從動物胚胎內部臟器中提取的胚胎素水提取物及其提取方法和用途
2023-06-12 08:50:01 2
從動物胚胎內部臟器中提取的胚胎素水提取物及其提取方法和用途
【專利摘要】從動物胚胎內部臟器中提取的胚胎素水提取物及其提取方法和用途，涉及從動物胚胎中提取胚胎素的【技術領域】及其應用。發明無需蛋白水解酶的酶解就能夠提取出分子量小於4000D的水溶性胚胎素。本發明提高生產效率、提高原料的利用率，以降低生產成本，能夠滿足化妝品和食品生產，利於工業化大批量生產，可確保提取液中物質易被人體皮膚和黏膜組織吸收。
【專利說明】從動物胚胎內部臟器中提取的胚胎素水提取物及其提取方法和用途
【技術領域】
[0001]本發明涉及從動物胚胎，特別是從羊、豬和狗等動物胚胎內部臟器，包括胚胎的肝臟、心臟、腎臟、腸和血液等臟器中提取胚胎素的工藝【技術領域】。
【背景技術】 [0002]1912年瑞士科學家卡爾教授因首次發現羊胚胎細胞中有一種能使人體細胞恢復活力的神奇物質，即羊胚胎素而獲得諾貝爾醫學獎。人類找到一種可以延緩衰老的純天然動物製品，即羊胚胎素，從而使人們追求年輕和延年益壽的夢想成為現實。
[0003]據科學考證，生物細胞分裂的次數與壽命之間存在一定的相關性，比如，壽命為30年的雞，細胞分裂為25次；而壽命僅為3年的小白鼠，只分裂12次。而導致人體衰老的根本原因是構成肌體生命最基本的單位細胞出現了老化；隨著年齡的增大，細胞分裂越來越慢，老化細胞使器官機能下降，甚至引起病變，人也隨之衰老。卡爾教授在羊胚胎中發現的羊胚胎素可以使動物機體細胞分裂次數增加，能使已衰退或老化的細胞重新活化或被淘汰，從而使老化的機能得到恢復。
[0004]1931年，瑞士保羅.尼翰教授首次通過注射的方式將小羊的甲狀旁腺提取物用於一位甲狀旁腺受損的臨危病人並成功地挽救了其生命，這項具有裡程碑式意義的發現為人類日後羊胚胎素在生物醫學和抗衰老領域的應用奠定了基礎，羅馬教皇為了表示對他的敬意，授封其為梵蒂岡科學院院士。1950年,瑞士 Dr.Alfred Pf ister與尼翰教授經過多年的合作與努力，發現羊胚胎細胞的提取物是活性細胞物質的最佳載體。
[0005]1952年，Dr.Alfred Pfister成立了瑞士雷曼納健康醫療中心，推廣羊胚胎素活細胞療法。1955年,在瑞士 Batelle研究院的支持下他解決了細胞提取時極易造成的損傷和惡化過程，以及保存的技術缺陷，此成果被命名為Cellvital。1956年，研究成果Cellvital又得到曾在1931年獲諾貝爾醫學獎的奧託.海因裡希.瓦爾堡細胞生物學家的論證。
[0006]70多年來，全球數十萬人進行過羊胚胎素的相關治療，其中包括前羅馬教皇保羅十二世、英國女王及皇室成員、菲律賓馬克斯總統、沙烏地阿拉伯和葉門國王、日本裕仁天皇、邱吉爾首相、法國戴高樂總統、查理?卓別林，以及瑪麗蓮夢露、黛德麗、嘉寶，球星馬拉度納
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[0007]羊胚胎素含有多種可以發揮調節人體組織器官功能的活性成分，其中表皮生長因子(EGF)、透明質酸刺激因子(HASF)和鹼性成纖維細胞生長因子(bFGF)等具有美化肌膚的功效。特別是羊胚胎素中的EGF，作為一種新興的美容護膚因子正成為時尚。研究表明，人的角質層細胞和纖維細胞等均有特異性EGF受體存在，為人體皮膚細胞具有吸收EGF的能力提供了理論依據。
[0008]另外，羊胚胎素中還含有多種小分子活性肽、核酸、維生素、多種礦物元素和豐富的胺基酸等活性成分，在促進皮膚細胞更新的同時，還能增加其內源性生長因子的含量，促進細胞分泌透明質酸和糖蛋白，具有調整皮膚結構，延緩衰老，減少皺紋，抑制粉刺和防治青春痘生長的作用。因此，羊胚胎素作為一種具有獨特生物學效應的化妝品添加劑將具有越來越強的生命力和良好的發展前景。
