具有改進的染色性能的漆酶的製作方法

2023-05-27 19:37:46 1

專利名稱：具有改進的染色性能的漆酶的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種包含微生物漆酶的染色組合物，該染色組合物在進行角蛋白纖維染色，特別是頭髮、皮毛、獸皮和羊毛染色中的應用，以及進行角蛋白纖維染色的方法。
用染髮的方法來遮蓋變灰的頭髮已經有很多年了。需要這樣做的原因在於灰發是青年時代已然過去的第一徵兆的事實，許多人不願接受這種事實。
例如，在亞洲的特定地區，男人和女人都廣泛使用染料來染髮，這種染料被幽默的人們稱為「黑色鞋油」。
在過去的幾十年中，染髮在西方越來越流行。最初，「朋克」青年和其他社會批判分子將他們的頭髮染成極端的顏色做為他們反對主流社會的一部分，但是今天尤其是青年人也使用染髮劑(較「朋克」柔和的色調)做為一種「化妝品」來改變或更新他們的形象。染髮劑總的來說，目前市場上的染髮組合物主要可分為三種——暫時性染髮劑——半永久性染髮劑，以及——永久性的氧化型染髮劑。
暫時性染髮劑只是用於短期內改變頭髮的自然顏色，通常是將染料塗於頭髮表面。這種染髮劑用普通的洗髮水就很容易除去。
應用半永久性染髮劑時，經過五次或更多次的洗髮水洗髮仍能保留染過的顏色。這是通過應用對頭髮角蛋白具有高度親合力的染料來達到的，它能滲透到毛幹的內部。
永久性染髮劑可耐受日曬、洗髮水洗髮和其他的頭髮處理，只需在新頭髮長出時每月使用一次。這種染髮體系的染料直接在頭髮裡或頭髮上產生。小分子的芳香族無色染料前體(例如對苯二胺和鄰氨基苯酚)深入到頭髮中，在那裡其被氧化劑氧化為有色的聚合化合物。這些有色化合物比染料前體大，不能從頭髮中洗脫。
在染髮組合物中加入被稱為改性劑(或偶聯劑)的化合物能獲得許多種頭髮色澤。這樣的改性劑有例如鄰苯二酚(Cathecol)和間苯二酚(Resorcinol)。
通常用過氧化氫作氧化劑(助色劑)，它也用作漂白劑。含有過氧化氫的染色組合物常被稱為「增淺染料」，由於過氧化氫有使顏色變淺的作用。
因為過氧化氫損傷頭髮，所以在染髮組合物中應用過氧化氫有一些弊病。而且，氧化型的染料通常要求高pH值(一般大約pH9-10)，這也會在頭髮和皮膚上造成損傷。因此，如果應用含有過氧化氫的染料組合物，通常不可用於染頭髮。
為了克服使用過氧化氫的弊端，建議用氧化酶來代替過氧化氫。
US專利號3,251,742(Revlon)描述了一種通過原位(例如，在頭髮上)形成染料來染人頭髮的方法。應用氧化酶在一個基本上中性的pH(7-8.5)條件下發生顏色形成反應。提到的合適的氧化酶有漆酶、酪氨酸酶、多酚酶(polyphenolase)和鄰苯二酚酶(cataco-lase)，唯一的作為範例的氧化酶是酪氨酸酶。
EP專利號504,005(Perma S.A.)提到的角蛋白纖維特別是頭髮的染色組合物也不需要H2O2(過氧化氫)。該組合物包含一種能催化聚合染料形成的酶和染料前體，例如鹼和偶聯劑，該組合物存在於pH6.5-8的緩衝溶液中，而該酶在pH6.5-8的範圍內有最佳活性。
在這個專利中漆酶的範例是Rhizoctonia praticola漆酶和漆樹(Rhus vernicifera)漆酶。
美國化學協會vol.209，no.1-2，1995的文章摘要公開了從嗜熱小柱孢菌(Scytalidium thermophilum)和嗜熱毀絲黴(Mycelioph-thora thermophila)克隆漆酶的過程。該摘要沒有提及用所說的漆酶進行染色。
