一種假地藍植株再生的快速繁殖方法
2023-06-01 10:04:36 1
一種假地藍植株再生的快速繁殖方法
【專利摘要】本發明研究了一種假地藍植株再生的快速繁殖方法，包括無菌莖尖的獲得，愈傷組織的誘導，愈傷組織的分化，生根誘導等步驟。本研究以假地藍莖尖為外植體，系統地研究了誘導愈傷組織、愈傷組織分化、幼苗生根的培養基條件，為建立高效便捷的無病毒假地藍快速繁殖技術體系提供依據。
【專利說明】 一種假地藍植株再生的快速繁殖方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及植物組織培養的快繁方法，屬於植物【技術領域】。
【背景技術】
[0002]假地藍，Croia/aria /errwgiflea,又名響鈴草,荷豬草,黃花野百合,豆科,多年生草本，根長達60釐米以上，莖、枝直立或略上升，通常分枝甚多，莖、枝、葉各部分均有稍長而擴展的毛，生於山坡疏林及荒山草地，海拔400-1000米，我國普遍有分布，而以西南為多見。乾燥全草，莖圓形，全體有黃棕色茸毛，葉片捲曲，多脫落，呈橢圓形或卵形，黃綠色，枝端尚帶莢果，種子大多脫落，帶根者，根蜿蜒而長，圓形，少分枝，鬚根細長，表面土黃色。種子含豬屎豆鹼、次豬屎豆鹼、光萼豬屎豆鹼、尼勒吉扔鹼、豬屎青鹼等生物鹼，尚含β -谷甾醇、木犀草素、牡荊素、牡荊素木糖甙以及能凝集人A型和B型紅細胞的植物凝集素。藥用功效為斂肺氣，補脾腎，利小便，消腫毒，治久咳痰血，耳鳴，耳聾，夢遺，慢性腎炎，膀胱炎，腎結石，扁桃腺炎，淋巴腺炎，疔毒，惡瘡。
【發明內容】
[0003]本發明所要解決的技術問題是提供假地藍植株再生的快速繁殖方法，本研究以假地藍莖尖為外植體，系統地研究了誘導愈傷組織、愈傷組織分化、幼苗生根的培養基條件，為建立高效便捷的無病毒假地藍快速繁殖技術體系提供依據。
[0004]本發明所要解決的技術問題是通過以下方案來實現的:
取假地藍長出的嫩莖尖，並把莖尖切成V字型，用0.1%的升汞處理6min，無菌水衝洗5次，消毒處理過的假地藍莖尖接入培養基為MSB+2，4-D4.0mg/L+脯氨酸500mg/l+穀氨醯胺500mg/L+水解酪蛋白300mg/L+8g/L卡拉膠進行愈傷組織誘導，附加鹿糖30g/L,瓊脂
6.5g/L，pH5.8，光照強度ΙΟΟΟΙχ，光照時間5h/d，溫度24±2°C，誘導出來的愈傷組織放入分化培養基 MSB+6-BA2.5-3.0mg/L+KT2.5-3mg/L+GA30.5mg/L,附加蔗糖 30g/L，瓊脂 6.5g/L, pH5.8,光照25001x,溫度24±2°C,假地藍再生試管苗在生根培養基中培養一個月後，開瓶煉苗3d，取出小苗在自來水下洗淨根部的培養基，用低濃度高錳酸鉀溶液潤洗根部，然後栽植到滅菌過的基質山地黃壤土:蛭石:泥炭=1:1:1中，放入恆溫28°C的智能人工氣候培養櫃內培養，光照強度20001x，光照時間24h/d。
[0005]採用本發明製備的假地藍成活率高，周期短，操作簡單利於大規模種植。
[0006]下面將結合【具體實施方式】對本發明作進一步闡述，但本發明要求保護的範圍並不局限於下列實施方式。
【具體實施方式】
[0007]實施例1
取假地藍長出的嫩莖尖，並把莖尖切成V字型，用0.1%的升汞處理6min，無菌水衝洗5次，消毒處理過的假地藍莖尖接入培養基為MSB+2，4-D4.0mg/L+脯氨酸500mg/l+穀氨醯胺500mg/L+水解酪蛋白300mg/L+8g/L卡拉膠進行愈傷組織誘導，附加鹿糖30g/L,瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照強度ΙΟΟΟΙχ，光照時間5h/d，溫度24±2°C，誘導出來的愈傷組織放入分化培養基 MSB+6-BA2.5mg/L+KT2.5mg/L+GA30.5mg/L,附加蔗糖 30g/L，瓊脂 6.5g/L，pH5.8，光照25001x，溫度24±2°C，假地藍再生試管苗在生根培養基中培養一個月後，開瓶煉苗3d，取出小苗在自來水下洗淨根部的培養基，用低濃度高錳酸鉀溶液潤洗根部，然後栽植到滅菌過的基質山地黃壤土:蛭石:泥炭=1:1:1中，放入恆溫28°C的智能人工氣候培養櫃內培養，光照強度20001x，光照時間24h/d，成活率89%。
