一種檢測紫蘇葉中常用殺菌劑前處理試劑盒及其方法
2023-06-03 05:43:01 1
專利名稱：一種檢測紫蘇葉中常用殺菌劑前處理試劑盒及其方法
技術領域：
本發明屬於食品檢測技術領域，特別是涉及ー種檢測紫蘇葉中常用殺菌劑前處理試劑盒及其方法。
背景技術：
目前，紫蘇葉是一種藥食同源的產品，在人們的生活中具有特殊的地位。作為ー種常見的中草藥，它可起到作為解表散寒，行氣和胃的療效，主要用於風寒感冒，咳嗽嘔惡，妊娠嘔吐，魚蟹中毒；作為稀特菜品種之一，由於紫蘇葉主要用於卷生魚片蘸調料吃，因此對其產品的衛生和農藥殘留要求非常嚴格。紫蘇葉中常見農藥殘留量檢測顯得非常迫切。紫蘇生產常用的殺菌劑主要有苯醚甲環唑、嘧菌酷、甲基託布津、腐黴利等農藥。為了提高紫蘇葉中常用殺菌劑殘留量檢測的效率，節約檢測成本，促進紫蘇葉進出口貿易 的健康發展，保護消費者的健康，紫蘇葉中常用殺菌劑前處理試劑盒及檢測方法成為急需 解決的重要經濟和社會問題。
發明內容
本發明為解決公知技術中存在的技術問題而提供一種檢測紫蘇葉中常用殺菌劑前處理試劑盒及其方法。本發明的目的之ー是提供ー種具有價格便宜，容易獲得，且用量小，樣品處理無需用固相萃取小柱進行樣品浄化，檢測成本低；試劑盒操作方便舒適，適用於大量幹紫蘇葉樣品的處理，樣品前處理的效率高，便於攜帶和儲存等特點的檢測紫蘇葉中常用殺菌劑前處
理試劑盒。本發明檢測紫蘇葉中常用殺菌劑前處理試劑盒所採取的技術方案是—種檢測紫蘇葉中常用殺菌劑前處理試劑盒，其特點是試劑盒由盒體、試劑管A、試劑管B、試劑管C、試劑管D及過濾器組成；試劑管A中的試劑為こ酸こ腈溶液；試劑管B中的試劑為無水硫酸鎂與氯化鈉的混合物或無水硫酸鎂與醋酸鈉的混合物；試劑管C中的試劑為檸檬酸鈉與檸檬酸ニ鈉倍半水合物的混合物；試劑管D中的試劑為N—丙基こニ胺(PSA)、C18及無水硫酸鎂的混合物。本發明檢測紫蘇葉中常用殺菌劑前處理試劑盒還可以採取如下技術措施所述的檢測紫蘇葉中常用殺菌劑前處理試劑盒及其方法，其特點是こ酸こ腈的重量百分比濃度為O. 5-1%。所述的檢測紫蘇葉中常用殺菌劑前處理試劑盒及其方法，其特點是過濾器為針管式過濾器。本發明的目的之ニ是提供ー種具有在較短時間內進行目標化合物測定，大大節約了檢測時間及檢測成本；具有快速、準確、靈敏地檢測，操作方便舒適，適用於大量幹紫蘇葉樣品的處理，樣品前處理的效率高等特點的檢測紫蘇葉中常用殺菌劑前處理的方法。本發明檢測紫蘇葉中常用殺菌劑前處理的方法所採取的技術方案是
一種檢測紫蘇葉中常用殺菌劑前處理的方法，其特點是前處理的方法包括以下步驟
