根皮素脂質體及其製備方法與流程
2023-06-18 00:19:12
本發明涉及化工領域，特別涉及根皮素脂質體及其製備方法。
背景技術：
：根皮素(phloretin)是一種含有二氫查爾酮類的天然植物化合物，化學名為：三羥苯酚丙酮2,4,6-三羥基-3-(4-羥基苯基)苯丙酮，主要分布於蘋果、梨等多汁水果的果皮及根皮以及多種蔬菜汁液中。國內外研究表明，根皮素具有抗炎、免疫、抗氧化、抗心血管疾病、抗糖尿病、抗腫瘤及肝臟保護等廣泛的藥理活性，是一種具有廣泛應用前景的、潛在的活性成分。根皮素因具有淡化色斑、美白、祛痘、抗誘變、抗衰老等活性而應用於面膜、護膚膏霜和精華素等化妝品中。Mizuma等人發現根皮素可以抑制葡萄糖醛酸化的影響，促進小腸對乙醯氨基酚和1-萘酚的吸收，使其藥理活性顯著提高。因此，根皮素可以應用於生物、化工、食品及醫藥等領域。但是由於根皮素水中溶解度差(0.02mg·mL-1)、生物利用度低，其應用範圍因此受到了極大限制。如何改善根皮素的水溶性以提高其生物利用度是其應用中的一大難題。目前，國內外學者對根皮素的研究主要集中在根皮素的提取、結構以及藥理活性等方面，對根皮素化學結構修飾的研究有少許報導，採用先進位劑技術對根皮素增溶研究鮮見報導。脂質體(liposomes)是將功能性成分包封於類脂質雙分子層內而形成的微型囊泡，是納米載體系統的典型代表。由親水和親油的雙親分子所構成的，在雙親分子中親水性的首端部分形成膜的內外表面，而親油性的尾端部分位於膜的中間，雙分子層包容藥物或者功能性成分。在脂質體中，脂溶性藥物與雙分子膜相互作用溶於膜內，很少再溶到周圍的水相中，使難溶性藥物的溶解度增加。1988年，第一個脂質體包裹的藥物在美國進行臨床試驗。由於其製備簡單，無免疫原性，對機體無毒及易實現靶向性等自身獨特的性能特點而越來越被人們認可。脂質體的發現和應用具有很大的應用價值，不僅為醫藥製劑工業注入了新的活力，更是推動了美容化妝品行業中化妝品向高檔次、高技術發展。國內外對脂質體製備方法的改進、分離富集方法及應用領域的開拓的研究正方興未艾。作為一種高效載體近年來在生物、食品、醫藥、化工等領域等都有廣泛應用，用脂質體包裹的新疫苗、抗癌藥、其他各種藥品、農藥、化妝品等已上市銷售。因此，提供根皮素脂質體及其製備方法具有重要的現實意義。技術實現要素：有鑑於此，本發明提供一種根皮素脂質體及其製備方法。本發明涉及根皮素脂質體及其製備方法，以期增加根皮素的溶解性，促進根皮素被吸收，進而提升其生物活性，具有重要的社會和經濟價值。為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：本發明提供了一種根皮素脂質體，由如下組分組成：在本發明的一些具體實施方案中，所述輔料包括有機溶劑、水化介質、pH調節劑、抗氧劑、防腐劑、等滲調節劑中的一種或兩者以上的混合物。在本發明的一些具體實施方案中，所述輔料包括亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉、抗壞血酸、沒食子酸丙酯、抗壞血酸棕櫚酸酯、叔丁基對羥基茴香醚(BHA)、二叔丁基對甲酚(BHT)、硫二丙酸、二硫代氨基苯甲酸類、生育酚及其衍生物、羥基香豆素、半胱氨酸、蛋氨酸、枸櫞酸、蘋果酸、組氨酸、山梨醇、EDTA、乳糖、蔗糖、甘露醇、木糖醇、殼聚糖、海藻糖、葡萄糖、氯化鈉、蛋白質中的一種或一種以上的混合物。在本發明的一些具體實施方案中，所述膽固醇與所述磷脂的質量比為1:(2～20)。作為優選，所述膽固醇與所述磷脂的質量比為1:(0.5～20)。優選的，所述膽固醇與所述磷脂的質量比為1:(2～5)。