羅紅黴素膠囊的質量控制方法

2023-06-18 04:44:06

羅紅黴素膠囊的質量控制方法
【專利摘要】本發明公開了羅紅黴素膠囊的質量控制方法，該方法採用超高效液相色譜法檢測羅紅黴素膠囊。本發明通過大量實驗優選出最佳的流動相組成，流速，檢測波長和色譜柱等分析條件，經多次實驗驗證表明，本發明提供的羅紅黴素膠囊的質量控制方法，穩定性和重複性好、分析速度快，分析效率高，可在3分鐘以內檢測出羅紅黴素的含量，並且分離度好，可以靈敏準確的定性、定量檢測目標化合物，從而可以高效、客觀、全面、準確的評價羅紅黴素膠囊的質量，對控制羅紅黴素膠囊的質量和保證臨床療效具有重要意義。
【專利說明】羅紅黴素膠囊的質量控制方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種藥物製劑的質量控制方法，具體涉及一種羅紅黴素膠囊的質量控制方法。
【背景技術】
[0002]羅紅黴素膠囊主要成份為羅紅黴素，9- {O- [ (2-甲氧基乙氧基)-甲基]-肟基}紅黴素，分子式為C41H76N2Otj羅紅黴素是紅黴素A的衍生物，是新一代的大環內酯類抗生素，主要作用於革蘭氏陽性菌、厭氧菌、衣原體和支原體等。現有技術中一般採用HPLC法測定羅紅黴素含量，但是現有技術的測量方法，操作比較繁瑣，尤其是分析時間較長，對於檢驗時間有較高要求的生產企業，現有技術的普通HPLC方法的分析檢測時間較長，並且精密度不高，檢測效率不高，不能滿足生產過程中，對於分析時間有較高要求的中間產品的質量控制。
[0003]因此，為了控制好羅紅黴素膠囊製劑的臨床安全性，維護患者的利益，滿足快速分析的目的，很有必要在現有技術的基礎之上，研究設計出能準確檢測羅紅黴素的檢測方法。

【發明內容】

[0004]發明目的:本發明的目的是解決現有技術的不足，提供一種檢測靈敏度高，精密度高，檢測速度快，檢測結果準確，可以客觀、全面、準確的評價羅紅黴素膠囊的質量，對控制羅紅黴素膠囊劑的質量和保證療效具有重要意義。
[0005]技術方案:為了實現以上目的，本發明所提供的羅紅黴素膠囊的質量控制方法，包括以下步驟:
[0006]羅紅黴素膠囊的質量控制方法，其特徵在於，它包括以下步驟:
[0007](I)標準品溶液的製備:精密稱取羅紅黴素對照品，加體積比為45:55的乙腈和濃度0.067mol/L磷酸二氫銨溶液溶解，用0.22 μ m濾膜過濾，製成濃度為lmg/mL的羅紅黴素標準品溶液；
[0008](2)羅紅黴素樣品溶液的製備:取羅紅黴素膠囊內容物適量，研細，精密稱取適量置於量瓶中，加體積比為45:55的乙腈和濃度0.067mol/L磷酸二氫銨溶液，超聲振蕩20?30min,使羅紅黴素完全溶解,放冷至室溫，用0.22 μ m濾膜過濾,製成濃度為lmg/mL的羅紅黴素供試品溶液；
[0009](3)標準曲線的製備:取步驟(I)得到的羅紅黴素標準品溶液，分別精密量取3ml、4ml、5ml、6ml、7ml對照品儲備液，置IOml量瓶中，加體積比為45:55的乙腈和濃度
0.067mol/L磷酸二氫銨溶液稀釋至刻度，搖勻，即得系列濃度標準溶液，分別精密量取系列濃度標準溶液各2 μ L，注入超高效液相色譜儀製備標準曲線；
[0010]所述的色譜條件為:色譜柱:反相C18柱；流動相:體積比為45:55的乙腈:
0.067mol/L磷酸二氫銨溶液組成流動相，並用三乙胺調節pH值為6.5，流速:1.5mL/min，檢測波長:210nm，柱溫30°C ；[0011](4)羅紅黴素樣品中羅紅黴素的含量測定:精密吸取步驟(2)所述的羅紅黴素膠囊樣品溶液2 μ I，注入超高效液相色譜儀分析5分鐘，色譜條件為:色譜柱:反相C18柱；流動相:體積比為45:55的乙腈:0.067mol.L-1磷酸二氫銨溶液組成的流動相，並用三乙胺調節pH值為6.5，流速:1.5mL/min，檢測波長:210nm，柱溫30°C，並按步驟(3)所述的標準
曲線測量羅紅黴素膠囊中羅紅黴素的含量。
[0012]本發明所述的羅紅黴素膠囊的質量控制方法，本發明通過實驗研究表明，採用常規的0.25 μ m濾膜過濾不能很好的過濾雜質，研究表明，採用0.22 μ m孔徑的濾膜對羅紅黴素樣品或標準品進行過濾，可以有效將紅黴素等雜質過濾，有利於整個分析過程，提高分析效率。
