以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體及其培育方法

2023-06-26 01:01:01

專利名稱：以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體及其培育方法
技術領域：
本發明涉及一種以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體及其培育方法。
背景技術：
1、蛹蟲草Cordyc印s militaris (La. :Fr)，又名北冬蟲夏草，為麥角菌目，麥角菌科，真菌，是我國醫藥學寶庫中的冬蟲夏草一類珍稀藥用真菌，經醫藥科學工作者多年研究證明，蛹蟲草所含蟲草素、蟲草多糖、蟲草酸、SOD酶等生理活性物質和營養成份的含量都高於或接近冬蟲夏草，現已被衛生部批准為新資源食品。人工培育蛹草大都以大米或蟲蛹為培養基，由於家蠶蟲草的人工培養尚無真正形成蟲體內僵化和形成子實體長度2cm以上的相關報導。對我國養蠶業的開發具有廣闊的應用前景。2、中國發明專利申請200510101348. O公開了一種以黃粉蟲蛹為寄主的蛹蟲草子實體及其培育方法，採用蛹蟲草菌向黃粉蟲蛹前胸注入0. 05-0. 2ml後，將受侵感染的黃粉蟲蛹置於無菌的培養基當中進行保溼培養50-60天，其在黃粉蟲上長出子實體。3、中國發明專利94112056. 2公開了一種快速高產人工培育蠶蛹蟲草的方法。其實蛹草菌的分生孢子懸濁液，用昆蟲針等提取菌液刺入蠶蛹，待營養菌在體內充分生長，蠶蛹僵硬後，在適當溫度、光線下培養即可獲得大量蛹蟲草。以上2、3都是以昆蟲蛹為寄主培育蛹蟲草子實體而本專利用蠶幼蟲為寄主，所用的昆蟲材料不同，家蠶蟲草難度更大。4、中國發明專利申請200910049298. 4公開了以幼蟲為寄主人工培育的活體蟲草及其培育方法。採用大麥蟲幼為寄主的蛹蟲草子實體培育方法，通過蛹蟲草菌的分離，培養大麥蟲的養殖，餵養蟲草菌液，在一定溫度下，使其蟲體僵化，並在其頭部長出蟲草子實體。以上4專利是用大麥蟲、幼蟲與本專利用家蠶幼蟲是不同科目，所以有本質的不同。5、食用菌2007 (1)《活蟲體人工培養泰山蛹蟲草技術試驗》文章，「蛹蟲菌採用泰安農科院在泰山採得野生蟲草，分離純化，人工復壯，對不同桑蠶幼蟲3-5齡幼蟲、蛹，採用活蟲體噴菌液，桑葉噴菌液，菌液注射、活體扎孔等6種接種方法，不同蟲齡幼蟲接種感染效果，由表2可知，4齡幼蟲利用噴菌液和帶桑葉餵食都能感菌且感染率較5齡蟲高，但蟲體感菌後迅速縮小，無利用價值，注射活體扎孔接種後，4齡5齡蠶都能感菌，但感染率都低於 50%，無開發價值，活蟲體滅菌接種能達到100%的感染率，但形成的子實體短，「全草」利用， 外觀商品性差。」
上述5文章中家蠶幼蟲體內都沒有形成僵化，所以感染後迅速縮小，無開發利用價值。滅菌的幼蟲也沒有形成體內僵化，形成子實體短，以上文章所述實驗不能算家蠶幼蟲蟲草感染蟲草菌稼接成功，本發明的家蠶幼蟲被蟲草菌感染後，形成體內僵化，蟲體整齊飽滿。頭部子實體2cm以上，是真正的家蠶幼蟲蟲草。6、中國發明專利200810013831. 7用原產於青藏高原的野生天然「冬蟲夏草菌株」 孢子接種到有機活體蠶蛹上人工培育而成蠶蛹蟲草。
上訴6培育蠶蛹蟲草是用的青藏高原「冬蟲夏草菌株」與本專利所用「蛹蟲草菌株」產於東北，兩種菌珠不同，菌株產地不同，所以有本質區別。

發明內容
本發明的目的是提供一種以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體及其培育方法。為了達到上述目的，本發明提供了一種以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體的培育方法，其特徵在於，具體步驟為
第一步將蛹蟲草子實體消毒、清洗後，切成段後接種於固體培養基中於18°C 25°C 培養10 20天得到菌塊；將所得的菌塊接種至一級液體菌種培養基中培養於18°C 25°C 培養4 7天得到一級液體菌種；
第二步將第一步所得的一級液體菌種按體積比1 :5 20用無菌水稀釋得到一級液體菌種稀釋液；將珍珠巖和輊石按重量比1 :0. 5 1. 5混合，滅菌後與上述的一級液體菌種稀釋液混合，得到蟲草混合培養土 ；
