一種glp-1衍生物的製作方法

2023-06-14 14:42:51

專利名稱：：一種glp-1衍生物的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種具有人胰高血糖素樣肽一l(Glucagon-likePeptide1，GLP—1)活性的人胰高血糖素樣肽一1衍生物(GLP—1衍生物)及其製備和應用，屬於生物工程
技術領域：
。
背景技術：
：人姨高血糖素樣月太一1(glucagon-likepeptide-l，GLP-1)是主要由遠端迴腸、結腸和直腸的L細胞分泌的一種31個胺基酸的多肽激素，通過葡萄糖依賴性促胰島素釋放、刺激生長抑素釋放和抑制胰高血糖素，是一種治療糖尿病尤其是II型糖尿病的多肽藥物，具有廣泛的社會效益和巨大的經濟效益。但是，GLP-1在體內很容易被二肽醯基肽酶IV(DipeptidylPeptidase4，DPPIV)降解為脫去N端His7-Ala8j^基的無活性的GLP-lC9-37)或GLP-l(9-36)-NH2。靜脈注射GLP-1在體內的半衰期僅為35分鐘，限制了GLP-1的臨床應用。目前GLP-1治療糖尿病的研究方向之一是通過對GLP-1的結構進行改變，得到GLP-1衍生物，用該衍生物治療糖尿病，達到延長藥物在體內的藥效時間的目的。已有的GLP-1衍生物都顯示出穩定性增加，且體內生物活性仍能維持的性質。例如在第8位上進行胺基酸改變如將丙氨酸Ala改為甘氨酸Gly的GLP-1衍生物。又如製備GLP-1的脂肪酸衍生物，代表性藥物有諾華諾德公司研製的NN2211(商品名Liraglutide)，在GLP-1的Lys26上進行醯化。再者，對GLP-1分子進行聚乙二醇(PEG)修飾，如用PEG20000修飾GLP-1分子。還有直接將GLP-1分子與白蛋白大分子融合的CJC-1131，通過分子量增大來增強GLP-1的體內穩定性。雖然通過改變GLP-1第8位上的胺基酸製備得到的GLP-1衍生物半衰期有延長，但第20位Lys、28位Lys以及30位Arg在體內是某些蛋白酶的降解位點，在體內仍然有被降解的可能。通過脂肪酸或聚乙二醇修飾GLP-1等方法製備的GLP-1衍生物雖然體內半衰期延長，但是脂肪酸或聚乙二醇修飾GLP-1的位點和修飾程度常難以控制，導致後續純化和質量控制都比較困難，製備步驟繁瑣、得率低、成本高。因此，現有GLP-1衍生物仍然存在製備和純化困難、或半衰期尚不夠長或難以口服給藥等缺陷，迫切需要研製生物半衰期長的新型GLP-1產品。
背景技術：
：已經提出一種GLP-1衍生物及其製備方法，見本申請人申請的申請號和發明名稱分別為"200610024355.X"和"一種人胰高血糖素樣肽一l衍生物及其製備和應用"，以及申請號和發明名稱分別為"200610029646.8"和"一種人胰高血糖素樣肽一1衍生物及其固相化學合成"的發明專利。
背景技術：
：製備所得的GLP-1衍生物，產量高，純化工藝簡化，生產成本較低，且該衍生物半衰期長於GLP-1的半衰期。但
背景技術：
製備的衍生物也有以下缺點例如，第2位胺基酸在體內仍然容易被二肽醯基肽酶IV降解失去活性。第20位Lys、28位Lys以及30位Arg在體內是某些蛋白酶的降解位點，在體內仍然有被降解的可能。因此，仍然需要開發具有更長作用時間的GLP-1衍生物，更好地用於糖尿病治療。
發明內容GLP-1在體內有兩種形式，一種為GLP-1(7—36)—NH2，由30個胺基酸殘基組成，另一種為GLP-1(7—37)，由31個胺基酸殘基組成，二者有相同的生物學活性。本發明涉及的GLP-1指GLP-1(7—37)，其序歹U(SeqIDNo.l)羅列如下His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp墨Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly。由於GLP-1的結構與功能目前已十分清楚N端是保持活性所必需，而C端負責與受體的結合。GLP-1(7—34)、GLP-1(7—35)、GLP-1(7—36)、GLP-1(7—37)已證明都具有降血糖活性，由此可見GLP-l的C端對生物學活性具有可塑性。根據GLP-1多肽C端功能"可塑性"的結構和功能的關係，以增加GLP-1的體內生物穩定性和延長半衰期為設計思想，我們開展了大量的研究工作，採用全新的思路對GLP-1的胺基酸序列迸行設計和改造，製備出長效的新型GLP-1衍生物。本發明的第一個目的是提供一種新型GLP-l衍生物aGLP-l，其特徵在於，該衍生物的分子結構式為以下的三種結構式aGLP-1(7—36)，艮卩SeqlDNo.2，aGLP-l(7—37)，艮卩SeqIDNo.3禾卩aGLP-l(7一38)，即S叫IDNo.4之一。其中，aGLP-l(7—36)，艮卩SeqIDNo.2序歹U如下His-Xaa2-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Xaa20-Glu-Phe-Ile-AIa-Trp-Leu-Val-Xaa28-Gly-Xaa30。