用於防治酒精性脂肪肝的松花粉水提取物腸溶片的製作方法

2023-06-14 16:18:31 3

專利名稱：用於防治酒精性脂肪肝的松花粉水提取物腸溶片的製作方法
技術領域：
本發明涉及從植物，特別是從松花粉水提取物製備腸溶片的工藝技術領域。
背景技術：
經WHO統計我國長期飲酒者近2億人，因酒精的毒性作用而致肝臟損害，嗜酒者中約2 / 3可發展為酒精性肝病(ALD)，其包括酒精性肝損傷、脂肪肝(AFL)、肝炎、肝纖維化和肝硬化，是順序漸進的過程，發病機制較複雜，中藥對AFL治療效果尚可。酒精性肝病是臨床上常見的肝病之一，主要是患者長期大量飲酒所致的肝損害。據西方研究，酒精性肝病是導致肝硬化的主要病因，幾乎50%的肝硬化患者都有長期飲酒的習慣。
近年來，隨著我國人民生活水平提高，生活方式和飲食習慣改變，酒精性肝病發病率明顯上升，成為僅次於病毒性肝炎的第二大肝病，並且逐漸向女性化、少年化發展。酒精性肝病在臨床上已屬多發病和常見病，所以，對酒精性肝病的臨床研究引起了廣泛的關注。酒精性肝病的好發年齡為30-50歲，其發病率逐年增加，且有年輕化和女性化的傾向。通過研究發現酒精性肝病患者年齡越大，飲酒史越長，飲酒量越大，肝功能損害就越重；酒精性肝病除與飲酒時間和飲酒量有關外，還和患者所飲酒類的質量及患者的飲酒習慣密切相關，酒類質量越差，其患病率越高；空腹飲用白酒或混合飲用多種酒類，患病率也會明顯增加；其次，雖然男性患者多於女性患者，但如果男女飲相同量的酒，女性較男性更容易患酒精性肝病，且臨床症狀較男性嚴重。由於受自身體質量、脂肪以及胃排空時間等因素的影響，女性的酒精性肝損害有高易感性。酗酒可導致實質器官的微血管改變和脂肪變性，進而發展為器官的萎縮和硬化，最初可出現在肝臟、肺、心臟和腦；肥胖可使體內游離脂肪酸(FFAs)增加，後者除本身引起的脂毒性外，還可抑制葡萄糖的氧化、抑制糖原合成、影響胰島β細胞功能，加速甘油三酯在肝細胞內蓄積等。酒精和肥胖可使上述所有病理變化加重外，還可誘發脂肪性肝炎，並能促進活性氧和活性乙醛-4-羥基乙醛基產生並增加，使酒精性脂肪肝(ASH)和非酒精性脂肪肝(NASH)都處在高水平的氧化應激狀態，促使炎症和纖維化不斷升級。糖脂代謝異常和酗酒還可以表現在對胰島素抵抗(IR)的協同作用，IR是肥胖和超重人群代謝症候群的一個重要標誌，同時也是FFAs在肝臟聚集的標誌，肝細胞中的FFAs可以作為非TG代謝物的載體，加速組織破壞和炎症浸潤及纖維化；酒精可以介導周圍型IR並刺激肝臟脂肪酸代謝，還可以在乙醇脫氫酶介導乙醇氧化成乙醛過程中，由於NAD+向NADH轉化使NAD+消耗增力口，促進FFAs合成，抑制脂質分解，最終導致TG在肝細胞內蓄積。另外，與傳統飲酒者導致明顯的營養缺乏和體重降低不同，狂飲者可能會食慾增加，更多的攝入纖維、高脂等食物，使酒精中獲得的額外能量不能通過減少食物攝入量來抵消，最終導致體重增加及肥胖。在慢性酗酒、糖尿病和肥胖條件下，黏膜損傷導致的腸道滲透性增強，使腸道細菌分解產生的巨大分子物質如病原體相關的分子進入腸內循環，並通過門脈系統進人肝臟，激活肝星狀細胞表達TLRs。在TLRs配體刺激後，纖維原細胞激活MAP信號途徑，激活NF-κ B，促使膠原肌纖維原細胞分泌大量前炎症細胞因子及化學因子，使血管周圍產生炎症反應和纖維化。尤其是腫瘤壞死因子-α、白介素-6、血清內毒素/脂多糖和血漿膠原激活抑制劑-I等可以作為兒童NAFLD向NASH轉化的重要生物標記物。