胎盤多肽注射液的多肽含量測定方法

2023-06-14 14:01:41

專利名稱：胎盤多肽注射液的多肽含量測定方法
技術領域：
本發明涉及藥品的質量檢測方法，特別是一種胎盤多肽注射液的多肽含量測定方 法。
背景技術：
胎盤在《本草綱目》上稱為紫河車，具有「安神養血、補氣、益精、解毒、補血的作用 的功效，久服者，耳聰目明，鬚髮黑，延年益壽，有奪造化之」。紫河車作為藥用已有數百年 歷史，且在不斷延伸擴展。胎盤多肽注射液是以健康產婦的新鮮胎盤為原料，經先進的生物 技術獲得的小容量生物製劑，含有多種營養素、生長因子及免疫因子等，這些大量的活性成 分幫助協調、提高自身免疫，增強新陳代謝，促進受損細胞和創傷的自我修復和癒合。具有 抗病毒、抗感染、抗過敏、抗突變、抗腫瘤、調節內分泌等治療及預防保健作用。胎盤多肽注 射液不但在臨床上用於多種疾病的治療和預防，還廣泛用於醫學美容等。

發明內容
本發明所要解決的技術問題在於提供一種胎盤多肽注射液的多肽含量測定方法， 該測定方法簡便、快速、準確率高，適用於大生產中對胎盤多肽注射液中多肽含量控制，從 而確保了胎盤多肽注射液的療效和臨床應用的安全性。本發明是這樣實現的胎盤多肽注射液的多肽含量測定方法，採用二辛可寧酸測 定法，以牛血清蛋白為對照製備對照品溶液，向對照品溶液中加入定量的鹼性銅試液，測定 其吸光度，繪製標準曲線；按對照品溶液的方法製備胎盤多肽注射液的供試品溶液，並測定 其吸光度；通過標準曲線法測定胎盤多肽注射液中多肽的含量。牛血清蛋白的濃度為0. 15 0. 25mg/ml。配製鹼性銅試液所用試藥包含二辛可寧酸，無水碳酸鈉，酒石酸鈉，氫氧化鈉，碳 酸氫鈉，硫酸銅以及純化水；配製方法為，將二辛可寧酸1. 8 2. 2g、無水碳酸鈉3. 2 3. 8g、酒石酸鈉0. 3 0. 35g、氫氧化鈉0. 6 1. 0g以及碳酸氫鈉1. 8 2. 0g分別加入到 175 185ml的純化水中溶解，得到混合溶液，用氫氧化鈉溶液或碳酸氫鈉調節混合溶液的 pH值至10. 75 11. 5，再加入純化水使混合溶液的總體積至190 210ml作為甲液；取硫 酸銅0. 8 1. 2g，並加入純化水溶解並稀釋至20 30ml，作為乙液；臨用前取50ml甲液和 lml乙液混勻，即得鹼性銅試液。繪製標準曲線，精密量取牛血清蛋白對照品溶液0. 2,0. 4,0. 6,0. 8及1. 0ml,分 別放置在具塞試管中，各加入純化水至2. 0ml，再加入鹼性銅試液4. 0ml混勻，在36. 5 37. 5°C的水浴中反應28 32min後，在常溫下冷卻至室溫，測定吸光度，同時以空白溶液作 對照，繪製標準曲線。空白溶液的製備為，將純化水2. 0ml及鹼性銅試液4. 0ml混勻，並將其在36. 5 37. 5°C的水浴中反應28 32min後，在常溫下冷卻至室溫，即得到空白溶液。測定所用的吸收波長為562nm。
胎盤多肽注射液的取用量為2. 0ml。為了確保本發明含量測定方法科學、合理、可行，對其進行了一系列的試驗研究和 考察
一、儀器與試藥
1、儀器紫外分光儀(^"ih/^ )，水浴鍋(北京光明醫療器械廠)等。2、試藥胎盤多肽注射液(貴陽黔峰生物製品有限責任公司)，牛血清蛋白(& 公司)，二辛可寧酸公司)，無水碳酸鈉、酒石酸鈉、氫氧化鈉、碳酸氫鈉和硫酸銅均為 國產分析純，純化水為自製。二、試驗方法及結果 1、鹼性銅試液配製
取二辛可寧酸2. 0g、無水碳酸鈉3. 54g、酒石酸鈉0. 32g、氫氧化鈉0. 8g和碳酸氫鈉 1. 9g，分別將它們加入180ml純化水溶解，得到混合溶液，用氫氧化鈉溶液或碳酸氫鈉溶液 調節混合溶液的PH值至11. 25，加水至200ml作為甲液；取硫酸銅1. 0g加純化水溶解並稀 釋至25ml作為乙液。臨用前，取50ml甲液和lml乙液混勻，即得到試驗所需的鹼性銅試液。2、對照品溶液的製備
