一種紫杉醇納米粒子及其製備方法和應用的製作方法
2023-06-14 16:39:26
專利名稱：一種紫杉醇納米粒子及其製備方法和應用的製作方法
技術領域：
本發明屬製藥技術領域，特別是涉及一種紫杉醇納米粒子及其製備方法和 應用。
背景技術：
紫杉醇(Paclitaxel， PTX)是由紅豆杉屬植物提取的一種具有抗癌活性的 二萜類化合物。作為目前最好的抗腫瘤藥物之一，它在臨床上己得到廣泛應 用，特別是對乳腺癌、卵巢癌的治療作用明顯。但其水溶性極差，為了增加 其溶解性，便於臨床給藥，目前國內外紫杉醇製劑均採用同一配方，即在紫 杉醇乙醇注射劑中加入了一種表面活性劑一一聚氧乙基蓖麻油(Cremophor EL)。但是聚氧乙基蓖麻油能促進組胺釋放，常引起嚴重的過敏反應以及產生 高敏性、神經毒性、腎毒性、心臟毒性等不良反應，給病人帶來了極度的痛 苦。為了解決上述問題，研究不含聚氧乙基蓖麻油並能提高紫杉醇生物利用 度的其它液體製劑成為當前的熱點，其中包括合成紫杉醇的易溶性前體藥物 (Kahashi T. Tsukamolo H. Yamada H. el al Design and synthesis of a water-soluble taxol analogue: taxol-sialyl conjugate [J] Bioorg Med Chem Lett. 1998. 8: 113-116)以及脂質體(Crosasso P， Cemti M, Brisa P. etal Preparation, characterization and properties of stencally stabilized paclitaxel-contaiuiug liposomes [J] Controlled Release. 2000. 63: 19-30) 等。
殼聚糖(chitosan， CS)是甲殼素脫乙醯基的產物。它是一種氨基多糖，有 許多獨特的物理、化學特性和生物功能。殼聚糖具有良好的生物黏附特性和 生物可降解性(蔣挺大.殼聚糖.北京化學工業出版社2001: 1 32)，可增
強穿透作用及酶抑制作用，因此被研製成為生物大分子藥物的運送載體，以 增加藥物在體內的有效濃度，提高療效。而與其它種類的高分子藥物載體相 比，殼聚糖不僅原料豐富，而且具有成本低、可生物降解、良好的生物相容 性和生物親和性、無毒、易於化學改性等優點，本身還具有抗菌、止血、抑 制癌細胞轉移等作用。
目前，國內外已有多篇文獻報導殼聚糖衍生物作為紫杉醇藥物載體的相 關研究，但事先都需要對殼聚糖進行功能性修飾。
發明內容
所要解決的技術問題
本發明所要解決的技術問題是提供一種紫杉醇納米粒子及其製備方法和 應用，以克服現有的殼聚糖衍生物作為紫杉醇藥物載體的相關技術事先都需 要對殼聚糖進行功能性修飾的缺陷。
技術方案
本發明的技術方案之一是提供一種紫杉醇納米粒子，通過如下製備方法
獲得
(1)將含有表面活性劑的紫杉醇的醇溶液置於室溫條件下，隨著醇溶劑的
揮發，製得紫杉醇納米粒子；(2) 將紫杉醇納米粒子溶解在殼聚糖溶液中作為水相，與油相混合後在 25-35°0的恆溫下攪拌1 4小時，製備乳液；
(3) 用交聯劑將殼聚糖包裹的紫杉醇納米粒子從乳液中固化析出，用有機 溶劑洗滌粒子，真空乾燥後即可獲得載有紫杉醇的殼聚糖納米粒子。
上述的紫杉醇納米粒子的優選方案之一為，所述的載有紫杉醇的殼聚糖 納米粒子中殼聚糖與紫杉醇的質量比為1:1-4:1。
上述的紫杉醇納米粒子的優選方案之二為，所述的殼聚糖納米粒子對紫 杉醇的包封率為70-80%,載藥量為15-25wt%。
上述的紫杉醇納米粒子的優選方案之三為，所述的殼聚糖、表面活性劑、 交聯劑、油相的質量比為500-4000: 250-2000: 80-160、 160000-400000。
上述的紫杉醇納米粒子的優選方案之四為，所述的交聯劑為檸檬酸三鈉， 所述的油相為液體石蠟，所述的洗滌粒子的有機溶劑為石油醚、異丙醇或者 兩者的組合。
