O本發明採用新鮮的暗紫貝母鱗莖球作為外植體進行繁殖，鱗莖球的利用率很高，達到95%以上,並且培育出來的植株枝葉茂盛，根系發達，植株生長旺盛；一個直徑4011鱗莖球大約能夠繁殖150-200個小鱗莖，即能夠利用有限的資源進行繁殖，繁殖係數很高。
[0006](2)在繼代培養過程中當愈傷組織分化出細芽後，升高培養溫度，提高光照周期和光照強度，這樣縮短了培養時間。
[0007](3)在生根試管苗溫室煉苗移栽過程中當外界夜間溫度在10_15°C，白天溫度在18-25之間時進行移栽，有利於暗紫貝母的生長發育，即把握了移栽的時間，提高了土壤肥力、控制了病蟲害，使試管苗的移栽成功率達到了 95%以上。
【具體實施方式】
[0008]下面對本發明的較佳實施例進行詳細闡述，以使本發明的優點和特徵能更易於被本領域技術人員理解，從而對本發明的保護範圍做出更為清楚明確的界定。
[0009]實施例1
一種暗紫貝母的促生栽培方法，包括:
(1)材料的選擇與消毒:首先選用生長健壯、成熟的新鮮的暗紫貝母鱗莖球，剝去鱗莖最外層幹皺的鱗片和基部殘餘老根，流水衝洗30 min後放入清水中浸泡15min，用50%多菌靈500倍液浸泡20 min後，將鱗莖球一層一層的剝開，再在紫外燈下照射20 min，繼而轉入超淨工作檯，在超淨工作檯上先用70 %的乙醇浸泡10秒，然後用無菌水衝洗，再轉入滴加了 2滴土溫80的0.1 %的升萊溶液中浸泡5min,用無菌水衝洗4次；
(2)材料的處理:將消毒處理好的鱗片用無菌濾紙吸乾，在無菌條件下將材料按照上、中、下部還有基部分割開來，分別切成4mm的小塊；
(3)初代培養:在無菌的條件下將步驟(2)得到的外植體接種在初代培養基上，該培養基是在在MS常規培養基中添加了 1.0mg/L的6-BA、l.2mg/L的NAA、0.4mg/L的ZT ;培養溫度為26°C，光照時間14 h/d，光照強度22 00 Lx, PH為6.5，瓊脂5 g/L，經過15-20天形成愈傷組織；
(4)繼代培養:將初代培養的愈傷組織切下接種在繼代培養基上，該培養基是在3/4MS常規培養基中添加了 0.5mg/L的6-BA、0.4 mg/L的NAA、0.3mg/L的KT和30mg/L的鹿糖，培養溫度為22°C，光照周期13h/d，光強度為25001ux，PH 6.5，經過4天時間分化出細芽後，升高培養溫度到25°C，光照周期為14h/d，光強度為28001UX，繼續培養8天便可分化出一簇
一簇的小鱗莖；
(5)生根培養:將分化出來的小鱗莖一個個分別接種於下列誘導培養基中進行生根誘導:MS培養基、1.5mg/L的活性炭、6g/L的瓊脂、0.3mg/L的IBA、0.4mg/L的KT，培養溫度為23°C，光照周期12h/d，光強度為20001ux，PH值為6.0，經過20-25天待小鱗莖長至3cm高，當根系比較健壯並且長出6-10個根時，即開始下一個階段；
(6)生根試管苗溫室煉苗移栽:將生根的試管苗開瓶後置溫室溫度在25°C，溼度80%，光照強度在50001x條件下煉苗5天後，洗掉苗上的培養基，將其移栽到由羊糞、腐殖土、珍珠巖的混合比例為1: 3: 2的苗床上。當外界夜間溫度在10-15°C，白天溫度在18-25之間時把試管苗進行移栽，在移栽初期的5天內，用塑料薄膜覆蓋，以保持溼度在80%以上，並且控制光照強度在27001x，之後逐漸揭去薄膜並適當增加光照，直至將移栽苗置於自然條件下。
[0010]經過上述步驟的培養，暗紫貝母的愈傷組織形成率達到了 95%，增殖倍數達到了5.8倍，生根率達到了 95%，最終的成活率達到了 88%，並且暗紫貝母的質量和產量都得到很大的提聞。
[0011]實施例2
一種暗紫貝母的促生栽培方法，包括以下步驟:
(I)材料的選擇與消毒:首先選用生長健壯、成熟的新鮮的暗紫貝母鱗莖球，剝去鱗莖最外層幹皺的鱗片和基部殘餘老根，流水衝洗30 min後放入清水中浸泡15min，用50%多菌靈500倍液浸泡30 min後，將鱗莖球一層一層的剝開，再在紫外燈下照射20 min，，繼而轉入超淨工作檯，在超淨工作檯上先用75 %的乙醇浸泡10秒，然後用無菌水衝洗，再轉入滴加了 3滴土溫80的0.1 %的升萊溶液中浸泡5min,用無菌水衝洗4次；(2)材料的處理:將消毒處理好的鱗片用無菌濾紙吸乾，在無菌條件下將材料按照上、中、下部還有基部分割開來，分別切成6mm的小塊；
