薤白在製備治療血管內皮功能障礙藥物中的應用的製作方法
2023-06-03 19:31:11 1
專利名稱：薤白在製備治療血管內皮功能障礙藥物中的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及中藥薤白的一種新的用途，具體地，涉及一種中藥組合物在 制治療血管功能障礙的藥物中的應用。
背景技術：
內皮功能障礙是動脈粥樣硬化的始動因素並貫穿病變全過程，高同型半 胱氨酸血症是內皮功能障礙的獨立危險因素[梁俊清，吳以嶺，趙韶華，等. 通心絡超微粉對同型半胱氨酸致血管損傷的幹預作用.絡病學基礎與臨床研
究(2)，中國科學技術出版社，202 205]。
內皮依賴性舒張反應的降低或消失是國際公認的評價血管內皮功能障 礙的金標準[Verdejo Paris J. Endothelial function[J]. Arch Cardiol Mex, 2006,76(Suppl 2):S164-9]， NO是血管內皮所合成分泌的最重要的血管活性物 質。NO具有擴張血管，抗血小板粘附聚集，抗血管平滑肌細胞增生等作用 [Moncade S. Nitric Oxide: physiology, pathophysiology and pharmacology [J]. Pharmacol Rev， 1997,43:109-114]，血漿NO水平可作為血管內皮損傷程度的評 價標準。 一氧化氮和內皮素一1(ET-1)是血管內皮合成、分泌的2種重要物質。 NO是一種小分子血管活性物質，是重要的內源性血管舒張因子，在血管內皮 中由NO合成酶催化L-精氨酸而生成，並向血管中膜的平滑肌細胞迅速彌散， 激活鳥苷酸環化酶，生成cGMP，並激活cGMP依賴性蛋白，影響Na+-Ca2+ 交換，使平滑肌鬆弛，血管舒張。近年研究表明，當患者存在高血壓及高血 脂等代謝指標異常時，內皮功能受損，NO的生成與分泌下降[吳以嶺.絡病 學.北京中國中醫藥出版社，2006.]。內皮素(ET—1)被認為是目前所 知的最強烈的縮血管物質，在與血管平滑肌有關的血管張力和結構的長期調 節中起作用。ET—1不僅本身具有強有力的縮血管作用，而且還增強5-羥色 胺(5-HT)、去甲腎上腺素的縮血管作用，刺激血管內皮的血管緊張素轉化酶 活性及腎上腺素和醛固酮的釋放，刺激單核細胞產生細胞因子，刺激血管平滑肌細胞的移行和增生，從而促進AS的進程[張清德，魏宗德.通心絡膠囊
對冠心病患者血脂及內皮素的影響[J].中國心血管雜誌，2006,11(1): 20-23]。 ET是心臟的高度"毒性肽"，其濃度升高是病情惡化標誌之一，臨床上可用ET 升高的幅度判斷病情，估計預後[黃宗明，陳清枝，李東野.冠心病患者內 皮細胞的損傷及其機制[J].徐州醫學院學報，1999,19(1): 19-21]。其引起 的血管收縮、心肌缺血、代謝紊亂和細胞增殖是與血管損傷有關疾病的共同 致病因素。
發明內容
本發明目的是提供薤白在製備治療血管內皮功能障礙藥物中的應用。在 本發明所述的應用中，用於改善血管內皮功能障礙的藥物是由薤白或薤白提 純中間體製成。該藥物可以製成膠囊劑、片劑、散劑、口服液、軟膠囊、丸 劑、酊劑、糖漿劑、栓劑、凝膠劑、噴霧劑或注射劑。
在本發明應用中的藥物，製備該藥物所用述薤白提純中間體由如下步驟
製成
薤白提取物與藥用大孔樹脂HPD-400按照1:5—1:15重量比例裝柱，使用 水與乙醇的比例按照5:95—95:5梯度變化進行梯度洗脫，每個濃度洗脫4一6 倍柱體積，收集60-80%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至無醇味後，減壓濃縮為 相對密度1. l一l .5的稠膏，冷凍乾燥即得中間體。
本發明藥物是由如下歩驟製成的