[0013]作為優選方案，本發明所述的羅紅黴素膠囊的質量控制方法，步驟(3)中以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標繪製標準曲線，得回歸方程為:y=261.34x+0.8224，r=0.9999，羅紅黴素在0.6026?1.4060mg/mL與峰面積的線性關係良好。
[0014]作為優選方案，本發明所述的羅紅黴素膠囊的質量控制方法，步驟(3)和(4)所述的反相 C18 柱為 Poroshell 20 SB-Clgo
[0015]作為優選方案，以上所述的羅紅黴素膠囊的質量控制方法，步驟(3)和(4)所述的超高效液相色譜儀的檢測器為DAD檢測器。
[0016]常規的檢測方法，靈敏度、精密度不高，尤其是分析時間長，為了嚴格控制好羅紅黴素膠囊的質量，制定檢測羅紅黴素膠囊含量的方法，本發明經過大量實驗對流動相組成、流速、檢測波長及色譜柱等色譜條件進行篩選，得到適合分析羅紅黴素的最佳色譜條件。
[0017]1、本發明通過全波長掃描和3D等高線觀察，確定羅紅黴素目標化合物在210nm處有較大的吸收，靈敏度高，因此本發明採用210nm作為檢測波長，可以準確靈敏的檢測到目標化合物。
[0018]2、為了縮短羅紅黴素的分析時間，提高分析效率，提高羅紅黴素的在色譜柱的分離度，本發明通過大量實驗篩選流動相的組成，實驗結果表明，用體積比為45:55的乙腈:
0.067mol -L-1磷酸二氫銨溶液組成的流動相，並用三乙胺調節pH值為6.5作為流動相，可以有效的將羅紅黴素在色譜柱上達到很好的分離，不會出現峰重疊等現象，目標化合物峰形好，從而能保證檢測結果準確，並且具有分析時間短，分析速度快的優點。
[0019]3、同時本發明還對流動相的流動速度進行了考察，如流速過快，分離度不夠理想，流速過慢，分析時間長，因此本發明分別考察了 2.0mL/min, 1.5mL/min、lmL/min、0.8mL/min、0.6mL/min、0.5mL/min、0.4mL/min和0.2mL/min不同流速，實驗結果表明，當流動相的流速為1.5mL/min時,各化合物的峰形最好、分離度最好,理論塔板數最高,並且分析速度快，分析時間短，分析效率高，因此本發明採用流動相的流速為1.5mL/min。
[0020]4、同時本發明對色譜柱的柱溫進行了篩選，考察了色譜柱在20 V、25 °C、28 V、30°C和35°C條件下化合物的分離效果，實驗結果表明，色譜柱在30°C條件下分離效果最好，分離重複性和穩定性最好。因此本發明採用色譜柱的柱溫為30°C。
[0021]5、本發明採用超高效液相(UPLC)取代現有技術中普通高效液相(HPLC)的色譜分析目標化合物，選用安捷倫(Agilent) 1290Infinity系統。同時本發明對多種色譜柱也進行了篩選，實驗結果表明，Poroshell 20 SB-C18色譜柱的分離效果最好。因此，本發明以Poroshell 20 SB-C18柱作為分析柱。[0022]6、本發明通過大量實驗篩選，採用0.22 μ m孔徑的濾膜對羅紅黴素樣品或標準品進行過濾，可有效將雜質過濾，提高分析效率。
[0023]有益效果:本發明提供的羅紅黴素膠囊的質量控制方法和現有技術相比具有以下優點:
[0024]本發明首選超高效液相色譜儀(UPLC)，並且根據羅紅黴素膠囊中活性成分和雜質成分的結構性質特點，通過大量實驗篩選出最佳的流動相組成、流速，檢測波長、色譜柱等分析條件，經多次實驗驗證表明，本發明提供的羅紅黴素膠囊的質量控制方法可以快速，靈敏、準確的檢測目標活性成分，可以在3分鐘以內檢測出羅紅黴素的質量，相比現有技術的分析條件，具有更強的分離能力、更高分離度、更高的速度及更高的靈敏度，尤其是具有很高的分析效率，可滿足羅紅黴素中間產品的質量控制，可以克服現有檢測方法分離速度慢，分離效果差，檢測靈敏度低、準確度低、穩定性差等諸多缺點，且本發明提供的質量檢測方法穩定性好、對分析成分的分離度好，可定性、定量檢測分析羅紅黴素。因此，本發明提供的羅紅黴素膠囊的質量控制方法可以客觀、全面、準確的評價羅紅黴素膠囊的質量，對控制羅紅黴素膠囊的質量和保證臨床療效具有重要意義。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0025]圖1為羅紅黴素標準品的超高效液相色譜檢測分析圖。
