利用氧氣療法的分割放療和化療的製作方法
2023-07-03 16:46:51 1
本創作係指一種氧氣療法的使用並結合化療給藥和/或放療的反覆運用。創作背景放射增敏劑是一種使腫瘤細胞對放射治療更加敏感的藥物。放療的一大主要限制作用就是讓實體腫瘤的細胞在氧氣中變得稀少。實體腫瘤的增長速度超過血液供應速度，因而會造成一種低氧狀態(稱為組織缺氧)。氧氣是一種強有力的放射增敏劑，通過形成損壞DNA的自由基來增加一次放射的有效性。缺氧環境中的腫瘤細胞可能比正常氧氣環境下的細胞對輻照損傷具有超出3倍的耐受力。創作圖式的簡要描述為讓本創作更能明顯易懂，下文特配合所附圖式和標示的內含元素作詳細說明如下：其中，圖1A顯示了在老鼠中9個Hs-766T胰腺癌腫瘤異種移植物的氧氣水平。不同的跡線代表了在9個不同老鼠中的9種腫瘤。每個老鼠都被注射了一個劑量的NVX-108：0.3mL/kg(藍色跡線)，0.45mL/kg(綠色跡線)或0.6mL/kg(紅色跡線)；圖1B顯示了3種不同劑量NVX-108水平下，老鼠中Hs-766T胰腺癌腫瘤異種移植物的平均和標準差氧氣水平：0.3mL/kg(藍色跡線，n＝2)，0.45mL/kg(綠色跡線，n＝3)或0.6mL/kg(紅色跡線，n＝4)；圖2A顯示了3組老鼠中腫瘤增長百分比對比圖；圖2B系圖2A中兩個治療組的放大圖。較佳實施例的詳細描述本創作在下文中通過較佳實施例並參考圖表進行了描述，在圖表中同類數字代表相同或相似的元素。本說明書中所指「一個實施例」，「某實施例」或類似用語係指本實施例描述的某個具體特徵、結構或特點被包含在本創作的至少一個實施例中。因此，「一實施例」，「某實施例」和貫穿本說明書的類似用語均可能(但不一定)指同一實施例。本創作中描述的特徵，結構或特點可能以任何合適的方式與一個或多個實施例相結合。在下列描述中，許多具體細節被反覆引用以便於充分理解本創作的實施例。不過，熟悉此項技術之人士當可在缺乏一個或多個具體細節的情況下，或採用其他方法，成分和材料等實施本創作。在其他情況下，熟知的結構，材料或操作並未詳細展示或描述，以避免對本創作引起歧義。十二氟戊烷乳劑(DDFPe)曾作為一种放療增敏劑在單次放療中進行測試。腫瘤(異種移植)被輻射，然後從動物中移除，細胞被分解並測試其生存能力。腫瘤的增長或存活都沒有被評估，並且，腫瘤pO2也沒有被直接評估。化療中實施DDFPe的效果也沒有被評估。分割放療中DDFPe的多劑量實施也沒有被評估。在某些實施例中，被治療的動物是哺乳動物。在某些實施例中，被治療的動物是人。在某些實施例中，劑量在大約0.01cc/kg到大約1.0cc/kg(2％w/volDDFPe)之間變化。在某些實施例中，劑量在大約0.05cc/kg到0.3cc/kg之間變化，並通過長達30分鐘的注入或單次彈丸推注的方式給藥。熟悉此項技術之人士應當會承認，如果乳劑中DDFP的濃度增加(例如5％或10％，按體重計)，則用藥量一般會隨之減少。優選情況下，研究對象吸入氧氣或氧氣與二氧化碳的混合氣體，例如碳合氣，其比例為95％氧氣混合5％二氧化碳與98％氧氣混合2％二氧化碳之間。申請人發現碳合氣和氧氣的使用效果相當，但碳合氣有些問題。它必須專門訂購，而氧氣隨處可得。每次放療前都靜脈注射DDFPe。在某些實施例中，DDFPe作為一種當前臨床研發中的用藥產品以NVX-108命名。在先前技術中，相對較高分子量的碳氟化合物已經作為放射增敏劑進行研究。已經作為放射增敏劑研究的材料包括：F-1,3-二甲基金剛烷，F-trimethylbicyclo[3.3.1]壬烷，F-三丁胺(FC-43,3M公司)，全氟萘烷和液態氟碳。創作者發現，低分子量的碳氟化合物(FC)，尤其是沸點在大約-4攝氏度到大約100攝氏度之間的FC，比更高分子量、更高沸點的FC更加有效。更優選的是沸點在大約20到80攝氏度之間的FC，而更為優選的是沸點在大約28到60攝氏度之間的FC。本創作中使用的FC包括：全氟丁烷，全氟戊烷，全氟己烷，全氟庚烷和全氟辛烷。在最優選的全氟戊烷和全氟己烷中，最優選的是全氟戊烷。最優選情況下，FC通過高壓、溫控同質化被製成一種乳劑。多種表面活化劑可以被用來製備乳劑。優選的表面活化劑是磷脂，而優選的磷脂成分包括dioleoylphosphatidylcholine(DOPC)和二油醯磷脂醯乙醇胺-PEG-5000(DOPE-PEG5k)。