殺菌組合物及其應用的製作方法
2023-06-01 11:45:11
本發明涉及一種殺菌組合物，尤其涉及一種含有葉菌唑的殺菌組合物及其防治農作物上病害的應用，屬於農藥技術領域。
背景技術：
葉菌唑，英文通用名稱：metconazole，為日本吳羽化學公司於20世紀90年代初開發的新款三唑類殺菌劑。葉菌唑為麥角甾醇生物合成中C-14脫甲基化酶抑制劑。雖然作用機理與其他三唑類殺菌劑一樣，但活性譜則差別較大。葉菌唑的殺真菌譜非常廣泛，且活性極佳。葉菌唑田間施用對穀類作物殼針孢、鐮孢黴和銹病菌有卓越效果。主要用於防治麥類銹病、白粉病、穎枯病、穗腐病、葉枯病等。葉菌唑同傳統殺菌劑相比，劑量低而防治穀類病害範圍卻很廣。
中生菌素，英文通用名稱：zhongshengmycin，屬於一種N-糖甙類抗生素，其抗菌譜廣，對多種細菌、真菌均有良好效果。對革蘭氏陰性和陽性的細菌有良好效果，特別對農作物致病菌如菜軟腐病菌，黃瓜角斑病菌，水稻白葉枯病菌，小麥赤黴病菌等均具有明顯的抗菌活性。並與常規製劑無交互抗性。
通過不同作用機制的殺菌劑之間的復配或者輪換使用，選擇合適的施藥時間，形成相應的作物解決方案，可以有效延緩抗藥性的產生，並可對已產生的殺菌劑抗藥性問題進行治理。
截止目前，還未見葉菌唑與中生菌素復配的相關文獻報導。
技術實現要素：
本發明的目的在於：提供一種適合農業上使用的殺菌組合物，並且有助於減少用藥量、延緩病原菌產生抗性和降低使用成本。
為達到上述目的，本發明採用的技術方案是：
一種殺菌組合物，組合物中含有有效成分葉菌唑和中生菌素，兩者的質量比為80：1～1：10，優選質量比為20：1～1：10，有效成分的總質量百分含量為5％～85％。
組合物可以製成的劑型有微囊懸浮劑、微乳劑、水乳劑、懸浮劑、可溼性粉劑、可分散油懸浮劑、懸浮種衣劑或水分散粒劑。
本發明的殺菌組合物可以按普通的方法施用，施藥方式可以採用噴霧、灌根、浸根、浸種、撒施、種子包衣等，防治葉部病害時優選噴霧處理。
殺菌組合物用於防治蔬菜、果樹、麥類、穀物類的真菌病害有：白粉病、銹病、黑星病、葉斑病、稻瘟病、稻曲病、紋枯病、胡麻葉斑病、惡苗病、霜黴病、疫病、晚疫病、早疫病、灰黴病、葉黴病、灰葉斑病、褐斑病、輪紋病、赤黴病、全蝕病、穎枯病、穗腐病、葉枯病、散黑穗病等。
殺菌組合物用於防治蔬菜、果樹、麥類、穀物類的細菌病害有：青枯病、細菌性條斑病、潰瘍病、白腐病、軟腐病、細菌性角斑病、白葉枯病、細菌性流膠病、細菌性髓部壞死等細菌病害的用途。
本發明組合物可以與其它具有除草、殺菌性能的化合物混合使用，也可以與殺蟲劑、殺線蟲劑、防護劑、生長調節劑、植物營養素或土壤調節劑混合使用。
與現有技術相比，本發明產生的有益效果為：(1)組合物增效作用明顯，防效與單劑相比顯著提高；(2)藥效提高後，降低了田間用藥量和使用成本，減少了農藥殘留和環境汙染；(3)組合物由不同作用機制的有效成分組成，作用位點增加，有利於克服和延緩病菌產生抗性。
具體實施方式
