源自山玉蘭、紫玉蘭、白玉蘭的小白菊內酯的製備方法
2023-06-18 09:27:36
專利名稱：源自山玉蘭、紫玉蘭、白玉蘭的小白菊內酯的製備方法
技術領域：
本發明屬於藥物提取技術領域，具體地說，本發明涉及一種小白菊內酯的製備方法，具體涉及從山玉蘭、紫玉蘭、白玉蘭根皮中提取小白菊內酯的方法。
背景技術：
腫瘤極大威脅著人類健康，我國現有癌症患者約200萬人，每年新發160萬例，這是一個不小的群體，抗腫瘤研究是當今生命科學領域極具挑戰性且意義重大的領域。過去的治療方法側重於對癌細胞的剷除和殺傷，目前，臨床上常用的抗腫瘤藥物主要是細胞毒類藥物，這類抗癌藥具有選擇性差、毒副作用強、易產生耐藥性等缺點，是典型的雙面刃藥物，而且難以根除癌症，不少癌症的復發比例較高。惡性腫瘤的高復發率一直是困擾腫瘤醫生的難題，越來越多的研究證實腫瘤細胞群體中存在少數能使群體擴增的腫瘤幹細胞。它們通常處於慢周期狀態，對化療藥物敏感性低，是腫瘤復發的根源。因此腫瘤幹細胞的發現·給腫瘤治療帶來新的靶標，針對腫瘤幹細胞的藥物研究為徹底治癒癌症提供可能。近年來，從天然產物中尋找抗癌活性化合物已經成為抗癌藥物的開發熱點，前20年間，全世界推出的藥物小分子新化學實體中，有61 %可追朔到天然產物。天然產物在某些治療領域出現率非常高78%的抗菌化合物和74%的抗腫瘤化合物都是天然產物，或從某個天然產物衍生而來，實踐證明，天然產物在抗癌藥物發現中的獨特作用重新引起高度重視。傳統治療腫瘤的化療藥物均存在耐藥問題，尤其是腫瘤幹細胞更不敏感。抗癌中藥博大精深，高效低毒，從中有可能篩選出高效殺傷腫瘤幹細胞，從而治療惡性腫瘤的藥物。倍半職內酯類化合物小白菊內酯(Parthenolide)是從小白菊中提取的化合物，最初被用來治療皮膚感染、風溼病以及偏頭痛。近期研究表明，小白菊內酯可抑制前列腺癌、乳腺癌、胃癌、白血病癌、腎癌、肺癌、結腸腺癌、成神經管細胞瘤等癌細胞的生長，在動物模型上小白菊內酯還能治療紫外線引起的皮膚癌。對其作用機理研究發現，小白菊內酯能抑制轉錄因子NF-K B的激活，其活性可能主要來源於p65/NF-K B亞基的Cys38上的巰基與含笑內酯發生了 Michael加成反應，由於NF- κ B是調控腫瘤侵襲、轉移、藥物抗性的重要基因，抑制NF-κ B的激活有可能提高腫瘤對於抑瘤劑所引起的細胞凋亡的敏感性。最近，紐約羅切斯特大學醫學院的Jordan，C. T.博士及其同事發現小白菊內酯能夠在基本不損傷正常幹細胞的情況下，針對性地消滅引發急性和慢性骨髓性白血病的幹細胞，從而有可能根本上遏制白血病復發，小白菊內酯這一獨特的作用機制，已引起人們的廣泛關注。小白菊內酯(parthenollde)的分子式C15H2tlO3,分子量248,性狀無色晶體,其
結構如下
Zo H
O
專利CN101190258中公開了一種從廣玉蘭的葉子或花中提取富含小白菊內酯提取物的方法，但該方法中所用廣玉蘭的葉子或花中小白菊內酯的含量不太高(含量約為
0.3%),而且過程較繁瑣，生產成本較高。本發明發現，山玉蘭、紫玉蘭、白玉蘭的根皮中均富含小白菊內酯，其含量高，提取分離過程簡單，易於工業化。
發明內容
本發明還提供了一種從山玉蘭、紫玉蘭、白玉蘭根皮中提取小白菊內酯的方法。具體地，本發明提供了一種從山玉蘭、紫玉蘭、白玉蘭根皮中分離提取小白菊內酯的方法，該方法包括以下步驟(I)取山玉蘭、紫玉蘭、白玉蘭乾燥根皮，粉碎成粉； (2)取粉碎的粗粉，用5 20倍重量的適當的提取溶劑在一定溫度下提取多次，每次I 108小時；(3)過濾，合併濾液，減壓回收溶劑得提取浸膏；(4)提取浸膏用質量濃度10% 30%的乙醇或甲醇溶液溶解，再用適當的有機溶劑萃取至顏色變淡，合併有機溶劑，減壓回收有機溶劑，乾燥得總倍半萜內酯類化合物；(5)取上述總倍半萜內酯類化合物上矽膠色譜柱，以混合有機溶劑梯度淋洗，跟蹤檢測，收集含小白菊內酯的流份，合併減壓回收混合有機溶劑，乾燥得小白菊內酯。