[0026]圖2為羅紅黴素膠囊樣品中羅紅黴素的超高效液相色譜檢測分析圖。
【具體實施方式】
[0027]下面結合具體實施例進一步闡明本發明，應理解這些實施例僅用於說明本發明而不用於限制本發明的範圍，在閱讀了本發明之後，本領域技術人員對本發明的各種等價形式的修改均落於本申請所附權利要求所限定的範圍。
[0028]實施列I羅紅黴素膠囊的質量控制方法的方法學考察
[0029]1、穩定性實驗
[0030]取羅紅黴素膠囊內容物適量，研細，精密稱取適量置於量瓶中，加體積比為45:55的乙腈和濃度0.067mol/L磷酸二氫銨溶液，超聲振蕩20?30min，使羅紅黴素完全溶解，放冷至室溫，用0.22 μ m濾膜過濾，製成濃度為lmg/mL的羅紅黴素供試品溶液；然後分別於
0、0.5、l、2、3h注入超高效液相色譜儀分析(色譜條件為:色譜柱:反相C18柱；流動相:體積比為45:55的乙腈:0.067mol *L_1磷酸二氫銨溶液組成的流動相，並用三乙胺調節pH值為
6.5，流速:1.5mL/min，檢測波長:210nm，柱溫 30°C )，並按回歸方程為:y=261.34x+0.8224，r=0.9999測定羅紅黴素，結果羅紅黴素峰面積的RSD=L 4%，表明供試品溶液在3h內測定穩定好。
[0031]2、重複性實驗
[0032]精密稱定6份羅紅黴素膠囊內容物，研細，精密稱取適量置於量瓶中，加體積比為45:55的乙腈和濃度0.067mol/L磷酸二氫銨溶液，超聲振蕩20?30min，使羅紅黴素完全溶解，放冷至室溫，用0.22 μ m濾膜過濾，製成濃度為lmg/mL的羅紅黴素供試品溶液，各取2 μ L分別注入超高效液相色譜儀分析(色譜條件為:色譜柱:反相C18柱；流動相:體積比為45:55的乙腈:0.067mol.L-1磷酸二氫銨溶液組成的流動相，並用三乙胺調節pH值為6.5，流速:1.5mL/min，檢測波長:210nm，柱溫 30°C )，並按回歸方程為:y=261.34x+0.8224，r=0.9999測定羅紅黴素，結果樣品中羅紅黴素平均含量為97.13%，RSD=0.7% (n=6)。以上重複性實驗結果表明，本發明提供的羅紅黴素膠囊的檢測方法的重複性好。
[0033]3、加樣回收率實驗
[0034]稱取相當於80%，100%, 120%標示量的羅紅黴素加入相應輔料各3份，按供試品溶液製備方法製備供試品溶液，並按2所述的重複性實驗的色譜條件和標準曲線，計算羅紅黴素回收率。結果羅紅黴素的平均回收率為99.68% (RSD=0.8%，n=9)。表明本發明提供的羅紅黴素膠囊的檢測方法的準確度高。
[0035]實施列2羅紅黴素膠囊的質量控制方法，包括以下步驟:
[0036](I)標準品溶液的製備:精密稱取羅紅黴素對照品，加體積比為45:55的乙腈和濃度0.067mol/L磷酸二氫銨溶液溶解，製成濃度為lmg/mL的羅紅黴素標準品溶液；
[0037](2)羅紅黴素樣品溶液的製備:取6批羅紅黴素膠囊內容物適量，研細，精密稱取適量置於量瓶中，加體積比為45:55的乙腈和濃度0.067mol/L磷酸二氫銨溶液，超聲振蕩20min,使羅紅黴素完全溶解,放冷至室溫,用0.22 μ m濾膜過濾,製成濃度為lmg/mL的羅紅黴素供試品溶液；
[0038](3)標準曲線的製備:取步驟(I)得到的羅紅黴素標準品溶液，分別精密量取3ml、4ml、5ml、6ml、7ml對照品儲備液，置IOml量瓶中，加體積比為45:55的乙腈和濃度
0.067mol/L磷酸二氫銨溶液稀釋至刻度，搖勻，即得系列濃度標準溶液，分別精密量取系列濃度標準溶液各2 μ L，注入超高效液相色譜儀製備標準曲線；以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標繪製標準曲線，得回歸方程為:y=261.34x+0.8224，r=0.9999，羅紅黴素在0.6026?
