一種黴菌數量檢驗用培養基及其製備與應用的製作方法

2023-06-02 00:38:26 1

專利名稱：一種黴菌數量檢驗用培養基及其製備與應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及生物分析技術領域，具體涉及一種黴菌數量檢驗用培養基及其製備與應用。
背景技術：
現有技術中，常用於菸草及菸草製品中黴菌數量檢驗用培養基有如下4種孟加拉紅瓊脂培養基、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基、察氏瓊脂和含20%蔗糖的高滲察氏瓊脂培養基。孟加拉紅瓊脂培養基的配方為蛋白腖5.0g，葡萄糖10. 0g，磷酸二氫鉀I. Ogjt 酸鎂(無水)O. 5g，瓊脂20. Og,孟加拉紅O. 033g,氯黴素O. Ig,蒸餾水1000mL。該培養基能滿足環境中一般黴菌的生長，也能滿足部分具嗜乾性特點黴菌的生長。但菸草及菸草製品中常見的具嗜乾性特點的汙染黴菌——局限麴黴，則不能在其上生長，從而可影響待檢樣品中黴菌數量檢驗結果的準確性。馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基的配方為馬鈴薯(去皮切塊)300g (按GB4789. 15-2010食品微生物學檢驗黴菌和酵母計數)(也有200g (按中國科學院微生物研究所《常見與常用真菌》編寫組.常見與常用真菌，北京科學出版社，1973))，葡萄糖20. Og,瓊脂20. Og,氯黴素O. Ig(有的加入此化合物，有的未加入)，蒸餾水1000mL。該培養基能滿足環境中一般黴菌的生長，也能滿足部分具嗜乾性特點黴菌的生長。但菸草及菸草製品中常見的具嗜乾性特點的汙染黴菌——局限麴黴，則不能在其上生長，從而可影響待檢樣品中黴菌數量檢驗結果的準確性。察氏瓊脂培養基的配方為=NaNO33. 0g, K2HPO4 I. 0g, KC10. 5g，MgSO4 · 7H20 0. 5g，FeSO4 0. Olg,蔗糖20. Og,瓊脂20. Og,蒸餾水1000mL。該培養基能滿足環境中一般黴菌的生長。但菸草及菸草製品中常見的具嗜乾性特點的汙染黴菌，如局限麴黴則不能在其上生長。另外菸草及菸草製品中常見的汙染黴菌，如匍枝根黴在其上生長極弱甚至不生長。(原因是其不能利用該培養基中的NaNO3作為生長用的N源營養物(中國科學院微生物研究所《常見與常用真菌》編寫組.常見與常用真菌，北京科學出版社，1973.))。因而可影響待檢樣品中黴菌數量檢驗結果的準確性。含20%蔗糖的高滲察氏瓊脂培養基的配方為=NaNO3 3. Og7K2HPO4 I. 0g,KC10. 5g，MgSO4 ·7Η20 O. 5g，FeSO4 O. 01g，蔗糖200g，瓊脂20. 0g，蒸餾水IOOOmL0該培養基能滿足環境中具嗜乾性特點的黴菌生長，也能滿足環境中一般黴菌的生長。但菸草及菸草製品中常見的汙染黴菌，如匍枝根黴在其上生長極弱，甚至可不生長(原因同察氏瓊脂)。因而可影響待檢樣品中黴菌數量檢驗結果的準確性。

發明內容
本發明目的是針對當前國內外暫未建立菸草及菸草製品中黴菌數量檢驗用的統一標準方法，更無適用於菸草及菸草製品中黴菌數量檢驗用的標準培養基的現狀，研製一種新的、完全能適用於菸草及菸草製品中黴菌數量檢驗用的培養基，從而解決了這一檢驗領域的技術難題，為建立我國菸草行業的菸草及菸草製品中黴菌數量檢驗的標準方法奠定基礎。本發明首先提供了一種適用於菸草及菸草製品中黴菌數量檢驗用的培養基，為NaCl (氯化鈉)添加濃度為10-50g/1000ml的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基。較佳的，所述黴菌數量檢驗用培養基中，NaCl添加濃度為25-35g/1000ml培養基，最佳為30g/1000ml培養基。進一步的，除NaCl外，每IOOOmL本發明的培養基還含有下列組分馬鈴薯200_300g，葡萄糖15_25g, 瓊脂15_25g，氯黴素0-0. lg，蒸懼水補足培養基總體積至1000mL。最佳的，本發明的黴菌數量檢驗用培養基中，每IOOOmL培養基含有下列組分馬鈴薯200g葡萄糖20. OgNaC130. Og瓊脂16. Og氯黴素O. Ig蒸餾水補足培養基總體積至1000mL。本發明的黴菌數量檢驗用培養基的製備方法如下將馬鈴薯去皮切塊，加蒸餾水IOOOmL,煮沸lOmin，後用紗布過濾，按配比加入葡萄糖、NaCl和瓊脂，補加蒸餾水至IOOOmL,加熱溶化，分裝後滅菌，倒平板前，按配比將氯黴素加入培養基中。氯黴素加入培養基的方法可先用少量乙醇溶解氯黴素後加入培養基。本發明的培養基特別適用於菸草及菸草製品中黴菌數量的檢驗。本發明針對現有技術中的黴菌培養基，有的雖能滿足菸草及菸草製品中一般黴菌的生長，但卻不能滿足菸草及菸草製品中某些具嗜乾性特點黴菌的生長(如馬鈴薯葡萄糖瓊脂、孟加拉紅瓊脂、察氏瓊脂培養基上局限麴黴不能生長);有的培養基，如含20%蔗糖的高滲察氏瓊脂培養基，雖能滿足菸草及菸草製品中具嗜乾性特點黴菌的生長，也能滿足大多普通黴菌的生長，但菸草及菸草製品中常見的汙染黴菌——匍枝根黴在其上生長極弱，甚至不生長(該菌在察氏瓊脂上生長情況也是如此，見下實施例子和文獻)。對此，本發明根據菸草及菸草製品中常見汙染黴菌的營養需求及生理特點，選用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基作為基礎培養基(其營養成分能滿足一般黴菌生長需求)，同時在其中加入一定量的NaCl，以適當提高培養基的滲透壓(即達到既不影響菸草及菸草製品中一般黴菌生長，又能滿足具嗜乾性特點黴菌生長所需的滲透壓)，這樣的嘗試，取得了理想的試驗結果，從而解決了菸草及菸草製品中黴菌數量檢驗領域的一個技術難題。與以往常用的黴菌培養基相比，採用本發明的培養基不僅具有檢驗黴菌菌相更全面、而且具有獲得黴菌數量結果更準確等優點。