該方法還包含小白菊內酯的結晶過程，結晶過程如下(6)小白菊內酯在適當的溶劑中得無色結晶狀化合物小白菊內酯。其中提取溶劑為甲醇、乙醇、丙酮、氯仿中的任一種或甲醇、乙醇、丙酮、氯仿分別與水按一定比例(水的百分含量為0% -100% )混合的提取溶劑。其中提取的溫度為(TC 100°C。其中萃取所用有機溶劑為乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、石油醚、正己烷中的任一種。其中淋洗所用混合有機溶劑為石油醚乙酸乙酯=20 : I I : 20，己烷乙酸乙酯=20 : I I : 20，石油醚丙酮=20 : I I : 20，己烷丙酮=20 I I 20,氯仿乙酸乙酯=40 : I I : I,氯仿丙酮=40 : I I : I,氯仿甲醇=200 : I I : I中的任一種。其中結晶所用有機溶劑選自石油醚/乙酸乙酯，己烷/乙酸乙酯，石油醚/丙酮，己烷/丙酮混合溶劑中的任一種。本發明還提供了山玉蘭、紫玉蘭、白玉蘭根皮用於提取小白菊內酯的用途，應用山玉蘭、紫玉蘭、白玉蘭根皮可以提取出小白菊內酯，所以應用山玉蘭、紫玉蘭或白玉蘭根皮提取小白菊內酯是獲得小白菊內酯的新的途徑，也發現了山玉蘭、紫玉蘭、白玉蘭根皮的一種新的有價值的用途。有益效果本發明提供的小白菊內酯的製備方法解決了小白菊內酯製備產率低、工藝過程複雜的技術缺陷，本發明所提供的小白菊內酯的製備方法，提取分離過程簡單，易於工業化。
具體實施例方式為了理解本發明，下面以實施例進一步說明本發明，但不限制本發明。
實施例I :從山玉蘭根皮中分離純化小白菊內酯取山玉蘭乾燥根皮I公斤，粉碎成粉。取粉碎的粗粉，用10倍(重量)的95%乙醇在回流提取3次，每次3小時。過濾，合併濾液，減壓回收溶劑得提取浸膏。浸膏用20%的乙醇溶解，再用乙酸乙酯萃取至萃取液的顏色變淡，合併有機溶劑，減壓回收溶劑，乾燥得固體114克。上矽膠色譜柱，以石油醚乙酸乙酯=15 : I 4 : I梯度淋洗，TLC跟蹤檢測，與小白菊內酯標準品對照，收集含小白菊內酯的流份，合併減壓回收溶劑，得乾燥固體。在石油醚丙酮=10 I的混合溶劑中結晶得無色結晶狀小白菊內酯52g(純度99. 2% )，得率為 5. 2%。譜圖數據1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ 6. 25 (s，1H)，5. 55 (s，1H)，5. 12 (d，J = 11·6Ηζ，1Η)，3. 79 (t, J = 8· 4Hz，1Η)，2· 71 (d，J = 8· 0Hz，2Η)，2· 28-2. 34 (m，2Η)，2· 06-2. 13 (m，4Η)，
I.64 (br s，4H)，I. 22(s，3H)，I. 24(s，1Η) ；13C NMR(CDC13，400MHz) δ 169. 2，139. 1，134. 5，124. 9，121. 1,82. 3,66. 0,61. 4,47. 3,40. 9,36. 1,30. 4,23. 9，17. 1，16. 8。譜圖數據表明實施例的方法製備得到的化合物是小白菊內酯。實施例2 :從紫玉蘭根皮中分離純化小白菊內酯取紫玉蘭乾燥根皮I公斤，粉碎成粉。取粉碎的粗粉，用10倍(重量)的95%乙醇在回流提取3次，每次3小時。過濾，合併濾液，減壓回收溶劑得提取浸膏。浸膏用20%的乙醇溶解，再用乙酸乙酯萃取至萃取液的顏色變淡，合併有機溶劑，減壓回收溶劑，乾燥得固體102克。上矽膠色譜柱，以石油醚乙酸乙酯=15 : I 4 : I梯度淋洗，TLC跟蹤檢測，與小白菊內酯標準品對照，收集含小白菊內酯的流份，合併減壓回收溶劑，得乾燥固體。在石油醚丙酮=10 I的混合溶劑中結晶得無色結晶狀小白菊內酯32g(純度99. 6% )，得率為 3.2%。實施例3 :從白玉蘭根皮中分離純化小白菊內酯取白玉蘭乾燥根皮I公斤，粉碎成粉。