aGLP陽l(7—37)，艮卩SeqIDNo.3序歹!j如下His-Xaa2-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-XaaSO-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-XaaSS-Gly-XaaSO-Xaa31。aGLP-l(7—38)，艮卩SeqIDNo.4序歹lj如下His-Xaa2-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Xaa20-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Xaa28-Gly-Xaa30-Xaa31-Xaa32。其中Xaa2是Ser，His和D-Ala中的任何一個胺基酸，Xaa20是Ser，His,Gln和Ala中的任何一個胺基酸，Xaa28是Ser，His，Asp和Ala中的任何一個胺基酸，Xaa30是Gly和Cys中的任何一個胺基酸，且當Xaa30是C末端胺基酸時，Gly和Cys的C末端可以是羧基一OH或醯胺-NH2，Xaa31是Gly和Cys中的任何一個胺基酸，且當Xaa31是C末端胺基酸時，Gly和Cys的C末端可以是羧基一OH或醯胺-NH2，Xaa32是Gly和Cys中的任何一個胺基酸，且當Xaa32是C末端胺基酸時，Gly和Cys的C末端可以是羧基一OH或醯胺-NH2。該衍生物不僅保持了天然GLP-1在體內的活性，還明顯延長了體內藥效時間，體內藥效時間至少可持續7小時，如給予較高濃度的該衍生物，體內藥效時間將更長，7具有良好的臨床使用價值。此外，該衍生物可通過重組DNA技術的方法或固相化學合成方法製備，技術成熟，成本低，適宜普及使用。本發明的第二個目的是提供固相化學合成上述衍生物的方法。固相化學合成法在製備少於40個胺基酸的小肽工藝十分成熟，具有快速、純化簡便、成本低等優點。為實現上述目的，本發明的技術方案選用固相化學合成法來製備GLP-1衍生物aGLP-l。現詳細說明本發明的技術方案。一種GLP-1衍生物的固相化學合成方法，其特徵在於，具體操作歩驟(1)合成多肽樹脂先將樹脂置入常規多肽合成儀，再將帶保護基的胺基酸單體按所述GLP-1衍生物的胺基酸序列，從C一端向N—端排列在所述常規合成儀中，在25。C下，進行脫Fmoc保護、活化、連接，然後反覆循環，合成得到帶側鏈保護基的多肽樹脂；(2)脫保護基及切斷樹脂將上述帶側鏈保護基的多肽樹脂進行裂解反應後，經過濾，沉澱洗滌，乾燥，得到GLP-1衍生物粗品；(3)HPLC分離純化、冷凍乾燥將上述粗品用製備型HPLC進行分離純化，再經冷凍乾燥，得到GLP-1衍生物；其中，所述帶保護基的胺基酸單體包括Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-D-Ala-OH、Fmoc-L-His(Trt)-OH、Fmoc-L-Val-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)陽OH、Fmoc-L-Tyr(tBu)扁OH、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L-Thr(tBu)-OH、Fmoc-L-Gln(Trt)-OH、Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L陽Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-Ile陽OH、Fmoc-L-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-L-Trp-OH、Fmoc-L-Cys(Trt)-OH;其中，當多肽C末端為羧基時，選擇王氏樹脂作為所述固相載體樹脂；當多肽C末端為醯胺時，選擇常規氨基樹脂作為所述固相載體樹脂。當所述的GLP-1衍生物為僅包含由遺傳密碼編碼的胺基酸殘基的多肽時，還可通過DNA重組技術製備衍生物。例如，按GLP-1衍生物的胺基酸序列合成基因片段；以適合於表達單獨的蛋白質或融合蛋白的方式將編碼序列放入表達載體；用含有GLP-1衍生物或融合的GLP-1衍生物基因序列的表達載體轉化適當的原核生物的宿主細胞，獲得基因工程菌株；將基因工程菌株經液體發酵，經離心獲得含有GLP-1衍生物融合蛋白或單獨含有GLP-1衍生物蛋白的溼菌體；將溼菌體破壁，經分離獲得含GLP-1衍生物融合蛋白或單獨含有GLP-1衍生物蛋白的粗品；經純化，冷凍乾燥製得產品GLP-1衍生物。本發明的第三個目的是提出GLP-1衍生物的應用，該衍生物在製備治療糖尿病的藥物中作該藥物的活性成分。本發明的優點在於本發明提出的GLP—1衍生物具有長於GLP-1的半衰期；生產方法簡便，成本較低；適於作治療糖尿病藥物的活性成分。具體實施例方式下面結合實施例，進一步詳述本發明的技術方案。說明書及以下實施例中所用帶保護基的胺基酸單體以及其他化學試劑等，均可以從相關公司購買獲得，未註明具體條件的實驗方法，可按常規條件進行，或按商品供貨商所建議的條件進行。所有的實施例均按照