(I)將紫蘇葉放入裝有こ酸こ腈溶液的試劑管A中，加入水及試劑管B中的無水硫酸鎂與氯化鈉的混合物或無水硫酸鎂與醋酸鈉的混合物，超聲提取；(2)加入試劑管C中的檸檬酸鈉與檸檬酸ニ鈉倍半水合物的混合物，震蕩，離心；(3)將步驟⑵中的上清液轉移到裝有N-丙基こニ胺(PSA)、C18及無水硫酸鎂的混合物的試劑管D中，渦旋，離心；(4)將步驟(3)中的上清液過濾後，進行液相色譜-串聯質譜法檢測。本發明檢測紫蘇葉中常用殺菌劑前處理的方法還可以採取如下技術措施所述的檢測紫蘇葉中常用殺菌劑前處理的方法，其特點是步驟(I)中，超聲提取時間為5-20min ;步驟(2)中，震蕩時間O. 5_2min，離心條件6000-10000r/min時間3_8min ；步驟(3)中，潤旋時間O. 5_2min,6000-10000r/min條件下離心3_8min ;步驟(4)中過濾採用針管式過濾器。所述的檢測紫蘇葉中常用殺菌劑前處理的方法，其特點是紫蘇葉試樣及各試劑配比為步驟(I)中，稱取粉碎混勻後的紫蘇葉試樣3_8g於50ml試劑管A中，試劑管A裝有O. 5-1%こ酸こ腈溶液10-20ml ;加入6_10mL水及試劑管B中的無水硫酸鎂與氯化鈉的混合物或無水硫酸鎂與醋酸鈉的混合物；無水硫酸鎂與氯化鈉的混合物的重量配比為5g: l_2g，無水硫酸鎂與醋酸鈉的混合物的重量配比為5g: l-2g。步驟(2)中，試劑管C中檸檬酸鈉與檸檬酸ニ鈉倍半水合物的混合物重量配比為Ig 0.5-lg ；步驟(3)中，試劑管D中N-丙基こニ胺(PSA)、C18及無水硫酸鎂的混合物重量配比為 200_300mg :200_300mg IOOOmg0本發明具有的優點和積極效果是檢測紫蘇葉中常用殺菌劑前處理試劑盒及其方法由於採用了本發明全新的技術方案，與現有技術相比，本發明檢測幹紫蘇葉中常用殺菌劑(苯醚甲環唑、嘧菌酷、甲基託布津、腐黴利)的樣品前處理試劑盒，樣品前處理所用試劑價格便宜，容易獲得，且用量小，樣品處理無需用固相萃取小柱進行樣品浄化，從而大大節約了檢測成本；該試劑盒操作方便舒適，適用於大量幹紫蘇葉樣品的處理，從而大大提高了樣品前處理的效率；該試劑盒將所需試劑整合於ー個前處理盒內便於攜帶和儲存。經本前處理試劑盒處理後的樣品中殺菌劑(苯醚甲環唑、嘧菌酷、甲基託布津、腐黴利)的檢測方法，流動相配置簡單，能在較短時間內進行目標化合物測定，從而大大節約了檢測時間及檢測成本。從使用該前處理試劑盒和檢測方法的效果來看，樣品中雜質能夠處理乾淨。該方法是ー種能夠快速、準確、靈敏地檢測利用本前處理試劑盒處理樣品的高效液相色譜-串聯質譜法(UPLC-MS/MS)。本發明的優點及特點(I)本發明公開的紫蘇葉中常用殺菌劑多殘留前處理試劑盒生產過程簡單、無汙染、室溫保存，所用試劑量少。(2)前處理過程無需用固相萃取小柱進行樣品浄化，具有速度快、成本低、準確度和可靠性高特點。
(3)試劑盒中加入了檸檬酸鈉及倍半水合檸檬酸鈉作為緩衝保護劑，可促進對紫蘇葉中酸鹼敏感農藥的分離。(4)檢測方法為首次建立，消耗試劑少，分析時間短，能將目標化合物有效分離。
圖I是本發明檢測紫蘇葉中常用殺菌劑前處理試劑盒的結構示意圖；圖2是經本試劑盒處理後的樣品，經本檢測方法檢測後得出的紫蘇葉樣品中四種殺菌劑的質譜圖。圖中，I、試劑管A，2、試劑管B，3、試劑管C，4、試劑管D, 5、一次性針管過濾器。
