穩定的扶正解毒超微粉中毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量測定方法
2023-06-12 04:14:46
專利名稱：穩定的扶正解毒超微粉中毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量測定方法
技術領域：
本發明涉及一種高效液相色譜方法，特別涉及一種中藥成分的含量測定技術。
背景技術：
扶正解毒超微粉是根據《中華人民共和國獸藥典》2010版二部扶正解毒散項下規定，由黃芪、板藍根和淫羊藿三味中藥按一定比例組合超微粉碎而成的成方製劑，具有扶正祛邪、清熱解毒的功效。主治雞法氏囊病。超微粉碎是近20年迅速發展起來的一項高新技術,用於中藥領域能把原材料加工成微米甚至納米級的微粉。鑑於粉碎是中藥生產及應用中的基本加工技術，超微粉碎也愈來愈引起人們的關注，雖然在中藥製藥行業中起步較晚，開發研製的品種相對較少，但已顯露出特有的優勢和廣闊的應用前景，並已成為近幾年來中藥界的研究熱點。超微粉碎中藥最大的優勢是有效提高了藥物的生物利用度。從藥物學原理來說，藥物的溶出速度與藥物的顆粒比表面積呈正相關，而比表面積與顆粒粒徑成反比。因此，藥物的粒徑越小，則其表面積越大，越有助於藥物有效成分的溶出。超微粉碎中藥及其顆粒達至IJ超細粉末的水平，其比表面積顯著增大，藥物在胃腸道裡的溶解度明顯增加，從而增加藥物的生物利用度，並加快藥物起效時間。此外，由於納米或微米粒的粘附性及小的粒徑，既有利於延長局部用藥時滯留性的增加，也有利於延長藥物與腸壁接觸時間，加大接觸面積，從而提高藥物口服吸收的生物利用度。如甘草飲片超微粉碎後甘草酸的溶出有顯著增加。傳統中藥飲片往往採用煎煮的方法，目前雖已進行了中藥製劑的改良，但只是提取中藥所含的小部分成分，佔總成分的10% 30%，藥效大受影響。使用超微粉碎技術可充分提取中藥成分，具有吸收快及使用方便等優點。藥典中扶正解毒散項下質量標準未規定其各有效成分的鑑別方法和含量測定方法，為了完善扶正解毒散質量標準，為其質量標準的制定提供依據，本發明對扶正解毒超微粉中黃芪的成分毛蕊異黃酮葡萄糖苷進行含量測定方法的探索，並確定一種穩定的扶正解毒超微粉中毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量測定方法。
發明內容
本發明旨在解決扶正解毒超微粉中毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量測定問題，以解決扶正解毒超微粉中毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量測定無法使用中國獸藥典中所規定的黃芪中毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量測定方法。具體方法技術方案如下
一種高效液相色譜法測定扶正解毒超微粉中毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量的方法，其色譜條件為
a.填充劑為十八烷基矽烷鍵合矽膠；
b.流動相為混合比例為20:80的乙腈和O.2%甲酸溶液；C.紫外檢測器的檢測波長為260nm。d.所用流動相流速為lml/min ； e.進樣體積為10 μ I。1.毛蕊異黃酮葡萄糖苷標準曲線的繪製
a.標準品溶液的製備精密稱取毛蕊異黃酮葡萄糖苷標準品O. 01042g,置於200ml容量瓶中，用甲醇溶解，定容至200ml。b.用甲醇稀釋不同濃度的標準品溶液精密量取原濃度標準品溶液5ml，加甲醇定容至10ml，混勻後，再精密量取5ml至另一容量瓶中，加甲醇定容至10ml，按照此方法倍比稀釋，製成濃度分別為 52.1 μ g/ml、26. 05 μ g/ml、13. 03 μ g/ml、6. 51 μ g/ml、3. 26 μ g/ml的毛蕊異黃酮葡萄糖苷標準品溶液。
c.以不同濃度的毛蕊異黃酮葡萄糖苷標準品溶液響應的峰面積對濃度作圖，得到毛蕊異黃酮葡萄糖苷的標準曲線。見附圖
。2.供試品的製備
取扶正解毒超微粉約lg，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，加熱回流4小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液25ml，回收溶劑至幹，殘渣加甲醇溶解，轉移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。3.精密度試驗
取供試品溶液，精密吸取10 μ I進樣，重複5次，記錄峰面積，計算該方法精密度。試驗結果見表。表毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量測定方法精密度試驗結果
序號 I2345
峰_ mu丨斑於腿觀丨纖選I服觀 平均值224.75
RSD (%>0.51%
由結果可見，毛蕊異黃酮葡萄糖苷的相對標準偏差為O. 58%，表明本方法的進樣精密度良好。4.方法的專屬性試驗
