一種雲芝糖肽的提取及分級提純工藝的製作方法

2023-06-06 14:41:26

一種雲芝糖肽的提取及分級提純工藝的製作方法
【專利摘要】本發明屬於天然化合物提取【技術領域】，公開了一種雲芝糖肽的提取及分級提純工藝。所述提取及分級提純工藝首先採用特定條件下的「水提醇沉」工藝得到質量良好的粗多糖，然後將粗多糖通過乙醇三級提純分級，得到三種性狀良好的雲芝糖肽，極大的豐富了雲芝糖肽的種類和規格；另外本發明的整個工藝過程不使用有毒有機溶劑，程序簡單，適合工業化生產。
【專利說明】一種雲芝糖肽的提取及分級提純工藝

【技術領域】
[0001] 本發明屬於天然化合物提取【技術領域】，具體涉及一種雲芝糖肽的提取及分級提純 工藝。

【背景技術】
[0002]雲芝[Polysticus versicolor(L. )Fr]，又名彩紋雲芝、雜色雲芝、多色雲芝、白邊 黑雲芝等，民間稱其為千層蘑，雲芝蘑，雲蘑，木雞，樹蛾等，日本稱其為瓦茸。隸屬於擔子菌 亞門（Basidiomycotina)、多孔菌科（Polyporales)、栓菌屬（Trametes)。雲芝是一種世界 性分布的真菌，尤其在北半球的原始森林中，過熟林中較為常見，在我國主要產於東北各省 的林區。
[0003] 雲芝的化學成分研究主要是以雲芝子實體和菌絲體為原料，目前其化學成分的研 究多集中於多糖的研究。雲芝子實體主要含多糖、蛋白質、鞣質、胺基酸、有機酸、酚類、內脂 類、氰甙、生物鹼等成分，其中的多糖含量較高。在這些成分中研究的較多的是一種多糖類， 分子量在1.3X IO6Da以上。粗提物呈黑褐色，經DEAE纖維柱處理後的樣品呈白色至淡黃 白色，分子量為I. 2 X IO6Da左右，經氧化脫色後，分子量仍達到I. 0 X IO6Da以上。
[0004] 現有技術中多採用簡單的"水提醇沉"的方式對雲芝糖肽進行提取，如在專利 200710032475. 9和201210478886. 1中即描述了這種方法，但其純化過程需要使用到氯仿 和正丁醇等有毒有機溶劑，而且得到的雲芝糖肽規格單一，產物分子量分布不均。


【發明內容】

[0005] 為了解決現有技術的缺點和不足之處，本發明的目的在於提供一種雲芝糖肽的提 取及分級提純工藝。
[0006] 本發明目的通過以下技術方案實現：
[0007] -種雲芝糖肽的提取及分級提純工藝，包括以下操作步驟：
[0008] (1)取乾燥雲芝碎片，用10?15倍質量的去離子水在95?KKTC條件下煮提8? l〇h，過濾，濾液濃縮至原體積的1/6?1/2,加入濃縮液3?5倍體積的95%乙醇混合均勻， 靜置沉澱後離心，取沉澱物在常溫下乾燥，得粗多糖；
[0009] (2)將步驟（1)得到的粗多糖配製成質量濃度為5%的水溶液，然後加入水溶液1 倍體積的無水乙醇混合均勻，靜置沉澱，過濾得到沉澱物和上清液，沉澱物真空乾燥得到一 級多糖；
[0010] (3)將步驟（2)得到的上清液再加入原水溶液1倍體積的無水乙醇混合均勻，靜置 沉澱，過濾得到沉澱物和上清液，沉澱物真空乾燥得到二級多糖；
[0011] (4)將步驟（3)得到的上清液再加入原水溶液1倍體積的無水乙醇混合均勻，靜置 沉澱，過濾得到沉澱物和上清液，沉澱物真空乾燥得到三級多糖。
[0012] 步驟（1)中所述的濾液濃縮優選濃縮至原體積的1/2,所述95%乙醇加入量為濃 縮液體積的4倍，所述靜置沉澱是指在25°C密閉條件下靜置24h。
[0013]步驟（1)中所述的離心是指在3000r/min的條件下離心20min。
[0014] 通過本發明的工藝及所得到的產物具有如下優點及有益效果：
[0015] (1)本發明採用分級提純工藝，得到了 3種不同質量規格的雲芝糖肽產物，其在外 觀、溶解性、分子量分布、糖含量及蛋白含量上均具有一定的區別，豐富了市場上糖肽產品 的種類；另外通過分級提純工藝能夠將有效物糖肽提取而出，減少了有效物糖肽隨提取液 的流失；
[0016] (2)本發明採用分級提純工藝不採用有毒有機溶劑，而且提純工藝簡單，便於工業 化生產；
[0017] (3)本發明通過優化粗多糖製取過程中濃縮液的體積、靜置沉澱的溫度和95%乙 醇加入量，明顯提高了粗多糖中的多糖含量。