本發明的目的是提供用於角蛋白纖維，例如頭髮、皮毛、獸皮和羊毛的改進的染色組合物，該組合物包含作為氧化劑的氧化酶。
在本發明的範圍內用於角蛋白纖維染色的「改進的」組合物指一種能較快地使角蛋白纖維染上顏色的組合物或者使用較少量的氧化酶就能獲得最佳的染色效果的組合物，該效果通過與相應的現有技術染色組合物相比較的ΔE*來確定。
此外，也可使用較少量的染料前體。因為一些特定的染料前體是非常有害健康和致癌的，所以這一點很有好處。
出於使用者方便考慮，那些能更快地對角蛋白纖維，特別是頭髮、皮毛、獸皮和羊毛進行染色的組合物是所希望。
再者，希望能在染色組合物中使用較少量的酶。這可使染色方法更經濟。而且產生空氣傳播蛋白氣溶膠的風險也減小了。
目前令人驚奇地發現，通過使用微生物漆酶氧化染料前體可以提供這種改進的角蛋白纖維染色組合物。
漆酶(苯二酚氧氧化還原酶)(E.C.分類1.10.3.2，根據En-zyme Nomenclature(1992)Academic Press，Inc.)是催化酚氧化的含銅多酶。漆酶介導的氧化反應導致從合適的酚類底物產生芳氧基自由基中間體；所產生的這些中間體最終偶聯產生二聚的、寡聚的和聚合的反應產物的組合。特定的反應產物可以用於形成適於角蛋白纖維，例如頭髮和羊毛染色的染料(見下)。
首先，本發明的目的是提供一種染色組合物，它包括a)每毫升微生物漆酶的染色組合物中0以上-1毫克酶蛋白，b)一種或多種染料前體，c)任選的一種或多種改性劑。
特別關注的是微生物來源的漆酶，源於毀絲黴屬(Mycelio ph-thora)的一個菌株。
本發明的另一方面涉及本發明的染色組合物在對角蛋白纖維，諸如頭髮、皮毛、獸皮和羊毛進行染色中的應用。
本發明也涉及一種角蛋白纖維染色方法，它包括在適當的條件下使本發明的染色組合物接觸上述角蛋白纖維一段時間，這段時間足以允許染料前體氧化成一種有色化合物。
本發明還涉及漆酶在對角蛋白纖維進行永久性染色中的應用，這裡所說的漆酶是一種在相同染色條件下能使ΔE*值比源於漆樹(Rhus)的漆酶的ΔE*值高的漆酶。
這意味著，當用本發明的一種染色組合物染角蛋白纖維時，測定的ΔE*值比用含有源於漆樹的一種漆酶的染色組合物在相同條件下染相同的角蛋白纖維測定的ΔE*值高。
術語「相同的染色條件」指的條件是，例如酶濃度或酶活力、染色保溫時間、染色保溫溫度、pH情況、角蛋白纖維類型(比如頭髮類型)是一樣的，還有用同樣的染料前體和改性劑。換句話說，它限定的條件平行於所選擇的特定染色條件。可以選擇在下面的實施例中所描述的染色條件。
在本發明的範圍內，「較高的」ΔE*值規定總的定量顏色變化超過一個ΔE*單位。
ΔE*從測定的參數a*、b*和L*的值計算出，所述參數例如在一個Minolta CR200 Chroma Meter上測定，使用公式ΔE*＝√(ΔL*2+Δa*2+Δb*2)。a*、b*和L*的意義在下面的「材料與方法」部分進行解釋。


圖1顯示了六種不同漆酶的染色效果。這六種漆酶是Poly-porus pinsitus漆酶(rPp-漆酶)、嗜熱毀絲黴漆酶(Mt-漆酶wt.)、嗜熱毀絲黴T1變種漆酶(Mt-漆酶(var))、漆樹漆酶(Rvl-FXu-1)，嗜熱小柱孢菌漆酶(rStL-FXu-1)和立枯絲核菌(Rhizoctoniasolani)漆酶(rRsL-3-FXu-1)。鄰氨基苯酚被用作染料前體，而間苯二胺被用作改性劑。