另一種優選的磷脂混合物包括二棕櫚醯磷脂醯膽鹼(DPPC)和二棕櫚醯磷脂醯乙醇胺-PEG-5000(DPPE-PEG5k)。油脂的優選比例是92分子百分數DPPC和8分子百分數DPPE-PEG。同比例的油脂也可優選用於未飽和磷脂醯基團。其他磷脂，例如膽固醇，磷脂酸，硬脂酸，棕櫚酸，油酸和磷脂醯乙醇胺，可以與上述油脂混合。其他有用的表面活化劑包括含氟表面活性劑，如PEG調聚物B和CAPSTONE(杜邦)。可以使用磷脂和含氟表面活性劑的混合物。其他表面活化劑包括聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物表面活化劑，例如「普朗尼克」F-68。優選情況下，將黏精納入配方中來增加產品中的粘性以減少納米乳劑的沉澱。黏精包括蔗糖，羧甲基纖維素，海藻糖，澱粉，人造血漿溶液黃原膠，丙二醇，甘油和聚乙二醇，其分子量在大約400到8000MV之間。優選情況下，配方包含一種緩衝劑，如磷酸鈉，以此將pH值穩定在中性左右，也就是pH＝7.0。由於本創作使用更低沸點的FC來獲得更大的功效，用更低的劑量就可以有效逆轉耐輻照性。例如，NVX-108隻有2％w/vol的DDFP。先前的材料擁有大於10％w/vol的FC。對於本創作而言，優選的FC重量範圍是從大約1％到5％w/vol，其中最優選的是2％w/vol的FC，例如2％w/vol的DDFP或全氟。在患有異種移植腫瘤的動物身上的實驗表明，對於呼吸碳合氣和氧氣的動物來說NVX-108對pO2腫瘤的效果相當。但是對於呼吸室內空氣的動物來說對pO2腫瘤產生的效果會降低。因此，就本創作而言，研究對象在給予乳劑過程之中和之後，以及在放療或化療用藥期間，都可以呼吸碳合氣或者補充氧氣。這種材料可以與放療同時施用，或者在放療前施用，例如，在放療前多達120分鐘時施用。作為一種選項，除了放療或者單獨使用以外，化療可以與DDFPe同時施用。各種抗腫瘤藥都可以在本創作中使用，包括但不限於：烷化劑，抗代謝藥物，蒽環類藥物，拓撲異構酶抑制劑，有絲分裂抑制劑，皮質類固醇，各種各樣的化療藥物，靶向治療，激素治療和免疫治療藥物。NVX-108包含的一種劑型由表1中所列的組分組成。表1成分規格作用濃度(毫克/毫升)戊烷醫用級活性20蔗糖醫用級輔藥300PEG聚合物B純化的化學級輔藥3注射用水USP溶劑適量至1毫升氮醫用級頭部空間吹氣適量磷酸鈉USP緩衝劑0.01M鹽酸USP輔藥適量一般情況下，申請人的氟碳乳液不包含任何醯氨基胺氧化合物。更具體而言，申請人的氟碳乳液不包含任何氟化醯胺基胺氧化物。烷化劑包括但不限於氮芥：例如二氯甲基二乙胺(氮芥)，苯丁酸氮芥，環磷醯胺(環磷醯胺)，異環磷醯胺和苯丙氨酸氮芥；亞硝基脲：包括鏈脲佐菌素，亞硝(基)脲氮芥(BCNU)，和環己亞硝脲；烷基磺酸鹽：甲磺酸丁二醇二酯；三嗪：氮烯唑胺(DTIC)和替莫唑胺(TEMODAR)；乙烯亞胺:噻替哌和六甲蜜(六甲蜜胺)。鉑類藥物(順鉑，卡鉑，奧沙利鉑)有時和烷化劑歸為一類，因為它們以相似的方式殺死細胞。抗代謝物的樣例包括：5-氟尿嘧啶(5-FU)，6-巰嘌呤(6-MP)，卡培他濱(XELODA)，克拉屈濱，氯法拉濱，阿糖胞苷(ARA-C)，氟尿苷，氟達拉濱，吉西他濱(GEMZAR)，羥基脲，氨甲葉酸，培美曲塞(ALIMTA)，噴司他丁和硫鳥嘌呤。蒽環類包括：柔紅黴素，阿黴素(ADRIAMYCIN)和表柔比星。非蒽環黴素的伊達比星抗腫瘤抗生素包括：放線菌素博萊黴素和絲裂黴素-C。米託蒽醌是一種許多方面都和阿黴素相似的抗腫瘤抗生素。拓撲異構酶I抑制劑的樣例包括拓撲替康和依立替康(CPT-11)。拓撲異構酶II抑制劑的樣例包括依託泊苷(VP-6)和替尼泊苷。米託蒽醌也抑制拓撲異構酶II。有絲分裂抑制劑的樣例包括：紫杉烷類：紫杉醇(TAXOI)和多西他賽(TAXOTERE)。埃博黴素包括伊沙匹隆(IXEMPRA)。長春花生物鹼包括長春花鹼(VELBAN)，長春新鹼(ONCOVIN)，和長春瑞濱(NAVELBINE)和雌莫司汀(EMCYT)。皮質類固醇樣例包括潑尼松，甲潑尼龍(SOLUMEDROL)，和地塞米松(DECADRON)。