一類新型縮酚酸類化合物及其製法和用途的製作方法

2023-06-18 01:57:36

專利名稱：：一類新型縮酚酸類化合物及其製法和用途的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一類新型的縮酚酸類化合物的製備方法及其用途。技術背景縮酚酸，嚴格意義上是指那些兩個或者兩個以上的苯環之間由酚羥基參與形成的酯鍵相連接而形成的化合物。天然的縮酚酸類化合物主要存在於苔蘚類中，但是高等植物如石南科灌木、罌粟屬植物中也含有這類化合物。據報導，從苔蘚類植物中分離出來的一些縮酚酸類化合物具有很多的生物活性，包括抗分枝桿菌、革蘭氏陽性菌、昆蟲及線蟲等活性。另外，它們還表現出抗細胞增殖、抗癌細胞、抗HIV-1整合酶、抗病毒以及退熱止痛等作用。還有研究表明，一些縮酚酸類化合物可以通過抑制前列腺素和白細胞三烯B4的生物合成，從而有可能成為非甾體類抗炎藥。炎症(inflammation)是具有血管系統的活體組織對損傷因子所發生的防禦反應，表現為紅、腫、熱、痛。通常情況下，炎症是有益的，是人體的自動的防禦反應。在這個反應過程中，白介素8(chemokineinterleukin(IL)-8)等細胞因子起著很重要的作用。IL一8是一種多源的細胞因子，IL一1、TNF、LPS和PMA均能誘導單核細胞、巨噬細胞、成纖維細胞、內皮細胞等合成和分泌IL一8。PHA等絲裂原活化的T細胞也可產生IL一8，此外，人類多種腫瘤細胞均可表達IL一8。在一些組織發生炎症時，可以檢測到IL—8的量升高，而通過動物實驗模型研究表明，降低IL—8的量會對病變組織產生有利的作用(Sekido，N.;Mukaida,N.;Harada,A.;Nakanishi,I.;Watanabe，Y.;Matsushima,K.iVart/re(Zowtfo"」，1993,365,654.Mulligan,M.S.;Jones,M丄.；Bolanski,M.A.;Baganoff，M.P.;Deppeler,C丄.；Meyers,DM.;Ryan,U.S.;Ward,P.A.J!/mww"o/"1993,5585.)。最近，一種從產自巴西南部的植物擬愛神木的果實中分離出來的名為jaboticabin的縮酚酸類化合物，被證實具有抑制由刺激人的肺部上皮細胞所產生的IL一8的活性，因而具有一定的抗炎能力(Reynertson,K.A.;Wallace,A.M.;Adachi,S.;Gil，R.R.;Yang，H.;Basile，M丄；Armiento，J.D.;Weinstein,B.;Kennelly,E丄J！Ato./Vod2006，69,1228.)。迄今為止，人們對縮酚酸類化合物的研究局限在從含有這類化合物的植物中提取分離後再研究它們的生物活性，而關於針對性地設計合成縮酚酸類化合物的報導並不多。本發明設計併合成了一類新型的縮酚酸類化合物，並對它們抗細菌活性篩選，結果顯示這些化合物不僅可以抑制革蘭氏陽性菌株，而且有些還可以抑制革蘭氏陰性菌株，這是以前的文獻未曾報導過的。進一步地，本發明又對通過抗菌篩選出的活性好的化合物進行了抑制由細菌引起的IL一8產生量的測試，結果表明其中一個化合物具有較強的抑制由大腸桿菌刺激產生的IL一8，因而可以有潛力成為一類非甾體類抗炎藥。
發明內容本發明的目的在於提供一類新型的縮酚酸類化合物的製備方法與用途。本發明的技術方案如下一類縮酚酸類化合物，它有如下通式formulaseeoriginaldocumentpage4式中R屍-CH3或隱CH2CH3;R2=H、F、Cl或Br;R3=H、Cl、Br、OCH3、OCH2CH:或N02;R4=H、F、Cl、Br、OCH3、OCH2CH3或CH3;R產H或OCH3;11=0或1。一種製備上述縮酚酸類化合物的方法，它包括如下步驟:1.將鄰羥基苯乙酸酯溶於無水二氯甲垸中，待完全溶解後，8(TC及攪拌下慢慢加入各種R2、R3、R4和R5取代的苯甲酸或者苯乙酸類化合物，鄰羥基苯乙酸酯與苯甲酸或者苯乙酸類化合物兩者的物質的量之比為1:1.2，2.然後加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)和N，N-二環己基碳二亞胺(DCC)，回流條件下攪拌12小時停止反應，加入的DMAP與鄰羥基苯乙酸酯的物質的量之比為1:4-1:5，DCC與鄰羥基苯乙酸酯的物質的量之比為1.1:1，3.待反應液完全冷卻後，加入少量水(水的加入量可以是水與反應物鄰羥基苯乙酸酯的物質的量之比為100:1)，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離，洗脫液為乙酸乙酯:石油醚=1:2-1:5，得到上述的本發明的縮酚酸類化合物。實驗結果表明，本發明的新型的縮酚酸類化合物不僅可以抑制革蘭氏陽性菌株，而且有些還可以抑制革蘭氏陰性菌株，後者是以前的文獻未曾報導過的。本發明還對抗菌篩選出的活性好的化合物進行了抑制由細菌引起的IL一8產生量的測試，結果表明其中一個化合物具有較強的抑制由大腸桿菌刺激產生的IL一8，因而可以有潛力成為一類非甾體類抗炎藥。圖1為化合物21對由大腸桿菌誘發產生的白介素8量的抑制活性。試驗結果是5次試驗的平均值。圖2為化合物21在不同濃度下對細胞成活率的影響。試驗結果是5次試驗的平均值。具體實施方式通過以下實施例進一步詳細說明本發明，但應注意本發明的範圍並不受這些實施例的任何限制。實施例一鄰羥基苯乙酸甲酯的製備將鄰羥基苯乙酸(7.6g,50mmo1)溶於無水甲醇(50mL)中，待完全溶解後，90'C及攪拌下慢慢滴加3ml98%濃硫酸，回流條件下反應24小時後停止反應。待冷卻後，加入100mL水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離。用乙酸乙酯:石油醚=1:5進行洗脫，得到此目標化合物。白色粉末，產率90%，mp:61~62°C,&NMR(300MHz,c^-DMSO):3.54(s,2H);3.58(s，3H);6.78(m,2H);7.06(m,2H);9.47(s,1H).13CNMR(DMSO-必，3ppm):171.9，155.5,131.2,128.2,121.4,118.9,115.0，51.6，35.2.MS(ESI):167.1(C9Hu03，[M+H]+).Anal.CalcdforC9H10O3:C,65.05;H，6.07%;Found:C,65.03;H,6.10%。實施例二鄰羥基苯乙酸乙酯的製備OCH2CH3將鄰羥基苯乙酸(7.6g,50mmol)溶於無水乙醇(50mL)中，待完全溶解後，95'C及攪拌下慢慢滴加3.5ml98%濃硫酸，回流條件下反應24小時後停止反應。待冷卻後，加入100mL水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:4.5進行洗脫，得到此目標化合物，白色粉末。產率86%,mp:67~68°C;NMR(300MHz，^-DMSO):U7(t，</=7.1Hz，3H);3.53(s，2H);4.01(m,2H);6.75(m,2H);7.07(m,2H);9.46(s，1H).13CNMR(DMSO-浙<5ppm):171.6,155.3,131.8,127.9,121.8,118.3,115.4，51.5,35.8,14.3.MS(ESI):181.1(C10H13O3,[M+H]+).Anal.CalcdforC10H12O3:C，65.65;H,6.71%;Found:C，65.69;H，6.74%。實施例三4-氟苯乙酸-2-(甲氧羰基甲基)苯酚酯(化合物l)的製備。OCH3將實施例一得到的產物鄰羥基苯乙酸甲酯(1.66g,10mmol)溶於無水二氯甲垸(50mL)中，待完全溶解後，8(TC及攪拌下慢慢加入4-氟苯乙酸(1.85g，12mmol)。然後加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環己基碳二亞胺(DCC)(2.26g，11mmol),回流條件下攪拌12小時停止反應。待完全冷卻後，加入100mL水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離，用乙酸乙酯石油醚=1:5，洗脫，得到目標化合物，淡黃色油狀物。產率89。/。,111NMR(300MHz，^-DMSO):3.54(s,2H);3.55(s，3H);3.95(s,2H);7.20(m，4H);7.32(m，2H);7,41(m,2H).13CNMR(DMSO-瓶(5ppm):170.8,169.6，149.2,131.7，130.1,128.2,127.1,126.1，122.6，115.2，51.4，35.4.MS(ESI):303.1(C17H16F04，[M+H]+).Anal.CalcdforC17H15F04:C,67.54;H,5.00%;Found:C，67.60;H，5.05%。實施例四4-氯苯乙酸-2-(甲氧羰基甲基)苯酚酯(化合物2)的製備。