和厚樸酚二聚體及其製備分離方法和用途與流程
2023-06-03 02:55:56
本發明屬於藥物化學
技術領域：
，具體涉及和厚樸酚二聚體及其製備分離方法和用途。
背景技術：
：誘導血管的生成能力是惡性腫瘤的生長、浸潤與轉移的前提之一。腫瘤細胞本身和浸潤到腫瘤組織內及其周圍的炎細胞(主要是巨噬細胞)能產生一類血管生成因子，如血管內皮細胞生長因子(VEGF)和鹼性成纖維細胞生長因子(b-FGF)。這些血管生成因子促進血管內皮細胞分裂和毛細血管出芽生長。新生的毛細血管既為腫瘤生長提供營養，又為腫瘤轉移提供了有利條件。因此血管生成抑制劑可以用於大多數腫瘤如肺癌、肝癌、結直腸癌和血管瘤等的預防與治療。和厚樸酚是從中藥厚樸中提取分離出來的聯苯二酚類活性化合物，具有抗炎、抗菌、抗病原微生物、抗潰瘍、抗氧化、抗衰老、降低膽固醇以及抗腫瘤作用。但目前還沒有和厚樸酚二聚體化合物抗腫瘤和抑制血管生成活性的相關報導。技術實現要素：本發明提供了一種和厚樸酚二聚體，其結構如式I所示：上述的和厚樸酚二聚體是從敞口避光放置三年的和厚樸酚中分離得到的。本發明還提供了上述和厚樸酚二聚體的製備分離方法，包括以下步驟：1)取純度大於99％的和厚樸酚敞口避光放置1～3年，使用高速逆流色譜除去其中的和厚樸酚，溶劑為正己烷、乙酸乙酯、乙醇或甲醇、水的混合溶劑；2)將所有不含和厚樸酚的餾分合併，在30～60℃減壓濃縮為浸膏；3)浸膏用乙酸乙酯溶解，柱層析初分離；4)初分離收集的餾分用甲醇或乙腈溶解，用半製備高效液相色譜純化，分離得到二聚體化合物。其中，上述和厚樸酚二聚體的製備分離方法中，步驟1)所述正己烷、乙酸乙酯、乙醇或甲醇、水的體積比為5︰2︰5︰2、5︰3︰5︰3、5︰4︰5︰4或1︰1︰1︰1。其中，上述和厚樸酚二聚體的製備分離方法中，步驟3)所述的柱層析初分離包括：用不同比例的石油醚-乙酸乙酯，乙酸乙酯-甲醇來洗脫，收集餾分，用薄層色譜檢測，合併相同的餾分；將其中的第一段餾分、第二段餾分或第三段餾分進一步用柱層析分離，同樣用不同比例的石油醚-乙酸乙酯，乙酸乙酯-甲醇來洗脫，收集餾分，用薄層色譜檢測合併相同的餾分。其中，上述和厚樸酚二聚體的製備分離方法中，步驟4)所述的半製備高效液相色譜純化的色譜柱填料為50～200μm的十八烷基鍵合矽膠、辛烷基鍵合矽膠、苯基鍵合矽膠或親水色譜柱填料。其中，上述和厚樸酚二聚體的製備分離方法中，步驟4)所述的半製備高效液相色譜純化的流動相為甲醇-水或乙腈-水。所述流動相的體積比為甲醇︰水＝10～90︰90～10或乙腈︰水＝10～90︰90～10。本發明還提供了和厚樸酚二聚體藥學上可接受的鹽或水合物。一種藥物組合物，是由式I所示的和厚樸酚二聚體及其鹽或水合物添加藥學上可以接受的輔助性成分製備而成的。本發明還提供了式I所示的和厚樸酚二聚體及其鹽或水合物在製備抗腫瘤藥物和抑制血管生成藥物中的應用。本發明提供的和厚樸酚二聚體具有很好的血管抑制作用和抗腫瘤作用。具體實施方式和厚樸酚二聚體的製備分離方法，包括以下步驟：1)取純度大於99％的和厚樸酚敞口避光放置1～3年，使用高速逆流色譜除去其中的和厚樸酚，溶劑為正己烷、乙酸乙酯、乙醇或甲醇、水的混合溶劑；2)將所有不含和厚樸酚的餾分合併，在30～60℃減壓濃縮為浸膏；3)浸膏用乙酸乙酯溶解，柱層析初分離；4)初分離收集的餾分用甲醇或乙腈溶解，用半製備高效液相色譜純化，分離得到二聚體化合物。其中，上述和厚樸酚二聚體的製備分離方法中，步驟1)所述正己烷、乙酸乙酯、乙醇或甲醇、水的體積比為5︰2︰5︰2、5︰3︰5︰3、5︰4︰5︰4或1︰1︰1︰1。其中，上述和厚樸酚二聚體的製備分離方法中，步驟3)所述的柱層析初分離包括：用不同比例的石油醚-乙酸乙酯，乙酸乙酯-甲醇來洗脫，收集餾分，用薄層色譜檢測，合併相同的餾分；將其中的第一段餾分、第二段餾分或第三段餾分進一步用柱層析分離，同樣用不 同比例的石油醚-乙酸乙酯，乙酸乙酯-甲醇來洗脫，收集餾分，用薄層色譜檢測合併相同的餾分。其中，上述和厚樸酚二聚體的製備分離方法中，步驟4)所述的半製備高效液相色譜純化的色譜柱填料為50～200μm的十八烷基鍵合矽膠、辛烷基鍵合矽膠、苯基鍵合矽膠或親水色譜柱填料。其中，上述和厚樸酚二聚體的製備分離方法中，步驟4)所述的半製備高效液相色譜純化的流動相為甲醇-水或乙腈-水。所述流動相的體積比為甲醇︰水＝10～90︰90～10或乙腈︰水＝10～90︰90～10。實施例1和厚樸酚二聚體：1,1′,1″,1″′-四烯丙基-[3,5′:5,5″:3″,5″′-四聯苯]-4,2′,4″,2″′-四醇(式I化合物)的製備取純度99.16％的80g和厚樸酚敞口避光放置三年。