發明內容中的合成方法規定的歩驟進行操作，所有的實施例僅羅列與各自產品有關的關鍵步驟。實施例1固相化學合成法合成本發明的GLP-1衍生物，該衍生物的分子結構式為aGLP-l(7—36)，艮卩SeqIDNo.2，其中Xaa2二D-Ala，Xaa20^Ser，Xaa28二Ala，Xaa30二Cys，且Cys的C末端是醯胺-NH2，操作歩驟1、用的帶保護基的胺基酸單體共有16個，它們是Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-D-Ala-OH、Fmoc-L-His(Trt)-OH、Fmoc-L-Val-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L-Thr(tBu)-OH、Fmoc-L-Gln(Trt)-OH、Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-Ile-OH、Fmoc-L-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-L-Trp-OH、Fmoc-L-Cys(Trt)-OH，其中縮寫表示Fmoc:9—芴基甲氧羰基Trt:三苯甲基，即tritylOtBu:叔丁基酯tBU..叔丁基，即tert-butyl;2、需用的儀器設備及試劑儀器SYMPHONY型12通道多肽合成儀，型號SYMPHONY,美國產品；試劑N—甲基吡咯烷酮，二氯甲垸，六氫吡啶，甲醇，二甲氨基吡啶，艮卩Dimethylaminopyridine/DMFN'N—二異丙基乙胺，艮卩N，N-diisopropylethylamine/NMP，HBTU100mmol/0.5MHOBTinDMFN，N—二環己基碳二亞胺，即N，N-Dicyclohexylcarbodiimide/NMP，其中DMF為N，N—二甲基甲醯胺NMP為N_甲基吡咯烷酮HOBT為l一羥基苯並三唑HBTU為2—(1氫苯並三唑基)一1，1，3，3—四甲基脲六氟磷酸Sfe，艮卩2一(1H一benzotriazole陽yl-l，3，3-tetramethyl墨Uroniumhexafluorophosphate;3、操作第一歩多肽樹脂的合成當多肽C末端為羧基時，選擇王氏樹脂，當多肽C末端為醯胺時，選擇常規氨基樹脂，本實施例中選擇常規氨基樹脂。以0.25mmo1規模為例，稱取常規氨基樹脂0.25g，置入SYMPHONY型12通道多肽合成儀上的反應器中，將帶保護基的胺基酸單體稱取lmmol裝瓶，按GLP-1衍生物的胺基酸序列，即SeqIDNo.2，從C一端向N—端排列在所述的合成儀中，25'C下，由電腦程式控制自動進行脫Fmoc保護、活化、連接，然後再進行下一輪循環，如此完成合成，得到帶側鏈保護基的多肽樹脂，在所述的合成儀上吹乾、稱重；其中，胺基酸單體從C一端向N—端的排列順序如下Fmoc-L-Cys(Trt)-OH、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Val-OH、Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L-Trp-OH、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Ile-OH、Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Gln(Trt)-OH、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-Ser(出u)-OH、Fmoc-L-Val-OH、Fmoc-L-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-Thr(tBu)-OH、Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L-Thr(tBu)-OH、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-D-Ala-OH禾口Fmoc-L-His(Trt)-OH第二歩脫保護基及切斷樹脂將第一步得到的帶《！!U鏈保護基的多肽樹脂置於具塞三角燒瓶，加入下列裂解試劑試劑用量水0.25mLEDT0.25mLTISlmL三氟乙酸9.45，然後在3(TC下，電磁攪拌反應2小時，過濾，收集濾液，樹脂用三氟乙酸洗滌，合併收集液與洗滌液，加入乙醚產生沉澱，過濾，沉澱用乙醚洗滌，乾燥，得粗品；第三歩HPLC分離純化、冷凍乾燥將第二歩得到的粗品用製備型HPLC進行分離純化，再經冷凍千燥，得產品GLP-1衍生物。11製得的產品GLP-1衍生物具有上述提出的GLP-1衍生物的胺基酸序列。實施例2固相化學合成法合成本發明的GLP-1衍生物，該衍生物的分子結構式為aGLP-1(7—37)，即SeqIDNo.3,其中Xaa2=D-Ala，Xaa20二Ser，Xaa28二Ala，Xaa30=Gly，Xaa31二Cys，且Cys的C末端是羧基-OH，本實施例中選擇王氏樹脂。