一種城市河水汙染治理的複合微生物製劑及其製備方法
2023-06-14 11:35:31 1
一種城市河水汙染治理的複合微生物製劑及其製備方法
【專利摘要】本發明涉及一種城市河水汙染治理的複合微生物製劑及其製備方法。包括如下微生物菌劑，均為體積份：嗜酸乳桿菌製劑、熱帶假絲酵母菌劑、枯草芽孢桿菌製劑；將上述菌劑混合均勻後，即得複合微生物製劑。本發明製得的城市河水汙染治理的複合微生物製劑，有效活菌數量大於或等於40億CFU/克，適於城市河道河水COD和氨氮含量超標、河水汙濁、發臭等汙染的修復與治理，其可快速修復水體生態環境，防止水體二次汙染，並能很快恢復水體的自淨化功能，消解河底汙泥，是一種高效、快速、低成本和可持續發展的生物治汙產品。
【專利說明】一種城市河水汙染治理的複合微生物製劑及其製備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種城市河水汙染治理的複合微生物製劑及其製備方法，屬於環境修復【技術領域】。
【背景技術】
[0002]城市河道作為城市生態系統重要的組成部分，對城市的生態建設具有重要意義。但是隨著城市化進程的不斷加快，城市人口聚集，經濟活動日趨頻繁，工業廢水和生活汙水大量排放增加，垃圾的隨意丟棄，使城市環境汙染、水質惡化，原來清澈的河水變得又黑又臭，環境汙染問題日益嚴重，嚴重製約城市的社會、經濟與環境可持續發展，同時危及人民的身體健康。
[0003]去除水體汙染物的治理手段主要分為化學修復技術、物理修復技術和生物修復技術。生物修復技術是新發展起來的一項清潔環境的新興技術，它利用特定生物對水體中汙染物的吸收、轉化或降解，達到減緩或最終消除水體汙染、恢復水體生態功能的生物措施。汙染水體汙染物主要是通過微生物的代謝活動將其降解轉化。與物理化學修復技術相比，生物修復技術具有以下優點:1)設施簡單，運行費用省；2)操作簡單，環境影響小，不會導致汙染物的轉移或形成二次汙染；3)可最大限度降低汙染物濃度。因此生物修復技術是最具有發展前的水體汙染修復技術。微生物從以下幾個方面對河道水體進行淨化。
[0004]微生物對水體有機汙染物的去除:一方面菌體的同化作用會轉化部分有機汙染物為自身物質，另一方面微生物分泌的胞外酶能快速降解大分子有機物，實現對水體有機汙染物的降解和去除。
[0005]微生物對藻類的抑制:一方面通過複合微生物的協同作用，降低水體中氮、磷營養鹽水平，通過營養競爭的方式抑制藻類的生長，同時通過改善水體理化環境，促進浮遊動物種群的生長壯大，以浮遊動物捕食藻類的方式控制藻類的生長。
[0006]我國在利用微生物技術修復水體汙染領域研究起步晚，與發達國家相比技術還有差距。微生物修復在汙染治理中的佔的比例較小，主要原因是缺乏高效的菌種和成熟的技術。
[0007]中國專利文獻CN101886041A(申請號201010206701)公開了一種高效處理城市湖水汙染的微生物製劑，由以下成分按體積比配製成，亞硝化螺菌:紅螺菌:納豆芽孢桿菌:鏈孢擬諾卡氏菌:乳酸桿菌為0-10: 5-15: 5-15: 5-15: 5_15。所選取和培養的微生物在城市湖水環境中具有迅速繁殖並發展為優勢菌群的能力，各菌種能單獨和協同分解城市湖水中富營養成份，並能使常態下不易分解的某些富營養成份變得容易分解。能很好地淨化水質和改良底質，優化和保全生態環境。養水、保水、穩定水色，治濁水、水濃、水紅、水黑、底臭、藻類老化、調節和穩定水體PH值的作用明顯。