formulaseeoriginaldocumentpage7將實施例一得到的產物鄰羥基苯乙酸甲酯(1.66g,10mmd)溶於無水二氯甲垸(50mL)中，待完全溶解後，8(TC及攪拌下慢慢加入4-氯苯乙酸(2.04g，12mmol)。然後加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg，2.03mmol)和N，N-二環己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時停止反應。待完全冷卻後，加入IOOmL水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無7jCNa2S04乾燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離，用乙酸乙酯石油醚=1:5洗脫，得到目標化合物，淡黃色油狀物。產率86%，'HNMR(300MHz,^-DMSO):3.54(s,2H);3.55(s,3H);3.96(s,2H);7.13(m，1H);7.22(m，1H);7.32(m,2H);7.41(m,4H).13CNMR(DMSO-必,Sppm):170.7,169.3,149.1,132.9,132.1，131.5,128.4,127.1，126.1，122.6，51.8,35.3.MS(ESI):319.1(C17Hi6C104,[M+H]+).Anal.CalcdforC17H15C104:C，65.06;H，4.74%;Found:C,65.09;H，4.79%。實施例五4-溴苯乙酸-2-(甲氧羰基甲基)苯酚酯(化合物3)的製備。OCH3將實施例一得到的產物鄰羥基苯乙酸甲酯(1.66g，10mmo1)溶於無水二氯甲烷(50mL)中，待完全溶解後，80。C及攪拌下慢慢加入4-溴苯乙酸(2.56g，12mmol)。然後加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時停止反應。待完全冷卻後，加入IOOmL水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離，用乙酸乙酯石油醚=1:5洗脫，得到目標化合物。淡黃色油狀物，產率88%，^NMR(300MHz，^-DMSO):3.55(s,2H);3.59(s,3H);3.95(s,2H);7.14(m，1H);7.22(m,1H);7.32(m,4H);7.56(d,/=1.8Hz，2H).13CNMR(DMSO-必，(5ppm):170.6，169.2,149.0,133.3,131.9,131.6,128.4，126,9,122.5,114.9,51.8，35.2.MS(ESI):363.0(C17H16Br04,[M+H]+).Anal.CalcdforC17H15Br04:C,56.20;H,4.16%;Found:C,56.14;H，4.21%。實施例六3-氯苯乙酸-2-(甲氧羰基甲基)苯酚酯(化合物4)的製備。formulaseeoriginaldocumentpage8將實施例一得到的產物鄰羥基苯乙酸甲酯(1.66g,10mmol)溶於無水二氯甲垸(50mL)中，待完全溶解後，8CrC及攪拌下慢慢加入3-氯苯乙酸(2.04g,12mmol)。然後加入N,N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環己基碳二亞胺(DCC)(2.26g，11mmol)，回流條件下攪拌12小時停止反應。待完全冷卻後，加入100mL水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離，用乙酸乙酉旨:石油醚=1:5洗脫，得到目標化合物。淡黃色油狀物，產率84%,力NMR(300MHz，^-DMSO):3.56(s,2H);3.59(s,3H);3.99(s,2H);7.15(m，1H);7.23(m,1H);7.37(m，4H);7.47(s,1H).13CNMR(DMSO-必，5ppm):170.8,169.3，149.1，136.3，133.2,131.7，130.3，129.7,128.4,127.2,127.0,126.2,122.5,118.9，115.0,51.5,35.2.MS(ESI):319.0(C17H16C104,[M+H]+).Anal.CalcdforC17H15C104:C,64.06;H，4.74%;Found:C,64.01;H,4.69%。實施例七3-溴苯乙酸-2-(甲氧羰基甲基)苯酚酯((化合物5)的製備。OCH3將實施例一得到的產物鄰羥基苯乙酸甲酯(1.66g，10mmol)溶於無水二氯甲烷(50mL)中，待完全溶解後，8(TC及攪拌下慢慢加入3-溴苯乙酸(2.56g,12mmol)。然後加入N，N-二甲基氨基批啶(DMAP)(248mg，2.03mmol)和N，N-二環己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,Ummol)，回流條件下攪拌12小時停止反應。待完全冷卻後，加入100mL水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標化合物。淡黃色油狀物，產率89%,&顧R(300MHz，c4-DMSO):3.35(s，2H);3.36(s，3H);4.01(s，2H);7.14(m，1H);7.23(m,1H);7.35(m，4H);7.50(m，1H);7.62(s,1H).13CNMR(DMSO隱浙3ppm):170.7，169.3，149.1，136.6,132.6,131.6,131.1,130.1，128.9,128.2,127.0，126.2,122.6，119.0，115.151.5，35.3.MS(ESI):363.0(C17H16Br04,[M+H]+).Anal.CalcdforC17H15Br04:C,56.22;H，4.16%;Found:C,56.28;H，4.20%。實施例八3-甲氧基苯乙酸-2-(甲氧羰基甲基)苯酚酯(化合物6)的製備。將實施例一得到的產物鄰羥基苯乙酸甲酯(1.66g,10mmol)溶於無水二氯甲垸(50mL)中，待完全溶解後，80。C及攪拌下慢慢加入3-甲氧基苯乙酸(1.99g，12mmo1)。然後加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg，2.03mmol)和N，N-二環己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時停止反應。待完全冷卻後，加入100mL水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標化合物。淡黃色油狀物，產率83%，NMR(300畫z，^-DMSO):3.54(s,2H);3.55(s,3H);3.76(s，3H);3.90(s,2H);6.87(m,1H);6.94(m，2H);7.09(m,IH);7.28(m,4H).13CNMR(DMSO-必,5ppm):170.8，169.5，159.6,149.2,135.3，131.6,131,1,129.6,128.2,127.0,122.6,121.8，115.4,112.7,55.1，51.5，35.2.(ESI):363.0(C18H1905,[M+H]+).Anal.CalcdforCi8H1805:C,68.78;H,5.77%;Found:C，68.81;H，5.73%。實施例九3，4-二甲氧基苯乙酸-2-(甲氧羰基甲基)苯酚酯(化合物7)的製備。將實施例一得到的產物鄰羥基苯乙酸甲酯(1.66g，10mmol)溶於無水二氯甲烷(50mL)中，待完全溶解後，8(TC及攪拌下慢慢加入3，4-二甲氧基苯乙酸(2.35g,12mmol)。然後加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg，2.03mmol)和N,N-二環己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,llmmol)，回流條件下攪拌12小時停止反應。待完全冷卻後，加入100mL水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標化合物。白色粉末，產率85%,mp:6566°C，NMR(300MHz，^-DMSO):3.49(s,2H);3.51(s,3H);3.72(s，3H);3.73(s,3H);3.82(s,2H);6.84(m,1H);6.90(m，1H);6.94(m，1H);7.08(m，1H);7.18(m,1H);7.30(m,2H).13CNMR(DMSO-必，5ppm):170.8，169.8,149.1，148.2,131.6,128.4,127.0，126.3，126.1,122.6，121.8，113.5,55.6，51.8,35.2.MS(ESI):345.1(C19H2I06，[M+H]+).Anal.CalcdforC19H20O6:C,66.27;H，5.85%;Found:C，66.23;H,5.89%。