射靶療法樣例包括伊馬替尼(GLEEVEC)，吉非替尼(IRESSA)，舒尼替尼(SUTENT)和硼替佐米(VELCADE)。分化誘導劑樣例包括維甲酸，維A酸(ATRA或ATRALIN)和貝沙羅汀(TARGRETIN)，以及三氧化二砷(ARSENOX)。激素治療劑樣例包括抗雌激素：氟維司群(FASLODEX)，他莫昔芬，和託瑞米芬(FARESTON)。芳香抑制劑包括：阿那曲唑(ARIMIDEX)，依西美坦(AROMASIN)，和來曲唑(FEMARA)。孕激素包括醋酸甲地孕酮(MEGACE)和雌激素。抗雄激素包括比卡魯胺(CASODEX)，氟他胺(EULEXIN)，和尼魯米特(NILANDRON)。促性腺激素釋放激素(GnRH)，也叫作促黃體生成激素釋放激素(LHRH)激動劑或類似物，包括亮丙瑞林(LUPRON)和戈舍瑞林(ZOLADEX)。免疫治療種類及其樣例包括：單克隆抗體療法(被動免疫治療)，例如利妥昔單抗(RITUXAN)和阿侖單抗(CAMPATH)。非特定免疫治療和佐劑(提高免疫反應的其他物質和細胞)包括BCG，白細胞介素-2(IL-2)，和α-幹擾素。免疫調節藥，例如，沙利度胺和來那度胺(REVLIMID)。癌症疫苗(特定主動免疫治療)，如針對晚期前列腺癌的PROVENGE疫苗，可以和DDFPe以及其他當前研製中的疫苗一起使用。FC的使用增加了免疫治療的活力，例如作為免疫細胞的(易普利姆瑪)在通過腫瘤復氧獲得的氧化環境下變得更加活躍。其他可以和FC乳劑一起使用的免疫調節藥物包括PD-L1表達抑制劑。單克隆抗體在本創作中尤其有用。這些抗體可以被用作疫苗來激發排斥癌症的免疫反應。免疫系統的非特定刺激物可以在本創作中使用。樣例包括細胞因子，如白細胞介素和幹擾素(如幹擾素-α和白介素-2)。在本創作中有用的抗體包括阿侖單抗，貝伐單抗，Brentuximabvedotin，西妥昔單抗，吉妥珠單抗奧佐米星，替伊莫單抗，易普利姆瑪，Nivolumab，Ofatumumab，帕尼單抗，利妥昔單抗，託西莫單抗和曲妥珠單抗。本創作可以與過繼性T細胞療法抗-CD47抗體，抗-GD2抗體，免疫反制點阻斷劑和EGF受體抗體一起使用。乳劑的使用可以增加腫瘤組織中的氧氣，以便通過氧化應激促進免疫機制，並使得免疫系統更加有效，當然也可以通過改變基因表達來實現。通過減少缺氧相關的基因表達，這種氧氣療法將侵略性缺氧介導的表型轉換成更容易被免疫系統擊敗的低侵略性表型。在某些實施例中，申請人的創作包括一種改變基因表達的方法，即通過給有需要的病人施用有效治療劑量的氧氣治療劑，例如，但不限於NVX-108。優選情況下，在呼吸補充氧氣或碳合氣的同時使用DDFPe，這會增加腫瘤氧化，使得化療藥物的作用更加有效。同時進行放療則可以獲得協同優勢。以下案例旨在向熟悉此項技術之人士進一步證明如何作出和使用本創作。不過，這些案例無意限制本創作所界定的範圍。案例1十二氟戊烷乳劑的製備在室溫下通過在注射用水中溶入適量USP等級的蔗糖製備一種30％蔗糖溶液，隨後加入磷酸二氫鈉加以中和，使系統pH值為7。在第二個容器中，一種DDDFP：PEG調聚物B比例為7：1的DDFP(十二氟戊烷)Peg調聚物B的懸浮液按如下方法製備出來。在一個冷卻至4℃的夾套容器中，PEG調聚物B通過攪拌分散在注射用水中。預冷(4℃)的DDFP被加入到攪拌好的PEG調聚物B中，然後進行攪拌直至獲得一種均勻的乳狀懸浮液。在一個Avestin型C50均質器中對這種懸浮液進行長達18分鐘的高壓均質化處理，並保持溫度低於7℃。這種乳劑通過均質器在低壓下被轉移到一個包含30％蔗糖的水溶液容器中；對產生的溶液進行長達20分鐘的攪拌，然後通過均質器在低壓下轉移至第二個容器中。然後，這種溶液通過一個0.2微米的過濾器轉移至第三個容器中。這種產品被分配到加蓋的波紋狀小瓶中。由於活性成分(DDFP)的揮發性，這些操作均在低於8℃的冷夾套容器中完成。處理過程中的損耗通過使用超額活性成分加以補償。產品灌裝體積也經過嚴格控制，以便生產的小瓶滿足發送和保質期規格。所產生的產品包含2％w/volDDPE。Nycomps提供的粒度測量顯示平均顆粒尺寸大約為250納米。案例2在老鼠上實施了Hs-766t胰腺癌異種移植物的移植實驗。用於此研究的Hs-766T(胰腺；ATCCCat#HTB-134)細胞系來自美國菌種保藏中心(ATCC，位於維吉尼亞州馬納薩斯)，由亞利桑那大學實驗鼠共享服務中心(EMSS，亞利桑那大學)進行處理，存儲和管理。