[0008]中國專利文獻CN102815792A(申請號201210094446)公開了一種用於城鄉汙染河道水體修復的微生物-酶複合製劑及其製備的方法。該發明涉及的修復城鄉汙染河道的微生物-酶複合製劑，微生物主要是由30-60%的地衣芽孢桿菌、25-35%的硝化細菌和15-35%的惡臭假單胞菌組成；複合酶主要是由40% -60%的蛋白酶、15-25%的澱粉酶和25% -35的纖維素酶構成。針對不同汙染程度的水體，優化組合的微生物與複合酶復配為微生物-酶複合製劑，使得微生物的投加量為l_5g/m3，複合酶的投加量為0.01-0.05g/m3。該微生物-酶複合製劑投入到城鄉汙染河道水體中，以曝氣為輔助措施，進行微生物強化修復，可有效改善現有技術存在的微生物代謝活性低、環境耐受力低、在汙染水體中停留時間短等缺陷，具有顯著的水質淨化效果。
[0009]中國專利文獻CN102050523A(申請號201010610486)公開了一種微生物對黑臭河道處理及原位生態修復的方法。該發明的技術特徵是從汙水中篩選出有針對性的目的菌種，與現有菌種進行匹配組合成複合微生物菌劑，然後使用匹配的複合微生物菌劑對河道汙水進行處理。該發明根據河道汙染的具體情況，採用篩選汙水中生長的菌株對汙水進行治理，並針對河道水體的汙染情況將其與現有菌種進行匹配、組合，使之在微生物汙水處理系統中發揮協同作用，快速形成優勢菌群，對河道中汙染物進行分解、吸收、轉移，從而達到最佳處理效果。
[0010]中國專利文獻CN103911312A(申請號201310429597.7) 一種具有淨水，肥水和保健多重功效的為微生物製劑及其製備方法，將嗜酸乳桿菌，產朊假絲酵母菌，沼澤紅假單胞菌單獨發酵後組成複合微生物製劑，減低了水產養殖戶的養殖成本，提高了養殖效率。
【發明內容】
[0011]本發明針對現有技術的不足，提供一種城市河水汙染治理的複合微生物製劑及其製備方法。
[0012]本發明的技術方案如下:
[0013]一種城市河水汙染治理的複合微生物製劑，包括如下微生物菌劑，均為體積份:
[0014]嗜酸乳桿菌製劑40~60份、熱帶假絲酵母菌劑20~30份、枯草芽孢桿菌製劑10~20份；
[0015]所述嗜酸乳桿菌製劑中嗜酸乳桿菌菌體濃度不小於5.0X 109CFU/mL ；
[0016]所述熱帶假絲酵母菌製劑中熱帶假絲酵母菌菌體濃度不小於1.0X 109CFU/mL ；
[0017]所述枯草芽孢桿菌製劑中枯草芽孢桿菌菌體濃度不小於1.0X 1010CFU/mL ；
[0018]將上述菌劑混合均勻後，即得複合微生物製劑。
[0019]根據本發明優選的，所述複合微生物製劑，包括如下微生物菌劑，均為體積份:
[0020]嗜酸乳桿菌製劑60份、熱帶假絲酵母菌劑30份、枯草芽孢桿菌製劑10份。
[0021]根據本發明優選的，所述的嗜酸乳桿菌購自中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，菌種編號:1.1854。
[0022]根據本發明優選的，所述的熱帶假絲酵母菌購自中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，菌種編號:2.2735。
[0023]根據本發明優選的，所述的枯草芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)YYW-1，來源於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，菌種保藏編號:CGMCC N0.2396ο枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) YYW-1，保藏於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號=CGMCC N0.2396，可參見中國專利文獻CN101240302A(申請號 200810014395.5)。