操作歩驟的第一歩中，將帶保護基的胺基酸單體稱取lmmol裝瓶，按GLP-1衍生物的胺基酸序列，即SeqlDNo.3，從C一端向N一端排列在SYMPHONY型12通道多肽合成儀中Fmoc-L-Cys(Trt)-OH、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Val-OH、Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L-Trp-OH、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Ile-OH、Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)墨OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Gln(Trt)-OH、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-Val-OH、Fmoc-L-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-Thr(tBu)-OH、Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L-Thr(tBu)-OH、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-D-Ala-OH禾卩Fmoc-L-His(Trt)-OH其他操作歩驟及實驗條件與實施例1相同。實施例3固相化學合成法製備本發明的GLP-1衍生物，該衍生物的分子結構式為aGLP-l(7—38)，艮卩SeqlDNo.4，其中Xaa2二Ser，Xaa20二Gln，Xaa28=Asp，Xaa30=Gly，Xaa31二Gly，Xaa32=Cys，且Cys的C末端是羧基-OH，本實施例中選擇王氏樹脂。操作步驟的第一步中，將帶保護基的胺基酸單體稱取lmmol裝瓶，按GLP-1衍生物的胺基酸序列，即S叫IDNo.4，從C一端向N一端排列在SYMPHONY型12通道多肽合成儀中Fmoc-L-Cys(Trt)-OH、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-L-Val-OH、Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L-Trp-OH、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Ile-OH、Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-L-Gln(Trt)-OH、Fmoc-L-Aa-OH、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Gln(Trt)-OH、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-Val-OH、Fmoc-L-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-Thr(tBu)-OH、Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L-Thr(tBu)-OH、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH和Fmoc-L-His(Trt)-OH其他操作步驟及實驗條件與實施例1相同。實施例4GLP-1衍生物的降血糖作用。實驗材料與方法雄性健康昆明小鼠(清潔級，上海復旦大學醫學院動物中心提供)；50%葡萄糖溶液；0.9%NaCl溶液；GLP-1;aGLP-l，具有實施例l一3所述GLP-1衍生物的結構；血糖測試儀(上海新立醫療器械有限公司出品)。雄性健康昆明小鼠禁食過夜，分為5組(11=8)。1，葡萄糖對照組；2，GLP-1給藥對照組；35，aGLP-l給藥組，具體的序列結構是實施例l一3中所述的結構。GLP-1給藥對照組2腹腔注射100pL18mmol/kg的葡萄糖溶液和6nmol/kg的GLP-1，aGLP-l給藥組35，每組分別腹腔注射100(xL18mmol/kg的葡萄糖溶液和6nmol/kg的aGLP-l，記此時為零時刻。在測血糖前30min補充200nL50^葡萄糖溶液，每次注射30min後小鼠尾靜脈取血測定血糖，以檢驗aGLP-l降血糖作用。葡萄糖對照組只注射50%葡萄糖溶液，不給予GLP-1和aGLP-1，按相同時間間隔測定血糖。結果如表l所示，所示數值均為n=8的均值。與葡萄糖組小鼠相比，在給藥後GLP-1和aGLP-l組都能降低小鼠血糖，但GLP-1的持續降血糖時間只能維持100分鐘左右。而aGLP-l組在給藥後持續降血糖時間可長達440分鐘，顯示體內半衰期比GLP-1顯著延長。如給予更高濃度的aGLP-l，體內藥效時間將更長，顯示aGLP-l具有良好的臨床使用價值。13表1aGLP-l的降血糖作用tableseeoriginaldocumentpage14本發明涉及的GLP-l衍生物的胺基酸序列計有以下4條。現詳細示於以下序列表。