細胞在DMEM(Mediatech)中用高葡萄糖，L-穀氨醯胺和10％胎牛血清進行培養，並保持在37攝氏度條件下，二氧化碳濃度為5％。腫瘤細胞由ATCC細胞認證檢測服務部門通過PCR/短串聯重複序列位點(STR)進行認證。運用通用支原體檢測試劑盒(ATCC,30-1012K)對細胞進行支原體常規檢測，沒有發現汙染。29隻5-8周的雌性SCID老鼠被應用於這些研究。所有老鼠的餵食、飼養和獸醫服務均按照IACUC批准的準則和規程由EMSS進行管理。老鼠分成4組或4組以下關在鼠籠裡，以自由給飼的方式餵食和餵水。在注射之前，將老鼠剃毛，為腫瘤異種移植準備適當的位置。腫瘤細胞(10x106個細胞，MatrigelTM中；BDBioscience公司)在每個老鼠的左後側進行皮下注射。使用電子卡尺測定腫瘤尺寸((a2xb2)/2)，每周兩次進行腫瘤負荷評估。當腫瘤達到500-700mm3的平均體積時，老鼠被隨機分到6組中的一組：3組老鼠用於腫瘤氧氣的測定，3組老鼠用於腫瘤生長的測定。在9隻老鼠中進行腫瘤pO2的測定。施用了0.3(2隻老鼠)，0.45(3隻老鼠)，和0.6(4隻老鼠)mL/kg(2％w/vol乳劑)劑量的NVX-108。在其他20隻老鼠中進行了腫瘤生長速度的研究。這些老鼠被分到如下3個治療組：第1組：未治療(4隻老鼠)，第2組：呼吸碳合氣並用12Gy輻照量進行治療(8隻老鼠)，第3組：使用NVX-108(0.6cc每kg，2％w/vol的DDFP靜脈注射，超過30分鐘以上，注射結束時進行輻照)加以治療，並在呼吸碳合氣時施用12Gy輻照量(8隻老鼠)。每隻老鼠都接受了含賽拉嗪(5mg/kgIP)的氯胺酮(20mg/kgIP)以使其身體保持固定狀態，並且安裝了尾靜脈導管以便通過尾靜脈注射(TVI)給藥。尾靜脈導管插入通過一個裝配的27號針頭改造的PE50管來完成。這根導管通過尾部兩側的3-0縫合線和專用膠帶牢牢系附在每隻老鼠的尾部。在導管插入之後，這些老鼠被放入定製的氣室內，導入碳合氣(95％氧氣，5％二氧化碳)並10分鐘換氣一次。使用定製的約束裝置將其固定以便放置在一個鉛屏板下方，這些鉛屏板隔離側面的腫瘤異種移植物，以便於輻照分割。在一個引入碳合氣(95％氧氣，5％二氧化碳)並10分鐘換氣一次的定製氣室內，對所有老鼠進行一次12Gy的腫瘤分割。XRT劑量持續時間的計算是基於「處方劑量/劑量率」＝(1200cGy)/(87.9cGy/min)，這等於對腫瘤進行13.65分鐘(13分39秒)的單次分割。針對組別2#，200微升的無菌生理鹽水通過尾靜脈注射(TVI)方式注入(時間0:00)，並且用於碳合氣吸入前十分鐘和輻射前16.35分鐘的假注射。針對組別3#，200微升的NVX-108在碳合氣吸入前十分鐘和輻射前16.35分鐘時通過TVI(時間0:00)方式注射。尾靜脈注射通過一種多注射器泵進行，以便對每組同時給藥。在時間0:00分鐘時同時注射NVX-108和生理鹽水後，開始進行研究。然後，在10分鐘時吸入碳合氣，並在16.35分鐘時進行輻照。在輻照完成之後，可以讓這些老鼠通過自由飲食和飲水的方式進行恢復。對腫瘤尺寸的二維測定每周進行兩次。當腫瘤尺寸大於2000mm3，老鼠被處死。腫瘤氧化和血流量水平通過定向插入所有腫瘤的OxyLab(OxfordOptronics,Oxford,UK)三參數E-系列光纖探針來監測。使用一個在WindowsTM(版本5.02ADIstuments，澳大利亞)ChartTM下運行的多通道數據採集系統(PowerLab8SP，ADIstruments，澳大利亞)將來自這些監視器的氧分壓信號實時記錄下來。麻醉後的老鼠(異氟醚100％氧氣)被限制在一個定製的固定平臺上以防止移動，並且平臺用加熱墊進行改造以維持核心體溫。採取了預防措施來防止缺氧探頭的任何移動，並且消除外來光源的幹擾以防止探頭假象問題。使用19號針頭穿入腫瘤約2-4毫米，探針(OD約450微米)通過針頭被送入腫瘤異種移植物，並且用定向方法固定到位。所有探針被小心標記好刻度以便在所有腫瘤中達到同樣深度。一旦探針穩定並被固定住，則對輸出信號進行監測(5-10分鐘)直至觀測到穩定的基線。