為使本發明的目的、技術方案和優點更加清楚明白，下面結合實施例對本發明內容作進一步說明，但本發明絕非限於這些例子。具體實施例僅用於解釋本發明，並不用於限定本發明。凡在本發明的精神和原則之內所做的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本發明的保護範圍之內。因此，本發明專利的保護範圍應以所附權利要求為準。
本發明可以用已知的方法製備成適合農業使用的劑型，組合物可以根據所需防治的作物、防治方法、防治成本、所處環境條件等各種因素，將有效成分與助劑和載體(填料)一起加工製成農藥應用中可接受的任意一種劑型，優選劑型為懸浮劑、可分散油懸浮劑、水乳劑、可溼性粉劑、微囊懸浮劑、微乳劑、水分散粒劑。所用助劑、載體及加工技術採用已知的組分。在上述各種劑型中，有效成分葉菌唑和中生菌素的總質量百分含量為5％～85％，例如，當葉菌唑和中生菌素的質量百分含量分別為20％和2％時，總質量百分含量為22％。
一、製劑加工配方實施例
實施例1：81％葉菌唑·中生菌素水分散粒劑(葉菌唑：中生菌素＝80：1)
按照常規工藝製成，其中葉菌唑80g，中生菌素1g，萘磺酸鹽NNO(擴散劑)4g，木質素磺酸鈉(分散劑)10g，十二烷基硫酸鈉(潤溼劑)3g，高嶺土(填料)補足至100g。
本實施例中葉菌唑和中生菌素的質量比可以在80：1～1：10之間變化，兩者的總質量百分含量可以在5％～85％之間變化，使用助劑的配比也隨之作相應調整，形成新的實施例。
實施例2：41％葉菌唑·中生菌素可溼性粉劑(葉菌唑：中生菌素＝40：1)
按照常規工藝製成，其中葉菌唑40g，中生菌素1g，十二烷基硫酸鈉(潤溼劑)2g，萘磺酸鹽NNO(擴散劑)5g，木質素磺酸鈉(分散劑)6g，高嶺土補足至100g。
本實施例中葉菌唑和中生菌素的質量比可以在80：1～1：10之間變化，兩者的總質量百分含量可以在5％～85％之間變化，使用助劑的配比也隨之作相應調整，形成新的實施例。
實施例3：21％葉菌唑·中生菌素懸浮劑(葉菌唑：中生菌素＝20：1)
按照常規工藝製成，其中葉菌唑20g，中生菌素1g，木質素磺酸鈉(分散劑)4g，乙二醇(抗凍劑)4g，有機矽酮(消泡劑)0.4g，十二烷基硫酸鈉(潤溼劑)3g，膨潤土(增稠劑)0.2g，去離子水補至100g。
本實施例中葉菌唑和中生菌素的質量比可以在80：1～1：10之間變化，兩者的總質量百分含量可以在5％～85％之間變化，使用助劑的配比也隨之作相應調整，形成新的實施例。
實施例4：22％葉菌唑·中生菌素微乳劑(葉菌唑：中生菌素＝10：1)
按照常規工藝製成，其中葉菌唑20g，中生菌素2g，N-甲基吡咯烷酮(溶劑)5g，異丙醇(溶劑)15g，農乳1601號(乳化劑)5g，農乳500號(乳化劑)5g，去離子水補足至100g。
本實施例中葉菌唑和中生菌素的質量比可以在80：1～1：10之間變化，兩者的總質量百分含量可以在5％～85％之間變化，使用助劑的配比也隨之作相應調整，形成新的實施例。
實施例5：12％葉菌唑·中生菌素可分散油懸浮劑(葉菌唑：中生菌素＝5：1)