圖2顯示了嗜熱毀絲黴T1變種漆酶(Mt-漆酶(var)和Poly-porus pinsitus漆酶(rPp-漆酶)作為氧化劑的洗滌穩定性。
圖3顯示了用嗜熱毀絲黴T1變種漆酶(Mt-漆酶(var)和Poly-porus pinsitus漆酶(rPp-漆酶)作為氧化劑的快速程度(速度)。
圖4顯示了嗜熱毀絲黴漆酶染色效果的劑量—響應，所用的量從每毫升染色組合物中0.0001到0.5毫克酶蛋白。
本發明的目的是提供含有一種氧化酶的用於角蛋白纖維，諸如頭髮、皮毛、獸皮和羊毛永久性染色的改進的染色組合物。
目前令人驚奇地發現，通過使用微生物漆酶氧化染料前體可以提供這種改進的染色組合物。染色組合物本發明的第一個方面涉及一種染色組合物，其包括a)每毫升微生物漆酶的染色組合物中0以上-1毫克酶蛋白，b)一種或多種染料前體，以及c)任選一種或多種染料改性劑。
在本發明的一個優選的實施方案中，漆酶在染色組合物中存在的濃度範圍可以為0.0001-1mg/ml，優選0.001-0.8mg/ml，更優選0.002-0.5，甚至更優選0.003-0.2，特別是0.004-0.1mg酶蛋白/ml染色組合物。
當用本發明的一種組合物進行永久性染色時，所得到的ΔE*值高於在相同染色條件下用含有源於漆樹的一種漆酶的染色組合物所得到的ΔE*值。
漆樹漆酶的一個例子是來源於日本漆樹Rhus vernicifera的漆酶(Yoshida，(1883)，J.Chem.Soc，472)。在下面的實施例1中應用了這種漆樹漆酶。
根據本發明，所用的微生物漆酶是真菌或細菌來源的，特別是絲狀真菌來源的。
在本發明的一個實施方案中，微生物漆酶源於毀絲黴屬的一個菌株，諸如嗜熱毀絲黴種的一個菌株，例如在Novo Nordisk的WO95/33836(PCT/US95/06815)中描述的純化的漆酶，該文獻引入本文作參考。下面的SEQ ID NO1顯示了編碼源於嗜熱毀絲黴的一種合適的漆酶的DNA序列。
含有包括SEQ ID NO1的表達載體pRaMB5的大腸桿菌JM101已經按照布達佩斯條約保藏在The Agricultural ResearchService Patent Culture Collection，Northern Regional Research Center，1815 University Street，Peoria，Illinois，61604。該載體已經獲取了保藏號NRRLB-21261。
根據本發明，來源於其他微生物的、與來源於嗜熱毀絲黴的SEQ ID NO1相比有超過80％同源性的漆酶也加以了考慮。
另外，毀絲黴屬漆酶也包括能在嗜熱毀絲黴中找到的漆酶的其它形式，以及能在其他真菌中找到的漆酶的其它形式，這些真菌是屬於Apinis所描述的嗜熱毀絲黴的定義範圍的同物異名體(NovaHedwigia 5，57-78，1963)，被命名為嗜熱側孢(Sporotrichum ther-mophile)。後來的分類版本將其歸入金孢子菌屬(Chysosporium)(Von klopotek，A.Arche.，(1974)Microbiol，98，365-369)，再後來歸入毀絲黴屬(Myceliophthora)(Van Oorshot，Persoonia，(1977)，9，401-408)。許多其他命名的微生物也屬於這個種。它們包括嗜纖維側孢(Sporotrichum cellulophilum)(US專利號4,106,989)、嗜熱梭孢殼(Thielavia thermophila)(Fergus and Sinden(1968)，Can.J.Botany，47，1635-1637)、Chrysosporium fergussi和Corynascusthermophilus(Von Klopotek，同上)。