實施例十3,4-二乙氧基苯乙酸-2-(甲氧羰基甲基)苯酚酯(化合物8)的製備。formulaseeoriginaldocumentpage10將實施例一得到的產物鄰羥基苯乙酸甲酯(1.66g，10mmol)溶於無水二氯甲烷(50mL)中，待完全溶解後，8(TC及攪拌下慢慢加入3，4-二乙氧基苯乙酸(1.39g,12mmol)。然後加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,llmmol)，回流條件下攪拌12小時停止反應。待完全冷卻後，加入IOOmL水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標化合物。黃色粉末，產率82%,mp:92~93°C,^NMR(300MHz，^陽DMSO):1.24(s，3H);1.33(s,3H);3.52(s,2H);3.54(s,3H);3.83(s，2H);3.92(s,2H);3.95(s,2H);6.83(m，1H);6.94(m,2H);7.09(m，1H);7.21(m，1H);7.30(m，2H).13CNMR(DMSO陽必，<5卯m):170.8，169.9,149.2,148.4，147.7,131.7,128.5，12.70，126.3，12.61,122.6,122.0，115.3，113.9，64.1，51.8，35.8,31.9，30.6,25.6，25.3,24.6，15.0.MS(ESI):373.1(C21H2506,[M+H]+).Anal.CalcdforC21H2406:C,67.73;H,6.50%;Found:C，67.78;H,6.56%。實施例十一4-甲基苯甲酸-2-(甲氧羰基甲基)苯酚酯(化合物9)的製備formulaseeoriginaldocumentpage10將實施例一得到的產物鄰羥基苯乙酸甲酯(1.66g，10mmol)溶於無水二氯甲烷(50mL)中，待完全溶解後，8(TC及攪拌下慢慢加入4-甲基苯甲酸(1.63g，12mmol)。然後加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg，2.03mmol)和N，N-二環己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時停止反應。待完全冷卻後，加入100mL水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離，用乙酸乙酯石油醚=1:5洗脫，得到目標化合物。白色粉末，產率84%,mp:59~60°C,巾NMR(300MHz,&-DMSO):2.46(s,3H);3.47(s，3H);3.68(s,2H);7.27(m,2H);7.39(m，4H);7.98(d,/=8.0Hz，2H).13C畫R(DMSO-瓶3ppm):170.8，164.0,formulaseeoriginaldocumentpage11。實施例十二3-硝基苯甲酸-2-(甲氧羰基甲基)苯酚酯(化合物IO)的製備將實施例一得到的產物鄰羥基苯乙酸甲酯(1.66g,10mmol)溶於無水二氯甲烷(50mL)中，待完全溶解後，8(TC及攪拌下慢慢加入3-硝基苯甲酸(1.90g,12mmol)。然後加入N，N-二甲基氨基吡咬(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時停止反應。待完全冷卻後，加入100mL水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標化合物。白色粉末，產率82%,formulaseeoriginaldocumentpage11實施例十三2-氯苯甲酸-2-(甲氧羰基甲基)苯酚酯(化合物ll)的製備將實施例一得到的產物鄰羥基苯乙酸甲酯(1.66g,10mmol)溶於無水二氯甲烷(50mL)中，待完全溶解後，80'C及攪拌下慢慢加入2-氯苯甲酸(1.87g，12mmol)。然後加入N，N-二甲基氨基妣啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時停止反應。待完全冷卻後，加入IOOmL水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標化合物。淡黃色油狀物，產率84%，NMR(300MHz，^-DMSO):3.51(s，3H);3.71(s,2H》7.31(m，2H);7.43(m,2H);7.58(m,1H);7.67(m,2H);8.06(m，1H).13CNMR(DMSO-必,<5ppm):170.8，163.1,149.1,134.1，133.0,131.9,131.3，128.8,128.7,127,6,127.2,126.5,122.7,51.8,35.8.MS(ESI):305.0(C16H14C104，[M+H]+).Anal.CalcdforC16H13C104:C,63.06;H,4.30%;Found:C,63.02;H,4.32%。實施例十四4-氯苯甲酸-2-(甲氧羰基甲基)苯酚酯(化合物12)的製備CIOCH3將實施例一得到的產物鄰羥基苯乙酸甲酯(1.66g，10mmol)溶於無水二氯甲垸(50mL)中，待完全溶解後，8(TC及攪拌下慢慢加入4-氯苯甲酸(1.87g,12mmol)。然後加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2,03mmol)和N，N-二環己基碳二亞胺(DCC)(2.26g，11mmol)，回流條件下攪拌12小時停止反應。待完全冷卻後，加入IOOmL水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸千後用矽膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標化合物。白色粉末，產率86。/。,mp:82~83°C,NMR(300MHz，^-DMSO):3.47(s,3H);3.69(s，2H);7.30(m,2H);7.41(m，2H);7.30(m，2H);7.41(m,2H);7.70(d，/=8.4Hz,2H);8.10(d,/=8.4Hz，2H).13CNMR(DMSO-必，3ppm):170.8,163.3，149.1,139.3,131.8，131.7，129.3,129.1,128.6，128.1,127.8,127.2，126.4，122.8,51.8,35.9.MS(ESI):305.0(C16H14C104，[M+H]+).Anal.CalcdforC16H13C104:C,63.06;H，4.30%;Found:C,63.08;H,4.29%。實施例十五3，5-二甲氧基苯甲酸-2-(甲氧羰基甲基)苯酚酯(化合物13)的製備formulaseeoriginaldocumentpage13將實施例一得到的產物鄰羥基苯乙酸甲酯(1.66g,10mmol)溶於無水二氯甲烷(50mL)中，待完全溶解後，8(TC及攪拌下慢慢加入3，5-二甲氧基苯甲酸(2.18g，12mmol)。然後加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg，2.03mmol)和N,N-二環己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,llmmol)，回流條件下攪拌12小時停止反應。待完全冷卻後，加入100mL水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標化合物。白色粉末，產率85°/。，mp:86~87°C,&NMR(300MHz,^-DMSO):3.49(s,3H);3.69(s,2H);3.84(s,6H);6.88(t,J=2.4Hz，1H);7.20(d,/=2.4Hz,2H);7.28(m,2H);7.39(m,2H).13C麗R(DMSO國必，3ppm):170.8,163.8,160.8,149.2，131.8，130.9,128.6,127.2，126.3,122.8，107.5,106.1,55,8,51.8,35.9.MS(ESI):305.0(C18H1906,[M+H]+).Anal.CalcdforC18H1806:C,65.45;H,5.49%;Found:C,65.41;H，5.53%。實施例十六4-氟苯乙酸-2-(甲氧羰基甲基)苯酚酯(化合物14)的製備。將實施例二得到的產物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g,10mmol)溶於無水二氯甲烷(50mL)中，待完全溶解後，85。C及攪拌下慢慢加入4-氟苯乙酸(1.85g，12mmol)。然後加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg，2.03mmol)和N,N-二環己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時停止反應。