(3)初代培養:在無菌的條件下將步驟(2)得到的外植體接種在初代培養基上，該培養基是在在MS常規培養基中添加了 1.0mg/L的6-BA、1.2mg/L的NAA、0.4mg/L的ZT ;培養溫度為26°C，光照時間14 h/d，光照強度22 00 Lx，PH為6.5，瓊脂5 g/L，經過20天形成愈傷組織；
(4)繼代培養:將初代培養的愈傷組織切下接種在繼代培養基上，該培養基是在3/4MS常規培養基中添加了 0.5mg/L的6-BA、0.4 mg/L的NAA、0.3mg/L的KT和30mg/L的鹿糖，培養溫度為22°C，光照周期13h/d，光強度為25001ux，PH 6.5，經過4_5天時間分化出細芽後，升高培養溫度到25°C，光照周期為14h/d，光強度為28001uX，繼續培養6-10天便可分化出一簇一簇的小鱗莖；
(5)生根培養:將分化出來的小鱗莖一個個分別接種於下列誘導培養基中進行生根誘導:MS培養基、1.5mg/L的活性炭、6g/L的瓊脂、0.3mg/L的IBA、0.4mg/L的KT，培養溫度為23°C，光照周期12h/d，光強度為20001ux，PH值為6.0，經過20-25天待小鱗莖長至3cm高，當根系比較健壯並且長出6-10個根時，即開始下一個階段；
(6)生根試管苗溫室煉苗移栽:將生根的試管苗開瓶後置溫室溫度在28°C，溼度85%，光照強度在55001x條件下煉苗3天後，洗掉苗上的培養基，將其移栽到由羊糞、腐殖土、珍珠巖的混合比例為1: 3: 2的苗床上。當外界夜間溫度在15°C，白天溫度在25之間時把試管苗進行移栽，在移栽初期的5天內，用塑料薄膜覆蓋，以保持溼度在80%以上，並且控制光照強度在33001x，之後逐漸揭去薄膜並適當增加光照，直至將移栽苗置於自然條件下。
[0012]經過上述步驟的培養，暗紫貝母的愈傷組織形成率達到了 92%，增殖倍數達到了 6倍，生根率達到了 98%，最終的成活率達到了 90%。
[0013](5) 土壤基質管理: 調節土壤pH值為7.0-8.2，將硫磺粉過篩後與5倍體積細土混勻後施用，除了用硫磺粉調節土壤PH值外，硫磺粉與草炭混合施用效果則更佳，或者使用松針配合硫磺粉對土壤進行改良，其中松針、原土、糞肥、硫磺粉按照重量份數比2:3:1:2，或者土壤中施入鋸未、草炭、苔蘚和硫磺粉進行土壤改良，其中鋸未、草炭、苔蘚和硫磺粉的重量份數比為1:1:1:2;
增加土壤有機質含量:挖寬50 cm、深40 cm的定植溝,有機質、有機肥、原土按1:1:1的比例進行改土，有機質用酸性草炭，如果用鋸末、樹皮必須先堆放I月以上，完全腐熟分解後再使用，如用人畜糞尿腐熟或植物秸杆葉子腐爛腐熟後形成的天然肥料，注意不要摻入草木灰、石灰鹼性物質，含量達到3%-5%以上，以增加土壤的通透性；
土壤覆蓋:土壤覆蓋在苗木定植後即可進行，將覆蓋物均勻覆蓋在床面，寬I米、厚5-10釐米，以後每年再覆蓋2釐米厚，以保持原有厚度，如果應用未腐爛分解的新鋸末，需增施50%的氮肥，腐爛分解好的鋸末，氮肥用量應相應地減少，覆蓋黑地膜可以防止土壤水分蒸發，控制雜草，提高地溫，最好是在有滴灌設施的果園應用，覆蓋黑地膜與覆蓋有機物相結合效果更佳或者定植前用除草劑殺滅雜草，定植後全墾園地播撒綠肥白三葉、紅三葉等豆科植物，3月後可完全覆蓋園地，又能增加土壤肥力；
(6)生根試管苗溫室煉苗移栽:
將生根的試管苗開瓶後置溫室溫度在25-28 °C，溼度80-85 %，光照強度在5000-55001x條件下煉苗3-5天後，洗掉苗上的培養基，將其移栽到上述步驟(5)中的土壤基質中；當外界夜間溫度在10-15°C，白天溫度在18-25之間時把試管苗進行移栽，在移栽初期的5天內，用塑料薄膜覆蓋，以保持溼度在80%以上，並且控制光照強度在2700-33001X，之後逐漸揭去薄膜並適當增加光照，直至將移栽苗置於自然條件下。
[0014]經過上述步驟的培養，暗紫貝母的愈傷組織形成率達到了 94%，增殖倍數達到了 7倍，生根率達到了 99%，最終的成活率達到了 98%。
[0015]以上所述僅為本發明的實施例，並非因此限制本發明的專利範圍，凡是利用本發明說明書內容所作的等效結構或等效流程變換，或直接或間接運用在其他相關的【技術領域】，均同理包括在本發明 的專利保護範圍內。