上述的紫杉醇納米粒子的優選方案之五為，所述的醇溶液為乙醇溶液， 所述的殼聚糖溶液為殼聚糖的醋酸溶液。
本發明的技術方案之二是提供一種紫杉醇納米粒子的製備方法，依次包
括如下步驟
(4) 將含有表面活性劑的紫杉醇的醇溶液置於室溫條件下，隨著醇溶劑的 揮發，製得紫杉醇納米粒子；
(5) 將紫杉醇納米粒子溶解在殼聚糖溶液中作為水相，與油相混合後在 25-35'C的恆溫下攪拌1 4小時，製備乳液；
(6) 用交聯劑將殼聚糖包裹的紫杉醇納米粒子從乳液中固化析出，用有機
溶劑洗滌粒子，真空乾燥後即可獲得載有紫杉醇的殼聚糖納米粒子。 上述的紫杉醇納米粒子的製備方法的優選方案之一為，所述的載有紫杉
醇的殼聚糖納米粒子中殼聚糖與紫杉醇的質量比為1:1-4:1。
上述的紫杉醇納米粒子的製備方法的優選方案之二為，所述的殼聚糖納
米粒子對紫杉醇的包封率為70-80%，載藥量為15-25wt%。
本發明的技術方案之三是提供一種卵巢癌細胞的抑制劑，由權利要求1
所述的載有紫杉醇的殼聚糖納米粒子和藥學上可接受的載體組成。
本發明所製備的殼聚糖/紫杉醇載藥納米粒子可以簡稱為CS/PTX NPs。
有益效果
本發明採用生物降解材料殼聚糖製備包裹紫杉醇藥物的納米粒，也可避 免聚氧乙基蓖麻油引起的嚴重的過敏反應以及產生高敏性、神經毒性、腎毒 性、心臟毒性等不良反應問題，並且可利用納米粒的耙向和緩控釋作用，在 一定程度上提高藥物的療效，降低其自身的毒副反應。
本發明的載有紫杉醇的殼聚糖納米粒子採用溶劑揮發一乳化交聯法制 備，無須對殼聚糖進行任何化學修飾，直接可以將其作為紫杉醇藥物的載體， 避免了繁瑣和複雜的修飾步驟，操作過程方便，並降低了生產成本，利於推 廣。且製備的載藥鈉米粒子為單分散的規則球體，粒徑控制在80±30nm，無 團聚現象。
利用本發明的殼聚糖/紫杉醇載藥納米粒子對卵巢癌細胞進行細胞毒性實 驗，結果表明所製備的載藥納米粒子對腫瘤細胞有顯著的緩釋促凋亡作用。
圖1為CS/PTX NPs對卵巢癌細胞A2780細胞生長抑制趨勢圖。結果表 明載藥納米粒子能有效促進A2780細胞的凋亡，且細胞凋亡量隨著培養時 間的延長而增大，證明製得的粒子具有一定的緩釋作用；粒子濃度對細胞凋 亡有影響。培養時間相同時，粒子濃度越高，細胞凋亡量越大。
圖2為PTX藥物溶於乙醇的紫外吸收光譜圖。227nm處的特徵吸收峰為 PTX藥物的最大吸收波長(Amax)。
圖3為CS/PTX NPs溶於乙醇的紫外吸收光譜圖。在227nm附近出現了 PTX的特徵吸收峰，可知PTX被成功地包裹進CS中。
圖4為CS/PTX NPs透射電鏡圖。圖3表明，製成的CS/PTX NPs為球
型粒子，這些粒子分散均勻，且無團聚現象，粒徑範圍控制為80±30nm。
具體實施例方式
下列實施例中未註明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，如納 米材料技術手冊，或按照製造廠商所建議的條件。 實施例1
採用溶劑揮發法和乳液交聯法，用殼聚糖對紫杉醇納米粒子進行包裹， 得到粒徑大小約為80±30nm的球形粒子，具體實施方式
如下
(1 )將30mg紫杉醇0.5mL乙醇溶液滴加到50mL含50mg表面活性 劑十二垸基硫酸鈉(SDS)的水中，在室溫條件下，隨著乙醇溶劑的揮發， 製得紫杉醇納米粒子(PTXNPs);
(2) 將100mg殼聚糖、PTX NPs和0.5mL 0.5%稀醋酸溶液(質量比) 混合，加入到80mL液體石蠟中，在25'C條件下恆溫攪拌4小時；
(3) 在混合液中加入0.5mL 2%檸檬酸三鈉，反應30 min後固化析出粒 子；將所得到的粒子分別用石油醚和異丙醇洗滌，並將粒子真空乾燥保存。
用紫外分光光譜儀(UV)、透射電子顯微鏡(TEM)等測試儀器進行粒子表 徵。結果見圖2、圖3和圖4。
實施例2
(1) 將50mg紫杉醇、0.5mL乙醇溶液滴加到50mL含50mg十二垸基 硫酸鈉的水中，在室溫條件下，隨著乙醇溶劑的揮發，製得紫杉醇納米粒子