在基線處對碳合氣進行10分鐘的實時測量，隨後，在動物繼續吸入碳合氣時以0.3,0.45或0.6cc/kg劑量的NVX-108(NuvOxPharmaTucson，亞利桑那)進行200微升尾靜脈注射。案例3膠質母細胞瘤(GMB)的治療對一位GBM病人進行手術治療。術後釓增強MRI掃描顯示存在殘餘的增強腫瘤。病人持續6周進行30次放療，每次2格雷(Gy)，一共60Gy，從放療第一天到最後一天每周七天、每天口服每平方米75mg劑量的替莫唑胺。此病人接受了一根靜脈PICC導管。從每個放療階段前大約30分鐘開始，以靜脈滴注的方式和0.05cc/kg(2％w/vol)的劑量持續超過30分鐘施用DDFPe。實施磁共振TOLD掃描來顯示腫瘤缺氧的逆轉情況。隨後通過靜脈釓造影的MRI掃描顯示，與沒有使用DDFPe治療的病人相比，腫瘤數量得以減少。基線術後MRI掃描顯示於下圖左側。白色箭頭標示了左內側顳葉內可見的殘留增強腫瘤。右側的掃描顯示了完成化療照射和DDFPe治療4周之後的情形。白色箭頭標示了殘留的增強腫瘤。增強腫瘤減少了大約80％。病人現在仍然存活，並且治療完成後6個多月康復情況良好。案例4膠質母細胞瘤(GBM)的治療另一位患有膠質母細胞瘤的病人接受了手術，在造影增強MRI上可見殘餘腫瘤。除了使用0.1cc/kg的DDFPe以外，此病人採用與案例1(上文)一樣的方式治療。此病人很好地接受了這次治療。當前正在徵求下一個病人的同意，該病人將會在每次化療照射期間用0.17cc/kg劑量的DDFPe進行治療。預示案例1一位患有非小細胞性肺癌的病人使用Belani等人的方案中所述的胸部放療和合併化療法進行治療。序貫化療包括兩個持續3周的療程，每個療程中持續超過3小時施用200mg/m2的紫杉醇，緊接著通過靜脈滴注的方式持續超過30分鐘在血藥濃度-時間曲線下面積(AUC)＝6mg/mL·min時施用卡鉑。胸部放療在第42天開始，每天劑量1.8Gy，每周5次(在5周內對初始區域施用45.0Gy目標劑量)，之後對縮減區域的初始腫瘤體積，但也包括≥2.0cm的腫大淋巴結施用，每天2.0Gy，一共18Gy劑量(全部劑量為63.0Gy，分34次在7周以上的時間內施用)。對於每次放療，從放療開始前30分鐘，以靜脈滴注方式持續超過15分鐘施用DDFPe。用DDFPe治療過的病人對治療方案的反應有所改善。預示案例2一位患有階段I非小細胞肺癌的病人在一周內按照大分割放療計劃實施三次分割放療，每次15Gy，共45Gy。這代表112.5Gy的生物等價劑量(BED)。在每個輻照劑量前的30～60分鐘，對病人施用0.17cc/kg靜脈彈丸注射劑量的NVX-108(2％w/volDDFPe)。跟進研究顯示，治療後的腫瘤比沒有施用DDFPe的腫瘤消除得更多。預示案例3一位患有宮頸癌的女性病人同時用放療和化療+NVX-108進行治療。輻照劑量為20次共計45格雷(Gy)，隨後，對宮頸區腔內低劑量施用30Gy。化療包括每周40mg/m2的靜脈內注射順鉑，持續達6個療程。在每次輻照前60分鐘，對病人施用0.2cc/kg靜脈彈丸推注劑量的NVX-108(2％w/volDDFPe)。跟進研究顯示了對治療的完全反應。預示案例4一位患有頭部和頸部鱗狀上皮細胞癌的病人每周兩次靜脈滴注0.50單位/kg(20單位/m2)的博萊黴素。在每次施用博萊黴素期間，病人吸入碳合氣(98％氧氣/2％二氧化碳)的同時施用0.2cc/kg的2％w/vol全氟己烷乳劑。在腫瘤組織中獲得的更高氧氣水平增加了博萊黴素的活性，藥物反應得到了改善。預示案例5一位患有生殖細胞卵巢癌的成年病人按每四周五天施用500mcg/天的更生黴素。每瓶更生黴素包含0.5mg(500mcg)的更生黴素和20mg的甘露醇，將其靜脈注射給病人。每次施用更生黴素時都會靜脈彈丸推注DDFPe(0.2cc/kg，2％w/volDDFP)。在注射過程中及注射之後，病人吸入碳合氣30分鐘。這在腫瘤組織中獲得了更高的氧氣水平，增強了藥物的活性。預示案例6一位患有橫紋肌肉瘤的成年病人以1.4mg/m2的劑量靜脈注射長春新鹼進行治療。在病人呼吸室內空氣的同時相繼施用了0.1cc/kg的DDFPe。儘管病人吸入的是室內空氣，但腫瘤組織中仍然獲得了更高的氧氣含量，帶來了藥物活性的增強。