[0008]實施例2
取假地藍長出的嫩莖尖，並把莖尖切成V字型，用0.1%的升汞處理6min，無菌水衝洗5次，消毒處理過的假地藍莖尖接入培養基為MSB+2，4-D4.0mg/L+脯氨酸500mg/l+穀氨醯胺500mg/L+水解酪蛋白300mg/L+8g/L卡拉膠進行愈傷組織誘導，附加鹿糖30g/L,瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照強度ΙΟΟΟΙχ，光照時間5h/d，溫度24±2°C，誘導出來的愈傷組織放入分化培養基 MSB+6-BA3.0mg/L+KT3mg/L+GA30.5mg/L,附加蔗糖 30g/L，瓊脂 6.5g/L，pH5.8，光照25001x，溫度24±2°C，假地藍再生試管苗在生根培養基中培養一個月後，開瓶煉苗3d，取出小苗在自來水下洗淨根部的培養基，用低濃度高錳酸鉀溶液潤洗根部，然後栽植到滅菌過的基質山地黃壤土:蛭石:泥炭=1:1:1中，放入恆溫28°C的智能人工氣候培養櫃內培養，光照強度20001x，光照時間24h/d，成活率90%。
[0009]實施例3
取假地藍長出的嫩莖尖，並把莖尖切成V字型，用0.1%的升汞處理6min，無菌水衝洗5次，消毒處理過的假地藍莖尖接入培養基為MSB+2，4-D4.0mg/L+脯氨酸500mg/l+穀氨醯胺500mg/L+水解酪蛋白300mg/L+8g/L卡拉膠進行愈傷組織誘導，附加鹿糖30g/L,瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照強度ΙΟΟΟΙχ，光照時間5h/d，溫度24±2°C，誘導出來的愈傷組織放入分化培養基 MSB+6-BA3.0mg/L+KT2.5mg/L+GA30.5mg/L,附加蔗糖 30g/L，瓊脂 6.5g/L，pH5.8，光照25001x，溫度24±2°C，假地藍再生試管苗在生根培養基中培養一個月後，開瓶煉苗3d，取出小苗在自來水下洗淨根部的培養基，用低濃度高錳酸鉀溶液潤洗根部，然後栽植到滅菌過的基質山地黃壤土:蛭石:泥炭=1:1:1中，放入恆溫28°C的智能人工氣候培養櫃內培養，光照強度20001x，光照時間24h/d，成活率91%。
【權利要求】
1.本發明研究了一種假地藍植株再生的快速繁殖方法，包括無菌莖尖的獲得，愈傷組織的誘導，愈傷組織的分化，生根誘導等，其主要步驟如下: (1)取假地藍的幼嫩莖尖，對其進行消毒處理； (2)將步驟(I)消毒處理過的假地藍莖尖接入培養基為MSB+2，4-D4.0mg/L+脯氨酸500mg/l+穀氨醯胺500mg/L+水解酪蛋白300mg/L+8g/L卡拉膠進行愈傷組織誘導，附加鹿糖30g/L，瓊脂6.5g/L，ρΗ5.8，光照強度ΙΟΟΟΙχ，光照時間5h/d，溫度24±2°C ； (3)取步驟(2)誘導出來的愈傷組織放入分化培養基MSB+6-BA2.5-3.0mg/L+KT2.5-3mg/L+GA30.5mg/L,附加蔗糖 30g/L,瓊脂 6.5g/L，ρΗ5.8，光照 25001χ,溫度24±2°C ； (4)取步驟(3)分化培養出來的假地藍芽苗進行生根誘導。
2.按照權利要求1所述的一種假地藍植株再生的快速繁殖方法，其特徵在於:步驟(I)中所述假地藍無菌莖尖的獲得為，取假地藍長出的嫩莖尖，並把莖尖切成V字型，用0.1%的升萊處理6min,無菌水衝洗5次。
3.按照權利要求1所述的一種假地藍植株再生的快速繁殖方法，其特徵在於:步驟(4)假地藍生根誘導的方法為假地藍再生試管苗在生根培養基中培養一個月後，開瓶煉苗3d，取出小苗在自來水下洗淨根部的培養基，用低濃度高錳酸鉀溶液潤洗根部，然後栽植到滅菌過的基質山地黃壤土:蛭石:泥炭=1:1:1中,放入恆溫28°c的智能人工氣候培養櫃內培養，光照強度20001x，光照時間24h/d。
【文檔編號】A01H4/00GK104273033SQ201410550703
【公開日】2015年1月14日 申請日期:2014年10月17日 優先權日:2014年10月17日
【發明者】劉東鋒, 楊成東 申請人:南京帝道農業科技有限公司