長期過度飲酒，可使肝細胞發生脂肪變性、壞死和再生，導致酒精性肝病(ALD);在組織病理學上主要表現為三種形式酒精性脂肪肝、酒精性肝炎和酒精性肝硬化，這三種形式可單獨也可混合存在。隨著生活條件的改善，酗酒有增多趨勢。由於我國肝病主要由肝炎病毒引起，肝炎病毒攜帶者的數量更多，可能掩蓋了實際上是酒精作為病因的肝病。因此，正確認識酒精引起的肝損害，及時診斷和防治具有重要的意義。據研究，酒精性肝病的病因是乙醇的過量攝入，攝入的乙醇主要在十二指腸和上段迴腸通過單純擴散吸收，胃也能緩慢吸收少量的乙醇，進入血液循環中的乙醇隨著血流迅速擴散，在肝、肺及腦等血管分布較多的器官很快達到平衡。乙醇不能儲存，必須被代 謝，肝臟是體內乙醇代謝的最主要器官，其中90 95%在肝臟通過乙醇脫氫酶(ADH)和微粒體乙醇氧化酶系統(MEOs)進行氧化代謝，長期大量飲酒在加重肝臟負擔的同時，很大程度上對肝臟造成損傷。乙醇代謝後的主要產物是乙醛，同時還產生氧應激產物，乙醛隨後又被乙醛脫氫酶(ALDH)氧化代謝最終的產物是二氧化碳和水。戒酒是ALD治療關鍵的措施之一，戒酒可明顯提高ALD患者的生存質量。戒酒後可使ALD的肝功能異常迅速好轉，明顯提高生存率；對於輕微ALD，戒酒後可不繼續發展；肝硬化已充分形成，且有門脈高壓和食管靜脈曲張者，戒酒也難以逆轉，但可改善活動進程，減少併發症的發生。酒精性肝病患者通常合併熱量/蛋白質缺乏性營養不良，而營養不良又可加劇酒精性肝損傷。因此，酒精性肝病患者宜給予富含優質蛋白和維生素B類、高熱量的低脂軟食，必要時適當補充支鏈胺基酸為主的複方胺基酸製劑。嚴重的酒精性肝病應執行臥床休息，疾病的穩定階段應做肌肉鍛鍊，如非劇烈運動、體操、遊泳，家庭中簡單易行的身體鍛鍊同樣有效。目前，有關酒精性脂肪肝的確切發生機制尚未完全明了；一般認為長期飲酒可使體內乙醛生成量增加，NADH/NAD的平衡改變而導致脂肪代謝和轉運紊亂，酒精性脂肪肝是由於乙醇削弱了正常肝細胞的代謝及肝細胞膜的穩定性。①乙醇中間產物乙醛及乙酸，可使還原性輔酶I與輔酶V的比值升高，從而抑制線粒體三羧酸循環，使肝內脂肪酸代謝發生障礙。②酒精有特異性地增加膽鹼需要量的作用，磷脂的不足影響了脂蛋白的合成，從而使運出發生障礙。③大量飲酒致胃腸功能紊亂，影響微量元素的吸收，使體內氧化磷酸化和脂肪酸β氧化受損，血中游離脂肪酸增多，促進脂肪肝形成，大量乙醇刺激腎上腺及垂體-腎上腺軸，增加脂肪組織分解率，使甘油三脂合成增加並堆積。④長期飲酒可誘導肝微粒體中細胞色素Ρ450的活性，其活性增加更加重乙醇及代謝產物對肝臟的毒性作用。酒精中毒引起的肝損傷的機理比較複雜，除了乙醇的直接毒性作用外，乙醇代謝過程中，產生大量的氧自由基，引起肝臟脂質過氧化，是形成肝臟損傷的一個原因。從防治效果看，戒酒對酒精性肝病的治療預後非常重要，戒酒為終生治療，僅此一項即可改變肝病進程。加強社會宣傳教育、改變生活方式、減少烈性酒精耗量、早期診治酒精肝及提高戒酒成功率等，可逐步減少酒精性肝病的發病率。研究表明雙環醇有良好的保肝降酶作用，從ALT、AST、ALP和GGT的恢復速度和程度明顯優於多烯磷脂醯膽鹼組，其機理可能是誘導體內抗氧化物穀胱甘肽-S-轉移酶(GST)和還原型穀胱甘肽(GSH)，提高肝細胞抗氧化能力，提高肝細胞線粒體內GSH水平，雙環醇還能保護肝線粒體結構，對抗各類肝損傷負效應；雙環醇不是抑制劑，而是通過清除氧自由基，保護肝細胞膜，使肝細胞核DNA免受損傷及減少細胞凋亡的發生而起到保肝作用；雙環醇可減輕酒精引起的脂質過氧化招致的肝損傷，從而改善炎症壞死，表明雙環醇為一種治療酒精性脂肪肝的較好藥物選擇。