按照常規工藝製成，其中葉菌唑10g，中生菌素2g，木質素磺酸鹽(分散劑)1g，蓖麻油聚氧乙烯醚(乳化劑)0.4g，烷基磺酸鹽(潤溼劑)1.5g，膨潤土(增稠劑)2g，乙二醇(防凍劑)1g，礦物油(分散介質)10g，松脂基植物油ND-OD2補足至100g。
本實施例中葉菌唑和中生菌素的質量比可以在80：1～1：10之間變化，兩者的總質量百分含量可以在5％～85％之間變化，使用助劑的配比也隨之作相應調整，形成新的實施例。
實施例6：6％葉菌唑·中生菌素水乳劑(葉菌唑：中生菌素＝1：1)
按照常規工藝製成，其中葉菌唑3g，中生菌素3g，十二烷基苯磺酸鈣(乳化劑)2g，苯乙基酚聚氧乙烯醚(乳化劑)1.7g，環己酮(溶劑)10.1g，二甲苯(溶劑)10.5g，黃原膠(增稠劑)0.5g，去離子水補足至100g。
本實施例中葉菌唑和中生菌素的質量比可以在80：1～1：10之間變化，兩者的總質量百分含量可以在5％～85％之間變化，使用助劑的配比也隨之作相應調整，形成新的實施例。
實施例7：6％葉菌唑·中生菌素微囊懸浮劑(葉菌唑：中生菌素＝1：5)
按照常規工藝製成，其中葉菌唑1g，中生菌素5g，環己酮(溶劑)1g，多異氰酸酯(固化劑)0.4g，阿拉伯膠(增稠劑)1.5g，乙二醇(防凍劑)0.4g，去離子水補足至100g。
本實施例中葉菌唑和中生菌素的質量比可以在80：1～1：10之間變化，兩者的總質量百分含量可以在5％～85％之間變化，使用助劑的配比也隨之作相應調整，形成新的實施例。
實施例8：11％葉菌唑·中生菌素懸浮劑(葉菌唑：中生菌素＝1：10)
按照常規工藝製成，其中葉菌唑1g，中生菌素10g，木質素磺酸鈉(分散劑)4g，乙二醇(抗凍劑)4g，有機矽酮(消泡劑)0.4g，十二烷基硫酸鈉(潤溼劑)3g，膨潤土(增稠劑)0.2g，去離子水補至100g。
本實施例中葉菌唑和中生菌素的質量比可以在80：1～1：10之間變化，兩者的總質量百分含量可以在5％～85％之間變化，使用助劑的配比也隨之作相應調整，形成新的實施例。
二、生物活性測定和田間藥效試驗實施例
將不同農藥的有效成分組合製成農藥，是目前開發和研製新農藥以及防治農業上抗性病蟲害的一種有效和快捷的方式。不同品種的農藥混合後，通常表現出三種作用類型：相加作用、增效作用和拮抗作用。但具體為何種作用，無法預測，只有通過大量試驗才能確定。
發明人通過大量的篩選試驗，發現葉菌唑與中生菌素組合對小麥赤黴病、小麥白粉病、黃瓜角斑病、水稻稻瘟病、蘋果輪紋病、小麥銹病、黃瓜黑星病、水稻細菌性條斑病、柑橘潰瘍病等具有明顯的協同增效作用。由此，本發明實例提供上述殺菌組合物在防治小麥赤黴病、小麥白粉病、黃瓜角斑病、水稻稻瘟病、蘋果輪紋病、小麥銹病、黃瓜黑星病、水稻細菌性條斑病、柑橘潰瘍病等的應用，效果不僅僅是兩種藥劑的簡單相加，具體用以下生物測定實例加以說明。
一)生物活性測定試驗實施例
1.葉菌唑與中生菌素復配對小麥赤黴病病菌的聯合毒力測定試驗
供試對象：小麥赤黴病病菌(Fusarium graminearum Schw.)