使用高速逆流色譜除去其中的和厚樸酚，溶劑體系為正己烷︰乙酸乙酯︰乙醇︰水＝5︰2︰5︰2(體積比)，進樣量為7g，轉速為1250rpm，流速為50mL/min，檢測波長254nm，正相洗脫。將所有不含和厚樸酚的餾分合併，在45℃減壓濃縮為浸膏。浸膏用乙酸乙酯溶解，加入矽膠拌勻，烘乾，上200～300目矽膠柱。用不同比例的石油醚-乙酸乙酯來洗脫，收集餾分，用薄層色譜檢測合併相同的餾分。將第一段餾分進一步用矽膠柱細分，同樣用不同比例的石油醚-乙酸乙酯來洗脫，收集餾分，用薄層色譜檢測合併相同的餾分。將餾分用甲醇溶解，用半製備高效液相色譜純化，色譜柱填料為50μm的十八烷基鍵合矽膠。流動相為甲醇-水，流動相為甲醇-水(體積比85︰15)。分離得到和厚樸酚二聚體。1HNMR(400MHz,CDCl3):δppm:7.30(4H,m,H-4′/4″′/6′/6″′),7.12(4H,d,J＝3.6Hz,H-2/2″/6/6″),6.86(2H,d,J＝8.8Hz,H-3′/3″′),6.03(2H,ddt,J＝16.8Hz,J＝10.0Hz,J＝6.4Hz,H-8′/8″′),5.99(2H,ddt,J＝16.8Hz,J＝10.4Hz,J＝6.8Hz,H-8/8″),5.17(4H,m,H-9′/9″′),5.08(4H,m,H-9/9″),3.44(4H,d,J＝6.4Hz,H-7′/7″′),3.40(4H,d,J＝6.4Hz,H-7/7″)。13CNMR(400MHz,CDCl3):δppm:153.78(C-2′/2″′),147.97(C-4/4″),137.54(C-8/8″),136.17(C-8′/8″′),132.82(C-1/1″),131.42(C-6′/6″′),130.57(C-2/2″),130.55(C-6/6″),130.11(C-5′/5″′),129.15(C-3/3″),128.89(C-4′/4″′),125.77(C-1′/1″′),125.05(C-5/5″),116.83(C-9′/9″′),116.18(C-3′/3″′),115.91(C-9/9″),39.49(C-7/7″),35.23(C-7′/7″′)。HRESIMSm/z(高分辨質譜)：529.2381[M-H]—。本發明實施例中使用的人肝癌細胞HepG2、結直腸癌細胞HCT-116、非小細胞肺癌細胞H1975和臍靜脈內皮細胞(HUVEC)均購自美國模式培養物集存庫AmericanTypeCultureCollection(ATCC)。實施例2和厚樸酚二聚體對癌細胞的抑制作用實驗將肝癌細胞(HepG2)、結直腸癌細胞(HCT-116)和非小細胞肺癌細胞(H1975)置於培養基中培養(37℃、5％CO2、95％溼度)，取對數生長期細胞按密度4000個/孔接種於96孔培養板中，設定DMSO(二甲基亞碸)為溶劑對照組、各個濃度梯度的藥物處理組及空白對照，每組均做3個復孔。待細胞生長密度達到60％，分別加入各濃度梯度的化合物溶液，使終濃度分別為40μM、20μM、10μM、5μM、2.5μM，1.25μM，繼續培養72小時後，加入5mg/mL的四唑溴鹽(MTT)20μL，37℃繼續孵育4小時，終止培養，棄上清，每孔加入150μLDMSO，輕輕振蕩後在492nm波長處用酶標儀測定各孔吸光值，分別計算IC50。表1和厚樸酚二聚體對癌細胞的抑制作用實施例3和厚樸酚二聚體對臍靜脈內皮細胞(HUVEC)血管生成的抑制作用將臍靜脈內皮細胞(HUVEC)置於培養基中培養(37℃、5％CO2、95％溼度)，取對數生長期細胞按密度4000個/孔接種於96孔培養板中，設定溶劑對照組(DMSO)、各個濃度梯度的藥物處理組及空白對照，每組均做3個復孔。待細胞生長密度達到60％，分別加入5μL各濃度梯度的化合物溶液，使終濃度分別為80μM、40μM、20μM、10μM、5μM、2.5μM，繼續培養72小時後，加入5mg/mL的四唑溴鹽(MTT)20μL，37℃繼續孵育4小時，終止培 養，棄上清，每孔加入150μLDMSO，輕輕振蕩後在492nm波長處用酶標儀測定各孔吸光值，計算IC50。表2和厚樸酚二聚體對HUVEC血管生成的抑制作用HUVEC(μM)和厚樸酚52.448和厚樸酚二聚體7.59由表1和表2可以看出，本發明提供的和厚樸酚二聚體化合物的抗腫瘤活性是和厚樸酚的5倍以上，抑制血管生成活性是和厚樸酚的7倍以上，因此，該化合物在治療癌症和血管相關疾病的藥物中具有廣闊的應用前景。當前第1頁1 2 3