1) 薤白提取物與藥用大孔樹脂HPD-400按照1:5—1:15重量比例裝柱， 使用水與乙醇的比例按照5:95—95:5梯度變化進行梯度洗脫，每個濃度洗 脫4—6倍柱體積，收集60-80%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至無醇味後， 減壓濃縮為相對密度1.1一1.5的稠膏，備用。
2) 將步驟l製得的稠膏，按照常規製劑方法製成膠囊劑、片劑、散劑、 口服液、軟膠囊、丸劑、酊劑、糖漿劑、栓劑、凝膠劑、噴霧劑或注射劑。
在本發明應用中的藥物，該藥物可升高血清NO水平，降低血漿ET水平。 本發明中薤白提取物還可以由常規的提取工藝[如範碧亭《中藥藥劑學》 (上海科學出版社1997年12月第1版)]製得。本發明中的藥物，作為原料藥的中藥薤白的拉丁名及其加工方法來自
《中藥大辭典》(1977年7月，第一版，上海科學技術出版社)和《中國藥 典》(2005年版，化學工業出版社)。
本發明藥物還可以按常規的製劑工藝，例如，範碧亭《中藥藥劑學》(上 海科學出版社1997年12月第1版)記載的製備工藝，製成藥劑學可接受的任 意常規劑型。
本發明的應用中，所述藥物的製劑劑型為膠囊劑、片劑、散劑、口服液、 軟膠囊、丸劑、酊劑、糖漿劑、栓劑、凝膠劑、噴霧劑或注射劑等，為使上 述劑型能夠實現，需在製備這些劑型時加入藥學可接受的輔料，例如填充 劑、崩解劑、潤滑劑、助懸劑、粘合劑、甜味劑、矯味劑、防腐劑、基質等。
填充劑包括澱粉、預膠化澱粉、乳糖、甘露醇、甲殼素、微晶纖維素、蔗 糖等；崩解劑包括澱粉、預膠化澱粉、微晶纖維素、羧甲基澱粉鈉、交聯 聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙纖維素、交聯羧甲基纖維素鈉等；潤滑劑包括 硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、滑石粉、二氧化矽等；助懸劑包括聚乙烯吡 咯垸酮、微晶纖維素、蔗糖、瓊脂、羥丙基甲基纖維素等；粘合劑包括，澱 粉漿、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素等；甜味劑包括糖精鈉、阿斯 帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矯味劑包括甜味劑及各種香精；防腐 劑包括尼泊金類、苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸及其鹽類、苯扎溴銨、醋酸
氯乙定、桉葉油等；基質包括PEG6000， PEG4000，蟲蠟等。為使上述劑
型能夠實現中藥藥劑學，需在製備這些劑型時加入藥學可接受的其它輔料
(範碧亭《中藥藥劑學》，上海科學出版社1997年12月第1版中各劑型記載 的輔料)。
為闡明本發明藥物治療血管內皮功能障礙的活性，用按實施例l方法制 得的提純中間體(以下稱本發明藥物)進行了下列臨床試驗。 1.材料與方法 l.l實驗動物及分組
健康Wistar雄性大鼠40隻，體重220 240g，購於北京維通利華實驗動物 中心，大鼠5隻/籠，飼養在河北以嶺醫藥研究院藥理實驗室，將大鼠按體重
5隨機分為下列4組，(1)空白對照組正常飼料飲食。(2)模型組。(3)復 方黃芪薤白瓜蔞治療組模型+黃芪薤白瓜蔞煎劑灌胃。(4)本發明藥物組: 模型+本發明藥物灌胃。 1.2藥物
黃芪瓜蔞薤白複方(組成黃芪15g瓜蔞12g薤白10g)，由河北以嶺醫
藥研究院提供，水煎製成3.0g生藥/ml，給藥濃度為30g生藥/Kg。按lml/100g
灌胃。每周6天。
本發明藥物由河北以嶺醫藥研究院提供，配製成0.2g生藥/ml，給藥濃 度為2g生藥/Kg。按lml/100g灌胃。每周6天。