預示案例7一位患有多骨髓瘤的病人用BiCNU(注射用亞硝(基)脲氮芥)，亞硝脲(1,3-雙(2-氯)-1-亞硝脲)並結合強的松進行治療。對此之前，這位未接受治療的病人每六周靜脈注射200mg/m2BiCNU。這些劑量被分配到連續兩天，每天注射100mg/m2。在注射每劑量BiCNU的同時靜脈彈丸推注(劑量＝0.2cc/kg，2％w/volDDFP)DDFPe，在此同時病人吸入補充氧氣60分鐘。6周內，一旦循環血液元素重回到可接受水平(血小板高於100,000/mm3，白細胞高於4,000/mm3)，再次重複施用BiCNU，同時伴隨BiCNU施用DDFPe。預示案例8一位患有前列腺癌的病人結合使用外部放射治療和高臨時種子植入的高劑量率近距離放射治療。在對前列腺癌使用45Gy的外部放射治療三周後，使用高臨時種子植入及高劑量率近距離放射治療。病人被帶入手術室並麻醉。一個直腸超聲探頭被導入直腸，然後探頭固定到一個落地式踩踏裝置。一根導針/一個會陰模板系附在踩踏裝置上並向上抵靠在會陰部皮膚上。二十個金屬針頭通過模板安裝好，經過會陰部推進到中前列腺。這些針頭用塑料導管替換。在恢復之後，病人被帶到放射腫瘤科進行CT掃描，以確保導管安放準確。這個電腦控制的高劑量放療裝置包含一種源驅動機制，此機制根據劑量計劃確定的加載模式依次移動放射性銥絲通過填隙導管。此高劑量率放射治療耗時10-15分鐘，其中放射性銥絲被推進到每一根填隙導管中。此治療再重複一次，然後病人被轉移到醫院房間6個小時，然後此過程再次重複以便再進行兩次高劑量率放射治療，例如，銥絲被推進到每根導管，一共4次，早上兩次，下午兩次，每個階段耗時大約30分鐘。在每個治療階段，對病人使用0.2cc/kg劑量的DDFPe超過30分鐘，在此期間吸入碳合氣。http://prostate-cancer.org/temporary-seed-implant-with-high-dose-rate-brachytherapy/預示案例9一位患有第四階段腎母細胞瘤的兒科病人使用更生黴素，阿黴素，環磷醯胺和長春新鹼治療65周。藥用量如下：更生黴素(15mcg/kg/d[IV])，長春新鹼(1.5mg/m2wk[IV])，阿黴素(阿黴素20mg/m2/d[IV])以及環磷醯胺(10mg/kg/d[IV])。在術後以及第13，26，39，52和65周提供更生黴素療程。每個阿黴素療程的第1天和第8天給予長春新鹼。在第6，19，32，45和58周給予三天劑量的阿黴素。除了術後的更生黴素療程以外，在每個阿黴素和更生黴素療程期間給予三天劑量的環磷醯胺。在每次使用更生黴素和長春新鹼期間，在病人吸入補充氧氣的同時施用0.2cc/kg劑量的DDFPe。見Dangio,GiulioJ.等「TreatmentofWilms’tumor.ResultsofthethirdnationalWilms’tumorstudy.」Cancer64.2(1989):349-360.預示案例10一位患有不能切除的肝細胞癌的病人使用索拉非尼進行治療。病人每天口服400mg索拉非尼(2×200mg)。在單一設置條件下病人也使用玻璃微球進行治療。玻璃微球包括不溶的玻璃微珠，微珠內系縛有釔-90。肝動脈中插入導管，腫瘤血管床用玻璃微球進行栓塞，通過肝動脈進行注射來遞送100Gy目標劑量的玻璃微球。在栓塞過程中，0.1cc/kg劑量的DDFPe與氧氣混合，並且也注入到肝動脈中。預示案例11老鼠體內的移植瘤是用之前描述過的UTSCC33(口腔癌)，FADUDD(FaDu的亞系，一種未分化的喉咽癌)和SiHa子宮宮頸癌，HPV-陽性(從美國菌種保藏中心獲得)等細胞系生成的。見Toustrup,Kasper,etal.「Developmentofahypoxiageneexpressionclassifierwithpredictiveimpactforhypoxicmodificationofradiotherapyinheadandneckcancer.」Cancerresearch71.17(2011):5929-5931(下文中見「Toustrup」)。攜帶各種腫瘤的老鼠被隨機分成兩組，DDFPe治療組和控制組(注射相同量的生理鹽水)。DDFPe治療包括每天以靜脈彈丸推注的方式施用0.3cc/kg的DDFPe，共用十四天。