更優選的，所述膽固醇與所述磷脂的質量比為1:2。在本發明的一些具體實施方案中，所述根皮素與所述磷脂的質量比為1:(5～40)。作為優選，所述根皮素與所述磷脂的質量比為1:15。在本發明的一些具體實施方案中，所述有機溶劑與所述水化介質的體積比為1:0.5～4。作為優選，所述有機溶劑與所述水化介質的體積比為1:1。在本發明的一些具體實施方案中，以mg/mL計，所述根皮素與所述有機溶劑的質量體積比為(20～1000)：(10～250)。優選的，以mg/mL計，所述根皮素與所述有機溶劑的質量體積比為20:10、50:10、1000:20、1000:250或80:20。在本發明的一些具體實施方案中，所述磷脂包括天然磷脂、半合成或全合成磷脂中的一種或兩者以上的混合物；所述天然磷脂選自源於大豆、蛋黃、動物腦中的天然磷脂；優選的，所述天然磷脂為卵磷脂、大豆磷脂、蛋黃磷脂、心磷脂、神經鞘磷脂、鞘磷脂中的一種或兩者以上的混合物。在本發明的另一些具體實施方案中，所述半合成或全合成磷脂包括氫化卵磷脂、二棕櫚醯磷脂醯膽鹼(DPPC)、磷脂醯絲氨酸(PS)、磷脂醯肌醇(PI)、磷脂醯乙醇胺(PE)、磷脂醯甘油(PG)、磷脂醯膽鹼(PC)、二鯨蠟磷酸酯(DCP)、二肉豆蔻醯磷脂醯膽鹼(DMPC)、二硬脂醯磷脂醯膽鹼(DSPC)、二月桂醯磷脂醯膽鹼(DLPC)、二油醯磷脂醯膽鹼(DOPC)。在本發明的一些具體實施方案中，其pH值為4～9.5。在本發明的一些具體實施方案中，所述pH調節劑為乙醇-醋酸緩衝液、三羥甲基氨基甲烷緩衝液、巴比妥緩衝液、甲酸鈉緩衝液、鄰苯二甲酸鹽緩衝液、枸櫞酸鹽緩衝液、枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩衝液、氨-氯化銨緩衝液、硼砂-氯化鈣緩衝液、醋酸鹽緩衝液、醋酸-鋰鹽緩衝液、醋酸-醋酸鈉緩衝液、醋酸-醋酸銨緩衝液、磷酸-三乙胺緩衝液、磷酸鹽緩衝液中的一種或兩者以上的混合物。在本發明的一些具體實施方案中，所述水化介質為蒸餾水、生理鹽水、磷酸鹽緩衝液、醋酸鹽緩衝液、碳酸鹽緩衝液、甘氨酸緩衝液中的一種或兩者以上的混合物。在本發明的一些具體實施方案中，所述有機溶劑為二氯甲烷、乙醇、氯仿中的一種或兩者以上的混合物。在本發明的一些具體實施方案中，所述根皮素脂質體還包括靶向性物質，如靶向抗體、配體，包括各種單克隆抗體、葉酸、轉鐵蛋白、乳鐵蛋白、鐵蛋白、半乳糖配體、葡萄糖配體、RGD中的一種或兩者以上的混合物。本發明還提供了所述的根皮素脂質體的製備方法，包括如下步驟：步驟1：取根皮素、磷脂和膽固醇溶於有機溶劑中製得有機相；步驟2：取所述有機相與水化介質混合，過濾除菌，得到根皮素脂質體。在本發明的一些具體實施方案中，可以採用攪拌法、超聲波分散法、高壓均質法、微射流分散法、薄膜分散法、注入法、二次乳化法製備。根皮素的藥理活性較廣泛，但是由於其在水中的溶解度低，屬於脂溶性藥物，脂質體可以將難溶性藥物包裹在囊泡中，動態地增加難溶性藥物的溶解度，促進藥物被吸收，且可結合靶向配體實現靶向性輸送。本發明提供了一種根皮素脂質體及其製備方法，包括根皮素0.2～20mg/mL，4％～95％磷脂，2％～60％膽固醇，0～90％其他輔料。採用攪拌法、超聲波分散法、高壓均質法、微射流分散法、薄膜分散法、注入法、二次乳化法製備。本發明製備的脂質體包封率高，穩定性好，可改善根皮素的溶解性、促進根皮素吸收、靶向遞送，能更好的提升其生物活性，擴大其開發應用範圍，具有較好的社會和經濟價值。附圖說明為了更清楚地說明本發明實施例或現有技術中的技術方案，下面將對實施例或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹。圖1示不同脂膽比製備的根皮素包封率試驗結果；圖2示脂膽比2:1根皮素脂質體的電鏡照片；圖3示藥脂比1:15根皮素脂質體的電鏡照片；圖4示油水比1:1根皮素脂質體的電鏡照片。具體實施方式本發明公開了一種根皮素脂質體及其製備方法，本領域技術人員可以借鑑本文內容，適當改進工藝參數實現。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發明。本發明的方法及應用已經通過較佳實施例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本
發明內容、精神和範圍內對本文所述的方法和應用進行改動或適當變更與組合，來實現和應用本發明技術。本發明提供的根皮素脂質體及其製備方法中所用原料及試劑均可由市場購得。下面結合實施例，進一步闡述本發明：實施例1：研究考察大豆卵磷脂與膽固醇的比例、藥脂比和油水比對包封率的影響。取4支潔淨試管，分別取處方量大豆卵磷脂、膽固醇、根皮素、二氯甲烷、十二烷基磺酸鈉和磷酸緩衝液，按照上述實施例2方法製備脂質體，電鏡照片及包封率見附圖(見圖1-4)。可見脂質體的形態比較圓整，成近圓球狀。表1為不同脂膽比影響考察處方，表2為不同藥脂比影響考察處方，表3為不同油水比影響考察處方。表1為不同脂膽比影響考察處方，表2為不同藥脂比影響考察處方，表3為不同油水比影響考察處方。藥物磷脂比為1∶15時製備的根皮素脂質體，其包封率優於其他比例的根皮素脂質體。當根皮素用量低於一定比例時，包封率顯著降低；隨著用量的增加，包封率逐漸下降。磷脂膽固醇比為2∶1時製備的根皮素脂質體，其包封率優於其他比例的根皮素脂質體。一開始包封率隨比例增大上昇平緩，隨著磷脂的用量增加，包封率逐漸上升。二氯甲烷與磷酸緩衝溶液之比為1∶1時製備的根皮素脂質體，其包封率優於其他比例的根皮素脂質體。當油水比為1∶3時，包封率明顯降低，隨著磷酸緩衝溶液的增加，根皮素脂質體的包封率逐漸上升。表1不同脂膽比影響考察處方表2不同藥脂比影響考察處方實驗序號1234藥脂比1∶251∶201∶151∶10大豆卵磷脂/mg300300300300膽固醇/mg75757575根皮素/mg12152030二氯甲烷/mL30303030磷酸緩衝液/mL60606060十二烷基磺酸鈉/mg30303030表3不同油水比影響考察處方實驗序號9101112油水比1∶41∶31∶21∶1二氯甲烷/mL10101010磷酸緩衝溶液/mL40302010根皮素/mg20202020大豆卵磷脂/mg300300300300膽固醇/mg75757575十二烷基磺酸鈉/mg30303030實施例2：稱取根皮素1g，大豆磷脂30.0g，膽固醇3.0g，二氯甲烷10mL，生育酚0.25g溶解得有機相；另取0.5％十二烷基磺酸鈉磷酸緩衝溶液(pH6.8)250mL，待溶解或分散後得水相；將有機相傾入水相中，振蕩分散置細胞粉碎機超聲處理30min，得O/W型乳化劑，置於水浴溫度55℃攪拌揮幹，待有機相揮盡後，可得透明的白色乳光的脂質體溶液；過0.8μm濾膜除菌即得有白色乳光的根皮素脂質體。所製備脂質體根皮素濃度為0.5mg/mL，包封率為55％。實施例3：稱取20mg根皮素、375mg大豆卵磷脂、75mg膽固醇，加入10mL二氯甲烷溶解得有機相；另取30mL2％十二烷基磺酸鈉醋酸緩衝溶液(pH6.8)中，待溶解或分散後得水相；將有機相傾入水相中，振蕩分散置細胞粉碎機超聲處理30min，得O/W型乳化劑，置於水浴溫度55℃攪拌揮幹，待有機相揮盡後，可得透明的白色乳光的脂質體溶液；過0.8μm濾膜除菌即得有白色乳光的根皮素脂質體。