陰性樣品溶液精密稱取除黃芪外扶正解毒超微粉約lg，置圓底燒瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，加熱回流4小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液25ml，回收溶劑至幹，殘渣加甲醇溶解，轉移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。對照品溶液取毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品適量，精密稱定，加甲醇製成每Iml含50 μ g的溶液，即得。5.回收率試驗
供試品溶液的製備精密稱取扶正解毒超微粉約lg，6份，置圓底燒瓶中，分別加入毛蕊異黃酮葡萄糖苷標準品溶液1ml，精密加入甲醇49ml，稱定重量，加熱回流4小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液25ml，回收溶劑至幹，殘渣加甲醇溶解，轉移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。對照品溶液取毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品適量，精密稱定，加甲醇製成每Iml含50 μ g的溶液，即得。表毛蕊異黃酮葡萄糖苷回收率試驗結果
權利要求
1.一種穩定的扶正解毒超微粉中毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量測定方法，其特徵在於步驟如下(1)採用高效液相色譜法測定；(2)色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以乙腈-O.2% 甲酸溶液(20:80)為流動相；檢測波長為260nm，理論板數按毛蕊異黃酮葡萄糖苷峰計算應不低於3000;(3)對照品溶液的製備取毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品適量，精密稱定，加甲醇製成每 Iml含50 μ g的溶液，即得；(4)供試品溶液的製備取本品粉末約lg，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入甲醇 50ml，稱定重量，加熱回流4小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過， 精密量取續濾液25ml，回收溶劑至幹，殘渣加甲醇溶解，轉移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度， 搖勻，即得；(5)測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定， 即得。
2.如權利要求1所述，穩定的扶正解毒超微粉中毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量測定方法，其特徵在於採用高效液相色譜法。
3.如權利要求1所述，扶正解毒超微粉中毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量測定方法，其特徵在於以乙腈-O. 2 %甲酸溶液(20:80 )為流動相。
4.如權利要求1所述，穩定的扶正解毒超微粉中毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量測定方法，其特徵在於以毛蕊異黃酮葡萄糖苷為對照品。
5.如權利要求1所述，穩定的扶正解毒超微粉中毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量測定方法，其特徵在於所用檢測器為紫外檢測器。
6.穩定的扶正解毒超微粉中毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量測定方法，其特徵在於檢測波長為260nm。
7.穩定的扶正解毒超微粉中毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量測定方法，其特徵在於所用溶劑為甲醇。
全文摘要
本發明公開一種穩定的扶正解毒超微粉中毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量測定方法，以乙腈-0.2％甲酸溶液(20:80)為流動相，檢測波長260nm，以毛蕊異黃酮葡萄糖苷為對照品，用甲醇回流、過濾、蒸乾、溶解處理樣品，採用高效液相色譜法-紫外檢測器檢測扶正解毒超微粉中毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量。此方法線性關係良好、精密度、重現性良好，可作為扶正解毒超微粉中毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量測定方法，簡單、快速、易操作。
文檔編號G01N30/02GK102998394SQ20121052873
公開日2013年3月27日 申請日期2012年12月11日 優先權日2012年12月11日
發明者郭振環, 於瑞, 劉海新, 劉琴, 李秋霞, 王文文 申請人:河南省康星藥業股份有限公司