以上藥物均在使用前用0.5XCMC—Na製成混懸液，4。C保存備用。用藥 組在灌胃藥物的同時，正常組和模型組按體重，用0.5XCMC—Na液以 lml/100g灌胃。
1.3造模方法
參照文獻[梁俊清，吳以嶺，趙韶華，等.通心絡超微粉對同型半胱氨酸
致血管損傷的幹預作用.絡病學基礎與臨床研究(2)，中國科學技術出版社， 202 205]採用3%蛋氨酸飲食(不限食)，4周，建立內皮功能障礙大鼠動物模型。
蛋氨酸25kg/袋，純度99.9%，河北省農科院提供。3%高蛋氨酸(Met) 飼料由河北省實驗動物中心製作。 1.4檢測指標
1.4.1 NO含量採用硝酸還原酶法檢測於實驗結束後，10%水合氯醛麻 醉(0.35ml/100g)，頸動脈插管取血，4°C， 3500轉/分離心10分鐘，常規分 離留取血清，-701:保存，嚴格按照試劑盒說明書要求進行檢測。
1.4.2血漿ET含量的測定採用放免法。實驗結束後，頸動脈取血2ml注 入含有10。/。的EDTA-Na230^il和抑肽酶40iil的無菌抗凝試管中，混勻，4°C， 3000r/min，離心10min，分離血漿，-70°(:保存，嚴格按照試劑盒說明書要求 進行檢測。
1.5主動脈組織光鏡及電鏡觀察
1.5.1光鏡觀察各組於實驗結束後，10%水合氯醛腹腔注射麻醉，仔細分離並截取胸主動脈，用4%多聚甲醛溶液固定，脫水，石蠟包埋，切片， 行HE染色，於光學顯微鏡下觀察各組實驗動物胸主動脈的大體形態學改變。
1.5.2透射電鏡觀察各組於實驗結束後，10%水合氯醛腹腔注射麻醉， 仔細分離並截取一小段動脈，迅速浸入電鏡液中，修成lmmxlmmxlmm大小 組織塊，置電鏡液中4'C保存(由河北醫科大學基礎醫學院電鏡室協助完成)。
1.6統計學方法
所有數據用均數士標準差(；±S)表示。採用SPSS-11.5統計軟體包，多 個樣本均數比較用單因素方差分析(One-WayANOVA)，多個樣本均數間的 兩兩比較用最小顯著差法(least significant difference, LSD)，若方差不齊則 採用Satterthwaite-t'檢驗行兩兩比較，以P < 0.05作為判斷差異顯著性的標準。
2結果
2.1各組大鼠內皮功能的變化
模型組大鼠ET較正常組明顯增高(PO.Ol)，NO較正常組降低(PO.Ol); 黃芪瓜蔞薤白組較模型組ET下降(P<0.05)， NO增高(PO.05);本發明藥 物組較模型組ET明顯下降(P<0.01)， NO明顯增高(PO.01);本發明藥物 組較黃芪薤白瓜萎組效果更明顯(P<0.05)。
表l各組之間內皮素(ET)、 NO比較(；h， n=10)
組另U_ET(pg/ml)_NO(畫l/L)
正常 140.32±9.81 44.36±5.43 模型組171.23±10.56** 24.81±7.32** 黃芪薤白瓜蔞組 161.76±9.54# 31.28±4.75# 本發明藥物 149.12±8.37絲@@ 38.53士6.82##@_
與正常組比較"PO.01;與模型組比較卯O.05絲PO.01;與黃芪瓜蔞薤 白組比較@@P<0.01
2.2各組大鼠主動脈組織HE染色比較
正常組主動脈血管形態正常，內皮細胞結構完整,中膜彈力纖維正常。外 膜形態基本正常。模型組內皮細胞腫脹、分布不均勻、密度增加，內膜有多 量淋巴細胞附壁、內膜內有炎細胞浸潤、內彈力板有斷裂；平滑肌細胞水腫。 黃芪薤白瓜蔞組、本發明藥物治療組可改善模型大鼠的主動脈大體結構，本發明藥物治療組作用較黃芪薤白瓜蔞組更加明顯。見圖l. 2.3各組大鼠主動脈組織內皮細胞超微結構的變化
模型組內皮細胞線粒體大部分嵴和少部分膜融合或消失，幾乎見不到 粗面內質網和吞飲小泡。黃芪薤白瓜蔞組、本發明藥物組內皮細胞超微結構 變化較模型組減輕，本發明藥物組作用較黃芪薤白瓜蔞組更加明顯。見圖2.