[0009]經過百年的研究，羊胎素在延緩機體衰老方面的作用是肯定的；而其所含的小分子活性物質在提高機體免疫力方面作用也是十分顯著的；另外，在調節機體激素水平、改善貧血、增強新陳代謝和促進機體活力等方面也具有顯著效果。羊胚胎素是一種既可以內用，也可以外用的活性小分子多肽類物質，其被機體吸收和利用的方式也是多種多樣的，其對人類的美容和健康事業必將發揮越來越大的作用。
[0010]目前羊胎素的提取過程大約可分為三個階段:首先從小羊胚胎臟器細胞中提取活性成分，去除雜質、熱敏感蛋白質及過敏因子；其次通過分離技術，得到具有不同功效的活性物質，如胚胎胸腺素、多種促生長因子等不同類型的活性肽，最後採用凍幹技術進行冷凍乾燥，保證其活性。值得注意的是羊胎素的提取是一項非常複雜的生物技術過程，如今絕大多數的提取過程只能在實驗室中完成，很難進行大量工業化生產和長期保存。在我國有實驗室採用蛋白水解酶酶解的方法提取羊胚胎素，雖然這種方法可以大幅度提高水解液中總蛋白含量，但經過最新研究發現所檢測的總蛋白質中主要增加的是沒有生物調節活性的胺基酸和活性肽的碎片，而真正能夠發揮調節作用的胚胎素含量則較低，說明通過蛋白水解酶的酶解方法所提取出的羊胚胎素活性和含量均較低，蛋白水解酶對羊胚胎素具有一定的破壞作用，現在這種提取方法逐漸被新的提取方法所淘汰。
【發明內容】
[0011]本發明第一目的在於提出一種從動物胚胎內部臟器中提取的胚胎素水提取物。
[0012]本發明所述水提取物為從動物胚胎內部的臟器提取的分子量小於4000D的水溶性胚胎素。
[0013]本發明所指動 物不只是羊，還可以擴大至豬和狗等動物，動物胚胎臟器可以如肝臟、心臟、腎臟、腸和血液等臟器，本發明可利用的胚胎原量廣泛，易得，利於工業化大批量生產。本發明水溶性胚胎素的分子量小於4000D可確保提取液中物質易被人體皮膚和黏膜組織吸收。
[0014]本發明第二目的在於發明一種利於規模化生產、提高利用率、降低生產成本的從動物胚胎內部臟器低溫提取胚胎素的方法。
[0015]本發明包括以下步驟:
1)將於-15~-25°c溫度條件下冷凍保存的動物胚胎用雙蒸水洗淨，分離出胚胎內臟
器；
2)在常壓條件下，採用溫度為O~5°C的雙蒸水浸泡經過機械粉碎的胚胎內臟器20~30分鐘，所述雙蒸水與所述胚胎內臟器的混合重量比I~4: I ；
3)將由雙蒸水與胚胎內臟器混合形成的混合液反覆冷凍和解凍2~4次，每次冷凍的環境溫度為-15~_30°C，每次冷凍時間為24~48小時，每次解凍至5°C，解凍過程中採用低頻超聲波處理20~40分鐘；
4)以4000~15000轉/分的冷凍離心機對上述混合液處理10~15分鐘，除去固體雜質，得到水提溶液A ；5)將水提溶液A的Ph值調至1.5~3.5，採用冷凍離心的方法去除沉澱物，取上清再調Ph值至3.5~6.5，再經冷凍離心的方法去除沉澱物，取得水提溶液B ；
6)在1~5°C的環境溫度下對水提溶液B進行超濾，分離出分子量為4000D以下的水溶性胚胎素。
[0016]本發明原料採用冷凍保存的動物胚胎，最大程度地保持胚胎中胚胎素的活性；採用雙蒸水浸泡的目的是提高提取胚胎素時的純度，減少水中雜質帶來的汙染，雙蒸水溫度保持O~5°C，有利於保護提取液中胚胎素的活性；經過反覆冷凍和解凍的處理方法，使混合液呈肉糜狀，目的都是為了提高提取效率，增加提取液中胚胎素的含量，並最大程度地保證提取過程中胚胎素的活性，利於後續的分離；採用先調水提溶液A的Ph值調至1.5~3.5、再調Ph值至3.5~6.5的兩次冷凍離心方法，可高效去除水提液A中的大蛋白，利於後續的超濾提取；在1~5°C的環境溫度下對水提溶液B進行超濾，目的是確保提取胚胎素的活性不受溫度的影響，利於高效地提取活性有效成分。最終產品PH值與胚胎素存在的自然條件相近，能夠充分保證提取出的胚胎素的天然活性。