十四天後老鼠被處死並針對缺氧相關基因的表達進行腫瘤測定。見ToustrupRNAfromfresh-frozentissuewasextractedbyusingRNeasy-kit(Qiagen)accordingtothemanufacturer’sinstructions.cDNA通過使用大容量cDNA檔案包生成(應用生物系統；ABI)，而基因表達通過利用qPCR進行量化。根據FFPE樣本，cDNA在實時qPCR之前根據製造商的明細(TaqManPreAmp，ABI)進行前置放大。為了檢測出感興趣的轉錄物，TaqMan基因表達測定(ABI)應用於所有潛在的分類器和參考基因。感興趣的基因(被認為在缺氧腫瘤中上調並與最可能演變的腫瘤相關)包括以下幾類：ADM(應激反應)，ALDOA(糖代謝)，ANKRD37(蛋白質相互作用)，BNIP3(細胞凋亡)，BNIP3L(細胞凋亡)，C3orf28(未知)，EGNL3(HIF-1活性調節)，KCTD11(細胞凋亡)，LOX(細胞外基質代謝)，NDRG1(應激反應)，P4HA1(細胞外基質代謝)，P4HA2(細胞外基質代謝)，PDK1(能量代謝)，PFKFB3(葡萄糖代謝)以及SLC2A1(葡萄糖代謝)。在使用DDFPe治療過的動物的異種移植腫瘤中，其基因表達測定發現，缺氧相關基因的表達明顯低於用鹽水控制注射治療的動物腫瘤組織樣本中的表達。預示案例12下列預示案例旨在顯示DDFPe的使用如何下調在缺氧腫瘤組織中表達過度的基因表達以及上調含氧量正常組織中的基因表達(即：規範基因的表達)。Fischer344隻老鼠(F344/Ncr；美國國家癌症研究所，弗雷德裡克，馬裡蘭州)用來生成9L神經膠質瘤模型。部分9L神經膠質瘤如之前所述被嵌入上腹部動脈/靜脈對中。動物每天靜脈注射0.45cc/kgDDFPe或者鹽水直至腫瘤大約重達1.5g，然後將動物安樂死，取下腫瘤並速凍。按照上述類似的方式對腫瘤裡的基因表達進行測定。在控制組中看到的上調基因包括：BCL2/腺病毒E1B19kDa-相互作用的蛋白質3，血紅素加氧酶(decycling)1，激活轉錄因子3，熱休克蛋白(HSP27)，N-myc下遊調節基因1，碳酸酐酶9等。在控制組中下調的基因包括：Ly6-C抗原，溶質載體系列44(成員2)，包含9-L的無菌α基序域，DEAD(Asp-Glu-Ala-Asp)盒多肽60以及CD3分子δ多肽等等。對使用DDFPe治療的動物身上的9-L神經膠質瘤組織的基因表達對比顯示：控制組動物中上調的基因表達明顯減少，而下調的基因表達明顯增加。也就是說，使用DDFPe治療的動物的腫瘤裡具有規範化的基因表達。詳見Marotta，Diane，etal.「InvivoprofilingofhypoxicgeneexpressioningliomasusingthehypoxiamarkerEF5andlaser-capturemicrodissection.」Cancerresearch71.3(2011):779-789。預示案例13按照案例1所述製備一份30％的蔗糖溶液。在第二個容器中通過在水裡加熱使其溫度高於所有油脂的相變溫度，製備一份含下列成份的磷脂混合物懸浮液：92％DPPC和8％DPPE-PEG(摩爾比例)的DPPC和DPPE-PEG5k。一旦油脂分散開來，則將懸浮液冷卻到4℃，然後在一個夾套容器裡攪拌。按照重量比7:1將預冷的(4℃)DDFP加入攪拌好的磷脂懸浮液中，然後攪拌，直到獲得均勻的乳白色懸浮液。在Avestin型C50均質器中對懸浮液進行長達18分鐘的高壓均質化處理，並保持溫度低於7℃。通過均質器在低壓下將乳狀液轉移到一個裝有30％蔗糖水溶液的容器裡；將獲得的溶液攪拌二十分鐘，然後通過均質器在低壓下將攪拌後的溶液轉移到第二個容器中。隨後，溶液通過一個0.2微米的過濾器過濾到第三個容器中。這種產品被分配到加蓋的波紋狀小瓶中。由於活性成分(DDFP)的揮發性，這些操作均在低於8℃的冷夾套容器中完成。處理過程中的損耗通過使用超額活性成分加以補償。產品灌裝體積也經過嚴格控制，以便生產的小瓶滿足發送和保質期規格。預示案例14按照案例1所述製備一份30％的蔗糖溶液。在第二個容器中通過在水裡加熱使其溫度高於所有油脂的相變溫度，製備一份含下列成份的磷脂混合物懸浮液：DPPC和DPPE-PEG5k。