精密稱取牛血清蛋白對照品10mg，置50ml量瓶中，加純化水適量，溶解，稀釋至刻度， 即得。3、標準曲線繪製及曲線方程
精密量取牛血清蛋白對照品溶液0. 2,0. 4,0. 6,0. 8,1. 0ml，分別置於具塞試管中，各加 入純化水至2. 0ml，再加入鹼性銅試液4. 0ml混勻，在37士0. 5°C水浴反應30士2min，在常溫 下冷卻至室溫，同時以空白溶液作對照，按分光光度法(中國藥典2005年版二部附錄IV A) 在562nm的波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，對照品的量為橫坐標繪製標準曲線，並 求出標準曲線方程。4、含量測定
精密量取胎盤多肽注射液2. 0ml，照標準曲線的製備項下的方法，加入鹼性銅試液 4. 0ml混勻，在37 士 0. 5°C水浴反應30 士 2min，在常溫下冷卻至室溫，在562nm的波長處測定 吸光度，自標準曲線或標準曲線方程中計算出胎盤多肽注射液的含量。5、線性關係考察
精密量取牛血清蛋白對照品溶液0. 2,0. 4,0. 6,0. 8,1. 0ml，分別置具塞試管中，加純化 水至2. 0ml，再加入鹼性銅試液4. 0ml混勻，37°C水浴準確反應30min，放冷至室溫，同時以 空白溶液作對照，照分光光度法(中國藥典2005年版二部附錄IV A)在562nm的波長處測 定吸光度，以吸光度(y)為縱坐標，對照品的量(x)為橫坐標，得回歸方程y = 3. 1073x + 0. 0306(r = 0.9997)。結果見表1和圖1，結果表明，牛血清蛋白在0. 0409 0. 2046mg範 圍內線性關係良好。表1不同濃度對照品吸光度
精密量取同一批次(20071070)樣品各1ml於9支試管中，分別加入濃度為0. 2046mg/ ml的對照品0.6ml，加純化水0.4ml，製成回收樣品。按上述測定方法進行測定，計算，結果 見表5。 表5回收率實驗結果
6、精密度考察
精密量取牛血清蛋白對照品溶液(0. 2046mg/ml)0. 4ml，在上述條件下，重複測定5次， 記錄吸光度值，結果見表2，牛血清蛋白RSD為0. 11%，說明有良好的精密度。表2精密度考察結果
7、穩定性考察
精密量取牛血清蛋白對照品溶液(0. 2046mg/ml)0. 4ml，在上述條件下，分別於第0、 60U20min進行測定，結果見表3，牛血清蛋白RSD為0. 71%，說明穩定性良好。表3穩定性考察結果
8、重複性試驗
取同一批胎盤多肽注射液(20011070) 5份，按上述測定方法進行測定，記錄吸光度值， 計算，結果見表4，胎盤多肽RSD為1. 08%，說明有良好的重現性。
表4重複性試驗結果
5
10、樣品含量測定
精密量取10批次胎盤多肽注射液各2ml，按上述測定方法進行測定，結果見表6。
表6胎盤多肽注射液含量測定結果
本發明的有益效果本發明建立了胎盤多肽注射液的多肽含量測定方法，該方法採用 二辛可寧酸測定法，即以牛血清蛋白為對照品，採用標準曲線法對胎盤多肽注射液中的多 肽成分進行含量測定。該方法精密度高，根據上述的各項試驗結果中可以看出，本發明所選 用的鹼性銅試液的各組分對胎盤多肽注射液的測試結果乾擾性小，該鹼性銅試劑明顯針對 胎盤多肽注射液的檢測具有專一性，整個測試的重現性好，準確度高，可有效測定胎盤多肽注射液的含量，從而確保其臨床用藥的有效性及安全性。


附圖1為牛血清蛋白線性關係。下面結合具體實施方式
對本發明進行進一步的說明。
具體實施例方式本發明的實施例1 胎盤多肽注射液的多肽含量測定方法，採用二辛可寧酸測定 法，取二辛可寧酸2. 0g、無水碳酸鈉3. 54g、酒石酸鈉0. 32g、氫氧化鈉0. 8g及碳酸氫鈉