1.4060mg/mL與峰面積的線性關係良好，標準品的色譜分析圖如圖1所示；
[0039]所述的色譜條件為:色譜柱=Poroshel 120SB_C18 ;流動相:體積比為45:55的乙腈:0.067mol/L磷酸二氫銨溶液組成流動相，並用三乙胺調節pH值為6.5，流速:1.5mL/min，檢測波長:210nm，柱溫30°C ；
[0040](4)羅紅黴素樣品中羅紅黴素的含量測定:精密吸取步驟(2)所述的羅紅黴素膠囊樣品溶液各2 μ I，注入超高效液相色譜儀分析5分鐘，樣品的色譜分析圖如圖2所示；
[0041]色譜條件為:色譜柱=Poroshell 20 SB-C18 ;流動相:體積比為45:55的乙腈:
0.067mol.L-1磷酸二氫銨溶液組成的流動相，並用三乙胺調節pH值為6.5，流速:1.5mL/min，檢測波長:210nm，柱溫30°C，並按步驟(3)所述的標準曲線測量羅紅黴素膠囊中羅紅黴素的含量。具體實驗結果如表I所示。
[0042]通過以上分析，羅紅黴素膠囊有效成分在本發明提供的分析條件下，能夠很好的分離，峰形好，檢測靈敏度高，化合物的標準曲線的線性關係良好，r值均達到0.999以上，尤其是具有分析速度快，分析效率高的優點，可滿足需要在短時間內，對多個樣品中羅紅黴素進行含量測定的要求。
[0043]表I羅紅黴素膠囊中甲鈷胺的檢測結果
[0044]
【權利要求】
1.羅紅黴素膠囊的質量控制方法，其特徵在於，它包括以下步驟: (1)標準品溶液的製備:精密稱取羅紅黴素對照品，加體積比為45:55的乙腈和濃度0.067mol/L磷酸二氫銨溶液溶解，製成濃度為lmg/mL的羅紅黴素標準品溶液； (2)羅紅黴素樣品溶液的製備:取羅紅黴素膠囊內容物適量，研細，精密稱取適量置於量瓶中，加體積比為45:55的乙腈和濃度0.067mol/L磷酸二氫銨溶液，超聲振蕩2(T30min，使羅紅黴素完全溶解，放冷至室溫，用0.22 μ m濾膜過濾,製成濃度為lmg/mL的羅紅黴素供試品溶液； (3)標準曲線的製備:取步驟(1)得到的羅紅黴素標準品溶液，分別精密量取3ml、4 ml,5 ml,6 ml、7ml對照品儲備液，置IOml量瓶中，加體積比為45:55的乙腈和濃度0.067mol/L磷酸二氫銨溶液稀釋至刻度，搖勻，即得系列濃度標準溶液，分別精密量取系列濃度標準溶液各2 μ L，注入超高效液相色譜儀製備標準曲線； 所述的色譜條件為:色譜柱:反相C18柱；流動相:體積比為45:55的乙腈:0.067mol/L磷酸二氫銨溶液組成流動相，並用三乙胺調節pH值為6.5，流速:1.5 mL/min,檢測波長:210nm，柱溫 30°C ； (4)羅紅黴素樣品中羅紅黴素的含量測定:精密吸取步驟(2)所述的羅紅黴素膠囊樣品溶液2 μ 1，注入超高效液相色譜儀分析5分鐘，色譜條件為:色譜柱:反相C18柱；流動相:體積比為45:55的乙腈:0.067mol -L-1磷酸二氫銨溶液組成的流動相，並用三乙胺調節pH值為6.5，流速:1.5 mL/min，檢測波長:210nm，柱溫30°C，並按步驟(3)所述的標準曲線測量羅紅黴素膠囊中羅紅黴素的含量。
2.根據權利要求1所述的羅紅黴素膠囊的質量控制方法，其特徵在於，步驟(3)中以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標繪製標準曲線，得回歸方程為:y=261.34x+0.8224，r=0.9999，羅紅黴素在0.6026^1.4060 mg/mL與峰面積的線性關係良好。
3.根據權利要求1所述的羅紅黴素膠囊的質量控制方法，其特徵在於，步驟(3)和(4)所述的反相C18柱為Poroshell 20 SB-Clgo
【文檔編號】G01N30/88GK103776945SQ201410019957
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2014年1月16日 優先權日:2014年1月16日
【發明者】雷曉雪, 張高平, 王麗楠, 曹義海 申請人:揚子江藥業集團南京海陵藥業有限公司