試驗採用菌絲生長速率法：以含有適量的二甲苯和吐溫-80的滅菌水作為對照(CK)。取4mL藥液加入到裝有36mL熱培養基(PDA培養基，45-50℃)的錐形瓶中，搖勻後，迅速倒入直徑90mm玻璃培養皿，每個培養皿倒入帶藥培養基10mL，每個處理4次重複，水平靜置，冷卻後即成平板。用直徑5mm打孔器從培養3d的供試菌落邊緣切取菌餅，用挑針將帶有菌絲的一面接到帶毒培養基上，所有操作均在超淨工作檯進行無菌操作。處理後放在24±1℃的恆溫無菌培養箱中暗箱培養，5d後採用十字交叉法分別測量各處理的菌落直徑，計算菌落直徑的平均值、菌絲生長抑制率。
聯合作用方式判定採用共毒係數(CTC)法。共毒係數的計算公式如下：
實測毒力指數(ATI)＝(標準藥劑EC50/供試藥劑EC50)×100
理論毒力指數(TTI)＝A藥劑ATI×混劑中A的百分含量+B藥劑ATI×混劑中B的百分含量
共毒係數(CTC)＝[混劑實測毒力指數(ATI)/混劑理論毒力指數(TTI)]×100
當CTC≤80，則組合物表現為拮抗作用，當80＜CTC＜120，則組合物表現為相加作用，當CTC≥120，則組合物表現為增效作用。
試驗結果：葉菌唑與中生菌素復配後對小麥赤黴病菌的聯合毒力測定試驗結果詳見表1。
表1葉菌唑和中生菌素復配對小麥赤黴病的聯合毒力測定試驗結果
表1中試驗結果表明，葉菌唑和中生菌素復配在80：1～1：10的配比範圍內對小麥赤黴病菌的聯合毒力測定試驗的共毒係數(CTC)均大於120，具有增效作用。尤其是在20：1～1：10的配比範圍內，CTC均大於180，增效作用顯著。
2.葉菌唑與中生菌素復配對小麥白粉病菌的室內毒力測定試驗
供試對象：小麥白粉病菌(Blumeriagraminis(DC.)
SpeerErysiphegraminisDC.E.graminisDC.f.sp.triticiMarchal)
在20度溫室內培養一批小麥苗，待長出3片真葉時，將小麥白粉病菌孢子均勻撒在小麥苗上進行接種，用記號筆分別寫上標籤編號，插入盆栽苗內，按序排放，供試驗用。待有小麥白粉病零星發生時，使用作物噴霧塔，採用莖葉噴霧處理進行施藥，12盆/處理，噴藥量共40ml/處理，10ml/重複，共4次重複。採用不同的藥劑和濃度進行處理後，將小麥置於溫室中培養。藥前調查病情指數，並於第二次藥後10d調查小麥白粉病發病情況，調查每盆小麥全部葉片的病情級數，參照以下標準進行分級和計算防效。
白粉病的分級方法(以葉片為單位)：
0級：無病；
1級：病斑面積佔整片葉面積的5％以下；
3級：病斑面積佔整片葉面積的6％―15％；
5級：病斑面積佔整片葉面積的16％―25％；
7級：病斑面積佔整片葉面積的26％―50％；
9級：病斑面積佔整片葉面積的50％以上。
聯合作用方式判定採用共毒係數(CTC)法。共毒係數的計算公式如下：
實測毒力指數(ATI)＝(標準藥劑EC50/供試藥劑EC50)×100
理論毒力指數(TTI)＝A藥劑ATI×混劑中A的百分含量+B藥劑ATI×混劑中B的百分含量
共毒係數(CTC)＝[混劑實測毒力指數(ATI)/混劑理論毒力指數(TTI)]×100
當CTC≤80，則組合物表現為拮抗作用，當80＜CTC＜120，則組合物表現為相加作用，當CTC≥120，則組合物表現為增效作用。