[0024]上述城市河水汙染治理的複合微生物製劑的製備方法，步驟如下:
[0025](I)取嗜酸乳桿菌，接種於固體培養基中，經活化培養，製得活化嗜酸乳桿菌；然後將活化嗜酸乳桿菌接種於液體培養基I進行擴大培養；再接種於發酵培養基I中，經發酵培養製得菌體濃度不小於5.0X 109CFU/mL的嗜酸乳桿菌製劑；
[0026](2)取熱帶假絲酵母菌，接種於固體培養基中，經活化培養，製得活化熱帶假絲酵母菌；然後將活化熱帶假絲酵母菌接種於液體培養基II進行擴大培養；再接種於發酵培養基II中，經發酵培養製得菌體濃度不小於1.0X 109CFU/mL的熱帶假絲酵母菌製劑；
[0027](3)取枯草芽孢桿菌，接種於固體培養基中，經活化培養，製得活化枯草芽孢桿菌；然後將活化枯草芽孢桿菌接種於液體培養基III進行擴大培養；再接種於發酵培養基III中，經發酵培養製得菌體濃度不小於1.0X 101(lCFU/mL的枯草芽孢桿菌製劑；
[0028](4)將步驟(1)製得的嗜酸乳桿菌製劑、步驟(2)製得的熱帶假絲酵母菌製劑和步驟(3)製得的枯草芽孢桿菌製劑按比例混合後，製得複合微生物製劑。
[0029]根據本發明優選的，所述步驟(1)中，活化條件為:35~38°C活化培養45~50h ；所述的固體培養基I組分如下，均為重量份:
[0030]蛋白腖1份，酵母粉0.5份，檸檬酸銨0.2份，葡萄糖2份，硫酸鎂0.054份，牛肉膏1份，磷酸氫二鉀0.2份，醋酸鈉0.5份，硫酸錳0.025份，瓊脂1.5份，水93.021份，自然pH值；
[0031]所述步驟(1)中，擴大培養步驟如下:
[0032]將活化嗜酸乳桿菌接種於液體培養基I中，在35~38°C培養45~50h，製得一級種子液；然後按照重量百分比5-8%的接種量將一級種子液接種於液體培養基I中，在培養溫度35~38°C、罐壓為0.02MPa、攪拌速度為100~120rpm的條件下，培養24~30小時，製得嗜酸乳桿菌種子液；
[0033]所述的液體培養基I組分如下，均為重量份:
[0034]蛋白腖1份，酵母粉0.5份，檸檬酸銨0.2份，葡萄糖2份，硫酸鎂0.054份，牛肉膏1份，磷酸氫二鉀0.2份，醋酸鈉0.5份，硫酸錳0.025份，水94.521份，自然pH值；
[0035]所述步驟(1)中，發酵培養步驟如下:
[0036]將嗜酸乳桿菌種子液按照體積百分比7~10%的接種量接種於發酵培養基I中，在溫度35~38°C，罐壓為0.02MPa,攪拌速度為100~120，培養36~48h，製得嗜酸乳杆囷製劑；
[0037]所述的發酵培養基I組分如下，均為重量份:
[0038]糖蜜I~10份、紅糖I~10份、葡萄糖I~3份、蛋白腖0.1~2份、磷酸氫二鉀
0.01~1份、氯化鈉0.1~2份、水72~96.8份。
[0039]根據本發明優選的，所述步驟(2)中，活化條件為:28~30°C活化培養45~50h ；所述的固體培養基II每升組分如下:
[0040]馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂粉15g，水定容至IL ；
[0041 ] 所述步驟(2)中，擴大培養步驟如下:
[0042]將活化熱帶假絲酵母菌接種於液體培養基II中，在28~30°C、通風比為1: 1、罐壓0.02MPa，攪拌速度為180~200rpm，培養36~48h，製得熱帶假絲酵母菌種子液；
[0043]所述的液體培養基II組分如下，均為重量份:
[0044]糖蜜I~10份，紅糖3~5份，10~15波美度的麥芽汁4~6份，水79~92份；
[0045]所述步驟(2)中發酵培養步驟如下:
[0046]將熱帶假絲酵母菌種子液按照體積百分比5~8%的接種量接種於發酵培養基II中，在溫度28~30°C，通風量為1: 1，罐壓為0.02MPa，攪拌速度為180~200rpm，培養36~48h,製得熱帶假絲酵母菌製劑；
[0047]所述的發酵培養基II組分如下，均為重量份:
[0048]糖蜜I~10份，紅糖3~5份，10~15波美度的麥芽汁4~6份，水79~92份。
[0049]根據本發明優選的，所述步驟(3)中，活化條件為:35~38°C活化培養34~40h;所述的固體培養基III每升組分如下:
[0050]蛋白腖10克，酵母膏5克，氯化鈉10克，瓊脂粉15克，水定溶至IL ；
[0051]將活化枯草芽孢桿菌接種於液體培養基III中，在35~38°C、通氣量以發酵液體積m3/空氣體積m3 ?分鐘計為1: (1.1~1.2)、罐壓0.02MPa,攪拌速度為220~260rpm，培養12~16h,製得枯草芽孢桿菌種子液；
[0052]所述的液體培養基III組分如下，均為重量份:
[0053]玉米粉0.5~4份、豆餅粉0.5~5份、麩皮粉0.5~3份、氯化鈉0.01~0.2份、氯化鎂0.01~0.2份、硫酸錳0.01~0.5份，水87.1~98.5份；
[0054]所述步驟(3)中發酵培養步驟如下:
[0055]將枯草芽孢桿菌種子液按照體積百分比7~10%的接種量接種於發酵培養基III中，在溫度35~38°C， 通風量為1: 1，罐壓為0.02MPa，攪拌速度為200~240rpm，培養32~48h，製得枯草芽孢桿菌製劑；
[0056]所述的發酵培養基III組分如下，均為重量份:
[0057]玉米粉0.5~4份、豆餅粉0.5~5份、麩皮粉0.5~3份、氯化鈉0.01~0.2份、氯化鎂0.01~0.2份、硫酸錳0.01~0.5份，水87.1~98.5份。
[0058]上述培養基中的原料均為本領域常用配製培養基原料，均可市場購得。
[0059]有益效果
[0060]本發明製得的城市河水汙染治理的複合微生物製劑，有效活菌數量大於或等於40億CFU/克，適於城市河道河水COD和氨氮含量超標、河水汙濁、發臭等汙染的修復與治理，其可快速修復水體生態環境，防止水體二次汙染，並能很快恢復水體的自淨化功能，消解河底汙泥，是一種高效、快速、低成本和可持續發展的生物治汙產品。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0061]圖1是試驗例3複合微生物製劑對汙泥有機物的消解作用的效果照片；
【具體實施方式】
[0062]下面結合實施例對本發明的技術方案做進一步說明，本發明的優點和特點將會隨著描述而更為清楚。但這些實施例僅是範例性的，並不對本發明的範圍構成任何限制。本領域技術人員應該理解的是，在不偏離本發明的精神和範圍下可以對本發明技術方案的細節和形式進行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發明的保護範圍內。
[0063]實施例1
[0064]嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus),菌種編號 CGMCCl.1854,購自中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心。
[0065]熱帶假絲酵母菌(Candida tropical is)，菌種編號CGMCC 2.2735，購自中國普通微生物菌種保藏管理中心。
[0066]枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)YYW-1,來源於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，菌種保藏編號CGMCC N0.2396。
