一種利用動物血液和脾臟分離提取活性多肽和免疫核糖核酸的方法
2023-05-28 23:51:26 1
專利名稱：一種利用動物血液和脾臟分離提取活性多肽和免疫核糖核酸的方法
技術領域：
本發明涉及一種利用動物血液和脾臟分離提取活性多肽和免疫核糖核酸的方法，活性多肽和免疫核糖核酸(iRNA)主要用於該動物病毒性疾病的預防和治療。
背景技術：
近年來，隨著人民群眾生活水平的提高，畜禽類食品需求量逐年增加，從而帶動了養殖業的空前發展。隨著養殖業的快速發展，畜禽類的疾病也在增加，個體用藥量越來越大，飼養成本逐漸提高，造成養殖效益下滑。由於西藥危害和產品藥殘而帶來的食品安全問題，越來越引起國人的高度關注。如此下去，必將嚴重影響到該行業持續健康地發展。面對這種嚴峻的形勢，我們公司組織科研人員，並在相關專家的指導下，發明生產出一種活性多肽製劑，用於畜禽類動物疾病的防治，既無藥物殘留和毒副作用，也無藥物依賴性。
發明內容
本發明的目的在於提供一種利用動物血液和脾臟分離提取活性多肽和免疫核糖核酸的方法，利用先進的細胞裂解技術，能夠安全有效地濾除各種細菌和蛋白質等抗原，最大限度地提取高純度、高活性的有效成份，這種高純度的活性多肽製劑保留其上一代曾經受到的防疫及得過疾病後服藥的全部信息，攜帶或傳遞給下一代畜禽個體，接收後的個體即不再罹患原來已患過的疾病，從而實現治療和預防的目的。本發明的方法採用以下步驟
1去除脂肪取畜禽類脾臟，去除原料中的脂肪； 2稱量清洗精確稱量出去除脂肪後原料，用純化水清洗2 3遍； 3 粗粉碎將脾臟與血液和純化水按相應比例混合，用膠體磨將其研磨數分鐘，製成勻漿；脾臟與純化水的重量比為1 :2，脾臟與血液的重量比為1 :5 ；
4超微粉碎將勻漿經過細胞破碎機進行超微破碎，破碎後的溶液裝入滅菌後的容器
中；
5滅活按破碎液總量的0. 2%加甲醛溶液，36 38 °C滅活； 6凍融將滅活的勻漿，置_38°C冷庫冷凍後解凍；
7離心分離將解凍的勻漿置2V，以3600r/min離心15分鐘，去除沉澱，取上清液
8過濾層析先將上清液經過粗濾，再利用層析柱進行層析，並收集層析液； 9精濾將層析液用2 μ m的微孔濾膜進行過濾，然後用截留分子量為12000道爾頓超濾膜進行精濾；
10配製將精濾後的溶液移入配液罐中，用鹽酸或氫氧化鈉溶液調PH至6. 8 7. 5 之間，混勻；
11分裝定量分裝，加蓋密封；活性多肽含量不低於1. 8毫克/毫升，核糖核酸含量不低於60微克/毫升；
12保存在_28°C條件下冷凍保存。
由於動物新型免疫抑制性疾病，導致傳統疫苗免疫效力不足或失效，給畜牧業生產造成了極大損失。大量實驗證明活性多肽配合疫苗使用可以顯著提高疫苗的免疫效力， 同時可以提高動物對這些免疫抑制疾病的抵抗能力。活性多肽還可以治療動物病毒和輔助性治療細菌性疾病，增強動物的免疫能力，用於病毒性疾病的治療能夠克服傳統藥物副作用大、療效不佳的缺點，而且運用基因工程方法生產的活性多肽，可以大大降低生產成本， 獲得良好的市場性價比。
利用活體宰殺後的脾臟、血液作為原料，採用生物提取工藝精製而成。本產品的生產工藝先進、科學，從原料的粉碎到製成成品，整個工藝過程均是在超淨環境和常溫以下的溫度中進行，工藝中使用了先進的細胞裂解技術，有效地減少了半成品在反覆凍融過程中活性蛋白核苷鏈被分解而失活的機會，改良層析、過濾等技術的應用，能夠安全有效地濾除各種細菌和蛋白質等抗原，最大限度地提取高純度、高活性的有效成份。這種高純度的活性多肽製劑保留其上一代曾經受到的防疫及得過疾病後服藥的全部信息，攜帶或傳遞給下一代畜禽個體，接收後的個體即不再罹患原來已患過的疾病，從而實現治療和預防的目的。本產品具有以下優點