從表2中試驗數據可以看出，葉菌唑與中生菌素復配後各製劑實施例增效作用明顯；第二次施藥後10d，各復配藥劑對小麥白粉病的防治效果也明顯好於單劑。
表2葉菌唑與中生菌素復配對小麥白粉病菌的室內毒力測定試驗結果
表2中試驗結果表明，葉菌唑和中生菌素復配在80：1～1：80的配比範圍內對小麥白粉病菌聯合毒力測定試驗的共毒係數(CTC)均大於120，具有增效作用。尤其是在20：1～1：10的配比範圍內，CTC均大於180，增效作用顯著。
二)田間藥效試驗實施例
1.對小麥赤黴病的田間藥效試驗
試驗於2016年4月在河北保定一小麥地進行，該菜地連年種植小麥，小麥赤黴病發生程度較重。本試驗採用噴霧法，於小麥赤黴病發病初期進行施藥，間隔7天施第二次藥。藥前調查病情指數，並於第二次藥後7d調查小麥赤黴病發病情況，每小區隨機五點取樣，每點選二株，每株調查全部麥穗，以每一麥穗上的病斑面積佔整個麥穗面積的百分率來分級，並參照一下分級方法和計算公式，計算防效。
分級方法(以葉片為單位):
0級：無病斑；
1級：病斑面積佔整個麥穗面積的5％以下；
3級：病斑面積佔整個麥穗面積的6％―10％；
5級：病斑面積佔整個麥穗面積的11％―20％；
7級：病斑面積佔整個麥穗面積的21％―50％；
9級：病斑面積佔整個麥穗面積的50％以上。
從表3中試驗數據可以看出，葉菌唑與中生菌素復配後各製劑實施例增效作用明顯；第二次施藥後7d，各復配藥劑對小麥赤黴病的防治效果也明顯好於單劑。
表3葉菌唑與中生菌素復配對小麥赤黴病的田間防治效果
2、對黃瓜角斑病的田間藥效試驗
試驗於2016年5月在山東省壽光一蔬菜大棚內進行，該菜地連年種植黃瓜，黃瓜角斑病發生嚴重，本試驗採用噴霧法，於黃瓜角斑病發病初期進行施藥，間隔7天施第二次藥。藥前調查病情指數，並於第二次藥後7d調查黃瓜角斑病發病情況，每小區採用五點取樣，每點調查2―3株，調查每株的全部葉片，並根據以下分級方法及參照以下計算方法計算防效。
分級方法(以葉片為單位):
0級：無病斑；
1級：病斑面積佔整個葉面積的5％以下；
3級：病斑面積佔整個葉面積的6％―10％；
5級：病斑面積佔整個葉面積的11％―20％；
7級：病斑面積佔整個葉面積的21％―50％；
9級：病斑面積佔整個葉面積的50％以上。
從表4中試驗數據可以得出，葉菌唑與中生菌素復配後各製劑實施例增效作用明顯；第二次施藥後7d，各復配藥劑對黃瓜角斑病的防治效果也明顯好於單劑。
表4葉菌唑與中生菌素復配對黃瓜角斑病的田間防治效果
3、對水稻稻瘟病的田間藥效試驗
試驗於2016年7月在湖北省黃岡一水稻大田進行，該水稻田連年種植水稻，水稻稻瘟病發生嚴重，主要以葉瘟為主，本試驗採用噴霧法，於水稻稻瘟病發病初期進行施藥，間隔7天施第二次藥。藥前調查病情指數，並於第二次藥後7d調查水稻稻瘟病發病情況，每小區五點取樣，每點取50株，每株調查旗葉及旗葉以下兩片葉。以每一葉片上病斑面積佔整個葉面積的百分率來分級。
葉瘟(以葉片為單位)
0級：無病
1級：葉片病斑少於5個，長度小於1cm；
3級：葉片病斑6─10個，部分病斑長度大於1cm；
5級：葉片病斑11─25個，部分病斑連成片，佔葉面積10％～25％；