取粉碎的粗粉，用10倍(重量)的95%乙醇在回流提取3次，每次3小時。過濾，合併濾液，減壓回收溶劑得提取浸膏。浸膏用20%的乙醇溶解，再用乙酸乙酯萃取至萃取液的顏色變淡，合併有機溶劑，減壓回收溶劑，乾燥得固體112克。上矽膠色譜柱，以石油醚乙酸乙酯=15 : I 4 : I梯度淋洗，TLC跟蹤檢測，與小白菊內酯標準品對照，收集含小白菊內酯的流份，合併減壓回收溶劑，得乾燥固體。在石油醚丙酮=10 I的混合溶劑中結晶得無色結晶狀小白菊內酯36g(純度99. 4% )，得率為 3.6%。實施例4 :與廣玉蘭幹葉的對比實施例為了更好的說明本發明，按照CN101190258中公開的提取富含小白菊內酯提取物的方法，從I公斤廣玉蘭幹葉中分離純化得小白菊內酯2. 5g，得率僅為O. 25%。而且過程較繁瑣,生產成本較高。本發明的方法已經通過具體的實施例進行了描述。本領域技術人員可以借鑑本發明的內容適當改變工藝條件等環節來實現相應的其它目的，其相關改變都沒有脫離本發明的內容，所有類似的替換和改動對於本領域技術人員來說是顯而易見的，都被視為包括在本發明的範圍之內。
權利要求
1.一種從山玉蘭、紫玉蘭、白玉蘭根皮中分離提取小白菊內酯的方法，該方法包括以下步驟 (1)取山玉蘭、紫玉蘭、白玉蘭乾燥根皮，粉碎成粉； (2)取粉碎的粗粉，用5 20倍重量的適當的提取溶劑在一定溫度下提取多次，每次I 108小時； (3)過濾，合併濾液，減壓回收溶劑得提取浸膏； (4)提取浸膏用質量濃度10% 30%的乙醇或甲醇溶液溶解，再用適當的有機溶劑萃取至顏色變淡，合併有機溶劑，減壓回收有機溶劑，乾燥得總倍半萜內酯類化合物； (5)取上述總倍半萜內酯類化合物上矽膠色譜柱，以混合有機溶劑梯度淋洗，跟蹤檢測，收集含小白菊內酯的流份，合併減壓回收混合有機溶劑，乾燥得小白菊內酯。
2.根據權利要求I所述的方法，該方法還包含小白菊內酯的結晶過程，結晶過程如下 (6)小白菊內酯在適當的溶劑中得無色結晶狀化合物小白菊內酯。
3.根據權利要求I或2所述的方法，其中提取溶劑為甲醇、乙醇、丙酮、氯仿中的任一種或甲醇、乙醇、丙酮、氯仿分別與水按一定比例(水的百分含量為0%-100%)混合的提取溶劑。
4.根據權利要求I或2所還的方法，其中提取的溫度為0°C 100°C。
5.根據權利要求I或2所述的方法，其中萃取所用有機溶劑為乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、石油醚、正己烷中的任一種。
6.根據權利要求I或2所述的方法，其中淋洗所用混合有機溶劑為石油醚乙酸乙酯=20 : I I : 20，己烷乙酸乙酯=20 : I I : 20，石油醚丙酮=20 : I I 20，己烷丙酮=20 : I I : 20，氯仿乙酸乙酯=40 : I I : 1，氯仿丙酮=40 : I I : I,氯仿甲醇=200 : I I : I中的任一種。
7.根據權利要求2所述的方法，其中結晶所用有機溶劑選自石油醚/乙酸乙酯，己烷/乙酸乙酯，石油醚/丙酮，己烷/丙酮混合溶劑中的任一種。
8.—種山玉蘭、紫玉蘭、白玉蘭根皮用於提取小白菊內酯的用途。
全文摘要
本發明涉及一種小白菊內酯的提取製備方法，具體涉及從山玉蘭、紫玉蘭、白玉蘭根皮中提取小白菊內酯的方法，以山玉蘭、紫玉蘭、白玉蘭根皮為原料，粉碎，經極性有機溶劑提取，適當有機溶劑萃取後得到總內酯，總內酯再經柱層析分離，收集所需成分後，再用適當溶劑結晶即得到小白菊內酯。本發明從山玉蘭、紫玉蘭、白玉蘭根皮提取製備小白菊內酯的方法，適合工業化生產。
文檔編號C07D493/04GK102863452SQ201110187388
公開日2013年1月9日 申請日期2011年7月6日 優先權日2011年7月6日
發明者張泉, 陳悅, 範洪霞, 龍菁, 翟佳黛 申請人:天津尚德藥緣科技有限公司, 南開大學