3結論-
本實驗結果顯示,內皮功能障礙時,NO合成減少，ET明顯增加，病理學檢 査可見血管內皮細胞嚴重受損，黃芪薤白瓜萎組和本發明藥物組可升高血清 NO水平，降低血漿ET水平，顯示了本發明藥物具有改善內皮功能障礙的作 用，而本發明藥物提取物優於複方黃芪薤白瓜蔞水煎劑組，主動脈組織光鏡 及電鏡檢查也證實了這一點。
圖l:各組大鼠主動脈組織HE染色(400x)
圖2:各組大鼠主動脈組織內皮細胞超微結構變化(20000x)
具體實施例方式
本發明以下實施列中所用水蛭素購自廣西科康水蛭素股份有限公司； 薤白提取物購自西安奧晶科技公司，生藥量每g提取物相當於生藥10g。其 他中藥材購自安國藥材市場。但其不對本發明的範圍構成任何限制。
實施例l:本發明藥物提純中間體的製備
薤白提取物與藥用大孔樹脂HPD-400按照1:10重量比例裝柱，使用水與 乙醇的比例按照5:95-15:85-30:70-50:50-70:30-85:15-95:5梯度變化進行梯度 洗脫，每個濃度洗脫5倍柱體積，收集65-75%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至 無醇味後，減壓濃縮為相對密度1.25的稠膏，冷凍乾燥即得中間體。
實施例2:本發明藥物膠囊的製備
1)薤白提取物與藥用大孔樹脂HPD-400按照1:10重量比例裝柱，使用水 與乙醇的比例按照10:90-20:80-35:65-50:50-65:35-80:20-90:10梯度變化進行 梯度洗脫，每個濃度洗脫5倍柱體積，收集70-80%乙醇洗脫液，減壓回收乙
8醇至無醇味後，減壓濃縮為相對密度1.22的稠膏，備用；
2)將步驟l製得的稠膏，按照常規製劑方法製成膠囊劑。 實施例3:本發明藥物片劑的製備
1) 薤白提取物與藥用大孔樹脂HPD-400按照1:10重量比例裝柱，使用水 與乙醇的比例按照10:90-20:80-35:65-50:50-65:35-80:20-90:10梯度變化進行 梯度洗脫，每個濃度洗脫5倍柱體積，收集70-80%乙醇洗脫液，減壓回收乙 醇至無醇味後，減壓濃縮為相對密度1.22的稠膏，備用；
2) 將步驟l製得的稠膏，按照常規製劑方法製成片劑。 實施例4:本發明藥物口服液的製備
1) 薤白提取物與藥用大孔樹脂HPD-400按照1:10重量比例裝柱，使用水 與乙醇的比例按照10:90-20:80-35:65-50:50-65:35-80:20-90:10梯度變化進行
梯度洗脫，每個濃度洗脫5倍柱體積，收集70-80%乙醇洗脫液，減壓回收乙 醇至無醇味後，減壓濃縮為相對密度1.22的稠膏，備用；
2) 將步驟l製得的稠膏，按照常規製劑方法製成口服液。 實施例5:本發明藥物凝膠劑的製備
1) 薤白提取物與藥用大孔樹脂HPD-400按照1:10重量比例裝柱，使用水 與乙醇的比例按照10:90-20:80-35:65-50:50-65:35-80:20-90:10梯度變化進行
梯度洗脫，每個濃度洗脫5倍柱體積，收集70-80%乙醇洗脫液，減壓回收乙 醇至無醇味後，減壓濃縮為相對密度1.22的稠膏，備用；
2) 將步驟l製得的稠膏，按照常規製劑方法製成凝膠劑。
實施例6:本發明藥物注射劑的製備
1) 薤白提取物與藥用大孔樹脂HPD-400按照1:10重量比例裝柱，使用水 與乙醇的比例按照10:90-20:80-35:65-50:50-65:35-80:20-90:10梯度變化進行
梯度洗脫，每個濃度洗脫5倍柱體積，收集70-80%乙醇洗脫液，減壓回收乙 醇至無醇味後，減壓濃縮為相對密度1.22的稠膏，備用；
2) 將步驟l製得的稠膏，按照常規製劑方法製成注射劑。
實施例7:本發明藥物酊劑的製備
1)薤白提取物與藥用大孔樹脂HPD-400按照1:10重量比例裝柱，使用水 與乙醇的比例按照10:卯-20:80-35:65-50:50-65:35-80:20-90:10梯度變化進行梯度洗脫，每個濃度洗脫5倍柱體積，收集70-80%乙醇洗脫液，減壓回收乙
醇至無醇味後，減壓濃縮為相對密度1.22的稠膏，備用；
2)將步驟l製得的稠膏，按照常規製劑方法製成酊劑。
實施例8:本發明藥物丸劑的製備
