吲哚-2,3-二酮在製備抗精子畸形藥物中的應用的製作方法

2023-06-26 08:55:51

專利名稱：吲哚-2,3-二酮在製備抗精子畸形藥物中的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及吲哚-2，3-二酮(ind0le-2，3-di0ne)在製備抗精子畸形藥物中的應用。
背景技術：
近年來，由於環境汙染、藥物影響及各種電磁波及輻射的影響，男性精子質量下降已成為男性科常見疾病。據統計，不孕不育男性中有40%屬於精子異常。正常精子外形呈蝌蚪狀，分頭、體、尾三部分。具有正常生育力的男性，其正常形態的精子應為80%以上，如果畸形率超過20%則可造成不孕，畸形精子增多，其後果是造成不孕，習慣性流產，胎兒畸形，新生兒弱智等情況的發生。引起畸形精子症的原因有泌尿生殖道感染、腮腺炎並發的睪丸炎、附睪結核、精索靜脈曲張等；使用激素或某些化學藥物，如抗癌藥、利血平、馬利蘭、呋喃類等；生殖腺受到放射線照射；陰囊局部長期高熱、長期酗酒(特別是高濃度的烈性酒)，均可使精子發生畸變。中醫認為精子異常是由於腎陰腎陽失去平衡，造成腎陰腎陽的偏盛偏衰，腎的陽氣虛損無力化精或腎陰虧損，相火偏熾灼傷精子，但應用溫腎壯陽及滋陰補腎等中藥治療精子畸形有效率低。而西醫仍以手術為主，例如施行精索靜脈高位結紮術來解決精索靜脈曲張引起的精子畸形。藥物治療除了對其病因進行的抗生素治療外，通常通過補充維生素 A、維生素E及硫酸鋅，只能對部分患者的精子畸形略有改善，目前沒有明確的藥物可以治療精子的畸形。因此，亟需開發一種針對性強、毒副反應小的抗精子畸形藥物。吲哚-2，3- 二酮是來自於龍蝦並維持其生存所必需的一種天然海洋活性物質，是成分單一的橙紅色有機天然物質，單體已可合成，化學結構明確，其分子式C8H5NO2分子量 147. 13，結構式為吲哚-2，3-二酮吲哚-2，3-二酮已被證明是一種人體內源性物質，存在於正常人尿液中(Glover V, Halket J Μ, Watking Pjet al. J Neurochem 5 J 1988，656)，從龍蝦到人類漫長的生物進化過程，吲哚_2，3- 二酮在機體內存在顯然具有潛在的生物學價值。我們進行十多年潛心研究，發現其具有抗病毒、抗心血管疾病、抗炎及抗真菌作用，並獲4項發明專利 (吲哚_2，3-二酮在製備抗病毒或免疫增強劑藥物中的應用ZL200510105691. 2 ；吲哚_2， 3- 二酮在製備心腦血管疾病藥物中的應用ZL200510045475. 3 ；吲哚-2，3- 二酮在製備抗炎藥物中的應用ZL200810055735.9 ；吲哚-2，3-二酮在製備抗人體真菌藥物中的應用 ZL200810055736. 6)。另有研究表明吲哚-2，3_ 二酮主要在大鼠的腦和組織中分布，在附睪中濃度高於(Vivette Glover, S K Bhattacharya, M Sandler Indian Journal of Experimental Biology 1991，Vol. 29，1_5)，根據遺傳進化目的論，我們推測吲哚_2，3_ 二酮對精子是有保護作用的，且前期各項專利所述的抗炎、抗病毒及抗菌作用也有助於其保護精子的作用。破解吲哚-2，3-二酮對精子的作用，將對男性生殖保護產生深遠意義。本發明人經長期研究實驗結果表明，吲哚-2，3-二酮具有良好的抗精子畸形作用，其毒性低， 副作用小，在製備抗精子畸形藥物方面有良好的應用前景，具有巨大的新藥開發價值。