【權利要求】
1.一種暗紫貝母的促生栽培方法，其特徵在於，包括以下步驟: (1)材料的選擇與消毒:首先選用生長健壯、成熟的新鮮的暗紫貝母鱗莖球，剝去鱗莖最外層幹皺的鱗片和基部殘餘老根，流水衝洗30 min後放入清水中浸泡15min，用50%多菌靈500倍液浸泡20-30 min後，將鱗莖球一層一層的剝開，再在紫外燈下照射20 min，繼而轉入超淨工作檯，在超淨工作檯上先用70-75 %的乙醇浸泡10秒，然後用無菌水衝洗，再轉入滴加了 2-3滴土溫80的0.1 %的升萊溶液中浸泡5min,用無菌水衝洗4次； (2)材料的處理:將消毒處理好的鱗片用無菌濾紙吸乾，在無菌條件下將材料按照上、中、下部還有基部分割開來，分別切成4-6mm的小塊； (3)初代培養:在無菌的條件下將步驟(2)得到的外植體接種在初代培養基上，該培養基是在在MS常規培養基中添加了 1.0mg/L的6-BA、1.2mg/L的NAA、0.4mg/L的ZT ;培養溫度為26°C，光照時間14 h/d，光照強度22 00 Lx, PH為6.5，瓊脂5 g/L，經過15-20天形成愈傷組織； (4)繼代培養:將初代培養的愈傷組織切下接種在繼代培養基上，該培養基是在3/4MS常規培養基中添加了 0.5mg/L的6-BA、0.4 mg/L的ΝΑΑ、0.3mg/L的KT和30mg/L的鹿糖，培養溫度為22°C，光照周期13h/d，光強度為25001ux，PH 6.5，經過4_5天時間分化出細芽後，升高培養溫度到25°C，光照周期為14h/d，光強度為28001uX，繼續培養6_10天便可分化出一簇一簇的小鱗莖 ； (5)生根培養:將分化出來的小鱗莖一個個分別接種於下列誘導培養基中進行生根誘導:MS培養基+1.5mg/L的活性炭+6g/L的瓊脂+0.3mg/L的IBA+0.4mg/L的KT，培養溫度為23°C，光照周期12h/d，光強度為20001ux，PH值為6.0，經過20-25天待小鱗莖長至3cm高，當根系比較健壯並且長出6-10個根時，即開始下一個階段； (6)土壤基質管理:調節土壤pH值為7.0-8.2，將硫磺粉過篩後與5倍體積細土混勻後施用，除了用硫磺粉調節土壤PH值外，硫磺粉與草炭混合施用效果則更佳，或者使用松針配合硫磺粉對土壤進行改良，其中松針、原土、糞肥、硫磺粉按照重量份數比2:3:1:2,或者土壤中施入鋸未、草炭、苔蘚和硫磺粉進行土壤改良，其中鋸未、草炭、苔蘚和硫磺粉的重量份數比為1:1:1:2; 增加土壤有機質含量:挖寬50 cm、深40 cm的定植溝,有機質、有機肥、原土按1:1:1的比例進行改土，有機質用酸性草炭，如果用鋸末、樹皮必須先堆放I月以上，完全腐熟分解後再使用，如用人畜糞尿腐熟或植物秸杆葉子腐爛腐熟後形成的天然肥料，注意不要摻入草木灰、石灰鹼性物質，含量達到3%-5%以上，以增加土壤的通透性； 土壤覆蓋:土壤覆蓋在苗木定植後即可進行，將覆蓋物均勻覆蓋在床面，寬I米、厚5-10釐米，以後每年再覆蓋2釐米厚，以保持原有厚度，如果應用未腐爛分解的新鋸末，需增施50%的氮肥，腐爛分解好的鋸末，氮肥用量應相應地減少，覆蓋黑地膜可以防止土壤水分蒸發，控制雜草，提高地溫，最好是在有滴灌設施的果園應用，覆蓋黑地膜與覆蓋有機物相結合效果更佳或者定植前用除草劑殺滅雜草，定植後全墾園地播撒綠肥白三葉、紅三葉等豆科植物，3月後可完全覆蓋園地，又能增加土壤肥力； (7)生根試管苗溫室煉苗移栽: 將生根的試管苗開瓶後置溫室溫度在25-28 °C，溼度80-85 %，光照強度在5000-55001x條件下煉苗3-5天後，洗掉苗上的培養基，將其移栽到上述步驟(5)中的土壤基質中；當外界夜間溫度在10-15°C，白天溫度在18-25之間時把試管苗進行移栽，在移栽初期的5天內，用塑料薄膜覆蓋，以保持溼度在80%以上，並且控制光照強度在2700-33001X， 之 後 逐漸揭去薄膜並適當增加光照，直至將移栽苗置於自然條件下。
【文檔編號】A01G1/00GK103444526SQ201310357461
【公開日】2013年12月18日 申請日期:2013年8月16日 優先權日:2013年8月16日
【發明者】吳志剛 申請人:蘇州仁成生物科技有限公司