1) 薤白提取物與藥用大孔樹脂HPD-400按照1:10重量比例裝柱，使用水 與乙醇的比例按照10:90-20:80-35:65-50:50-65:35-80:20-90:10梯度變化進行
梯度洗脫，每個濃度洗脫5倍柱體積，收集70-80%乙醇洗脫液，減壓回收乙 醇至無醇味後，減壓濃縮為相對密度1.22的稠膏，備用；
2) 將步驟l製得的稠膏，按照常規製劑方法製成丸劑。 實施例9:本發明藥物糖漿劑的製備
1) 薤白提取物與藥用大孔樹脂HPD-400按照1:10重量比例裝柱，使用水 與乙醇的比例按照10:90-20:80-35:65-50:50-65:35-80:20-90: IO梯度變化進行 梯度洗脫，每個濃度洗脫5倍柱體積，收集70-80%乙醇洗脫液，減壓回收乙 醇至無醇味後，減壓濃縮為相對密度1.22的稠膏，備用；
2) 將歩驟l製得的稠膏，按照常規製劑方法製成糖漿劑。 實施例10:本發明藥物散劑的製備
1) 薤白提取物與藥用大孔樹脂HPD-400按照1:10重量比例裝柱，使用水 與乙醇的比例按照10:90-20:80-35:65-50:50-65:35-80:20-90:10梯度變化進行
梯度洗脫，每個濃度洗脫5倍柱體積，收集70-80%乙醇洗脫液，減壓回收乙 醇至無醇味後，減壓濃縮為相對密度1.22的稠膏，備用；
2) 將步驟l製得的稠膏，按照常規製劑方法製成散劑。
實施例ll:本發明藥物栓劑的製備
1) 薤白提取物與藥用大孔樹脂HPD-400按照1:10重量比例裝柱，使用水 與乙醇的比例按照10:90-20:80-35:65-50:50-65:35-80:20-90:10梯度變化進行 梯度洗脫，每個濃度洗脫5倍柱體積，收集70-80%乙醇洗脫液，減壓回收乙 醇至無醇味後，減壓濃縮為相對密度1.22的稠膏，備用；
2) 將步驟l製得的稠膏，按照常規製劑方法製成栓劑。
實施例12:本發明藥物噴霧劑的製備
1)薤白提取物與藥用大孔樹脂HPD-400按照1:10重量比例裝柱，使用水與乙醇的比例按照10:90-20:80-35:65-50:50-65:35-80:20-90:10梯度變化進行
梯度洗脫，每個濃度洗脫5倍柱體積，收集70-80%乙醇洗脫液，減壓回收乙 醇至無醇味後，減壓濃縮為相對密度1.22的稠膏，備用；
2)將步驟l製得的稠膏，按照常規製劑方法製成噴霧劑。
權利要求
1、薤白在製備治療血管內皮功能障礙藥物中的應用。
2、 如權利要求1所述的應用，其特徵在於所述藥物由薤白提純中間體製成。
3、 如權利要求1所述的應用，其特徵在於所述藥物為膠囊劑、片劑、散劑、 口服液、軟膠囊、丸劑、酊劑、糖漿劑、栓劑、凝膠劑、噴霧劑或注射劑。
4、 如權利要求2所述的應用，其特徵在於所述薤白提純中間體由如下步驟製成薤白提取物與藥用大孔樹脂HPD-400按照1:5—1:15重量比例裝柱， 使用水與乙醇的比例按照5:95—95:5梯度變化進行梯度洗脫，每個濃度洗 脫4一6倍柱體積，收集60-80%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至無醇味後， 減壓濃縮為相對密度1.1一1.5的稠膏，冷凍乾燥即得中間體。
5、 如權利要求3所述的藥物，其特徵在於該藥物由如下步驟製成-.1) 薤白提取物與藥用大孔樹脂HPD-400按照1:5—1:15重量比例裝柱， 使用水與乙醇的比例按照5:95—95:5梯度變化進行梯度洗脫，每個濃度洗 脫4一6倍柱體積，收集60-80%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至無醇味後， 減壓濃縮為相對密度1.1一1.5的稠膏，備用；2) 將步驟1製得的稠膏，按照常規製劑方法製成膠囊劑、片劑、散劑、 口服液、軟膠囊、丸劑、酊劑、糖漿劑、栓劑、凝膠劑、噴霧劑或注射劑。
6、 如權利要求l-3所述的應用，其特徵在於所述藥物可升高血清NO水平， 降低血漿ET水平。
全文摘要
本發明公開了薤白在製備治療血管內皮功能障礙藥物中的應用。研究證實薤白能有效升高血清NO水平，降低血漿ET水平，顯示了薤白具有改善內皮功能障礙的作用。
文檔編號A61K9/10GK101439141SQ20071018805
公開日2009年5月27日 申請日期2007年11月23日 優先權日2007年11月23日
發明者吳以嶺 申請人:河北以嶺醫藥研究院有限公司