[0067]城市河水汙染治理的複合微生物製劑的製備方法，步驟如下:
[0068](I)取嗜酸乳桿菌，接種於固體培養基中，經活化培養，製得活化嗜酸乳桿菌；然後將活化嗜酸乳桿菌接種於液體培養基I進行擴大培養；再接種於發酵培養基I中，經發酵培養製得菌體濃度5.5X109CFU/mL的嗜酸乳桿菌製劑；
[0069](2)取熱帶假絲酵母菌，接種於固體培養基中，經活化培養，製得活化熱帶假絲酵母菌；然後將活化熱帶假絲酵母菌接種於液體培養基II進行擴大培養；再接種於發酵培養基II中，經發酵培養製得菌體濃度1.35X 109CFU/mL的熱帶假絲酵母菌製劑；
[0070](3)取枯草芽孢桿菌，接種於固體培養基中，經活化培養，製得活化枯草芽孢桿菌；然後將活化枯草芽孢桿菌接種於液體培養基III進行擴大培養；再接種於發酵培養基III中，經發酵培養製得菌體濃度1.05X1010CFU/mL的枯草芽孢桿菌製劑；
[0071](4)將步驟⑴製得的嗜酸乳桿菌製劑60份、步驟⑵製得的熱帶假絲酵母菌製劑30份和步驟(3)製得的枯草芽孢桿菌製劑10份混合後，製得複合微生物製劑。
[0072]所述步驟(1)中，活化條件為:37°C活化培養48h ;所述的固體培養基I組分如下，均為重量份:
[0073]蛋白腖1份，酵母粉0.5份，檸檬酸銨0.2份，葡萄糖2份，硫酸鎂0.054份，牛肉膏1份，磷酸氫二鉀0.2份，醋酸鈉0.5份，硫酸錳0.025份，瓊脂1.5份，水93.021份，自然pH值；
[0074]所述步驟(1)中，擴大培養步驟如下:
[0075]將活化嗜酸乳桿菌接種於液體培養基I中，在37°C培養48h，製得一級種子液；然後按照重量百分比8%的接種量將一級種子液接種於液體培養基I中，在培養溫度37°C、罐壓為0.02MPa、攪拌速度為IlOrpm的條件下，培養24小時，製得嗜酸乳桿菌種子液；
[0076]所述的液體培養基I組分如下，均為重量份:
[0077]蛋白腖1份，酵母粉0.5份，檸檬酸銨0.2份，葡萄糖2份，硫酸鎂0.054份，牛肉膏1份，磷酸氫二鉀0.2份，醋酸鈉0.5份，硫酸錳0.025份，水94.521份，自然pH值；
[0078]所述步驟(1)中，發酵培養步驟如下:
[0079]將嗜酸乳桿菌種子液按照體積百分比10%的接種量接種於發酵培養基I中，在溫度37°C，罐壓為0.02MPa，攪拌速度為llOrpm，培養48h，製得嗜酸乳桿菌製劑；
[0080]所述的發酵培養基I組分如下，均為重量份:
[0081]糖蜜2份、紅糖2份、葡萄糖1份、蛋白腖0.1份、磷酸氫二鉀0.01份、氯化鈉0.1份、水94.8份。
[0082]所述步驟(2)中，活化條件為:30°C活化培養48h ;所述的固體培養基II每升組分如下:
[0083]馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂粉15g，水定容至IL ；
[0084]所述步驟⑵中，擴大培養步驟如下:
[0085]將活化熱帶假絲酵母菌接種於液體培養基II中，在30°C、通風比為1: 1、罐壓
0.02MPa，攪拌速度為200rpm，培養36h，製得熱帶假絲酵母菌種子液；
[0086]所述的液體培養基II組分如下，均為重量份:
[0087]糖蜜2份，紅糖3份，10~15波美度的麥芽汁4份，水91份；
[0088]所述步驟⑵中，發酵培養步驟如下:
[0089]將熱帶假絲酵母菌種子液按照體積百分比8%的接種量接種於發酵培養基II中，在溫度30°C，通風量為1: 1，罐壓為0.02MPa,攪拌速度為200rpm，培養48h，製得熱帶假絲酵母菌製劑；
[0090]所述的發酵培養基II組分如下，均為重量份:
[0091]糖蜜2份，紅糖3份，10~15波美度的麥芽汁4份，水91份。
[0092]所述步驟(3)中，活化條件為:37°C活化培養36h ;所述的固體培養基III每升組分如下，均為重量份:
[0093]蛋白腖 10克，酵母膏5克，氯化鈉10克，瓊脂粉15克，水定溶至IL ；
[0094]將活化枯草芽孢桿菌接種於液體培養基III中，在37°C、通氣量以發酵液體積m3/空氣體積Hi3.分鐘計為1: 1.1、罐壓0.02MPa,攪拌速度為240rpm，培養16h，製得枯草芽孢桿菌種子液；
[0095]所述的液體培養基III組分如下，均為重量份:
[0096]玉米粉2份、豆餅粉2份、麩皮粉1份、氯化鈉0.05份、氯化鎂0.05份、硫酸錳0.05份，水94.85份；
[0097]所述步驟(3)中發酵培養步驟如下:
[0098]將枯草芽孢桿菌種子液按照體積百分比10%的接種量接種於發酵培養基III中，在溫度37°C，通風量為1: 1，罐壓為0.02MPa，攪拌速度為220rpm，培養48h，製得枯草芽孢杆囷製劑；
[0099]所述的發酵培養基III組分如下，均為重量份:
[0100]玉米粉2份、豆餅粉2份、麩皮粉1份、氯化鈉0.05份、氯化鎂0.05份、硫酸錳0.05份，水94.85份。
[0101]製得複合微生物製劑有效活菌含量4.755 X 19億/mL。
[0102]實施例2
[0103]如實施例1所述的城市河水汙染治理的複合微生物製劑的製備方法，不同之處在於，
[0104]所述步驟(1)中，發酵培養步驟如下:
[0105]將嗜酸乳桿菌種子液按照體積百分比10%的接種量接種於發酵培養基I中，在溫度37°C，罐壓為0.02MPa，攪拌速度為llOrpm，培養48h，製得嗜酸乳桿菌製劑；
[0106]所述的發酵培養基I組分如下，均為重量份:
[0107]糖蜜5份、紅糖6份、葡萄糖2份、蛋白腖1份、磷酸氫二鉀1份、氯化鈉0.5份、水84.5份；製得菌體濃度8.1 X 109CFU/mL的嗜酸乳桿菌製劑；
[0108]所述步驟(2)中，發酵培養步驟如下:
[0109]將熱帶假絲酵母菌種子液按照體積百分比8%的接種量接種於發酵培養基II中，在溫度30°C，通風量為1: 1，罐壓為0.02MPa,攪拌速度為200rpm，培養48h，製得熱帶假絲酵母菌製劑；製得菌體濃度2.5 X 109CFU/mL的熱帶假絲酵母菌製劑；
[0110]所述的發酵培養基II組分如下，均為重量份:
[0111]糖蜜6份，紅糖3份，10~15波美度的麥芽汁6份，水85份。
[0112]所述步驟(2)中，發酵培養步驟如下:
[0113]將枯草芽孢桿菌種子液按照體積百分比10%的接種量接種於發酵培養基III中，在溫度37°C，通風量為1: 1，罐壓為0.02MPa，攪拌速度為220rpm，培養48h，製得枯草芽孢桿菌製劑；製得菌體濃度1.25X1010CFU/mL的嗜酸乳桿菌製劑；
[0114]所述的發酵培養基III組分如下，均為重量份:
[0115]玉米粉4份、豆餅粉4份、麩皮粉3份、氯化鈉0.1份、氯化鎂0.1份、硫酸錳0.5份，水88.3份。
[0116]將嗜酸乳桿菌製劑50份、熱帶假絲酵母菌製劑30份和枯草芽孢桿菌製劑20份混合後，製得複合微生物製劑。
[0117]製得的複合微生物製劑有效活菌含量7.30 X 19億/mL。
[0118]對比例
[0119]按中國專利文獻CN103911312A(申請號201310429597.7)中按實施例1的記載，分別將嗜酸乳桿菌、產朊假絲酵母菌、沼澤紅假單胞菌單獨發酵後，製備製劑。
[0120]試驗例I
[0121]取本申請實施例1製得的複合微生物製劑和對比例製得的製劑。