圖I局限麴黴、產黃青黴和總狀毛黴在孟加拉紅瓊脂培養基上的生長情況圖2局限麴黴、產黃青黴和總狀毛黴在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基上的生長情況圖3局限麴黴、產黃青黴和總狀毛黴在本發明培養基上的生長情況附圖標記I :總狀毛黴2 :產黃青黴·3:局限麴黴
具體實施例方式以下通過特定的具體實例說明本發明的實施方式，本領域技術人員可由本說明書所揭露的內容輕易地了解本發明的其他優點與功效。本發明還可以通過另外不同的具體實施方式
加以實施或應用，本說明書中的各項細節也可以基於不同觀點與應用，在沒有背離本發明的精神下進行各種修飾或改變。實施例I按下列配方配製培養基馬鈴薯200g葡萄糖20. OgNaC130. Og瓊脂16. Og氯黴素O. Ig蒸餾水補足1000mL。培養基配製方法將馬鈴薯去皮切塊，加IOOOmL蒸餾水，煮沸lOmin。用紗布過濾，加入葡萄糖、NaCl和瓊脂，補加蒸餾水至IOOOmL,加熱溶化，分裝後，121°C滅菌20min。倒平板前，用少量乙醇溶解氯黴素加入培養基中。實施例2按下列配方配製培養基馬鈴薯300g葡萄糖15. OgNaC125. Og瓊脂25. Og蒸餾水補足lOOOmL。培養基配製方法將馬鈴薯去皮切塊，加IOOOmL蒸懼水,煮沸lOmin。用紗布過濾，加入葡萄糖、NaCl和瓊脂，補加蒸餾水至IOOOmL,加熱溶化，分裝後，121°C滅菌20min，倒平板。實施例3按下列配方配製培養基馬鈴薯200g葡萄糖25. Og
NaC135. Og瓊脂15. Og氯黴素O. Ig蒸餾水補足lOOOmL。培養基配製方法同實施例I。實施例48種試驗黴囷在6種黴囷培養基上生長情況以菸草及菸草製品中常見的8種汙染黴菌作為試驗菌，並選擇6種常用的黴菌培 養基作為試驗用的候選培養基(包括實施例I製備的培養基(以下稱為I號瓊脂培養基))，採用黴菌三點接種法接種，經28°C培養6-9d後，觀察各試驗菌在上述6種培養基上的生長情況，試驗結果見下表I表I. 8種試驗黴菌在6種常用黴菌培養基上的生長情況
權利要求
1.一種黴菌數量檢驗用的培養基，為NaCl添加濃度為10-50g/1000ml的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基。
2.如權利要求I所述黴菌數量檢驗用的培養基，其特徵在於，所述NaCl添加濃度為25-35g/1000ml 培養基。
3.如權利要求I所述黴菌數量檢驗用的培養基，其特徵在於，除NaCl外，每IOOOmL所述培養基還含有下列組分 馬鈴薯200-300g， 葡萄糖15-25g， 瓊脂 15-25g， 氯黴素0-0. Ig, 蒸餾水補足培養基總體積至1000mL。
4.如權利要求I所述黴菌數量檢驗用的培養基，其特徵在於，每IOOOmL所述培養基中含有下列組分 馬鈴薯200g 葡萄糖20. Og NaC130. Og 瓊脂16. Og 氯黴素O. Ig 蒸餾水補足培養基總體積至1000mL。
5.如權利要求1-3任一權利要求所述培養基用於菸草及菸草製品中黴菌數量檢驗的用途。
全文摘要
本發明公開了一種黴菌數量檢驗用的培養基及其應用。本發明的黴菌數量檢驗用的培養基，為NaCl添加濃度為10-50g/1000ml的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基。本發明的黴菌數量檢驗用的培養基既不影響菸草及菸草製品中一般黴菌生長，又能滿足具嗜乾性特點黴菌生長的需求，特別適合菸草及菸草製品中黴菌數量檢驗。
文檔編號C12Q1/04GK102943105SQ20121038240
公開日2013年2月27日 申請日期2012年10月10日 優先權日2012年10月10日
發明者林華清, 沙雲菲, 戚大偉, 吳達 申請人:上海菸草集團有限責任公司