序列表華東師範大學—種GLP-1衍生物4I31PRT人1HisAlaGluGlyThrPheThrSerAspValSerSerTyrLeuGlu51015GlyGinAlaAlaLysGluPhelieAlaTrpLeuValLysGlyArg202530Gly230PRT人工序列合成構建體(2)Xaa=Ser，His或D-Ala合成構建體(20)Xaa=Ser，His,Gin或Ala合成構建體(28)Xaa=Ser，His,Asp或Ala合成構建體(30)Xaa=Gly或Cys2HisXaaGluGlyThrPheThrSerAspValSerSerTyrLeuGlu51015GlyGinAlaAlaXaaGluPhelieAlaTrpLeuValXaaGlyXaa202530331PRT人工序列<221〉合成構建體(2)Xaa=Ser,His或D-Ala合成構建體(20)<223〉Xaa=Ser，His,Gin或Ala合成構建體(28)Xaa=Ser，His,Asp或Ala合成構建體(30)Xaa=Gly或Cys合成構建體(31)Xaa=Gly或Cys3HisXaaGluGlyThrPheThrSerAspValSerSerTyrLeuGlu51015GlyGinAlaAlaXaaGluPhelieAlaTrpLeuValXaaGlyXaa202530Xaa432PRT人工序列合成構建體(2)Xaa=Ser,His或D-Ala合成構建體(20)Xaa=Ser，His,Gin或Ala合成構建體(28)Xaa=Ser，His,Asp或Ala合成構建體(30)<223〉Xaa=Gly或Cys合成構建體(31)Xaa-Gly或Cys合成構建體(32)Xaa=Gly或Cys4HisXaaGluGlyThrPheThrSerAspValSerSerTyrLeuGlu51015GlyGinAlaAlaXaaGluPhelieAlaTrpLeuValXaaGlyXaa202530XaaXaa權利要求1、一種GLP-1衍生物，其特徵在於，該衍生物的分子結構式為以下任何一種結構式aGLP-1(7—36)，即SeqIDNo.2，aGLP-1(7—37)，即SeqIDNo.3，或aGLP-1(7—38)，即SeqIDNo.4，其中，Xaa2是Ser，His和D-Ala中的任何一個胺基酸，Xaa20是Ser，His，Gln和Ala中的任何一個胺基酸，Xaa28是Ser，His，Asp和Ala中的任何一個胺基酸，其中，所述aGLP-1(7—36)即SeqIDNo.2中，Xaa30是Gly和Cys中的任何一個胺基酸，且當Xaa30是C末端胺基酸時，Gly和Cys的C末端可以是羧基-OH或醯胺-NH2；所述aGLP-1(7—37)即SeqIDNo.3中，Xaa31是Gly和Cys中的任何一個胺基酸，且當Xaa31是C末端胺基酸時，Gly和Cys的C末端可以是羧基-OH或醯胺-NH2；所述aGLP-1(7—38)即SeqIDNo.4中，Xaa32是Gly和Cys中的任何一個胺基酸，且當Xaa32是C末端胺基酸時，Gly和Cys的C末端可以是羧基-OH或醯胺-NH2。2、權利要求1所述的GLP-1衍生物的固相化學合成製備方法，先將樹脂置入多肽合成儀，再將帶保護基的胺基酸單體按照權利要求1所述GLP-1衍生物的胺基酸序列，從C-端向N—端排列在所述常規多肽合成儀中，經合成得到多肽樹脂，再經脫保護基、切斷樹脂、HPLC純化、冷凍乾燥，得到權利要求1所述的GLP-1衍生物；其中，所述帶保護基的胺基酸單體包括Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc墨D-Ala-OH、Fmoc-L-His(Trt)-OH、Fmoc墨L-Val-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-L-Tyr(tBu)陽OH、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L-Thr(tBu)-OH、Fmoc墨L-Gln(;Trt)-OH、Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L扁Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-Ile-OH、Fmoc-L-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-L-T卬-OH、Fmoc-L-Cys(Trt)-OH;其中，當GLP-1衍生物C末端為羧基時，選擇王氏樹脂作為所述固相載體樹脂；當GLP-1衍生物C末端為醯胺時，選擇常規氨基樹脂作為所述固相載體樹脂。