待完全冷卻後，加入100mL水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離，用乙酸乙酯石油醚=1:5洗脫，得到目標化合物。淡黃色油狀物，產率84%,]HNMR(300MHz,A-DMSO):3.15(t，/=9.1Hz,3H);3.52(s，2H);3.96(s，2H);4.02(q，J=8.1Hz,2H);7.14(t，■/=4.0Hz,2H);7.22(t,/=6.6Hz,2H);7.32(m,2H);7.42(q,/=5.2Hz,2H).13CNMR(DMSO-必，3ppm):170.3,169.6，163.2,160.0，149.1，131.7，131.6,130.2，128.4，128.2,127.1,126.1,122.6,115.5,115.2,60.5，35.5，14.1.MS(ESI):305.0(CsH18F04,[M+H]+).Anal.CalcdforC18H17F04:C，68.35;H,5.42%;Found:C，68.39;H,5.48%。實施例十七4-氯苯乙酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物15)的製備。formulaseeoriginaldocumentpage14o將實施例二得到的產物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g,10mmol)溶於無水二氯甲烷(50mL)中，待完全溶解後，85'C及攪拌下慢慢加入4-氯苯乙酸(2.04g,12mmol)。然後加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環己基碳二亞胺(DCC)(2.26g，11mmol)，回流條件下攪拌12小時停止反應。待完全冷卻後，加入100mL水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離，用乙酸乙酯石油醚二l:5洗脫，得到目標化合物。淡黃色油狀物，產率87%,&NMR(300MHz，A-DMSO):1.13(t,/=8.1Hz,3H);3.52(s，2H);3.96(s,2H);4.02(q，J=8.4Hz,2H);7.13(d,8.0Hz,1H);7.22(m，1H);7.32(m,2H);7.42(m,4H).13CNMR(DMSO-必,Jppm):170.3,169.4,149.1,133.0，132.2,131.7,128.6,128.4,127.1,126.1，122.6,60.6,35.6,14丄MS(ESI):333.0(C18H18C104，[M+H]+).Anal.CalcdforC18H17C104:C，64.97;H，5.15%;Found:C,64.91;H,5.11。/o。實施例十八4-溴苯乙酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物16)的製備。將實施例二得到的產物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g，10mmol)溶於無水二氯甲烷(50mL)中，待完全溶解後，85。C及攪拌下慢慢加入4-溴苯乙酸(2.56g,12mmol)。然後加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時停止反應。待完全冷卻後，加入100mL水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標化合物。淡黃色油狀物，產率82%,〗HNMR(300MHz,4-DMS0):1.14(t,/=8.1Hz,3H);3.52(s,2H);3.96(s，2H);4.01(q,/=8.4Hz,2H);7.13(d，J=8.4Hz,1H);7.21(t，J=7.5Hz,1H);7.33(t,/=8,0Hz，4H);7.56(d,■/=8.4Hz,2H).13CNMR(DMSO-必,<5ppm):170.3,169.2,149.1，133.4，132.0,131.6,131.5，128.4,127.1，126.1，122.6，120.6,60.6,35.6，14.2.MS(ESI):377.0(C18H18Br04，[M+H]+).Anal.CalcdforC18H17Br04:C,57.31;H,4.54%;Found:C,57.38;H,4.58%。實施例十九3-氯苯乙酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物17)的製備。將實施例二得到的產物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g,10mmol)溶於無水二氯甲垸(50mL)中，待完全溶解後，85。C及攪拌下慢慢加入3-氯苯乙酸(2.04g,12mmol)。然後加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg，2.03mmol)和N，N-二環己基碳二亞胺(DCC)(2.26g，11mmol)，回流條件下攪拌12小時停止反應。待完全冷卻後，加入100mL水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離，用乙酸乙酯石油醚=1:5洗脫，得到目標化合物。淡黃色油狀物，產率85%,^NMR(300MHz,c4-DMSO):1.16(t,J=8.6Hz，3H);3.54(s,2H);3.99(s,2H);4.06(q，《/=10.0Hz,2H);7.15(d,J=7.9Hz,1H);7.22(t,■/=7.3Hz,1H);7.37(m,5H);7.48(s,1H).13CNMR(DMSO-必，Sppm):170.3，169.2，149.1，136.4,133.2,131.7,131.1,130.4,129.7，128.5，128.4,127.2,127.1，126.2，122.6,60.6,35.5,14.2.MS(ESI):333.0(Ci8Hi8C104，[M+H〗+).Anal.CalcdforC18H17C104:C,64.97;H,5.15%;Found:C,64.93;H，5.12%。實施例二十3-溴苯乙酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物18)的製備。將實施例二得到的產物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g，10mmol)溶於無水二氯甲烷(50mL)中，待完全溶解後，85。C及攪拌下慢慢加入3-溴苯乙酸(2.56g,12mmol)。然後加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環己基碳二亞胺(DCC)(2.26g，11mmol)，回流條件下攪拌12小時停止反應。待完全冷卻後，加入100mL水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離，用乙酸乙酯石油醚=1:5洗脫，得到目標化合物。淡黃色油狀物，產率83%,^NMR(300MHz,^-DMSO):1.17(t,/=8.1Hz，3H);3.55(s,2H);3.99(s,2H);4.06(q,/=2.0Hz,2H);7.11(m,2H);7.23(m，2H);7.35(m，2H);7.50(m,2H).13C雨R(固SO-必，<5ppm):171.4，170.0，169.3,155.6，149.1，136.7,132.7,131.7,131.1，130.7,130.4,130.1,129.6,129.1,128.9，128.4,128.2,127.1,126.2,122.6,121.8,121.5,118.9，115.0,60.6，60.1，48.0,35.5，14.3.MS(ESI):377.0(C18H18Br04,[M+H]+).Anal.CalcdforC18H17Br04:C，57.31;H，4.54%;Found:C,57.37;H,4.59%。實施例二十一3-甲氧基苯乙酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物19)的製備。formulaseeoriginaldocumentpage16將實施例二得到的產物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g，10mmol)溶於無水二氯甲烷(50mL)中，待完全溶解後，85。C及攪拌下慢慢加入3-甲氧基苯乙酸(1.99g,12mmol)。然後加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環己基碳二亞胺(DCC)(2.26g，11mmol)，回流條件下攪拌12小時停止反應。