[0017]發明無需蛋白水解酶的酶解就能夠提取出天然結構的高活性胚胎素，提高胚胎素含量，利於工業化規模生產，提高生產效率、提高原料的利用率，以降低生產成本，能夠滿足化妝品和食品生廣。
[0018]本發明所述步驟I)的動物胚胎日齡為30~145天，目的是使所提取的胚胎中胚
胎素的含量更多。
[0019]另，所述步驟5)中將0~5°C的水提溶液A進行Ph值調整，也是更有利地保持水提溶液A中的有效成分的活性。
[0020]本發明的第三個目的是提出以上分子量小於4000D的水溶性胚胎素的用途。
[0021]用途之一:從動物胚胎內部臟器中提取的胚胎素水提取物在化妝品生產中的用途，特點是:在生產化妝品時，將分子量小於4000D的水溶性胚胎素按投料質量佔5~50%的比例代替化妝品中原有的水。
[0022]用途之二:從動物胚胎內部臟器中提取的胚胎素水提取物在化妝品生產中的用途，特點是:在生產化妝品時，將分子量小於4000D的水溶性胚胎素經過冷凍乾燥後，密封包裝製成化妝品。
[0023]經試用，以上兩類化妝品對美容效果顯著，且無副作用，而且費用低廉，簡單易行。
[0024]用途之三:從動物胚胎內部臟器中提取的胚胎素水提取物在食品生產的用途，特點是:將分子量小於4000D的水溶性胚胎素用於製備保健口服液和膠囊。
[0025]本發明作為保健口服液和膠囊的優點是使用方便、吸收效果好、價格低廉，可作為一般保健品和免疫增強劑使用。
【具體實施方式】
[0026]一、分子量小於4000D的水溶性胚胎素的提取方法:
1、取30~145日齡新鮮動物胚胎置於-15~_25°C低溫條件下儲存。
[0027]2、將冷凍保存的動物胚胎用雙蒸水洗淨，並分離胚胎肝臟、心臟、腎臟、腸和血液等臟器，再將分離後的臟器採用機械粉碎，待用。
[0028]3、在常壓條件下，採用溫度為0~5°C的雙蒸水浸泡經過機械粉碎的胚胎內臟器20~30分鐘。雙蒸水與胚胎內臟器的混合重量比I~4: I。
[0029]4、將由雙蒸水與胚胎內臟器混合形成的混合液反覆循環冷凍和解凍處理4次，每次冷凍的環境溫度為-15~_30°C，每次冷凍時間為24~48小時，每次解凍至5°C，解凍過程中採用低頻超聲波處理20~40分鐘。
[0030]5、以4000~15000轉/分的冷凍離心機對上述已經過反覆循環冷凍和解凍的混合液處理10~15分鐘，除去固體雜質，得到水提溶液A。
[0031]6、將O~5°C的水提溶液A以I~2N鹽酸調整Ph值至1.5~3.5，採用冷凍離心的方法去除沉澱物，取上清。將O~5°C的上清以I~2N氫氧化鈉調整Ph值至3.5~6.5，再經冷凍離心的方法去除沉澱物，取得水提溶液B。
[0032]7、在I~5°C的環境溫度下對水提溶液B採用4000D的超濾器進行超濾，分離出分子量為4000D以下的水溶性胚胎素。
[0033]二、分子量小於4000D的水溶性胚胎素的鑑定:
採用nanodrop2000紫外分光法測定超濾後的上清中胚胎素含量，經測定本發明胚胎素含量可以達到為0.4%~4%，是傳統胚胎素提取方法含量的2~10倍，能夠大幅度提高胚胎素的提取效率和活性。
[0034]三、製備化妝品:
1、化妝品一:
如化妝水的生產配方:
分別稱取分子量小於4000D的水溶性胚胎素5kg、淨化水95kg將以上原料混合均勻，進行瓶裝，即製成化妝水。
[0035]2、化妝品之二:
如胚胎素水提取物的冷凍乾燥製劑:
將分子量小於4000D的水溶性胚胎素經過冷凍乾燥後，密封包裝製成冷凍乾燥製劑。
[0036]將以上化妝水分別直接用於清潔後的臉部，將冷凍乾燥製劑直接或採用導入器用於清潔後的臉部，吸收快於普通產品。
[0037]應用於皮膚老化人群，皮膚恢復彈性效果顯著，且無副作用。
[0038]四、製備保健品:
1、製備胚胎素口服製劑A:
將分子量為4000D以下的水溶性胚胎素與蜂蜜或其他食品添加劑調勻，經超濾和巴氏消毒滅菌後，灌裝瓶裝口服液。
2、製備胚胎素口服製劑B:
將分子量為4000D以下的水溶性胚胎素冷凍乾燥後得到凍乾粉作為生產各種膠囊的原料。
[0039]3、製備胚胎素膠囊:
將分子量為4000D以下的水溶性胚胎素冷凍乾燥後得到凍乾粉5公斤，茶花粉冷凍乾燥後的凍乾粉95公斤，二者混合後制粒，灌裝每粒淨含量250毫克的硬膠囊即可。
[0040]4、應用:
服用對象:身體虛弱者。
[0041]服用劑量:口服液使用時按照每人每天4~10毫升，連接服用20~30天。口服膠囊，如膠囊含量為凍乾粉10~50毫克/粒，每人按照I~4粒/天，連續服用20~30天。
[0042]經常易感冒者和高血脂症患者，服用本發明產品20天左右，身體免疫力提高不易感冒，高血脂指標能夠恢 復正常。
【權利要求】
1.一種從動物胚胎內部臟器中提取的胚胎素水提取物，其特徵在於所述水提取物為從動物胚胎內部的臟器提取的分子量小於4000D的水溶性胚胎素。
2.如權利要求1所述從動物胚胎內部臟器中提取的胚胎素水提取物的製備方法，其特徵在於包括以下步驟: 1)將於-15~_25°C溫度條件下冷凍保存的動物胚胎用雙蒸水洗淨，分離出胚胎內臟器； 2)在常壓條件下，採用溫度為O~5°C的雙蒸水浸泡經過機械粉碎的胚胎內臟器20~30分鐘，所述雙蒸水與所述胚胎內臟器的混合重量比I~4: I ； 3)將由雙蒸水與胚胎內臟器混合形成的混合液反覆冷凍和解凍2~4次，每次冷凍的環境溫度為-15~_30°C，每次冷凍時間為24~48小時，每次解凍至5°C，解凍過程中採用低頻超聲波處理20~40分鐘； 4)以4000~15000轉/分的冷凍離心機對上述混合液處理10~15分鐘，除去固體雜質，得到水提溶液A ； 5)將水提溶液A的Ph值調至1.5~3.5，採用冷凍離心的方法去除沉澱物，取上清再調Ph值至3.5~6.5，再經冷凍離心的方法去除沉澱物，取得水提溶液B ； 6)在I~5°C的環境溫度下對水提溶液B進行超濾，分離出分子量為4000D以下的水溶性胚胎素。
3.根據權利要求2所述方法，其特徵在於所述步驟I)的動物胚胎日齡為30~145天。
4.根據權利要求2所述方法，其特徵在於所述步驟5)中將O~5°C的水提溶液A進行Ph值調整。
5.如權利要求1所述從動物胚胎內部臟器中提取的胚胎素水提取物在化妝品生產中的用途，其特徵在於，在生產化妝品時，將分子量小於4000D的水溶性胚胎素按投料質量佔5~50%的比例代替化妝品中原有的水。
6.如權利要求1所述從動物胚胎內部臟器中提取的胚胎素水提取物在化妝品生產中的用途，其特徵在於，在生產化妝品時，將分子量小於4000D的水溶性胚胎素經過冷凍乾燥後，密封包裝製成化妝品。
7.如權利要求1所述從動物胚胎內部臟器中提取的胚胎素水提取物在食品生產的用途，其特徵在於，將分子量小於4000D的水溶性胚胎素用於製備保健口服液和膠囊。
【文檔編號】A61Q19/00GK103462864SQ201310230537
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年6月10日 優先權日:2013年6月10日
【發明者】周斌, 葉滿紅 申請人:周斌, 葉滿紅