1.9g，分別將它們加入180ml純化水中溶解，得到混合溶液，用氫氧化鈉溶液或碳酸氫鈉溶 液調節混合溶液的PH值至11. 25，加水至200ml作為甲液；取硫酸銅1. 0g加純化水溶解並 稀釋至25ml作為乙液；臨用前，取50ml甲液和1ml乙液混勻，得到鹼性銅試液；精密稱取 牛血清蛋白對照品10mg，置50ml量瓶中，加入純化水使牛血清蛋白對照品溶解，稀釋至量 瓶的刻度，即製成濃度為0. 2mg/ml的牛血清蛋白對照品溶液；精密量取牛血清蛋白對照品 溶液0. 2,0. 4,0. 6,0. 8,1. 0ml，分別置於具塞試管中，各加入純化水至2. 0ml ；分別向每個 具塞試管中加入4. 0ml的鹼性銅試液混勻，在37士0. 5°C水浴反應30士2min，在常溫下冷卻 至室溫；同時用純化水至2. 0ml與鹼性銅試液4. 0ml按上述步驟製成空白溶液作對照，按分 光光度法(中國藥典2005年版二部附錄IV A)在562nm的波長處測定吸光度，以吸光度為 縱坐標，對照品的量為橫坐標繪製標準曲線，求出標準曲線方程；精密量取胎盤多肽注射液
2.0ml，照標準曲線的製備項下的方法，加入鹼性銅試液4. 0ml混勻，在37士0. 5°C水浴反應 30士2min，在常溫下冷卻至室溫，在562nm的波長處測定吸光度，自標準曲線或標準曲線方 程中計算出胎盤多肽注射液的含量。實施例2 胎盤多肽注射液的多肽含量測定方法，採用二辛可寧酸測定法，取二辛 可寧酸1. 8g、無水碳酸鈉3. 2g、酒石酸鈉0. 3g、氫氧化鈉0. 6g及碳酸氫鈉1. 8g，分別將它 們加入175ml的純化水中溶解，得到混合溶液，用氫氧化鈉溶液或碳酸氫鈉溶液調節混合 溶液的PH值至10. 75，加純化水至190ml作為甲液；取硫酸銅0. 8g加純化水溶解並稀釋 至20ml作為乙液；臨用前，取50ml甲液和1ml乙液混勻，得到鹼性銅試液；精密量取牛血 清蛋白對照品7. 5mg，置50ml量瓶中，加入純化水使牛血清蛋白對照品溶解，稀釋至量瓶的 刻度即製成濃度為0. 15mg/ml的牛血清蛋白對照品溶液；精密量取牛血清蛋白對照品溶液 0. 2,0. 4,0. 6,0. 8,1. 0ml，分別置於具塞試管中，各加入純化水至2. 0ml ；分別向每個具塞 試管中加入4. 0ml的鹼性銅試液混勻，在37士0. 5°C水浴反應30士2min，在常溫下冷卻至 室溫；同時用空白溶液作對照，按分光光度法(中國藥典2005年版二部附錄IV A)在562nm 的波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，對照品的量為橫坐標繪製標準曲線，求出標準曲 線方程；精密量取胎盤多肽注射液2. 0ml，照標準曲線的製備項下的方法，加入鹼性銅試液 4. 0ml混勻，在37 士 0. 5°C水浴反應30 士 2min，在常溫下冷卻至室溫，在562nm的波長處測定 吸光度，自標準曲線或標準曲線方程中計算出胎盤多肽注射液的含量。實施例3 胎盤多肽注射液的多肽含量測定方法，採用二辛可寧酸測定法，取二 辛可寧酸2. 2g、無水碳酸鈉3. 8g、酒石酸鈉0. 35g、氫氧化鈉1. 0g及碳酸氫鈉2. 0g，分別 將它們加入185ml的純化水中溶解，得到混合溶液，用氫氧化鈉溶液或碳酸氫鈉溶液調節混合溶液的PH值至11. 5，加純化水至210ml作為甲液；取硫酸銅1. 2g加水溶解並稀釋至 30ml作為乙液；臨用前，取50ml甲液和1ml乙液混勻，得到鹼性銅試液；精密量取牛血清 蛋白對照品12. 5mg，置50ml量瓶中，加入純化水使牛血清蛋白對照品溶解，稀釋至量瓶的 刻度即製成濃度為0. 25mg/ml的牛血清蛋白對照品溶液；精密量取牛血清蛋白對照品溶液 0. 2,0. 4,0. 6,0. 8,1. 0ml，分別置於具塞試管中，各加入純化水至2. 0ml ；分別向每個具塞 試管中加入4. 0ml的鹼性銅試液混勻，在37士0. 