根據本發明也考慮了漆酶變體的應用。
一個漆酶變體的例子是在PCT/US96/14087(Novo Nordisk)中描述的嗜熱毀絲黴T1變體。
T1變體(或類型I變體)是修飾過的銅藍氧化酶，包括漆酶。T1變體能夠通過例如定點誘變來構建，與相關的野生型銅藍氧化酶的差別在於類型I(T1)銅位點中的至少一個胺基酸殘基。這些修飾通常導致相對於野生型酶的pH範圍和/或特異活性的改變。當把這種酶用於染色組合物時這可能是有利的。
更特殊的嗜熱毀絲黴T1漆酶變體可含有509VSGGL511序列或者可被修飾以增加T1銅位點的至少一個片段的負電荷。
上述的微生物漆酶可有利地用於角蛋白纖維永久性染色組合物。這樣的組合物比包含例如實施例1所示的漆樹漆酶的相應組合物具有更好的染色效果。
嗜熱毀絲黴T1變體漆酶比Polyporus pinsitus漆酶洗滌穩定性更強，染色更快，這分別在實施例2和3中得到證明。
實施例4顯示與Polyporus pinsitus漆酶相比，為得到合適的染色效果所需的毀絲黴漆酶活力(即LACU/ml)更少。
實施例5顯示對於嗜熱毀絲黴漆酶，每毫升染色組合物大約0.005毫克酶蛋白將獲得最佳染色效果。
在毀絲黴漆酶用於永久性染色組合物的情況中，漆酶濃度在0以上-1mg/ml是有利的，優選0.0001-0.1mg/ml，更優選0.0005-0.05mg/ml，特別是0.001-0.01mg酶蛋白/ml染色組合物。
可以理解漆酶可在宿主細胞，諸如絲狀真菌、酵母或細菌中同源性地或異源性地產生。
絲狀真菌宿主細胞的例子包括木黴屬(Trichoderma)種的菌株，優選Trichoderma harzianum或Trichoderma reesei的一個菌株；或者是鐮孢屬(Fusarium)的一個種；或者是麴黴屬(Aspergillus)的一個種，最優選米麴黴(Aspergillus oryzae)或黑麴黴(Aspergillusniger)；或者是酵母細胞，例如酵母屬(Saccharomyces)的一個菌株，特別是酵酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、克魯維酵母(Saccha-romyces kluyveri)或葡萄汁酵母(Saccharomyces uvarum)；裂殖酵母(Schizosaccharomyces sp.)的一個菌株，比如粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)；漢遜酵母(Hansenula sp.)、畢赤酵母(Pichia sp.)、Yarrowia sp.比如Yarrowia lipolytica或克魯維酵母(Kluyveromyces sp.)