第三步將4 5齡家蠶幼蟲用酒精擦蟲體後，用一次性針筒吸入第二步所得的一級液體菌種，注射到家蠶體內；將接種後的家蠶幼蟲插進第二步所得的蟲草混合培養土中，幼蟲頭部朝上，露出0. 5 1. 5釐米，在溫度為18°C 、溼度為70% 90%、每天光照不少於 10小時的條件下培養50 60天後採收，得到以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體。優選地，所述第一步中的固體培養基由馬鈴薯過濾液、瓊脂、葡萄糖、蛋白腖、 KH2PO4^MgSO4 · TH2O^VB1 和無菌水按比例 200ml :20g :20g :10g :3g :2g :0. Ig :1000ml 混合， 121°C滅菌20 50分鐘得到。優選地，所述第一步中的一級液體菌種培養基由馬鈴薯過濾液、瓊脂、葡萄糖、蛋白腖、KH2P04、MgSO4 .7H2CKVB1 和無菌水按比例 200ml :0. Ig :20g :10g :3g :2g :0. Ig :1000ml 混合，121°C滅菌20 50分鐘得到。本發明還提供了採用上述培育方法培育得到的以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體，其特徵在於，其長度大於2cm以上。優選地，所述的以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體中包含腺苷0. 07 0. 09wt%, 多糖8 9. 8wt%。與現有技術相比，本發明的優點是
1、本發明採用了珍珠巖和輊石構成蟲草混合培養土基質，其具有透氣、鬆軟、保溼等優點，能夠模擬大自然外部環境，利於蟲草生長，所述的混合培養土中添加有菌種稀釋液，有利於蟲草的培養；
2、本發明採用了家蠶幼蟲，其無毒，可入藥，營養成分高；
3、本發明的家蠶幼蟲被蟲草菌感染後，形成體內僵化，蟲體整齊飽滿，頭部子實體長度2cm以上，有效成分含量高。


圖1為以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體示意圖。
具體實施方式
下面結合實施例來具體說明本發明。 實施例一種以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體的培育方法，具體步驟為
(1)將上海農科院自主培養的蛹蟲草(Cordyc印Smilitaris (La. :Fr)Link)子實體用75voW)的酒精消毒、用滅菌水衝洗後，切成小段後，接種於固體培養基中於20°C培養15 天得到菌塊；所述固體培養基由馬鈴薯過濾液200ml、瓊脂20g、葡萄糖20g、蛋白腖10g、 KH2P043g、MgSO4 · 7H20 2g、VB1O. Ig 和 1000ml 無菌水混合，121°C滅菌 30 分鐘得到，所述的馬鈴薯過濾液的製備方法為將200g馬鈴薯切成小塊，加入無菌水IOOOmL,燒開30分， 用紗布過濾後備用；將長勢好、轉勢快的菌塊接種至一級液體菌種培養基中培養於20°C培養5天得到一級液體菌種；所述的一級液體菌種培養基由馬鈴薯過濾液200ml、瓊脂0. lg、 葡萄糖 20g、蛋白腖 10g、KH2P043g、MgSO4 · 7H20 2g、VB1O. Ig 和 1000ml 無菌水混合，121 °C 滅菌30分鐘得到，所述的馬鈴薯過濾液的製備方法為將200g馬鈴薯切成小塊，加入無菌水 IOOOmL,燒開30分，用紗布過濾後備用；
(2)將第一步所得的一級液體菌種按體積比1:10用無菌水稀釋得到一級液體菌種稀釋液；將珍珠巖和輊石按重量比1 :1混合，滅菌後與上述的一級液體菌種稀釋液混合，得到蟲草混合培養土，裝在一次性塑料杯內備用；
(3 )將4 5齡家蠶幼蟲用75vd%酒精擦蟲體後，用25ml —次性針筒吸入一級液體菌種，注射到家蠶(鱗翅目，蠶蛾科，Bombyxmori Linaeus)體內；將接種後的家蠶幼蟲插進第二步所得的蟲草混合培養土中，幼蟲頭部朝上，露出1釐米，在溫度為20°C、溼度為85%、每天光照不少於10小時的條件下培養55天後採收，得到以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體， 感染成功率70%以上。如圖1所示，為以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體示意圖，從上到下分別為1號蟲草、2號蟲草、3號蟲草、4號蟲草，其中，1號蟲草的家蠶幼蟲1長5. 5cm,子實體2長4. 5cm, 2號蟲草的家蠶幼蟲1長5. 5cm,子實體2長3. 5cm, 3號蟲草的家蠶幼蟲1長 7cm，子實體2長2. 5cm, 4號蟲草的家蠶幼蟲1長6. 5cm,子實體2長4. 5cm。