待完全冷卻後，加入100mL水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標化合物。淡黃色油狀物，產率86%,&NMR(300MHz，^-DMSO):1.14(t,J=7.1Hz，3H);3.52(s，2H);3.76(s,3H);3.91(s,3H);4.03(q，/=6.9Hz,2H);6.89(m，2H);7.12(d，/=7.9Hz,1H);7.30(m,4H).13CNMR(DMSO-必，<5ppm):170.3,169,5,159.6，149.2，135.3,131.7,131.2,129.7，128.4,127.1，126.1,122.6,121.9,115.4,112.7,60.5,55.1，35.5,14.3.MS(ESI):377.0(C19H2105,[M+H]+).Anal.CalcdforC19H20O5:C，69.50;H,6.14%;Found:C,69.54;H，6.17%。實施例二十二3，4-二甲氧基苯乙酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物20)的製備。formulaseeoriginaldocumentpage16將實施例二得到的產物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g，10mmol)溶於無水二氯甲烷(50mL)中，待完全溶解後，85。C及攪拌下慢慢加入3，4-二甲氧基苯乙酸(2.35g,12mmol)。然後加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環己基碳二亞胺(DCC)(2.26g，11mmol)，回流條件下攪拌12小時停止反應。待完全冷卻後，加入100mL水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標化合物。淡黃色油狀物，產率85%,^NMR(300MHz，^隱DMSO):1.16(t,/=7.1Hz，3H);3.53(s,2H);3.74(s，3H);3.76(s，3H);3.86(s，2H);4.02(q，J=4.2Hz，2H);6.94(m,3H);7.11(m，1H);7.22(tn,1H);7.32(m,1H).13CNMR(DMSO-必,(5ppm):170.4,169.9,149.2,148.9,148.2,131.6,131.2，128.4,128.2,127.1,126.2，126.1，122.6,121.8,118.9,115.0,113.4，112.0，60.5，55.7,35.5,14.3.MS(ESI):377.0(C20H23O6，[M+H]+).Anal.CalcdforC20H22O6:C,67.03;H,6.19%;Found:C,67.09;H，6.23%。實施例二十三3，4-二乙氧基苯乙酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物21)的製備。formulaseeoriginaldocumentpage17將實施例二得到的產物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g，10mmol)溶於無水二氯甲垸(50mL)中，待完全溶解後，85。C及攪拌下慢慢加入3，4-二乙氧基苯乙酸(1.39g，12mmol)。然後加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時停止反應。待完全冷卻後，加入100mL水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標化合物。黃色油狀物，產率81%,&NMR(300MHz，^-DMSO):1.13(t,/=7.1Hz,3H);1.31(q,/=2.4Hz,3H);1.33(q,>2.4Hz，3H);3.50(s,2H);3.82(s,2H);3.99(m，6H);6.84(m，1H);6.93(m,2H);7.11(m，1H);7.22(m,1H);7.32(m,1H).l3CNMR(DMSO-必，(5ppm):170.3，169.9，149.2,148.3，147.6,131.6,128.4,127.1,126.3,126.1,122.6，121.9,115.1，113.6，6線60.5,35.5，15.0，14.1.MS(ESI):387.1(C22H2706,[M+H]+).Anal.CalcdforC22H2606:C,68.38;H，6.78%;Found:C,68.36;H,6.74%。實施例二十四4-甲基苯甲酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物22)的製備。formulaseeoriginaldocumentpage18將實施例二得到的產物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g,10mmol)溶於無水二氯甲垸(50mL)中，待完全溶解後，85'C及攪拌下慢慢加入4-甲基苯甲酸(1.63g,12mmol)。然後加入N，N-二甲基氨基吡徒(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時停止反應。待完全冷卻後，加入IOOmL水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標化合物。黃色粉末，產率85Q/。，mp:55~56°C,^畫R(300MHz,c4-DMS0):1.01(t,/=7.1Hz,3H);2.43(s,3H);3.64(s，2H);3.91(q，/=8.1Hz，2H);7.28(m，2H);7.41(m，4H);7.99(d,8.3Hz,2H).13CNMR(DMSO-必,(5ppm):170.4，166.9，163.0,149.0,134.3,132.9,132.7，132.0,131.4,131.0,130.8,130.6,128.7,127.7,127.4，127.2，126.5，122.7,60.5,36.0,14.0.MS(ESI):299.1(C18H1904,[M+H]+).Anal.CalcdforCi8Hi804:C,72.47;H,6.08%;Found:C,72.43;H,6.03%。實施例二十五3-硝基苯甲酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物23)的製備。formulaseeoriginaldocumentpage18將實施例二得到的產物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g，10mmol)溶於無水二氯甲'烷(50mL)中，待完全溶解後，85X:及攪拌下慢慢加入3-硝基苯甲酸(1.90g,12mmol)。然後加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時停止反應。待完全冷卻後，加入IOOmL少量水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離，用乙酸乙酯石油醚=1:5洗脫，得到目標化合物。白色粉末，產率88%,mp:73~74°C,&NMR(300MHz，c4-DMSO):0.99(t，/=7.1Hz,3H);3.71(s，2H);3.94(q,/=7.1Hz,3H);7.31(m，1H);7.42(m,3H);7.93(t,/=8.0Hz，1H);8.52(d,J=7.9Hz,1H);8.59(d>8.3Hz，1H);8.76(m,1H).13CNMR(DMSO-必，<5ppm):170.4,162.4,149.0,148.2,136.0,131.9，131.1,130.7，128.6，127.2,126.6，124.2,122.8，60.6,36.1，14.0.MS(ESI):330.0(C17H16N06，[M+H]+).Anal.CalcdforC17H15N06:C，62.00;H，4.59;N,4.25%;Found:C,62.07;H,4.62;N,4.28%。實施例二十六2-氯苯甲酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物24)的製備。將實施例二得到的產物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g，10mmol)溶於無水二氯甲垸(50mL)中，待完全溶解後，85。C及攪拌下慢慢加入2-氯苯甲酸(1.87g,12mmol)。然後加入N,N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時停止反應。待完全冷卻後，加入100mL水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離，用乙酸乙酯石油醚=1:5洗脫，得到目標化合物。白色粉末，產率86。/。