一旦油脂分散開來，則將懸浮液冷卻到4℃，然後在一個夾套容器裡攪拌。按照重量比7:1將預冷的(4℃)全氟己烷加入攪拌好的磷脂懸浮液中，然後攪拌，直到獲得均勻的乳白色懸浮液。在Avestin型C50均質器中對懸浮液進行長達18分鐘的高壓均質化處理，並保持溫度低於7℃。通過均質器在低壓下將乳狀液轉移到一個裝有30％蔗糖水溶液的容器裡；將獲得的溶液攪拌二十分鐘，然後通過均質器在低壓下將攪拌後的溶液轉移到第二個容器中。隨後，溶液通過一個0.2微米的過濾器過濾到第三個容器中。這種產品被分配到加蓋的波紋狀小瓶中。由於活性成分(全氟己烷)的揮發性，這些操作均在低於8℃的冷夾套容器中完成。處理過程中的損耗通過使用超額活性成分加以補償。產品灌裝體積也經過嚴格控制，以便生產的小瓶滿足發送和保質期規格。預示案例15按照案例1所述製備一份30％的蔗糖溶液。在第二個容器中通過在水裡加熱使其溫度高於所有油脂的相變溫度，製備一份含下列成份的磷脂混合物懸浮液：DPPC，膽固醇和DPPE-PEG5k。一旦油脂分散開來，則將懸浮液冷卻到4℃，然後在一個夾套容器裡攪拌。按照重量比7:1將預冷的(4℃)全氟庚烷加入攪拌好的磷脂懸浮液中，然後攪拌，直到獲得均勻的乳白色懸浮液。在Avestin型C50均質器中，對懸浮液進行長達18分鐘的高壓均質化處理，並保持溫度低於7℃。通過均質器在低壓下將乳狀液轉移到一個裝有30％蔗糖水溶液的容器裡；將獲得的溶液攪拌二十分鐘，並通過均質器在低壓下將攪拌後的溶液轉移到第二個容器中。然後，溶液通過一個0.2微米的過濾器過濾到第三個容器中。這種產品被分配到加蓋的波紋狀小瓶中。由於活性成分(全氟庚烷)的揮發性，這些操作均在低於8℃的冷夾套容器中完成。處理過程中的損耗通過使用超額活性成分加以補償。產品灌裝體積也經過嚴格控制，以便生產的小瓶滿足發送和保質期規格。預示案例16按照案例1所述製備一份30％的蔗糖溶液。在第二個容器中通過在水裡加熱使其溫度高於所有油脂的相變溫度，製備一份含下列成份的磷脂混合物懸浮液：DPPC，磷脂酸(DPPA)和DPPE-PEG5k。一旦油脂分散開來，則將懸浮液冷卻到4℃，然後在一個夾套容器裡攪拌。按照重量比7:1將預冷的(4℃)全氟辛烷加入攪拌好的磷脂懸浮液中，然後攪拌，直到獲得均勻的乳白色懸浮液。在Avestin型C50均質器中，對懸浮液進行長達18分鐘的高壓均質化處理，並保持溫度低於7℃。通過均質器在低壓下將乳狀液轉移到一個裝有30％蔗糖水溶液的容器裡；將獲得的溶液攪拌二十分鐘，並通過均質器在低壓下將攪拌後的溶液轉移到第二個容器中。然後，溶液通過一個0.2微米的過濾器過濾到第三個容器中。這種產品被分配到加蓋的波紋狀小瓶中。由於活性成分(全氟辛烷)的揮發性，這些操作均在低於8℃的冷夾套容器中完成。處理過程中的損耗通過使用超額活性成分加以補償。產品灌裝體積也經過嚴格控制，以便生產的小瓶滿足發送和保質期規格。預示案例17通過在水裡加熱使其溫度高於所有油脂的相變溫度製備一份含下列成份的磷脂混合物懸浮液：二油醯磷脂醯膽鹼(DOPC)，膽固醇和二油醯磷脂醯乙醇胺-PEG-5,OOO。產生的油脂懸浮液懸浮在丙二醇/甘油混合物中，從而獲得80:10:10重量百分比的磷酸鹽緩衝鹽水：丙二醇：甘油。一旦油脂分散開來，則將懸浮液冷卻到4℃，然後在一個夾套容器裡攪拌。按照重量比7:1將預冷的(4℃)全氟己烷加入攪拌好的磷脂懸浮液中，然後攪拌，直到獲得均勻的乳白色懸浮液。在Avestin型C50均質器中，對懸浮液進行長達18分鐘的高壓均質化處理，並保持溫度低於7℃。通過均質器在低壓下將乳狀液轉移到一個裝有30％蔗糖水溶液的容器裡；將獲得的溶液攪拌二十分鐘，並通過均質器在低壓下將攪拌後的溶液轉移到第二個容器中。然後，溶液通過一個0.2微米的過濾器過濾到第三個容器中。這種產品被分配到加蓋的波紋狀小瓶中。由於活性成分(全氟辛烷)的揮發性，這些操作均在低於8℃的冷夾套容器中完成。處理過程中的損耗通過使用超額活性成分加以補償。產品灌裝體積也經過嚴格控制，以便生產的小瓶滿足發送和保質期規格。前文系針對本創作之較佳實施例進行具體之說明，不過，熟悉此項技術之人士當可在不脫離本創作之精神與原則下對本創作進行變更與修改，而此等變更與修改皆應涵蓋於如下申請專利範圍所界定之範疇中。當前第1頁1 2 3