由於脂肪肝並非為獨立性病種，通過引發肝功能的損傷，引起血液生化指標和酶值的變化。在反應肝細胞損傷的檢測項目中，以血清酶值最常見，如谷丙轉氨酶(ALT)、鹼性磷酸酶(ALP)、乳酸脫氫酶(LDH)等。當肝臟發生脂肪變時，由於肝細胞受到損害，細胞變性、壞死，細胞膜破碎或細胞膜的通透性增加，肝細胞中所含的ALT就會被釋放到血液中，使血中ALT活性增加。由於ALT主要存在於肝細胞中，當其明顯升高時常提示有肝損傷；肝臟發生脂肪變時，多以ALT升高為主。谷丙轉氨酶(ALT)是診斷肝細胞實質損害的主要項目，其高低往往與病情輕重相平行。有人把脂肪肝和冠心病比喻成高脂血症一根繩上的兩個螞蚱，因為肥胖、高脂血症、糖尿病和酗酒是脂肪肝的常見病因，而這些因素也同樣與動脈粥樣硬化和冠心病關係密切。有明顯心肌損傷和血流動力學紊亂，T細胞免疫功能下降，肝活檢研究顯示，這些病例中91. 4%有肝細胞脂肪變性。一般而言，酒精脂肪肝屬可逆性疾病，早期診斷並及時治療常可恢復正常。長期食用高脂食物或大量飲酒，酒精會直接毒害肝細胞，影響其結構及功能；許多人就是因為飲酒過度才患上酒精性肝炎、脂肪肝致使肝臟受損。而肝損傷可導致甘油三酯(TG)下降，甘油三酯是長鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，是人體內含量最多的脂類，大部分組織均可以利用甘油三酯分解產物供給能量，是體內能量的主要來源。脂肪肝會導致食入的大量脂肪吸收減少，膽汁分泌不足，不能分解吃進去的脂肪，脂肪在肝臟形成脂肪滴從而加重病情。松花粉是裸子植物松科松屬馬尾松和油松等松樹的花粉，我國是世界上利用和食用松花粉最早的國家。全世界的松花粉的資源大部分分布在我國，但作為我國獨有的生物資源，馬尾松和油松的花粉還沒有被充分的開發利用。全國松花粉產量非常豐富，僅馬尾松的花粉，每年可再生產量就在近千萬噸，此外我國還有2000多萬公頃的油松花粉可供採集，由於松花粉是風媒傳粉系，如此之多的松花粉的資源如果不能及時採集和加工就會被白白浪費掉。松花粉的醫療保健作用近幾年已經越來越被人們所認知，但是松花粉中存在一類防治酒精性脂肪肝的物質就不為人所知，經過我們多年研究發現這類物質在松花粉中呈水溶性狀態，因而分離提取特別困難，最近我們成功分離出來，並做了相關防治酒精性脂肪肝分子機理的研究工作，找到其發揮作用的關鍵基因，其防治效果非常理想，為此，提出該發明專利申請。通過大鼠實驗研究發現苦瓜具有降低動物肝臟指數以及肝和血清中總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)水平、提高低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HPL-C)含量，因此苦瓜能有效降低大鼠血脂，保護肝臟的功能。決明子中總蒽醌對酒精性脂肪肝模型大鼠具有降低血清ALT、AST、TC、TG和MDA作用，提高血清SOD活性；降低大鼠肝組織TC、TG和FFA，提高HL、LPL、S0D活性。研究還顯示決明子總蒽醌對酒精性脂肪肝模型大鼠肝組織PPAR- Y mRNA和蛋白表達降低有明顯升高作用。說明決明子中總蒽醌可能通過調節脂肪代謝、改善肝臟功能、抗脂質氧化作用和增加PPAR- Y mRNA和蛋白的表達，從而具有預防脂肪肝發生的作用。但是，無論是苦瓜還是決明子在目前的研究中都沒有提出來過它們具有治療酒精性脂肪肝的研究記錄。