所製備脂質體根皮素濃度為5mg/mL，包封率為90％。實施例4：將1g根皮素、40g蛋黃磷脂和80g膽固醇溶於200mL乙醇中，加入2％活性炭過濾除熱原；50℃條件下加入40g山梨醇，減壓除去有機溶劑，形成乾燥粉末；50℃條件下加入含有磷酸鹽緩衝液(pH7.8)200mL，通過高壓均質降低水化後的溶液的粒徑，經0.22μm濾膜過濾除菌，得到均勻的有白色乳光的脂質體溶液；所製備脂質體根皮素濃度為0.2mg/mL，包封率為70％。實施例5：將1g根皮素、5g心磷脂和1.5g膽固醇溶於250ml氯仿中，加入1％活性炭過濾除熱原；在55℃條件下加入300g葡萄糖載體粉末，減壓除去有機溶劑，形成乾燥粉末；在55℃條件下加入0.5L蒸餾水水化介質(含100g甘露醇)，磁力攪拌使其混合均勻，探頭超聲法(600w，10min，工作5s間歇5s)降低水化後脂質體溶液粒徑，經0.22μm濾膜過濾除菌，得到均勻的有白色乳光的脂質體溶液；所製備脂質體根皮素濃度為2mg/mL，包封率為82％。實施例6：取80mg根皮素、500mg二棕櫚醯磷脂醯膽鹼、25mg膽固醇和10mg生育酚溶於20mL乙醇中，40℃旋轉蒸發除去乙醇，形成一層均勻薄膜，充氮氣，真空乾燥；加入10mL1％NaCl溶液水化6h(45攝氏度)，使薄膜脫落、浸泡，冰浴條件下探頭超聲(500w，10min，工作3s間歇3s)，磁力攪拌條件下加入1mL甘露醇醋酸-醋酸銨緩衝液(10mg/mL，pH6.0)，經0.22μm濾膜過濾除菌，得到均勻的有白色乳光的脂質體溶液；所製備脂質體根皮素濃度為20mg/mL，包封率為68％。實施例7：將1g根皮素、10g心磷脂和5g膽固醇溶於200mL乙醇中，加入2％活性炭過濾除熱原；50℃條件下加入90g山梨醇，減壓除去有機溶劑，形成乾燥粉末；50℃條件下加入含有磷酸鹽緩衝液(pH8)200mL，通過高壓均質降低水化後的溶液的粒徑，經0.22μm濾膜過濾除菌，得到均勻的有白色乳光的脂質體溶液；所製備脂質體根皮素濃度為5mg/mL。實施例8：將1g根皮素、25g神經鞘磷脂和2g膽固醇溶於200mL乙醇中，加入2％活性炭過濾除熱原；50℃條件下加入50g山梨醇，減壓除去有機溶劑，形成乾燥粉末；50℃條件下加入含有磷酸鹽緩衝液(pH6)800mL，通過高壓均質降低水化後的溶液的粒徑，經0.22μm濾膜過濾除菌，得到均勻的有白色乳光的脂質體溶液；所製備脂質體根皮素濃度為0.125mg/mL。實施例9：將1g根皮素、15g大豆磷脂和1.5g膽固醇溶於200mL乙醇中，加入2％活性炭過濾除熱原；50℃條件下加入30g山梨醇，減壓除去有機溶劑，形成乾燥粉末；50℃條件下加入含有磷酸鹽緩衝液(pH9.5)400mL，通過高壓均質降低水化後的溶液的粒徑，經0.22μm濾膜過濾除菌，得到均勻的有白色乳光的脂質體溶液；所製備脂質體根皮素濃度為2.5mg/mL。實施例10：將0.8g根皮素、16g鞘磷脂和2g膽固醇溶於200mL乙醇中，加入2％活性炭過濾除熱原；50℃條件下加入60g山梨醇，減壓乾燥；50℃條件下加入含有醋酸鹽緩衝液(pH4.5)80mL，用細胞破碎儀降低脂質體粒徑，經0.22μm濾膜過濾除菌，得到均勻的有白色乳光的脂質體溶液；所製備脂質體根皮素濃度為10mg/mL。以上所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對於本
技術領域：
的普通技術人員來說，在不脫離本發明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發明的保護範圍。當前第1頁1 2 3