，mp:7778。C，'H固R(300MHz，^-DMSO):1.01(t，6.9Hz,3H);3.69(s,2H);3.94(q,/=7.1Hz,3H);7.30(m，2H);7.41(m,3H);7.67(m,2H);8.08(d，《/=7.5Hz，1H).13CNMR(DMSOJ,(5ppm):170.4，163.7，160.8,149.2,131.8，130.9,128.5，127.3,126.3，122.8，107.6，106.0，60.5，55.8,36.1，13.9.MS(ESI):319.0(C17H16C104,[M+H]+).Anal.CalcdforC17H15C104:C，64.06;H，4.74%;Found:C,64.08;H,4.78%。實施例二十七4-氯苯甲酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物25)的製備。formulaseeoriginaldocumentpage20將實施例二得到的產物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g,10mmol)溶於無水二氯甲烷(50mL)中，待完全溶解後，85。C及攪拌下慢慢加入4-氯苯甲酸(1.87g,12mmol)。然後加入N,N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg，2.03mmol)和N，N-二環己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol),回流條件下攪拌12小時停止反應。待完全冷卻後，加入100raL水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離，用乙酸乙酯石油醚=1:5洗脫，得到目標化合物。黃色油狀物，產率85。/。？HNMR(300MHz,^-DMSO):0.99(t,J=7.1Hz,3H);3.68(s,2H);3.92(q,J=7.1Hz，2H);7.29(m，2H);7.41(m，2H);7.68(m，2H);8.12(m,2H).13CNMR(DMSO-必，3ppm):170.8，163.3，149.1，139.3,131.8,131.7，129.3，129.1,128.6,128.1，127.8，127.2,126.4,122.8，51.8，35.9,14.2.MS(ESI):319.0(C17H16C104，[M+H]+).Anal.CalcdforC17H15C104:C，64.06;H,4.74%;Found:C,64.11;H，4.78%。實施例二十八3，5-二甲氧基苯甲酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物26)的製備。OCH3將實施例二得到的產物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g，10mmol)溶於無水二氯甲'垸(50mL)中，待完全溶解後，85。C及攪拌下慢慢加入3，5-二甲氧基苯甲酸(2.18g,12mmol)。然後加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時停止反應。待完全冷卻後，加入100mL水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標化合物。白色粉末，產率88%,mp:75~76°C，NMR(300MHz,^-DMSO):1.01(t,/=7.1Hz，3H);3.67(s,2H);3.84(s,6H);3.93(q,J=7.1Hz，2H);6.88(t,/=2.4Hz，1H);7.21(d，/=2.4Hz,2H);7.28(m，2H);7.40(m,2H).13CNMR(DMSO-必,3ppm):170.4,164.0,149.3，144.8，131.8,130.0,129.7,128.5,127.4,126.2,122.9,60.5,36.1,21.4,14.0.MS(ESI):345.1(C19H2i06，[M+H]+).Anal.CalcdforC19H20O6:C，66.27;H,5.85%;Found:C,66.23;H，5.87%。實施例二十九2-氟苯甲酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物27)的製備。將實施例二得到的產物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g,10mmol)溶於無水二氯甲垸(50mL)中，待完全溶解後，85'C及攪拌下慢慢加入2-氟苯甲酸(1.85g,12mmol)。然後加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時停止反應。待完全冷卻後，加入100mL水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無水Na2S04千燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標化合物。淡黃色油狀物，產率80%,if!NMR(300MHz,A-DMSO):3.14(t，/=9.1Hz,3H);3.51(s,2H);4.08(q,J=8.1Hz，2H);7.17(t，《/=4.0Hz，2H);7.22(t,/=6.6Hz,2H);7.36(m,2H);7.42(q,/=5.2Hz，2H).13C畫R(DMSO-必，(5ppm):170.3，169.6,163.2,160.0，149.1,131.7，131.6，130.2,128.4，128.2,127.1,126.1,122.6，115.5,115.2，60.5,35.5,14.1.MS(ESI):305.0(C18H18F04,[M+H]+).Anal.CalcdforC18H17F04:C,68.35;H,5.42%;Found:C，68.31;H，5.46%。實施例三十3-氯苯甲酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物2S)的製備。formulaseeoriginaldocumentpage22OCH2CH3將實施例二得到的產物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g，10mmol)溶於無水二氯甲垸(50mL)中，待完全溶解後，85°<3及攪拌下慢慢加入3-氯苯甲酸(1.87g，12mmol)。然後加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg，2.03mmol)和N，N-二環己基碳二亞胺(DCC)(2.26g，11mmol)，回流條件下攪拌12小時停止反應。待完全冷卻後，加入100mL水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸千後用矽膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標化合物。淡黃色油狀物，產率83%,^NMR(300MHz，A-DMSO):1.01(t，J=6.9Hz,3H);3.94(q,/=7.1Hz，3H);7.30(m,2H);7.41(m，3H);7.67(m，2H);8.08(d,J=7.5Hz,1H).13CNMR(DMSO-必，<5ppm):170.4，163.7，160.8,149.2，131.8，130.9,128.5,127.3，126.3，122.8，107.6,106.0,60.5，55.8，36.1，13.9.MS(ESI):319.0(C17H16C104,[M+H]+).Anal.CalcdforC17H15C104:C，64.06;H，4.74%;Found:C，64.09;H,4.71%。實施例三十一2-溴苯甲酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物29)的製備。formulaseeoriginaldocumentpage22將實施例二得到的產物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g，10mmol)溶於無水二氯甲垸(50mL)中，待完全溶解後，85'C及攪拌下慢慢加入2-溴苯甲酸(2.56g，12mmol)。然後加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環己基碳二亞胺(DCC)(2.26g，11mmol)，回流條件下攪拌12小時停止反應。待完全冷卻後，加入100mL水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標化合物。