7級：葉片病斑26個以上，病斑連成片，佔葉面積26％～50％；
9級：病斑連成片，佔葉面積50％以上或全葉枯死。
從表5中數據可以得出，葉菌唑與中生菌素復配後各製劑實施例增效作用明顯；第二次施藥後7d，各復配藥劑對水稻稻瘟病的防治效果也明顯好於單劑。
表5葉菌唑與中生菌素復配對水稻稻瘟病的田間防治效果
4、對小麥白粉病的田間藥效試驗
試驗於2016年5月在河北省保定一小麥地進行，該地周年種植小麥，小麥白粉病發生嚴重，本試驗採用噴霧法，於小麥白粉病發病初期進行施藥，間隔10天施第二次藥。藥前調查病情指數，並於第二次藥後10d調查小麥白粉病發病情況，每小區對角線固定五點取樣，每點查0.25m2植株，小麥起身拔節期調查基部1～5片葉，抽穗後調查每株的旗葉及旗葉下第一片葉。
白粉病的分級方法(以葉片為單位)：
0級：無病；
1級：病斑面積佔整片葉面積的5％以下；
3級：病斑面積佔整片葉面積的6％―15％；
5級：病斑面積佔整片葉面積的16％―25％；
7級：病斑面積佔整片葉面積的26％―50％；
9級：病斑面積佔整片葉面積的50％以上。
從表6中試驗數據可以看出，葉菌唑與中生菌素復配後各製劑實施例增效作用明顯；第二次施藥後10d，各復配藥劑對小麥白粉病的防治效果也明顯好於單劑。
表6葉菌唑與中生菌素復配對小麥白粉病的田間防治效果
5、對蘋果輪紋病的田間藥效試驗
試驗於2016年6月在山東省煙臺一蘋果園內進行，該果園以種植蘋果為主，蘋果輪紋病發生嚴重，本試驗採用噴霧法，於蘋果輪紋病發病初期進行施藥，間隔10天施第二次藥。藥前調查病情指數，並於第二次藥後10d調查蘋果輪紋病發病情況，每小區隨機調查50個果實，計算病果率(包括落果)，參照以下公式計算防效。
從表7中試驗數據可以看出，葉菌唑與中生菌素復配後各製劑實施例增效作用明顯；第二次施藥後10d，各復配藥劑對蘋果輪紋病的防治效果也明顯好於單劑。
表7葉菌唑與中生菌素復配對蘋果輪紋病的田間防治效果
6、對小麥銹病的田間藥效試驗
試驗於2016年5月在河北保定一小麥地進行，該地周年種植小麥，小麥銹病發生嚴重，本試驗採用噴霧法，於小麥銹病發病初期進行施藥，間隔7天施第二次藥。藥前調查病情指數，並於第二次藥後7d調查小麥銹病發病情況，每小區隨機選有代表性的五點或對角線五點取樣調查，每點調查20株，每株調查頂部三片葉(若有旗葉則包括旗葉)，以每片葉上病斑面積佔整個葉面積的百分率分級，稈鏽以葉鞘或頂部麥稈為調查單位。
分級方法：
0級：無病；
1級：病斑面積佔整片葉面積的5％以下；
3級：病斑面積佔整片葉面積的6％―25％；
5級：病斑面積佔整片葉面積的26％―50％；
7級：病斑面積佔整片葉面積的51％―75％；
9級：病斑面積佔整片葉面積的76％以上。
試驗小區無其它病害發生。
從表8中試驗數據可以看出，葉菌唑與中生菌素復配後各製劑實施例增效作用明顯；第二次施藥後7d，各復配藥劑對小麥銹病的防治效果也明顯好於單劑。
表8葉菌唑與中生菌素復配對小麥銹病的田間防治效果
7、對黃瓜黑星病的田間藥效試驗
試驗於2016年6月在山東省壽光一蔬菜大棚內進行，該菜地以種植黃瓜為主，黃瓜黑星病發生嚴重，本試驗採用噴霧法，於黃瓜黑星病發病初期進行施藥，間隔10天施第二次藥。藥前調查病情指數，並於第二次藥後10d調查黃瓜黑星病發病情況，每小區採用五點取樣，每點調查2―3株，調查每株的全部葉片，並根據以下分級方法及參照以下計算方法計算防效。