目前我國松花粉的研究已經處於國際領先水平，國外的研究還處於營養成分的分析等初級研究階段，而我國已經很好地解決了松花粉保鮮、破壁以及生產等一系列難題，實現了規模化生產，並大大提高了食用松花粉後的營養吸收率，為松花粉行業在世界上的領先地位提供了有力保障。儘管如此國外的花粉產品卻比我國在應用上更廣泛，瑞典將花粉食品應用於美容，日本將花粉食品用做營養品，法國將花粉作為助長兒童發育的機能食品。與之相比，我國松花粉的開發研究雖然已經進行了十幾年，出現了大量的松花粉產品，但綜合加工利用水平還不高，市場上已有的松花粉的產品種類單一，質量參差不齊，精深加工的程度也不高，出口產品更是稀少，寶貴的松花粉的資源沒有被很好的利用。
松花粉中蘊含著非常豐富的營養成分，王開發等研究總結，松花粉含有氧化還原酶、磷酸酶、超氧化物歧化酶(SOD)等104種酶；除常量元素外，還含有碘、鈷、硒等多種微量元素；黃酮類、胡蘿蔔素、核酸、生長素等；豐富的磷脂，具有調整脂肪、蛋白質和碳水化合物新陳代謝的作用，可以有效預防動脈粥樣硬化、肥胖等疾病，保護肝臟並促進肝細胞生成，其中的卵磷脂還能促進大腦發育，增強記憶力；還含有維生素A、B、C、D、E等多種維生素，能滿足不同層次人群的營養需要，是上好的天然保健品，但利用松花粉解酒方面研究仍然是空白。松花粉是中國醫學寶庫中的藥食兼用花粉品種，作為中國傳統藥材，其藥食兼用的歷史已逾數千年，從2400年前的《神農本草經》、《本草綱目》到今天的《中華人民共和國藥典》中均有記載，在民間更是以其神奇的功效被奉為「仙藥」。經過最新的研究發現松花粉中還存在一類具有促進酒精代謝的物質，對促進機體解酒、防治脂肪肝方面具有顯著作用。如專利申請號為201010607364. 8的中國專利就公開了通過水提取方法，將松花粉經破壁、浸泡、水提、超濾，取得松花粉水溶性物質，並證明松花粉水溶性物質具有治療脂肪肝的作用。腸溶片，是一類在胃中不溶、在腸液中可溶解的物質為主要包衣材料進行包衣而製成的片劑。片劑包腸溶衣是由藥物性質和用藥目的決定的①為了防止酸性及酶對某些藥物的破壞或防止藥物對胃的強烈刺激性；②為了使藥物如驅蟲藥、腸道消毒藥等在腸內發生作用，③希望某些藥物在腸道吸收或需要在腸道保護較長時間以延長藥物作用。包上腸溶衣後，能在胃中保持完整而在腸道中釋放出藥物。經過研究我們發現松花粉中有許多生物活性物質在胃中易被胃酸破壞，所以製作腸溶片可以更好地保護生物活性物質免遭破壞，提高產品的使用效果。人大量飲酒的同時也攝取了大量的食物，特別是高油高脂性食物使人胃呈高飽腹狀態，其胃容物的排空一般需要2小時左右，如果同時服用解酒及防治酒精性脂肪肝的藥物，由於服用量與胃容物相比相差太懸殊，很難發揮作用而失效，但如果採用大劑量的解酒藥物，又會受到胃容量的限制而無法實施，所以飯後使用的解酒藥物必須採用胃不溶性的處理方式，這就是我們為什麼要開發腸溶片的主要原因。隨著中國經濟的快速發展，各種各樣的應酬越來越多，由於飲酒誘發的多種疾病的發病率逐年提高，特別是酗酒誘發的酒精性脂肪肝已經成為影響現代人生活質量的重要方面，酗酒並高脂飲食已經成為影響中國中青年人身體健康的主要因素，必須找到科學合理、簡單易行的方法加以控制，否則後果將十分嚴重。

發明內容
本發明目的在於發明一種能高效防治酒精性脂肪肝的松花粉水提取物腸溶片。