【具體實施方式】
[0018] 下面結合實施例對本發明作進一步詳細的描述，但本發明的實施方式不限於此。
[0019] 實施例1
[0020] 本實施例的一種雲芝糖肽的提取及分級提純工藝，具體操作步驟如下：
[0021] (1)取乾燥雲芝碎片300g，用3000g去離子水在95?KKTC條件下煮提10h，過 濾，濾液濃縮至原體積的1/2,加入濃縮液4倍體積的95%乙醇混合均勻，在25°C密閉條件 下靜置24h後在3000r/min的條件下離心20min，取沉澱物在常溫下乾燥，得粗多糖18. 3g， 收率為6. 1% ;
[0022] (2)將步驟⑴得到的粗多糖配製成質量濃度為5%的水溶液，然後加入水溶液1 倍體積的無水乙醇混合均勻，靜置沉澱，過濾得到沉澱物和上清液，沉澱物真空乾燥得到難 溶於水的棕褐色顆粒狀一級多糖9. 8g ;
[0023] (3)將步驟⑵得到的上清液再加入原水溶液1倍體積的無水乙醇混合均勻，靜 置沉澱，過濾得到沉澱物和上清液，沉澱物真空乾燥得到易溶於水的棕色顆粒狀二級多糖 I- 39g ；
[0024] (4)將步驟（3)得到的上清液再加入原水溶液1倍體積的無水乙醇混合均勻，靜 置沉澱，過濾得到沉澱物和上清液，沉澱物真空乾燥得到易溶於水的白色粉末狀三級多糖 0. 91g〇
[0025] 採用苯酚-硫酸法（徐志祥，李剛，李寶健，苯酚-硫酸法測定靈芝多糖含量的條 件研究【J】.中國食用菌，2000,22(3) :6-8)，以葡聚糖繪製標準曲線，測定本實施例一級多 糖、二級多糖和三級多糖的糖含量；採用凱氏定氮法測定本實施例一級多糖、二級多糖和三 級多糖的蛋白含量，測定結果如表1所示：
[0026]表1三種多糖糖含量及蛋白含量

【權利要求】
1. 一種雲芝糖肽的提取及分級提純工藝，其特徵在於：所述工藝包括以下操作步驟： (1) 取乾燥雲芝碎片，用10?15倍質量的去離子水在95?100°C條件下煮提8?10h， 過濾，濾液濃縮至原體積的1/6?1/2,加入濃縮液3?5倍體積的95%乙醇混合均勻，靜 置沉澱後離心，取沉澱物在常溫下乾燥，得粗多糖； (2) 將步驟（1)得到的粗多糖配製成質量濃度為5%的水溶液，然後加入水溶液1倍體 積的無水乙醇混合均勻，靜置沉澱，過濾得到沉澱物和上清液，沉澱物真空乾燥得到一級多 糖； (3) 將步驟（2)得到的上清液再加入原水溶液1倍體積的無水乙醇混合均勻，靜置沉 澱，過濾得到沉澱物和上清液，沉澱物真空乾燥得到二級多糖； (4) 將步驟（3)得到的上清液再加入原水溶液1倍體積的無水乙醇混合均勻，靜置沉 澱，過濾得到沉澱物和上清液，沉澱物真空乾燥得到三級多糖。
2. 根據權利要求1所述的一種雲芝糖肽的提取及分級提純工藝，其特徵在於：步驟（1) 中所述的濾液濃縮是指濃縮至原體積的1/2 ;所述95%乙醇的加入量為濃縮液體積的4倍； 所述靜置沉澱是指在25°C密閉條件下靜置24h。
3. 根據權利要求1所述的一種雲芝糖肽的提取及分級提純工藝，其特徵在於：步驟（1) 中所述的離心是指在3000r/min的條件下離心20min。
【文檔編號】C07K1/36GK104262503SQ201410571644
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年10月23日 優先權日:2014年10月23日
【發明者】李巖, 周藝, 楊鳳瓊, 葉澤波, 唐浩, 秦春梅, 曾琳玲 申請人:廣東嶺南職業技術學院