甘蔗健康種苗的組培快繁方法
2023-06-17 20:34:21
專利名稱：甘蔗健康種苗的組培快繁方法
技術領域：
本發明屬於植物組織培養技術領域，尤其是一種甘蔗健康種苗的組培快繁方法。
背景技術：
妨MXSaccharum. ·5印)是我國最重要的糖料作物，也是世界上最重要的能源植物。 甘蔗優良新品種的迅速推廣與應用已成為推動我國甘蔗蔗糖產業的新動力，然而，甘蔗宿根矮化病(Ratoon Stunting Disease，RSD)在我國主產蔗區造成了嚴重危害，導致我國部分品種種性退化，嚴重的影響到了甘蔗的品質與產量，給我國蔗糖產業帶來了很大的損失。 目前還沒有一個當家品種或新品種能夠很好的抗甘蔗宿根矮化病，所以最好的控制方法就是推廣種植甘蔗健康種苗。隨著我國甘蔗產業的不斷發展，對甘蔗健康種苗的需求量越來越大。而我國應用於生產的去宿根矮化病的方法一般有熱處理脫毒、莖尖培養脫毒和愈傷組織培養脫毒等，但是都分別存在不同的問題有的生產年限長，生產過程中可能存在二次感染，有的工作量大去除RSD不徹底，有的生產難度大變異多等。因此，對目前現有的方法進行改進或將目前現有的方法綜合改良是很有必要的，同時也將為更好的利用甘蔗健康種苗作種，推廣應用於生產為蔗糖產業的可持續發展開闢一條可行高效的途徑。
發明內容
本發明的目的是提出一種甘蔗健康種苗的組培快繁殖方法，以克服上述現有技術存在的不足。目前本發明的相關技術還未見報導。一種甘蔗健康種苗的快速繁殖方法，其特徵在於採用少量洗淨的甘蔗成熟種莖， 經52°C溫水脫毒處理30min，38°C恆溫恆溼箱催芽，以發出的腋芽為外植體材料誘導分化培養獲得第一代健康種苗；經PCR檢測技術對誘導分化出的成苗進行宿根矮化病RSD檢測； 以檢測結果陰性的成苗為材料，經多代增殖培養，獲得大量健康甘蔗種苗，經一次性生根培養、煉苗、移栽沙床假植，抽樣經PCR檢測技術進行宿根矮化病RSD檢測，證明甘蔗健康種苗合格(感染RSD為0)後，移栽大田或推廣種植。具體包括如下步驟
1)甘蔗材料的選擇與處理取成熟的甘蔗莖，切成兩個芽的莖段，在清水中刷洗外表面去除表面附著的病蟲害殘留物或泥土等汙物。用體積濃度2、的石灰水浸種30min，於52°C 恆溫水浴鍋中浸泡30min，種植於5. 5-6cm厚的甘蔗渣基質中，於38°C恆溫恆溼培養箱中培養5-6天，待腋芽出土後即可。2)腋芽的選擇與處理取5-6cm高的腋芽，在無菌條件下滅菌處理後，作為外植體材料。3)腋芽誘導培養將外植體材料接種於分化培養基中，20天換一次培養基，更換 2-3次培養基即可分化出第一代的甘蔗小苗；所述培養基為MS+6-BAl. 0mg/L+KT0. 5 mg/L + 蔗糖 30g/L。4)病毒的檢測利用PCR檢測技術對步驟3)中分化出的外植體小苗進行RSD檢測。5)增殖培養將步驟4)檢測合 格的全部成苗接入增殖培養基中，進行增殖培養獲得分化叢苗，15天接一次培養基，可根據需苗量更換培養基3-5次，增殖至所需的苗量。6)生根培養將步驟5)中的分化叢苗切成單株接在生根培養基中進行生根培養， 生根培養基中添加香蕉，培養瓶改成透明的培養袋，培養19-21天得到袋苗。7)甘蔗袋苗的煉苗將步驟6)中的全部袋苗移出無菌培養室，放置於沙床上煉苗一周。8)甘蔗袋苗移栽沙床將步驟7)中袋苗洗乾淨，用0. 5%多菌靈浸泡lOmin，栽種於沙床上，蓋薄膜4 - 6天，夏天加蓋蔭網，小苗種植40天以上即可移栽大田。9)病毒的抽樣檢測及推廣應用與步驟4)的方法相同，抽取一定量的樣本進行 RSD檢測，確定小苗的脫毒效果合格後，可以移栽大田或進行推廣應用。本發明具有如下突出的實質性特點和顯著進步