本發明主要由以松花粉水提取方法取得的分子量小於5000的松花粉水提取物的凍乾粉、苦瓜粉、決明子粉、異麥芽糖醇、硬脂酸鎂和腸溶性包衣粉組成。所述凍乾粉、苦瓜粉、決明子粉、異麥芽糖醇、硬脂酸鎂和腸溶性包衣粉分別佔腸溶片總質量的10 25%、10 20%、I 10%、50 80%、0· 2 O. 4%和I 3%。松花粉是裸子植物松科松屬馬尾松和油松等松樹的花粉，松花粉內含各種豐富的營養物質，具有多種的生物學活性。松花粉水提物能夠在基因水平上發揮防治酒精性脂肪肝的藥理作用，目前的研究已經基本解決了其防治解酒性脂肪肝的分子機理，本發明原料之一——以松花粉水提取方法取得的分子量小於5000的松花粉水提取物的凍乾粉中總蛋白含量O. 25 2%，含水量低於6%，本發明利用松花粉水提物治療酒精性脂肪肝效果顯著，且無副作用，而且費用低廉，簡單易行。作為腸溶片的優點是松花粉中用於防治酒精性脂肪肝的物質避免胃酸的破壞，治療效果更理想。



圖I為自然健康組肝臟組織切片圖。圖2為自然健康組腎臟組織切片圖。圖3為酒精性脂肪肝模型組肝臟組織切片圖。圖4為酒精性脂肪肝模型組腎臟組織切片圖。圖5為灌胃松花粉腸溶片組肝臟組織切片圖。圖6為灌胃松花粉腸溶片組腎臟組織切片圖。
具體實施例方式一、製備松花粉防治酒精性脂肪肝水提取物的凍乾粉
I、松花粉除雜、乾燥，使含水量下降到4 8%。 2、採用氣流粉碎破壁的方式將松花粉破壁。3、以常壓常溫純淨水浸泡已經破壁的松花粉，同時以低頻超聲波處理10 40分鐘，控制超聲提取液的溫度在10 40°C。4、以8000 15000轉冷凍離心法除去固體雜質，取上清液。5、將所述上清液在I 5°C的環境溫度下以5000D分子篩超濾分離，取得分子量為5000以下的松花粉水溶性物質。6、將上述松花粉水提物經冷凍乾燥24 48小時製備含水量低於6%的松花粉水提物的凍乾粉。二、製備腸溶片
I、制粒工藝沸騰鍋預熱到60 80°C以上，預熱後，先將松花粉的水提凍乾粉、苦瓜粉、決明子粉、異麥芽糖醇加入沸騰鍋內，按照下表參數設置，打開蠕動泵，噴純化水進行一步制粒。制粒結束後，過篩、烘乾，再加入硬脂酸鎂混合均勻用於壓片。
#￥~ I進風溫度I出風溫度I引風頻率I婦動泵I霧化壓力 噴漿時 70-85°C 40-60°C 40Hz150rpm 0.2MPa
噴眾後!85-90°C 150-65°C !35Hz |l50rpm |θ. 2MPa —典型的幾種質量配比表(單位kg)
I凍乾粉I苦瓜粉I決明子粉I異麥芽糖醇I硬脂酸鎂I包衣粉
權利要求
1.用於防治酒精性脂肪肝的松花粉水提取物腸溶片，其特徵在於主要由以松花粉水提取方法取得的分子量小於5000的松花粉水提取物的凍乾粉、苦瓜粉、決明子粉、異麥芽糖醇、硬脂酸鎂和腸溶性包衣粉組成。
2.根據權利要求I所述用於防治酒精性脂肪肝的松花粉水提取物腸溶片，其特徵在於所述凍乾粉、苦瓜粉、決明子粉、異麥芽糖醇、硬脂酸鎂和腸溶性包衣粉分別佔腸溶片總質量的 10 25%、10 20%、I 10%、50 80%、0· 2 O. 4% 和 I 3%。
全文摘要
用於防治酒精性脂肪肝的松花粉水提取物腸溶片，涉及從植物，特別是從松花粉水提取物製備腸溶片的工藝技術領域。由以松花粉水提取方法取得的分子量小於5000的松花粉水提取物的凍乾粉、苦瓜粉、決明子粉、異麥芽糖醇、硬脂酸鎂和腸溶性包衣粉組成。本發明對於防治酒精性脂肪肝效果顯著，且無副作用，而且費用低廉，簡單易行。
文檔編號A61K36/15GK102935105SQ20121050029
公開日2013年2月20日 申請日期2012年11月30日 優先權日2012年11月30日
發明者王桐, 周斌, 劉志河, 石麗花, 葉滿紅, 徐宏楠, 於建偉, 鞠東, 李明 申請人:煙臺新時代健康產業有限公司