淡黃色油狀物，產率85%,^NMR(300MHz,^-DMSO):1.14(t,/=8.1Hz,3H);3.52(s，2H);4.01(q,/=8.4Hz，2H);7.13(d，J=8.4Hz，1H);7.21(t,J=7.5Hz，1H);7.33(t,/=8.0Hz,4H);7.56(d,/=8.4Hz,2H)."CNMR(DMSO-必，(5ppm):170.3，169.2,149.1,133.4，132.0,131.6，131.5，128.4，127.1,126.1,122.6,120.6,60.6,35.6,14.2.MS(ESI):377.0(C18H18Br04，[M+H]+).Anal.CalcdforC18H17Br04:C,57.31;H,4.54%;Found:C,57.34;H,4.57%。實施例三十二2-硝基苯甲酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物30)的製備。將實施例二得到的產物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g,10mmol)溶於無水二氯甲垸(50mL)中，待完全溶解後，85'C及攪拌下慢慢加入2-硝基苯甲酸(l.卯g，12mmo1)。然後加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)禾tlN，N-二環己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時停止反應。待完全冷卻後，加入IOOmL水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標化合物。無色油狀物，產率83%，&NMR(300MHz,c^-DMSO):0.99(t,J=7.1Hz，3H);3.73(s，2H);3.92(q，/=7.1Hz,3H);7.34(m,1H);7.45(m，3H);7.94(t,/=8.0Hz，1H);8.52(d，J=7.9Hz,1H);8.59(d，/=8.3Hz,1H);8.76(m,1H).13CNMR(DMSO-必，<5ppm):170.4，162.4,149.0，148.2，136.0,131.9,131.1，130.7,128.6，127.2，126.6,124.2,122.8,60.6，36.1，14.0.MS(ESI):330.0(C17Hi6N06,[M+H]+).Anal.CalcdforC17H15N06:C,62.00;H，4.59;N,4.25%;Found:C,62.02;H,4.64;N:4.22%。實施例三十三2-甲氧基苯甲酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物31)的製備。formulaseeoriginaldocumentpage24將實施例二得到的產物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g,10mmol)溶於無水二氯甲垸(50mL)中，待完全溶解後，85"及攪拌下慢慢加入2-甲氧基苯甲酸(1.90g,12mmo1)。然後加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時停止反應。待完全冷卻後，加入100mL水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標化合物。淡黃色油狀物，產率80%,&NMR(300MHz,^-DMSO):1.14(t,/=7.1Hz,3H);3.75(s，3H);3.93(s，3H);4-06(q，《/=6.9Hz,2H);6.86(m,2H);7.12(d,/=7.9Hz,1H);7.30(m,4H).13CNMR(DMSO-必,<5ppm):170.3,169.5,159.6，149.2,135.3,131.7,131.2，129.7,128.4,127.1，126.1,122.6,121.9,115.4,112.7,60.5,55.1，35.5，14.3.MS(ESI):377.0(C19H2105,[M+H]+).Anal.CalcdforC19H20O5:C,69.50;H,6.14%;Found:C，69.56;H,6.18%。實施例三十四4-硝基苯甲酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物32)的製備。NO將實施例二得到的產物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g，10mmol)溶於無水二氯甲烷(50mL)中，待完全溶解後，85。C及攪拌下慢慢加入4-硝基苯甲酸(1.90g,12mmol)。然後加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg，2.03mmol)和N，N-二環己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時停止反應。待完全冷卻後，加入IOOmL水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標化合物。無色油狀物，產率83%,'HNMR(300MHz,^-DMSO):0.99(t,/=7.1Hz,3H);3.71(s，2H);3.94(q,J=7.1Hz,3H);7.31(m,1H);7.42(m,3H);7.93(t,/=8.0Hz,1H);8.52(d，《/=7.9Hz,1H);8.59(d,/=8.3Hz，1H);8.76(m,1H).13CNMR(DMSO-必，3ppm):170.4,162.4,149.0，148.2,136.0，131.9,131.1,130.7,128.6,127.2,126.6,124.2，122.8，60.6,36.1,14.0.MS(ESI):330.0(C17H16N06,[M+H]+).Anal.CalcdforC17H15N06:C，62.00;H,4.59;N,4.25%;Found:C，62.03;H,4.61;N,4.27%。實施例三十五2-甲基苯甲酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物33)的製備。將實施例二得到的產物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g,10mmol)溶於無水二氯甲垸(50mL)中，待完全溶解後，85'C及攪拌下慢慢加入2-甲基苯甲酸(1.63g,12mmol)。然後加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg，2.03mmol)禾卩N，N-二環己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時停止反應。待完全冷卻後，加入IOOmL水，然後用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗兩次，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標化合物。黃色油狀物，產率81%,mp:55~56°C,&NMR(300MHz,^-DMSO):1.01(t,■/=7.1Hz,3H);2.45(s，3H);3.92(q,J=8.1Hz,2H);7.27(m,2H);7.41(m，4H);7.99(d,8.3Hz,2H).13CNMR(DMSO-必,3ppm):170.4,166.9,163.0，149.0,134.3,132.9,132.7,132.0,131.4，131.0，130.8,130.6，128.7,127.7,127.4，127.2,126.5,122.7,60.5,36.0,14.0.MS(ESI):299.1(C18H1904,[M+H]+).Anal.CalcdforC18H1804:C,72.47;H,6.08%;Found:C,72.40;H,6.05%。實施例三十六上述實施例製備的縮酚酸類化合物列於表1。表1.本發明的縮酚酸類化合物通式中R基團所代表的取代基及其表徵數據tableseeoriginaldocumentpage25tableseeoriginaldocumentpage26實施例三十七本發明合成的縮酚酸類化合物對細菌的抑制作用本發明採用MTT法，以及rato7/sATCC6633，S.awrewsATCC6538，S./aecafcATCC9790，Pam^"osaATCC13525，￡.co//ATCC35218和￡.c/oacaeATCC13047為研究對象，進行最低抑菌濃度(minimuminhibitoryconcentration,MIC)判定，並初步進行構效關係研究，MTT法由於可通過測定對結果進行量化分析，較之肉眼觀察法更為客觀、靈敏，易於進行統計分析，因而具有更大的應用價值。1.藥物的稀釋將藥物按照二倍稀釋法逐管稀釋藥液，使助溶劑的最終濃度為1%。2.待測菌液的製備從新鮮菌種斜面沾取少量的菌苔，接種在適合實驗菌生長的培養基中，細菌放在37度的培養箱中培養18-24h。