1.是一種活性多肽，屬低分子可透析成分，可用於治療和預防多種畜禽類疾病，並可在臨床上大量應用，開拓了畜禽類疾病防治的新途徑；
2.本產品可單獨使用，也可以與藥物、抗體甚至疫苗同時使用；可以口服，也可以注射，具有使用方便、效果快的特點，且無任何應激；
3.本品所用原料(血液、脾臟)不經過處理將會嚴重汙染周圍環境，而將這些原料經過先進生產工藝處理後變廢為寶，能夠創造極大的經濟效益、社會效益和環境效益；
4.本項目的投產將解決以下突出問題普通藥物的殘留和毒副作用問題；養殖業的可持續發展問題；增加產品附加值，促進循環經濟的發展問題。
具體實施例方式下面為本發明利用動物血液和脾臟分離提取活性多肽和免疫核糖核酸的方法，其步驟如下
1去除脂肪取畜禽類脾臟，去除原料中的脂肪； 2稱量清洗精確稱量出去除脂肪後原料，用純化水清洗2 3遍； 3 粗粉碎將脾臟與血液和純化水按相應比例混合，用膠體磨將其研磨數分鐘，製成勻漿；脾臟與純化水重量比為1 :2，脾臟與血液的重量比為1 :5 ；
4超微粉碎將勻漿經過細胞破碎機進行超微破碎，破碎後的溶液裝入滅菌後的容器
中；
5 滅活按破碎液總量的0. 2%加甲醛溶液(甲醛溶液的重量百分比為35 40%)， 36 38°C滅活；
6凍融將滅活的勻漿，置_38°C冷庫冷凍後解凍；
7離心分離將解凍的勻漿置2°C，以3600r/min離心15分鐘，去除沉澱，取上清液
8 過濾層析先將上清液經過粗濾，再利用層析柱進行層析，並收集層析液；層析柱主要技術為
權利要求
1. 一種利用動物血液和脾臟分離提取活性多肽和免疫核糖核酸的方法，其特徵在於採用以下步驟(1)去除脂肪取畜禽類脾臟，去除原料中的脂肪；(2)稱量清洗精確稱量出去除脂肪後原料，用純化水清洗2 3遍；(3)粗粉碎將脾臟與血液和純化水按相應比例混合，用膠體磨將其研磨數分鐘，製成勻漿；脾臟與純化水的重量比為1 :2，脾臟與血液的重量比為1 :5 ；(4)超微粉碎將勻漿經過細胞破碎機進行超微破碎，破碎後的溶液裝入滅菌後的容器中；(5)滅活按破碎液總量的0.2%加甲醛溶液，36 38°C滅活；(6)凍融將滅活的勻漿，置_38°C冷庫冷凍後解凍；(7)離心分離將解凍的勻漿置2V，以3600r/min離心15分鐘，去除沉澱，取上清液備用；(8)過濾層析先將上清液經過粗濾，再利用層析柱進行層析，並收集層析液；(9)精濾將層析液用2μ m的微孔濾膜進行過濾，然後用截留分子量為12000道爾頓超濾膜進行精濾；(10)配製將精濾後的溶液移入配液罐中，用鹽酸或氫氧化鈉溶液調pH至6. 8 7. 5之間，混勻；(11)分裝定量分裝，加蓋密封；活性多肽含量不低於1. 8毫克/毫升，核糖核酸含量不低於60微克/毫升；(12)保存在條件下冷凍保存。
全文摘要
本發明利用動物血液和脾臟分離提取活性多肽和免疫核糖核酸的方法，是利用先進的細胞裂解技術，以健康畜禽類脾臟、血液為原料，經過原料脂肪的去除、細胞破碎、滅活、凍融、離心、粗濾、層析、精濾、配置、分裝製備的活性多肽口服溶液。本品分子量小，完全不具抗原性，應用後不刺激機體產生抗體，不會被抗體中和。能增強動物免疫功能，提高機體抗感染能力；不被胰蛋白酶、DNA酶、RNA酶所破壞，應用效果良好；活性高，臨床用量小，見效快；使用安全，無毒副作用，無藥物殘留。不僅可用於預防，也可用於病毒感染引起的疾病的治療。
文檔編號C07K1/36GK102167726SQ20111004113
公開日2011年8月31日 申請日期2011年2月21日 優先權日2011年2月21日
發明者夏雪, 蔣士策, 蔣明達, 虞文洲 申請人:山東省莘縣金鑫畜禽有限公司