(PTXNPs);
(2) 將100mg殼聚糖、PTX NPs、 2mL0.5。/。稀醋酸溶液(質量比)混 合，加入到70mL液體石蠟中，在35'C條件下恆溫攪拌1小時；
(3) 在混合液中加入0.5mL2。/。檸檬酸三鈉，反應30 min後固化析出粒 子；將所得到的粒子分別用石油醚和異丙醇洗滌，並將粒子真空乾燥保存。
實施例3
將處於對數生長的卵巢癌細胞A2780分別調成1x104個/mL接種於96 孔培養板，每孔100|jL。分別加入三種不同濃度的殼聚糖載藥納米粒子(25ijg /mL、 2.5|jg/mL、 0.25|jg/mL)，每種濃度平行4孔。給予10%牛血清1640 培養液，毎孔加100ijL，分別培養24h、 48h、 72h和96h後，觀察所制的粒 子對細胞的促凋亡作用效果。實驗結果如圖1所示。
權利要求
1.一種紫杉醇納米粒子，通過如下製備方法獲得(1)將含有表面活性劑的紫杉醇的醇溶液置於室溫條件下，隨著醇溶劑的揮發，製得紫杉醇納米粒子；(2)將紫杉醇納米粒子溶解在殼聚糖溶液中作為水相，與油相混合後在25-35℃的恆溫下攪拌1～4小時，製備乳液；(3)用交聯劑將殼聚糖包裹的紫杉醇納米粒子從乳液中固化析出，用有機溶劑洗滌粒子，真空乾燥後即可獲得載有紫杉醇的殼聚糖納米粒子。
2. 根據權利要求1所述的紫杉醇納米粒子，其特徵在於，所述的載有紫杉醇 的殼聚糖納米粒子中殼聚糖與紫杉醇的質量比為1:1 -4:1 。
3. 根據權利要求1所述的紫杉醇納米粒子，其特徵在於，所述的殼聚糖納米 粒子對紫杉醇的包封率為70-80%，載藥量為15-25wt%。
4. 根據權利要求1所述的紫杉醇納米粒子，其特徵在於，所述的殼聚糖、表 面活性劑、交聯劑、油相的質量比為500-4000: 250-2000: 80-160、 160000-400000。
5. 根據權利要求1或4所述的紫杉醇納米粒子，其特徵在於，所述的交聯劑 為檸檬酸三鈉，所述的油相為液體石蠟，所述的洗滌粒子的有機溶劑為石 油醚、異丙醇或者兩者的組合。
6. 根據權利要求1所述的紫杉醇納米粒子，其特徵在於，所述的醇溶液為乙 醇溶液，所述的殼聚糖溶液為殼聚糖的醋酸溶液。
7. —種紫杉醇納米粒子的製備方法，依次包括如下步驟(1)將含有表面活性劑的紫杉醇的醇溶液置於室溫條件下，隨著醇溶劑的 揮發，製得紫杉醇納米粒子； (2) 將紫杉醇納米粒子溶解在殼聚糖溶液中作為水相，與油相混合後在 25-35-C的恆溫下攪拌1 4小時，製備乳液；(3) 用交聯劑將殼聚糖包裹的紫杉醇納米粒子從乳液中固化析出，用有機 溶劑洗漆粒子，真空乾燥後即可獲得載有紫杉醇的殼聚糖納米粒子。
8. 根據權利要求1所述的紫杉醇納米粒子的製備方法，其特徵在於，所述的 載有紫杉醇的殼聚糖納米粒子中殼聚糖與紫杉醇的質量比為1:1-4:1。
9. 根據權利要求1所述的紫杉醇納米粒子的製備方法，其特徵在於，所述的 殼聚糖納米粒子對紫杉醇的包封率為70-80%，載藥量為15-25wt%。
10. —種卵巢癌細胞的抑制劑，由權利要求1所述的載有紫杉醇的殼聚糖納米 粒子和藥學上可接受的載體組成。
全文摘要
本發明涉及一種紫杉醇納米粒子，通過如下製備方法獲得將含有表面活性劑的紫杉醇的醇溶液置於室溫條件下，隨著醇溶劑的揮發，製得紫杉醇納米粒子；將紫杉醇納米粒子溶解在殼聚糖溶液中作為水相，與油相混合後在25-35℃的恆溫下攪拌1～4小時，製備乳液；用交聯劑將殼聚糖包裹的紫杉醇納米粒子從乳液中固化析出，用有機溶劑洗滌粒子，真空乾燥後即可獲得載有紫杉醇的殼聚糖納米粒子。本方法無須對殼聚糖進行任何化學修飾，所製備的載藥納米粒子對腫瘤細胞有明顯的緩釋促凋亡作用。
文檔編號A61K31/337GK101167716SQ20071004776
公開日2008年4月30日 申請日期2007年11月2日 優先權日2007年11月2日
發明者於永春, 朱懷仕, 芳 李, 李佳嚀, 沈鶴柏, 童曉文, 馬經緯 申請人:上海市第十人民醫院