具體實施例方式為能進一歩了解本發明的發明內容、特點及功效，茲例舉以下實施例，並配合附圖詳細說明如下 參閱附圖I至圖2。實施例I—種檢測紫蘇葉中常用殺菌劑前處理試劑盒，由盒體、試劑管A、試劑管B、試劑管C、試劑管D及針管式過濾器E組成；其中，試劑A裝在50mL具塞螺旋蓋聚丙烯離心管中，試劑管C裝在5mL具塞螺旋蓋聚丙烯離心管中，試劑D裝在15mL具塞螺旋蓋聚丙烯離心管中。試劑盒的製備試劑A的製備配製O. 5-1%冰こ酸混合こ腈溶液10mL，轉移至50mL具塞螺旋蓋聚丙烯離心管中。試劑B的製備稱取2g氯化鈉或醋酸鈉與5g無水硫酸鎂充分混合，轉移至密封試劑袋中。試劑C的製備稱取Ig檸檬酸鈉與O. 5g檸檬酸ニ鈉倍半水合物轉移至5mL具塞螺旋蓋聚丙烯離心管中。試劑D的製備稱取為300mg N-丙基こニ胺(PSA)、200mg C18及Ig無水硫酸鎂轉移至15mL具塞螺旋蓋聚丙烯離心管中。實施例2應用實施，一種檢測紫蘇葉中常用殺菌劑前處理的方法I、取紫蘇葉中常用殺菌劑前處理試劑盒，裡面配有試劑管A、試劑管B、試劑管C、試劑管D及針管式過濾器E。2、稱取粉碎混勻後的紫蘇葉試樣5. Og於試劑管A中，加入SmL水及試劑管B，超聲提取IOmin ;所述的試劑管A為O. 5-1%こ酸こ腈溶液；所述的試劑管B為無水硫酸鎂與氯化鈉的混合物、無水硫酸鎂與醋酸鈉的混合物的任意ー種；3、加入試劑管C,劇烈震蕩lmin,8000r/min離心5min ;所述的試劑管C朽1檬酸鈉與檸檬酸ニ鈉倍半水合物的混合物；
4、將上清液轉移到試劑管D中，潤旋lmin,8000r/min離心5min ;所述的試劑管D為N-丙基こニ胺(PSA)、C18及無水硫酸鎂的混合物；5、上清液經針管式過濾器E過濾後，供UPLCMS/MS檢測。實施例3應用實施，一種檢測紫蘇葉中常用殺菌劑前處理的方法I、將應用前處理試劑盒處理後紫蘇葉樣品按如下液相色譜-串聯質譜條件進行測定。 2、優選的色譜條件色譜柱=ACQUITy UPLC BEH C18 柱，2. I X IOmm, I. 7 μ m ;柱溫250C ;進樣量2 μ L ;流速0. 25mL/min。梯度洗脫條件A相為甲醇，B相為lOmmol/Lこ酸銨，O 3min, 20%A ；3 4min, 90%A ；4 5min, 90%A ；5 6min, 20%A。3、優選的質譜條件離子源電噴霧離子源；掃描方式正離子掃描；採集模式多反應監測模式MRM ;毛細管電壓3. 12kV ;脫溶劑氣溫度400°C;脫溶劑氣流速800L/Hr ；錐孔反吹氣流速50L/Hr ;待測農藥定性、定量離子對錐孔電壓和碰撞電壓見表I。表I待測農藥定性、定量離子對錐孔電壓和碰撞電壓
權利要求
1.一種檢測紫蘇葉中常用殺菌劑前處理試劑盒，其特徵是試劑盒由盒體、試劑管A、試劑管B、試劑管C、試劑管D及過濾器組成；試劑管A中的試劑為こ酸こ腈溶液；試劑管B中的試劑為無水硫酸鎂與氯化鈉的混合物或無水硫酸鎂與醋酸鈉的混合物；試劑管C中的試劑為檸檬酸鈉與檸檬酸ニ鈉倍半水合物的混合物；試劑管D中的試劑為N-丙基こニ胺(PSA)、C18及無水硫酸鎂的混合物。