3、如權利要求2所述的製備方法，其中，所述帶保護基的胺基酸單體依次為Fmoc-L-Cys(Trt)-OH、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Val-OH、Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L-Trp-OH、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Ile-OH、Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L-Glu(;OtBu)-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Gln(Trt)陽OH、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-Val墨OH、Fmoc-L陽Asp(OtBu)-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)陽OH、Fmoc-L墨Thr(tBu)-OH、Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L-Thr(tBu)-OH、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L墨Glu(OtBu)墨OH、Fmoc-D誦Ala誦OH和Fmoc-L-His(Trt)-OH時，所得產物為具有S叫IDNo.2的GLP-1衍生物，在該序列中，Xaa2二D-Ala，Xaa20=Ser，Xaa28=Ala，Xaa30=Cys，且Cys的C末端是醯胺-NH2。4、如權利要求2所述的製備方法，其中，所述帶保護基的胺基酸單體依次為Fmoc-L-Cys(Trt)-OH、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L陽Ala-OH、Fmoc-L-Val-OH、Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L-Trp-OH、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Ile-OH、Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L陽GIn(Trt)-OH、Fmoc陽L-Gly-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)墨OH、Fmoc-L墨Leu-OH、Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-Val-OH、Fmoc-L-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-Thr(tBu)陽OH、Fmoc-L陽Phe-OH、Fmoc-L-Thr(tBu)-OH、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L墨Glu(OtBu)-OH、Fmoc-D-Ala陽OH禾口Fmoc-L-His(Trt)陽OH時，所得產物為具有SeqIDNo.3的GLP-1衍生物，在該序列中，Xaa2=D-Ala，Xaa20=Ser，Xaa28=Ala，Xaa30=Gly，Xaa31=Cys，且Cys的C末端是羧基-OH。5、如權利要求2所述的製備方法，其中，所述帶保護基的胺基酸單體依次為Fmoc-L-Cys(Trt)-OH、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-L-Val-OH、Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L-Trp-OH、Fmoc陽L-Ala-OH、Fmoc-L-Ile-OH、Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-L-GlnCTrt)-OH、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Gln(Trt)-OH、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-Val-OH、Fmoc-L-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-Thr(tBu)-OH、Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L-Thr(tBu)-OH、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH、Fmoc陽L-Ser(tBu)-OH禾口Fmoc-L-His(Trt)-OH時，所得產物為具有ScqIDNo.4的GLP-1衍生物，在該序列中，Xaa2=Ser，Xaa20=Gln，Xaa28=Asp，Xaa30二Gly，Xaa31=Gly，Xaa32二Cys，且Cys的C末端是羧基-OH。6、權利要求1所述的GLP-1衍生物在製備治療糖尿病的藥物中的用途。全文摘要本發明公開一種GLP-1衍生物，其特徵在於，該衍生物的分子結構式為以下任何一種結構式aGLP-1(7-36)即SeqIDNo.2；aGLP-1(7-37)即SeqIDNo.3；或aGLP-1(7-38)即SeqIDNo.4。本發明還公開了GLP-1衍生物的固相化學合成製備方法，以及在製備治療糖尿病的藥物中的用途。文檔編號C07K14/435GK101463081SQ200910045188公開日2009年6月24日申請日期2009年1月12日優先權日2009年1月12日發明者雯劉,吳自榮,麗金,金明飛,靜黃申請人:華東師範大學