本發明方法培養的家蠶蟲草的質量對比如下
權利要求
1.一種以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體的培育方法，其特徵在於，具體步驟為第一步將蛹蟲草子實體消毒、清洗後，切成段後接種於固體培養基中於18°C 25V培養10 20天得到菌塊；將所得的菌塊接種至一級液體菌種培養基中培養於18°C 25°C 培養4 7天得到一級液體菌種；第二步將第一步所得的一級液體菌種按體積比1 :5 20用無菌水稀釋得到一級液體菌種稀釋液；將珍珠巖和輊石按重量比1 :0. 5 1. 5混合，滅菌後與上述的一級液體菌種稀釋液混合，得到蟲草混合培養土 ；第三步將4 5齡家蠶幼蟲用酒精擦蟲體後，用一次性針筒吸入第二步所得的一級液體菌種，注射到家蠶體內；將接種後的家蠶幼蟲插進第二步所得的蟲草混合培養土中，幼蟲頭部朝上，露出0. 5 1. 5釐米，在溫度為18°C 、溼度為70% 90%、每天光照不少於 10小時的條件下培養50 60天後採收，得到以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體。
2.如權利要求1所述的以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體的培育方法，其特徵在於， 所述第一步中的固體培養基由馬鈴薯過濾液、瓊脂、葡萄糖、蛋白腖、KH2PO4 JgSO4WH2OJB1 和無菌水按比例 200ml :20g :20g :10g :3g :2g :0. Ig :1000ml 混合，121°C滅菌 20 50 分鐘得到。
3.如權利要求1所述的以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體的培育方法，其特徵在於，所述第一步中的一級液體菌種培養基由馬鈴薯過濾液、瓊脂、葡萄糖、蛋白腖、kh2PO4、 MgSO4 · 7H20、VB1 和無菌水按比例 200ml :0. Ig :20g :10g :3g :2g :0. Ig :1000ml 混合，121 °C 滅菌20 50分鐘得到。
4.採用權利要求1所述的培育方法培育得到的以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體，其特徵在於，其長度大於2cm以上。
5.如權利要求4所述的以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體，其特徵在於，所述的以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體中包含腺苷0. 07 0. 09wt%,多糖8 9. 8wt%。
全文摘要
本發明涉及一種以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體及其培育方法。所述的培育方法具體步驟為將蛹蟲草子實體消毒、清洗後，切成段後接種於固體培養基中培養得到菌塊；將所得的菌塊接種至一級液體菌種培養基中培養得到一級液體菌種；將所得的一級液體菌種用無菌水稀釋得到一級液體菌種稀釋液；將珍珠巖和輊石混合，滅菌後與上述的一級液體菌種稀釋液混合，得到蟲草混合培養土；將4～5齡家蠶幼蟲用酒精擦蟲體後，用一次性針筒吸入所得的一級液體菌種，注射到家蠶體內；將接種後的家蠶幼蟲插進所得的蟲草混合培養土中，幼蟲頭部朝上，培養後採收，得到以家蠶幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體。本發明頭部子實體長度2cm以上，有效成分含量高。
文檔編號A01G1/04GK102523912SQ20111038139
公開日2012年7月4日 申請日期2011年11月27日 優先權日2011年11月27日
發明者徐正華, 徐窕, 沈娟麗, 沈金德 申請人:桐鄉市中泰蟲草專業合作社