[0122]從濟南市內河道取水樣，利用河道模型進行水質改良實驗。菌劑:水質量比為1:1000。分別於O小時、24小時、48小時和72小時測定水體CODcr、氨氮和濁度。結果分別見表1、表2、表3。
[0123]表1對比例和實施例1對水體CODcr (mg/L)的影響
[0124]
【權利要求】
1.一種城市河水汙染治理的複合微生物製劑，其特徵在於，包括如下微生物菌劑，均為體積份: 嗜酸乳桿菌製劑40~60份、熱帶假絲酵母菌劑20~30份、枯草芽孢桿菌製劑10~20份； 所述嗜酸乳桿菌製劑中嗜酸乳桿菌菌體濃度不小於5.0X 109CFU/mL ； 所述熱帶假絲酵母菌製劑中熱帶假絲酵母菌菌體濃度不小於1.0X 109CFU/mL ； 所述枯草芽孢桿菌製劑中枯草芽孢桿菌菌體濃度不小於1.0X 101(lCFU/mL ； 將上述菌劑混合均勻後，即得複合微生物製劑。
2.如權利要求1所述的複合微生物製劑，其特徵在於，包括如下微生物菌劑，均為體積份: 嗜酸乳桿菌製劑60份、熱帶假絲酵母菌劑30份、枯草芽孢桿菌製劑10份。
3.如權利要求1所述的複合微生物製劑，其特徵在於，所述的嗜酸乳桿菌購自中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，菌種編號:1.1854。
4.如權利要求1所述的複合微生物製劑，其特徵在於，所述的熱帶假絲酵母菌購自中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，菌種編號:2.2735。
5.如權利要求1所述的複合微生物製劑，其特徵在於，所述的枯草芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)YYW_l,來源於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，菌種保藏編號:CGMCC N0.2396。
6.權利要求1所述的城市河水汙染治理的複合微生物製劑的製備方法，其特徵在於，步驟如下: (1)取嗜酸乳桿菌，接種於固體培養基中，經活化培養，製得活化嗜酸乳桿菌；然後將活化嗜酸乳桿菌接種於液體培養基I進行擴大培養；再接種於發酵培養基I中，經發酵培養製得菌體濃度不小於5.0X 109CFU/mL的嗜酸乳桿菌製劑； (2)取熱帶假絲酵母菌，接種於固體培養基中，經活化培養，製得活化熱帶假絲酵母菌；然後將活化熱帶假絲酵母菌接種於液體培養基II進行擴大培養；再接種於發酵培養基II中，經發酵培養製得菌體濃度不小於1.0X 109CFU/mL的熱帶假絲酵母菌製劑； (3)取枯草芽孢桿菌，接種於固體培養基中，經活化培養，製得活化枯草芽孢桿菌；然後將活化枯草芽孢桿菌接種於液體培養基III進行擴大培養；再接種於發酵培養基III中，經發酵培養製得菌體濃度不小於1.0X 101(lCFU/mL的枯草芽孢桿菌製劑； (4)將步驟⑴製得的嗜酸乳桿菌製劑、步驟(2)製得的熱帶假絲酵母菌製劑和步驟(3)製得的枯草芽孢桿菌製劑按比例混合後，製得城市河水汙染治理的複合微生物製劑。
7.如權利要求6所述的製備方法，其特徵在於，所述步驟(1)中，活化條件為:35~38°C活化培養45~50h ;所述的固體培養基I組分如下，均為重量份: 蛋白腖1份，酵母粉0.5份，檸檬酸銨0.2份，葡萄糖2份，硫酸鎂0.054份，牛肉膏I份，磷酸氫二鉀0.2份，醋酸鈉0.5份，硫酸錳0.025份，瓊脂1.5份，水93.021份，自然pH值； 所述步驟(1)中，擴大培養步驟如下: 將活化嗜酸乳桿菌接種於液體培養基I中，在35~38°C培養45~50h，製得一級種子液；然後按照重量百分比5-8%的接種量將一級種子液接種於液體培養基I中，在培養溫度35~38°C、罐壓為0.02MPa、攪拌速度為100~120rpm的條件下，培養24~30小時，製得嗜酸乳桿菌種子液； 