葉分級方法：
0級：無病；
1級：病斑面積佔整片葉面積的10％以下；
3級：病斑面積佔整片葉面積的11％―25％；
5級：病斑面積佔整片葉面積的26％―40％；
7級：病斑面積佔整片葉面積的41％―65％；
9級：病斑面積佔整片葉面積的65％以上。
從表9中試驗數據可以看出，葉菌唑與中生菌素復配後各製劑實施例增效作用明顯；第二次施藥後10d，各復配藥劑對黃瓜黑星病的防治效果也明顯好於單劑。
表9葉菌唑與中生菌素復配對黃瓜黑星病的田間防治效果
8、對水稻細菌性條斑病的田間藥效試驗
試驗於2016年8月在湖北天門一水稻田內進行，該稻田地以種植水稻為主，水稻細菌性條斑病發生嚴重，本試驗採用噴霧法，於細菌性條斑病發病初期進行施藥，間隔10天施第二次藥。藥前調查病情指數，並於第二次藥後10d調查水稻細菌性條斑病發病情況，每小區五點取樣，每點取50株，每株調查旗葉及旗葉以下兩片葉。並根據以下分級方法及參照以下計算方法計算防效。
葉分級方法：
0級：無病；
1級：病斑面積佔整片葉面積的1％以下；
3級：病斑面積佔整片葉面積的2％─5％；
5級：病斑面積佔整片面積的6％─15％；
7級：病斑面積佔整片葉面積的16％─25％；
9級：病斑面積佔整片葉面積的25％以上。葉鞘一般枯死。
從表10中試驗數據可以看出，葉菌唑與中生菌素復配後各製劑實施例增效作用明顯；第二次施藥後10d，各復配藥劑對水稻細菌性條斑病的防治效果也明顯好於單劑。
表10葉菌唑與中生菌素復配對水稻細菌性條斑病的田間防治效果
9、對柑橘潰瘍病的田間藥效試驗
試驗於2016年9月在湖北黃岡一柑橘園內進行，該果園以種植柑橘為主，柑橘潰瘍病發生嚴重，本試驗採用噴霧法，於柑橘潰瘍病發病初期進行施藥，間隔10天施第二次藥。藥前調查病情指數，並於第二次藥後10d調查柑橘潰瘍病發病情況，每小區調查兩株，每株按東西南北中五點取樣，每點調查10個果及兩個梢上的全部葉片。並根據以下分級方法及參照以下計算方法計算防效。
葉(果)分級方法：
0級：無病；
1級：每葉(果)有病斑1個～5個；
3級：每葉(果)有病斑6個～10個；
5級：每葉(果)有病斑11個～15個；
7級：每葉(果)有病斑16個～20個；
9級：每葉(果)有病斑21個以上。
從表9中試驗數據可以看出，葉菌唑與中生菌素復配後各製劑實施例增效作用明顯；第二次施藥後10d，各復配藥劑對柑橘潰瘍病的防治效果也明顯好於單劑。
表9葉菌唑與中生菌素復配對柑橘潰瘍病的田間防治效果
從葉菌唑和中生菌素復配對番茄葉黴病的室內試驗結果，及對小麥赤黴病、小麥白粉病、黃瓜角斑病、水稻稻瘟病、蘋果輪紋病、小麥銹病、黃瓜黑星病、水稻細菌性條斑病、柑橘潰瘍病等的田間藥效試驗結果看，各復配藥劑均有很好的防治效果，防效顯著好於單劑。說明復配具有增效作用，持效期延長，可以降低用藥量和施藥次數，延緩抗藥性產生，同時可降低防治成本。
以上僅為本發明的較佳實施例而已，並不用以限制本發明，凡在本發明的精神和原則之內所作的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本發明的保護範圍之內。