培養後加入2-3ml的無菌生理鹽水，用無菌的接種針將菌體充分的洗下，用管口帶棉花的無菌吸管從斜面中吸出懸液於無菌試管中，然後進行計數。細菌再用MH培養基稀釋50倍，使其最終濃度為103-105cfu/ml。3.對照細菌革蘭氏陰性菌卡那黴素。革蘭氏陽性菌青黴素。陽性對照只有培養基和一定濃度的助溶劑。4.藥敏板的製備取無菌96孔板，於每排1號孔加入培養基100Ul，作為空白對照；2-10號孔加入不同濃度的受試化合物溶液IOul和新鮮配置的菌液90ul。ll號孔加入已知的對照藥品10ul和菌液90ul作為陰性對照；12號孔不含受試藥物，作為陽性對照。每個濃度做三個重複。5.培養細菌放在37度的培養箱中培養24h後加入2mg/ml的MTT溶液50ul作用4-5h後，每孔再加入裂解液IOOul(異丁醇鹽酸SDS)作用12h。6.MIC值判定將上述處理好的藥敏板，用酶標分析儀在570nra下測各孔的OD值。計算ICs。值，作為藥物的最低抑菌濃度即MIC。結構見表2。表2本發明所合成的縮酚酸類化合物的抗細菌活性的MIC列表tableseeoriginaldocumentpage27tableseeoriginaldocumentpage28抗細菌試驗結果顯示大部分縮酚酸類化合物不僅能夠抑制革蘭氏陽性細菌的生長，還可以抑制革蘭氏陰性細菌的生長。其中一些化合物顯示了很強的抗菌活性，比如化合物10和23具有很強的抑制及w&ffeATCC6633的活性，MIC值為0.78pg/mL，高於對照青黴素G;化合物8和21對￡.co/!'ATCC35218表現出很強的抑制作用，MIC值為1.562;/g/mL，高於對照卡那黴素B。實施例三十八篩選出的抗菌活性好的化合物21繼續進行了抵抗大腸桿菌引起的炎症反應的活性研究，測定它對大腸桿菌誘導胃腺癌上皮細胞產生IL-8水平的影響。試驗步驟如下1.細胞培養人胃腺癌上皮細胞AGS的培養為貼壁生長細胞，常規培養於RPMI-1640培養液內(含10%小牛血清、100U/ml青黴素和100U/ml鏈黴素)，置37。C、5%<:02孵箱中培養，每隔34天傳代一次。傳代時先棄去原培養液，再用D-Hanks緩衝液洗滌；然後用0.5%胰蛋白酶消化1分鐘左右，加入少量新鮮培養液終止消化；吹打，使貼壁細胞從培養瓶壁上脫落下來；移取適量至新鮮培養瓶中，再補充新鮮培養液至原體積。2.細菌的培養本實驗中的菌株為五.co/!'ATCC35218，生長於MH培養基。3.藥物的配製每種化合物在實驗中共設計了15、30和60Wnol/ml三個濃度，藥物用DMSO配成1200tool/ml的母液，使用D-Hanks兩倍梯度稀釋待用。4.大腸桿菌水提物的製備細菌在生長34d後，在超淨臺上用接種環刮取菌落置於生理鹽水中，吹打散開，於2400rpm離心5min，棄上清，加入適量滅菌生理鹽水，使菌液ODs(K)為1左右，此時菌液的濃度大約為108CFU/ml，然後2400rpm離心5min，加入原體積1/4的已滅菌三蒸水，振蕩均勻。菌液然後經過23min渦旋振蕩，置於室溫放置1h後，使用超速低溫離心機，20000g離心20min，吸出的上清即為所需的大腸桿菌水Ji物，4'C冰箱中保存待用。5.化合物21對大腸桿菌誘導人胃腺癌上皮細胞AGS產生IL-8的影響效果測定AGS細胞在24孔板中生長48h後，棄去原培養液，用D-Hanks清洗兩遍，再換入無血清無抗生素的培養基350W，培養6h後，加入待測化合物母液50W預孵1h，對照組加入50WDMSO，空白組加入50W的D-Hanks。每組加入100W的HPE(空白組中加入100W滅菌的三蒸水)，37。C培養12h。12h後，取培養液上清於4。C25000rpm離心15min後，吸出上清，4'C保存待測。6.酶聯免疫法(ELISA)測定IL-8含量得到的細胞上清中IL-8含量的測定使用購買的人細胞上清ELISA試劑盒測定，具體的測定操作步驟為①建立標準曲線設立標準8個孔，每孔加入樣品稀釋液100W，第一孔加入標準品100W，混勻後，依次從上一孔中吸取IOOW放入下一孔中。直到第七個孔中，第八個孔作為空白對照。②加樣每孔加入待測樣品100W。③將反應板放入37°C120min洗板用洗滌液將反應板反覆洗滌4一6次，在濾紙上印幹。⑤每孔中加入第一抗體工作液50W，37'C反應60min。⑥洗板用洗滌液將反應板反覆洗滌4一6次，在濾紙上印幹。⑦每孔中加入酶標抗體工作液IOOW，37'C反應60min。⑧洗板用洗滌液將反應板反覆洗滌4一6次，在濾紙上印幹◎每孔中加入底物工作液10014，37'C暗處反應60min。⑩每空加入50W終止液混勻，492nm處測吸光值。7.化合物21對細胞存活率的影響為了檢驗以上各化合物抑制大腸桿菌誘導AGS細胞產生IL-8的水平效果是否受其細胞毒作用的影響，本實驗通過MTT法來測定各種化合物的對細胞存活率的影響。細胞孵育按正常細胞傳代的程序消化吹打細胞，調細胞懸液濃度為1.5xl04/ml。在96孔培養板中每孔加細胞懸液100nl，置5。/。C02、37。C的孵箱中培養24h。培養24h後，加入藥液。加藥將待測的化合物21加入到各個孔中，使終濃度分別為15、30、60和12O^M，每個濃度設6個平行孔。實驗分為藥物試驗組(分別加入不同濃度的測試藥)、對照組(只加培養液和細胞，不加測試藥)和空白組(只加培養液，不加細胞和測試藥)。將加藥後的96孔板置於5%C02、37'C的孵48h中培養。存活細胞的測定在培養了48h後的96孔板中，每孔加4mg/mlMTT40W，在37。C放置4h後，移去上清液，每孔加150WDMSO，振蕩5min，使Formazan結晶溶解，利用自動酶標讀數儀在570nm波長處檢測各孔的光密度(OD570值)。8.統計分析實驗數據用SPSS9.0forwindows軟包處理。用成對的t測驗分析試驗組和對照組的差異，其中+P〈0.05，**P<0.01，***P〈0.001為具有顯著性意義。試驗結果1.實驗結果表明，化合物21對大腸桿菌水體物誘導AGS產生的IL-8水平有很強的抑制作用。如圖1所示，大腸桿菌水體物單獨刺激可以產生接近於1100pg/ml的IL-8，而化合物21和阿司匹林分別表現出了對此強烈的，劑量依賴性的抑制作用。化合物21在15Mmol/ml時，可以把IL-8的分泌量減少在830pg/ml左右，而此後隨著濃度的增大，抑制的作用越來越明顯，當60Wnol/ml的時候抑制作用與阿司匹林相當。2.如圖2所示，在15、30、60陶ol/L三個濃度下，化合物21和阿司匹林對AGS細胞的存活率均沒有明顯的影響。結論在15、30、60陶ol/L三個濃度下，由於化合物21和阿司匹林對AGS細胞的存活率沒有明顯的影響，在之前實驗中，兩者能夠抑制大腸桿菌誘導的AGS細胞產生IL-8的結果就不會受到其直接對細胞活性的影響的幹擾。權利要求1.一類縮酚酸類化合物，其特徵是它有如下通式式中R1＝-CH3或-CH2CH3；R2＝H、F、Cl或Br；R3＝H、Cl、Br、OCH3、OCH2CH3或NO2；R4＝H、F、Cl、Br、OCH3、OCH2CH3或CH3；R5＝H或OCH3；n＝0或1。2.—種製備權利要求1所述的縮酚酸類化合物的方法，其特徵是它由下列步驟組成步驟1.將鄰羥基苯乙酸酯溶於無水二氯甲垸中，待完全溶解後，8(TC及攪拌下慢慢加入各種R2、R3、R4和R5取代的苯甲酸或者苯乙酸類化合物，鄰羥基苯乙酸酯與苯甲酸或者苯乙酸類化合物兩者的摩爾比為1:1.2，步驟2.然後加入N，N-二甲基氨基吡啶和N，N-二環己基碳二亞胺，回流條件下攪拌12小時停止反應，加入的N，N-二甲基氨基吡啶與鄰羥基苯乙酸酯的物質的量之比為1:4-1:5，N，N-二環己基碳二亞胺與鄰羥基苯乙酸酯的物質的量之比為1.1:1，步驟3.待反應液完全冷卻後，加入少量水，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，然後用無水Na2S04乾燥，溶劑減壓蒸乾後用矽膠柱分離，洗脫液為乙酸乙酯石油醚=1:2-1:5，得到縮酚酸類化合物。3.權利要求1所述的縮酚酸類化合物在製備抑制革蘭氏陽性菌株或抑制革蘭氏陰性菌株藥物中的應用。4.權利要求1所述的3，4-二乙氧基苯乙酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯在製備非甾體類抗炎藥物中的應用。全文摘要一類縮酚酸類化合物，它有如右通式，式中R1＝-CH3或-CH2CH3；R2＝H、F、Cl或Br；R3＝H、Cl、Br、OCH3、OCH2CH3或NO2；R4＝H、F、Cl、Br、OCH3、OCH2CH3或CH3；R5＝H或OCH3；n＝0或1。本發明的縮酚酸類化合物不僅可以抑制革蘭氏陽性菌株，而且有些還可以抑制革蘭氏陰性菌株，後者是以前的文獻未曾報導過的。本發明還對抗菌篩選出的活性好的化合物進行了抑制由細菌引起的IL-8產生量的測試，結果表明其中一個化合物具有較強的抑制由大腸桿菌刺激產生的IL-8，因而可以有潛力成為一類非甾體類抗炎藥。文檔編號A61K31/216GK101333166SQ20081002099公開日2008年12月31日申請日期2008年8月5日優先權日2008年8月5日發明者呂鵬程,宋忠誠,朱海亮申請人:南京大學