1)本發明以經過溫水處理的脫毒種莖催芽獲得小量甘蔗腋芽為外植體，獲得的種苗變異率低。本發明採用的培養基配方經多次實驗證明能最大的提高甘蔗小苗增殖效率，在生根壯苗方面也有優良的效果，適合用於工廠化規模化的生產。2)經過兩次PCR檢測RSD病毒確保健康種苗的脫毒質量。3)本發明是用0. 5%多菌靈浸泡甘蔗小苗IOmin後，栽種於沙床上，蓋薄膜4 一 6 天，加蓋蔭網，大大提高了組培甘蔗健康種苗的成活率。應用袋苗生根，是工廠化生產中必然的選擇，既降低了成本，又方便操作。同時本發明所生產的甘蔗健康種苗經實驗證明具有明顯的增產、增糖、提高宿根性的效果。經過溫水處理的脫毒種莖催芽獲得小量腋芽，經組培快繁獲得大量甘蔗健康種苗，其優點在於脫毒效果優良，種苗健壯，變異少，操作簡單，高效快速，成本低廉。
具體實施例方式通過以下實施例對本發明作進一步闡述，但本發明內容不限於所述範圍。實施例一
甘蔗健康種苗的快速繁殖方法，按照如下步驟實施
1)甘蔗材料的選擇與處理以甘蔗良種雲蔗06 - 407為材料，於1月份取成熟的甘蔗莖，切成兩個芽的莖段，在清水中刷洗外表面去除表面附著的病蟲害殘留物或泥土等汙物。用濃度2%石灰水浸種30min，於52°C恆溫水浴鍋中浸泡30min，種植於5. 5-6cm厚的甘蔗渣基質中，於38°C恆溫恆溼培養箱中培養5-6天，待腋芽出土後就可。2)腋芽的選擇與處理取5-6cm高的腋芽，在無菌條件下滅菌處理後，作為外植體。3)腋芽誘導培養將外植體接種於分化培養基中，20天換一次培養基，所述的分化培養基配方為MS+6-BAl. Omg/L+KTO. 5 mg/L + 蔗糖 30g/L。4)病毒的檢測利用PCR檢測技術對步驟3)中分化出的成苗進行RSD檢測。5)增殖培養將步驟4)中檢測合格(RSD感染數為0)的全部成苗接入增殖培養基中，進行增殖培養，所述的增殖培養基配方為MS+6-BA 1. 5mg/L+KT 0.5 mg/L +蔗糖30g/L+卡拉膠8 g/L。15天接一次培養基，增殖至所需的量。6)生根培養將步驟5)中的分化叢苗切成單株接在生根培養基中進行生根培養，生根培養基中添加香蕉，培養瓶改成透明的培養袋，培養約20天，生根培養基配方為 MS+NAA 1 mg/L + 蔗糖 30g/L+ 卡拉膠 8 g/L+ 香蕉 80 g/L。7 )甘蔗袋苗的煉苗將步驟6 )中的全部袋苗移出無菌培養室，放置於沙床上煉苗一周。8)甘蔗袋苗移栽沙床將步驟7)中袋苗洗乾淨，用0. 5%多菌靈浸泡lOmin，栽種於沙床上，蓋薄膜4 - 6天，夏天加蓋蔭網，小苗種植40天以上即可移栽大田。9)病毒的抽樣檢測及推廣應用與步驟4)的方法相同，抽取一定量的樣本進行 RSD檢測，確定小苗的脫毒效果合格後，可以移栽大田或進行推廣應用。實施例二
甘蔗健康種苗的快速繁殖方法，按照如下步驟實施
1)甘蔗材料的選擇與處理以甘蔗良種雲蔗05 - 51為材料，於1月份取成熟的甘蔗莖，切成兩個芽的莖段，在清水中刷洗外表面去除表面附著的病蟲害殘留物或泥土等汙物。 用2%石灰水浸種30min，於52°C恆溫水浴鍋中浸泡30min，種植於約6cm厚的甘蔗渣基質中，於38°C恆溫恆溼培養箱中培養5-6天，待芽出土後就可。2)腋芽的選擇與處理取5-6cm高的腋芽，在無菌條件下滅菌處理後，作為外植體。3)腋芽誘導培養將外植體接種於分化培養基MS+6-BAl. Omg/L+KTO. 5 mg/L +蔗糖30g/L的培養基中20天換一次培養基。4)病毒的檢測利用PCR檢測技術對步驟3)中分化出的成苗進行RSD檢測。5)增殖培養將步驟4)中檢測合格(RSD感染數為0)的全部成苗接入增殖培養基中，進行增殖培養，增殖培養基配方為MS+6-BA 1. 5mg/L+KT 0.5 mg/L +蔗糖30g/L+卡拉膠8 g/L。