所述的液體培養基I組分如下，均為重量份: 蛋白腖1份，酵母粉0.5份，檸檬酸銨0.2份，葡萄糖2份，硫酸鎂0.054份，牛肉膏I份，磷酸氫二鉀0.2份，醋酸鈉0.5份，硫酸錳0.025份，水94.521份，自然pH值； 所述步驟(1)中，發酵培養步驟如下: 將嗜酸乳桿菌種子液按照體積百分比7~10%的接種量接種於發酵培養基I中，在溫度35~38°C，罐壓為0.02MPa，攪拌速度為100~120，培養36~48h，製得嗜酸乳桿菌製劑； 所述的發酵培養基I組分如下，均為重量份: 糖蜜I~10份、紅糖I~10份、葡萄糖I~3份、蛋白腖0.1~2份、磷酸氫二鉀0.01~1份、氯化鈉0.1~2份、水72~96.8份。
8.如權利要求6所述的製備方法，其特徵在於，所述步驟(2)中，活化條件為:28~30°C活化培養45~50h ;所述的固體培養基II每升組分如下: 馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂粉15g，水定容至IL ； 所述步驟(2)中，擴大培養步驟如下: 將活化熱帶假絲酵母菌接種於液體培養基II中，在28~30°C、通風比為1: 1、罐壓0.02MPa，攪拌速度為180~200rpm，培養36~48h，製得熱帶假絲酵母菌種子液； 所述的液體培養基II組分如下，均為重量份: 糖蜜I~10份，紅糖3~5份，10~15波美度的麥芽汁4~6份，水79~92份； 所述步驟(2)中發酵培養步驟如下: 將熱帶假絲酵母菌種子液按照體積百分比5~8%的接種量接種於發酵培養基II中，在溫度28~30°C，通風量為1: 1，罐壓為0.02MPa，攪拌速度為180~200rpm，培養36~48h,製得熱帶假絲酵母菌製劑； 所述的發酵培養基II組分如下，均為重量份: 糖蜜I~10份，紅糖3~5份，10~15波美度的麥芽汁4~6份，水79~92份。
9.如權利要求6所述的製備方法，其特徵在於，所述步驟(3)中，活化條件為:35~38°C活化培養34~40h ;所述的固體培養基III每升組分如下: 蛋白腖10克，酵母膏5克，氯化鈉10克，瓊脂粉15克，水定溶至IL ； 將活化枯草芽孢桿菌接種於液體培養基III中，在35~38°C、通氣量以發酵液體積m3/空氣體積m3.分鐘計為1: (1.1~1.2)、罐壓0.02MPa，攪拌速度為220~260rpm，培養12~16h，製得枯草芽孢桿菌種子液； 所述的液體培養基III組分如下，均為重量份: 玉米粉0.5~4份、豆餅粉0.5~5份、麩皮粉0.5~3份、氯化鈉0.01~0.2份、氯化鎂0.01~0.2份、硫酸錳0.01~0.5份，水87.1~98.5份； 所述步驟(3)中發酵培養步驟如下: 將枯草芽孢桿菌種子液按照體積百分比7~10%的接種量接種於發酵培養基III中，在溫度35~38°C，通風量為1: 1，罐壓為0.02MPa，攪拌速度為200~240rpm，培養32~48h,製得枯草芽孢桿菌製劑；所述的發酵培養基III組分如下，均為重量份: 玉米粉0.5~4份、豆餅粉0.5~5份、麩皮粉0.5~3份、氯化鈉0.01~0.2份、氯化鎂0.01~0.2份、硫酸錳 0.01~0.5份，水87.1~98.5份。
【文檔編號】C12R1/23GK104178433SQ201410449850
【公開日】2014年12月3日 申請日期:2014年9月4日 優先權日:2014年9月4日
【發明者】嶽壽松, 王翠萍, 鄒曉鳳, 遊銀偉, 王留名, 彭繼敏, 鄭建榮 申請人:山東省農業科學院生物技術研究中心