發明內容
本發明的目的是提供吲哚-2，3- 二酮在製備抗精子畸形藥物中的應用。本發明的吲哚-2，3_ 二酮為天然產物或人工合成產品。其純化方法包括用超純水和無水乙醇按1 1-8比例混合，加入人工合成或天然的吲哚-2，3-二酮，在磁性攪拌器中緩慢加熱至溶解，然後逐漸冷卻呈橘紅色結晶，加熱溫度為50-80°C，濾去上清液，按上述方法重複純化1-3次，其結晶純度達99% ；將經純化的吲哚-2，3- 二酮研磨成粉末過80目篩，與藥用澱粉按1 1-10重量比例混勻製成50或IOOmg規格的膠囊。或將經純化的吲哚-2，3- 二酮研磨成粉末過80目篩，按溼法制粒工藝製成50或IOOmg規格的片劑。服用方法用於抗精子畸形，可用膠囊或片劑，每人每日200mg，可分2次飯後服用。吲哚_2，3-二酮在製備抗精子畸形藥物中應用的有益效果如下證明了吲哚-2，3_ 二酮具有抗精子畸形作用。已完成臨床前在小鼠環磷醯胺精子畸形模型中的藥效學研究。採用了經典的環磷醯胺所致的小鼠精子畸形模型，觀察不同劑量的吲哚-2，3-二酮在對小鼠精子畸形的改善作用。研究表明1、吲哚-2，3_ 二酮對環磷醯胺所致的小鼠精子畸形有改善作用。2、吲哚-2，3- 二酮小鼠急性毒性LD50 = 1091 士 359mg .kg-1，在Wistar大鼠6個月長期毒性試驗證明，吲哚_2，3- 二酮對進食情況及行為活動等無影響，血液生化等指標未見異常，在22種臟器和組織的病理組織學觀察也未見異常，說明吲哚-2，3- 二酮毒性低。
具體實施例方式下面通過實施例和試驗例進一步闡述本發明吲哚-2，3_ 二酮在製備抗精子畸形藥物中應用的有益效果。實施例1 片劑的製備將超純水與無水乙醇按1 5的比例混合，加入吲哚-2，3-二酮，在磁性攪拌器作用下，在60°C下加熱溶解，室溫下重結晶得針形橘紅色結晶，按上述操作重結晶3次。結晶粉碎過80目篩，稱取吲哚-2，3-二酮100mg、乳糖100mg、澱粉混合均勻，用溼法制粒， 乾燥，整粒後與5mg硬脂酸鎂混合，壓片，製成每片重量為500mg的片劑。實施例2 膠囊的製備將超純水與無水乙醇按1 5的比例混合，加入吲哚-2，3-二酮，在磁性攪拌器作用下，在60°C下加熱溶解，室溫下重結晶得針形橘紅色結晶，按上述操作重結晶3次。結晶粉碎過80目篩，稱取吲哚-2，3- 二酮100mg、乳糖100mg、澱粉混合均勻，填充膠囊， 製成每個純重為500mg的膠囊劑。
試驗例1 吲哚-2，3- 二酮抗精子畸形藥效學研究實驗材料1、吲哚-2，3_ 二酮由青島醫學院藥理組提供。取10%的吲哚-2，3-二酮，4°C保存備用，實驗時以西黃耆膠稀釋到所需濃度；注射用環磷醯胺(江蘇恆瑞醫藥股份有限公司，產品批號=06032021)2、昆明(KM)種小鼠雌雄各半，6周，18_22g，由山東省青島市藥檢所實驗動物中心提供。實驗方法1、吲哚-2，3_ 二酮對環磷醯胺模型小鼠精子畸形的改善作用健康雄性小鼠48 只，體重為18 25g，隨機分為五組，分籠飼養。分別為①空白組，即生理鹽水組；②模型組即環磷醯胺注射組；③吲哚-2，3_ 二酮低、中、高劑量灌胃組。給予受試物前隔夜禁食16h， 不禁水。除空白組外其他動物環磷醯胺40mg/kg體重腹腔注射，連續處理5d。吲哚-2，3-二酮和生理鹽水灌胃連續35天，將小鼠頸椎脫白法處死，摘取雙側附睪置於盛有Iml左右磷酸鹽緩衝生理鹽水中剪碎，再加1 2ml稀釋，輕輕吹打後，靜止3 5min後吸取精子懸液。 取精子懸浮液1 2滴於清潔玻片上，作均勻塗片。待乾燥後，用無水甲醇固定5min，用體積分數為2%伊紅染色10-20min，衝去染液，顯微鏡下觀察。以每隻小鼠500個完整精子計算精子畸形率。實驗結果1、吲哚-2，3_ 二酮對環磷醯胺模型小鼠精子畸形的改善作用注射環磷醯胺後， 模型組小鼠精子畸形率顯著增加。吲哚-2，3-二酮中、高劑量均可明顯降低畸形精子率(bP < 0. 01)。表1吲哚-2，3- 二酮對小鼠精子畸形的影響( 土·r,n = 8)
權利要求
1.吲哚-2，3-二酮在製備抗精子畸形藥物中的應用。
2.根據權利要求1所述的應用，其特徵在於所述的吲哚_2，3-二酮為天然產物或人工合成廣品。
3.根據權利要求1所述的應用，其特徵在於所述的吲哚-2，3-二酮通過下述方法純化 用超純水和無水乙醇按1 1-8比例混合，加入吲哚-2，3-二酮，在磁力攪拌器中緩慢加熱至溶解，然後逐漸冷卻呈針形橘紅色結晶。
4.根據權利要求3所述的應用，其特徵在於所述加熱溫度為50-80°C。
5.根據權利要求3所述的應用，其特徵在於將所得到的針形橘紅色結晶再按同樣方法重複純化1-3次，以減少重金屬離子。
6.根據權利要求1所述的應用，其特徵在於將所述的吲哚_2，3-二酮研磨成粉末過80 目篩，與藥用澱粉按1 1-10重量比例混勻製成50或IOOmg規格的膠囊。
7.根據權利要求1所述的應用，其特徵在於將所述的吲哚_2，3-二酮研磨成粉末過80 目篩，按溼法制粒工藝製成50或IOOmg規格的片劑。
全文摘要
本發明涉及吲哚-2，3-二酮在製備抗精子畸形藥物中的應用，所述的吲哚-2，3-二酮為天然產物或人工合成產品，其毒性低，副作用小，具有良好的抗精子畸形的作用。
文檔編號A61K31/404GK102210674SQ20111013255
公開日2011年10月12日 申請日期2011年5月16日 優先權日2011年5月16日
發明者嶽旺, 張芳, 楊志宏, 石振豔, 金景玉, 鞠傳霞 申請人:青島大學