2.根據權利要求I所述的檢測紫蘇葉中常用殺菌劑前處理試劑盒，其特徵是こ酸こ腈的重量百分比濃度為O. 5-1%。
3.根據權利要求I所述的檢測紫蘇葉中常用殺菌劑前處理試劑盒，其特徵是過濾器為針管式過濾器。
4.一種檢測紫蘇葉中常用殺菌劑前處理的方法，其特徵是前處理的方法包括以下步驟 (1)將紫蘇葉放入裝有こ酸こ腈溶液的試劑管A中，加入水及試劑管B中的無水硫酸鎂與氯化鈉的混合物或無水硫酸鎂與醋酸鈉的混合物，超聲提取； (2)加入試劑管C中的檸檬酸鈉與檸檬酸ニ鈉倍半水合物的混合物，震蕩，離心； (3)將步驟(2)中的上清液轉移到裝有N-丙基こニ胺(PSA)、C18及無水硫酸鎂的混合物的試劑管D中，渦旋，離心； (4)將步驟(3)中的上清液過濾後，進行液相色譜-串聯質譜法檢測。
5.根據權利要求4所述的檢測紫蘇葉中常用殺菌劑前處理的方法，其特徵是步驟(I)中，超聲提取時間為5-20min ;步驟(2)中，震蕩時間O. 5_2min，離心條件6000_10000r/min時間3_8min ;步驟(3)中，潤旋時間O. 5-2min,6000-10000r/min條件下離心3_8min ;步驟(4)中過濾採用針管式過濾器。
6.根據權利要求4或5所述的檢測紫蘇葉中常用殺菌劑前處理的方法，其特徵是紫蘇葉試樣及各試劑配比為 步驟(I)中，稱取粉碎混勻後的紫蘇葉試樣3-8g於50ml試劑管A中，試劑管A裝有O. 5-1%こ酸こ腈溶液10-20ml ;加入6_10mL水及試劑管B中的無水硫酸鎂與氯化鈉的混合物或無水硫酸鎂與醋酸鈉的混合物；無水硫酸鎂與氯化鈉的混合物的重量配比為5g: l_2g，無水硫酸鎂與醋酸鈉的混合物的重量配比為5g: l-2g。
步驟(2)中，試劑管C中檸檬酸鈉與檸檬酸ニ鈉倍半水合物的混合物重量配比為Ig:O.5-lg ； 步驟(3)中，試劑管D中N-丙基こニ胺(PSA)、C18及無水硫酸鎂的混合物重量配比為200_300mg :200_300mg IOOOmg0
全文摘要
本發明涉及一種檢測紫蘇葉中常用殺菌劑前處理試劑盒及其方法。本發明屬於食品檢測技術領域。檢測紫蘇葉中常用殺菌劑前處理試劑盒，由盒體、試劑管A、試劑管B、試劑管C、試劑管D及過濾器組成。前處理的方法(1)將紫蘇葉放入裝有乙酸乙腈溶液的試劑管A中，加入水及無水硫酸鎂與氯化鈉的混合物或無水硫酸鎂與醋酸鈉的混合物，超聲提取；(2)加入檸檬酸鈉與檸檬酸二鈉倍半水合物的混合物，震蕩，離心；(3)將上清液轉移到裝有N-丙基乙二胺(PSA)、C18及無水硫酸鎂的混合物的試劑管中，渦旋，離心；(4)將上清液過濾，進行液相色譜-串聯質譜法檢測。本發明具有過程簡單、無汙染、室溫保存、試劑量少、速度快、成本低、準確度和可靠性高優點。
文檔編號G01N30/14GK102692468SQ20121016013
公開日2012年9月26日 申請日期2012年5月22日 優先權日2012年5月22日
發明者王雲鳳, 肖亞兵, 陳其勇, 陳旭豔, 韓紅芳 申請人:天津出入境檢驗檢疫局動植物與食品檢測中心