一種新型巰基顯色劑、其製備方法與應用的製作方法
2023-06-06 15:23:11 1
專利名稱：一種新型巰基顯色劑、其製備方法與應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種新型巰基顯色劑、其製備方法與應用，該新型巰基顯色劑為5，5' -二硫雙-(2-硝基苯乙酸)，可用於測定膽鹼酯酶、硫代糖苷水解酶的活性，可用於檢測體液中膽鹼酯酶及酶標免疫分析中膽鹼酯酶類標記酶的活性。
背景技術：
目前檢測巰基或硫醇常用顯色劑是5，5' 二硫代雙-(2-硝基苯甲酸)，即Ellman試劑，簡稱DTNB ;其顯色反應所釋放有色產物簡稱NTB且吸收峰在410nm附近。當利用等吸收波長實現兩種酶活性同步測定時，用鹼性磷酸酶水解4-硝基-1-萘基磷酸酯的最大等吸收波長在405nm ;如同步測定鹼性磷酸酶水解4-硝基-1-萘基磷酸酯和膽鹼酯酶水解硫代乙醯膽鹼或硫代丁醯膽鹼的活性，則需要巰基顯色劑的吸收峰越靠近405nm越好。因此，本發明設計合成了新型巰基顯色劑，使其顯色產物差吸收峰更靠近405nm，用於測定各種類型的烷基硫醇、測定膽鹼酯酶活性，尤其適用於濾光片式酶標儀同步測定鹼性磷酸酶和膽鹼酯酶活性。
發明內容
本發明設計的新型巰基顯色劑5，5' - 二硫雙-(2-硝基苯乙酸)，簡稱DTNA，其被烷基硫醇即RSH選擇性還原斷裂二硫鍵後所得有色產物稱NTA，其差吸收峰剛好在405nm附近；該顯色劑5，5' - 二硫雙-(2-硝基苯乙酸)的結構如下:
權利要求
1.一種新型巰基顯色劑、其製備方法與應用，該新型巰基顯色劑為5，5' -二硫雙-(2-硝基苯乙酸)，結構如下:
2.據權利要求1，此新型巰基顯色劑5，5'- 二硫雙-(2-硝基苯乙酸)製備過程特徵步驟包括: (一)3_氯苯乙酸在二氯甲烷中，20 45°C下與硝酸或硝酸與硫酸混合物反應，而用混合物酸時硝酸濃度從20% 65%、硫酸濃度從5% 40%均有效；反應2 8小時後收集二氯甲烷層，減壓蒸去二氯甲烷得到黃色固體，將黃色固體殘留物用水洗至洗滌液PH在6.0 7.0後，殘留固體為2-硝基-5-氯-苯乙酸。
(二)2-硝基-5-氯苯乙酸在pH8 12的NaOH水溶液中，30 80°C間與Na2S2反應IOmin到10小時，再調pH至3 1，收集生成的黃色沉澱後用乙醇重結晶，得到產物為5，5' - 二硫雙-(2-硝基苯乙酸)。
3.據權利要求1，此新型巰基顯色劑5，5'- 二硫雙-(2-硝基苯乙酸)與烷基硫醇或巰基在PH6.5以上反應，其二硫鍵被選擇性還原而斷裂，所釋放的(2-硝基-5-巰基)-苯乙酸相對於此新巰基顯色劑的差吸收峰在405nm附近；這種光譜特性使得該顯色劑適於濾光片式酶標儀及分光光度計測定吸收定量巰基，從而跟蹤水解硫酯或硫代糖苷鍵釋放硫醇的水解酶反應過程，包括但不限於用硫代乙醯膽鹼測定乙醯膽鹼酯酶、用硫代丁醯膽鹼測定丁醯膽鹼酯酶活性。`
全文摘要
一種新型巰基顯色劑、其製備方法與應用，該新型巰基顯色劑為5，5′-二硫雙-(2-硝基苯乙酸)，用3-氯苯乙酸硝化、與二硫化鈉反應製備；該顯色劑與烷基硫醇或巰基反應時二硫鍵被還原斷裂，所釋放的(2-硝基-5-巰基)-苯乙酸相對此顯色劑的差吸收峰在405nm附近，適合用濾光片式酶標儀及分光光度計測定。
文檔編號G01N21/78GK103105391SQ20121057157
公開日2013年5月15日 申請日期2012年12月26日 優先權日2012年12月26日
發明者廖飛, 劉霖, 楊曉蘭, 劉紅博, 王昕 , 李元麗 申請人:重慶醫科大學