15天接一次培養基，增殖至所需的量。6)生根培養將步驟5)中的分化叢苗切成單株接在生根培養基中進行生根培養，生根培養基中添加香蕉，培養瓶改成透明的培養袋，培養約20天，生根培養基配方為 MS+NAA 1 mg/L + 蔗糖 30g/L+ 卡拉膠 8 g/L+ 香蕉 80 g/L。7 )甘蔗袋苗的煉苗將步驟6 )中的全部袋苗移出無菌培養室，放置於沙床上煉苗一周。8)甘蔗袋苗移栽沙床將步驟7)中袋苗洗乾淨，用0. 5%多菌靈浸泡lOmin，栽種於沙床上，蓋薄膜4 - 6天，夏天加蓋蔭網，小苗種植40天以上即可移栽大田。9)病毒的抽樣檢測及推廣 應用與步驟4)的方法相同，抽取一定量的樣本進行 RSD檢測，確定小苗的脫毒效果合格後，可以移栽大田或進行推廣應用。
權利要求
1.一種甘蔗健康種苗的組培快繁方法，其特徵在於步驟如下(1)取成熟的甘蔗莖，用體積濃度m的石灰水浸種30min，於52°C恆溫水浴鍋中浸泡 30min，種植於5. 5-6. 5cm厚的甘蔗渣基質中，於38°C恆溫恆溼培養箱中培養5_6天，待腋芽出土後即可；(2)取5-6cm高的腋芽，在無菌條件下滅菌處理後，作為外植體材料；(3)將外植體材料接種於分化培養基中，20天換一次培養基，更換2-3次培養基即可分化出第一代的甘蔗小苗；(4)利用PCR檢測技術對步驟3)中分化出的外植體小苗進行RSD檢測；(5)將步驟4)檢測合格的全部成苗接入增殖培養基中，進行增殖培養獲得分化叢苗，15 天接一次培養基，根據需苗量更換培養基3-5次，增殖至所需的苗量；(6)將步驟5)中的分化叢苗切成單株接在生根培養基中進行生根培養，生根培養基中添加香蕉，培養瓶改成透明的培養袋，培養19-21天得到袋苗；(7)將步驟6)中的袋苗移出無菌培養室，放置於沙床上煉苗一周；(8)將步驟7)中袋苗洗乾淨，用0.5%多菌靈浸泡lOmin，栽種於沙床上，蓋薄膜4 一 6 天，夏天加蓋蔭網，小苗種植至少40天，抽取一定量的樣本進行RSD檢測，確定小苗的脫毒效果合格後，移栽大田或進行推廣應用。
2.根據權利要求1所述的甘蔗健康種苗的組培快繁方法，其特徵是所述分化培養基為:MS+6-BAl. Omg/L+KTO. 5 mg/L + 蔗糖 30g/L。
3.根據權利要求1所述的甘蔗健康種苗的組培快繁方法，其特徵是所述增殖培養基配方為 MS+6-BA 1. 5mg/L+KT 0. 5 mg/L + 蔗糖 30g/L+ 卡拉膠 8 g/L。
4.根據權利要求1所述的甘蔗健康種苗的組培快繁方法，其特徵是所述生根培養基配方為 MS+NAA 1 mg/L + 蔗糖 30g/L+卡拉膠 8 g/L+香蕉 80 g/L。
全文摘要
一種甘蔗健康種苗的快速繁殖方法，採用少量洗淨的甘蔗成熟種莖，52℃溫水脫毒處理30min，38℃催芽，以該腋芽為外植體誘導分化培養獲得第一代健康種苗，經PCR檢測宿根矮化病，以檢測結果陰性的小苗材料，經多代增殖培養，獲得大量健康甘蔗種苗，經一次性生根培養、煉苗、移栽沙床假植，抽樣進行宿根矮化病PCR檢測，證明甘蔗健康種苗合格後，移栽大田或推廣種植。本發明可提高甘蔗健康種苗的生產效率，兩次PCR檢測可保證甘蔗健康種苗的脫毒效果，整個生產過程短，無需經過多級苗圃擴繁，直接將組培苗用於生產或推廣應用，具有高效、品質優良、快速等特點，適合甘蔗健康種苗大規模的工廠化生產需要。
文檔編號A01H4/00GK102379243SQ20111027129
公開日2012年3月21日 申請日期2011年9月14日 優先權日2011年9月14日
發明者劉家勇, 吳才文, 吳轉娣, 張敏, 昝逢剛, 李桂珍, 鄧軍, 黃應昆 申請人:雲南省農業科學院甘蔗研究所