5°C水浴反應30士2min，在常溫下冷卻至 室溫；同時用空白溶液作對照，按分光光度法(中國藥典2005年版二部附錄IV A)在562nm 的波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，對照品的量為橫坐標繪製標準曲線，求出標準曲 線方程；精密量取胎盤多肽注射液2. 0ml，照標準曲線的製備項下的方法，加入鹼性銅試液 4. 0ml混勻，在37 士 0. 5°C水浴反應30 士 2min，在常溫下冷卻至室溫，在562nm的波長處測定 吸光度，自標準曲線或標準曲線方程中計算出胎盤多肽注射液的含量。
權利要求
一種胎盤多肽注射液的多肽含量測定方法，其特徵在於採用二辛可寧酸測定法，以牛血清蛋白為對照製備對照品溶液，向對照品溶液中加入定量的鹼性銅試液，測定其吸光度，繪製標準曲線；按對照品溶液的方法製備胎盤多肽注射液的供試品溶液，並測定其吸光度；通過標準曲線法測定胎盤多肽注射液中多肽的含量。
2.根據權利要求1所述的胎盤多肽注射液的多肽含量測定方法，其特徵在於牛血清 蛋白的濃度為0. 15 0. 25mg/ml。
3.根據權利要求1所述的胎盤多肽注射液的含量測定方法，其特徵在於配製鹼性銅 試液所用試藥包含二辛可寧酸，無水碳酸鈉，酒石酸鈉，氫氧化鈉，碳酸氫鈉，硫酸銅以及純 化水；配製方法為，將二辛可寧酸1. 8 2. 2g、無水碳酸鈉3. 2 3. 8g、酒石酸鈉0. 3 0. 35g、氫氧化鈉0. 6 1. 0g以及碳酸氫鈉1. 8 2. 0g分別加入到175 185ml的純化水 中溶解，得到混合溶液，用氫氧化鈉溶液或碳酸氫鈉調節混合溶液的PH值至10. 75 11. 5， 再加入純化水使混合溶液的總體積至190 210ml作為甲液；取硫酸銅0. 8 1. 2g，並加 入純化水溶解並稀釋至20 30ml，作為乙液；臨用前取50ml甲液和1ml乙液混勻，即得鹼 性銅試液。
4.根據權利要求1所述的胎盤多肽注射液的多肽含量測定方法，其特徵在於繪製標 準曲線，精密量取牛血清蛋白對照品溶液0. 2,0. 4,0. 6,0. 8及1. 0ml，分別放置在具塞試管 中，各加入純化水至2. 0ml，再加入鹼性銅試液4. 0ml混勻，在36. 5 37. 5°C的水浴中反應 28 32min後，在常溫下冷卻至室溫，測定吸光度，同時以空白溶液作對照，繪製標準曲線。
5.根據權利要求4所述的胎盤多肽注射液的多肽含量測定方法，其特徵在於空白溶 液的製備為，將純化水2. 0ml及鹼性銅試液4. 0ml混勻，並將其在36. 5 37. 5°C的水浴中 反應28 32min後，在常溫下冷卻至室溫，即得到空白溶液。
6.根據權利要求1或4所述的胎盤多肽注射液的多肽含量測定方法，其特徵在於測 定所用的吸收波長為562nm。
7.根據權利要求1所述的胎盤多肽注射液的多肽含量測定方法，其特徵在於胎盤多 肽注射液的取用量為2. 0ml。
全文摘要
本發明公開了一種胎盤多肽注射液的多肽含量測定方法，採用二辛可寧酸測定法，以牛血清蛋白為對照製備對照品溶液，向對照品溶液中加入定量的鹼性銅試液，測定其吸光度，繪製標準曲線；按對照品溶液的方法製備胎盤多肽注射液的供試品溶液，並測定其吸光度；通過標準曲線法測定胎盤多肽注射液中多肽的含量。該方法精密度高，選用的鹼性銅試劑的各組分對胎盤多肽注射液的測試結果乾擾性小，該鹼性銅試劑明顯針對胎盤多肽注射液的檢測具有專一性，整個測試的重現性好，準確度高，可有效測定胎盤多肽注射液的含量，從而確保其臨床用藥的有效性及安全性。
文檔編號G01N33/68GK101893638SQ201010245588
公開日2010年11月24日 申請日期2010年8月5日 優先權日2010年8月5日
發明者劉智, 張秋生, 沈國華, 高翔 申請人:貴州益康製藥有限公司