比如乳酸克魯維酵母(Kluyveromyces lactis)的一個菌株；或者細菌，例如革蘭氏陽性細菌如芽孢桿菌屬(Bacil-lus)菌株、諸如枯草芽孢桿菌(B.subtilis)、地衣芽孢桿菌(B.Licheniformis)、遲緩芽孢桿菌(B.lentus)、短芽孢桿菌(B.brevis)、嗜熱脂肪芽孢桿菌(B.Stearothermophilus)、嗜鹼芽孢桿菌(B.alka-lophilus)、解澱粉芽孢桿菌(B.amyloliquefaciens)、凝結芽孢桿菌(B.coagulans)、環狀芽孢桿菌(B.circulans)、燦爛芽孢桿菌(B.lautus)、巨大芽孢桿菌(B.megaterium)或蘇雲金芽孢桿菌(B.thuringiensis)的菌株，或者是鏈黴菌屬(streptomyces)菌株諸如淺青紫鏈黴菌(S.lividans)或鼠灰鏈黴菌(S.murinus)的菌株；或者革蘭氏陰性細菌諸如大腸埃希氏桿菌(Escherichia coli)。
為了給角蛋白纖維染色，本發明的染色組合物中包含一種或多種染料前體，它們可被氧化劑轉變為有色化合物，根據本發明，這種氧化劑是一種微生物漆酶。
此外，染料前體可以是但不限於芳香族化合物，屬於三個主要化學物質家族之一二胺類、氨基苯酚(或氨基萘酚)類和苯酚類。靛紅衍生染料前體的例子可以在DE 4,314,317-A1中找到。另外，許多吲哚或二氫吲哚衍生的染料前體在WO94/00100中公開。在這些文件中提到的染料前體收入本文供參考。
合適的染料前體的例子包括下組化合物對苯二胺(PPD)、對甲代苯二胺(PTD)、氯對苯二胺、對氨基苯酚、鄰氨基苯酚、3，4-二氨基甲苯、2-甲基-1，4-二氨基苯、4-甲基-鄰苯二胺、2-甲氧基-對苯二胺、2-氯-1，4-二氨基苯，4-氨基二苯胺、1-氨基-4-β-甲氧基乙基氨基苯、1-氨基-4-雙-(β-羥乙基)-氨基苯、1，3-二氨基苯、2-甲基-1，3-二氨基苯、2，4-二氨基甲苯、2，6-二氨基吡啶、1-羥基-2-氨基苯、1-羥基-3-氨基苯、1-甲基-2-羥基-4-氨基苯、1-甲基-2-羥基-4-β-羥乙基氨基苯、1-羥基-4-氨基苯、1-羥基-4-甲基氨基苯、1-甲氧基-2，4-二氨基苯、1-乙氧基-2，3-二氨基苯、1-β-羥基乙氧基-2，4-二氨基苯、吩嗪、諸如4，7-吩嗪二羧酸、2，7-吩嗪二羧酸、2-吩嗪羧酸、2，7-二氨基吩嗪、2，8-二氨基吩嗪、2，7-二氨基-3，8-二甲氧基吩嗪、2，7-二氨基-3-甲氧基吩嗪、2，7-二氨基-3-甲氧基吩嗪、3-二甲基-2，8-吩嗪二胺、2，2′-[(8-氨基-7-甲基-2-吩嗪基)亞氨基]雙-乙醇、2，2′-[(8-氨基-7-甲氧基-2-吩嗪基)亞氨基]雙-乙醇、2，2′-[(8-氨基-7-氯-2-吩嗪基)亞氨基]雙-乙醇、2-[(8-氨基-7-甲基-2-吩嗪基)氨基]-乙醇、2，2′-[(8-氨基-2-吩嗪基)亞氨基]雙-乙醇、3-氨基-7-(二甲基氨基)-2，8-二甲基-5-苯基氯、9-(二乙基氨基)-苯並[a]吩嗪-1，5-二醇、N-[8-(二乙基氨基)-2-吩嗪基]-甲烷磺醯胺、N-(8-甲氧基-2-吩嗪基)-甲烷磺醯胺、N，N，N′，N′-四甲基-2，7-吩嗪二胺，3，7-二甲基-2-吩嗪胺，對氨基苯甲酸類，諸如對氨基苯甲酸乙酯、對氨基苯甲酸甘油酯、對氨基苯甲酸異丁酯、對二甲基氨基苯甲酸戊酯(p-dimethylamino benzoic acidamil)、對二甲基氨基苯甲酸辛酯、對二乙氧基氨基苯甲酸戊酯、對二丙氧基氨基苯甲酸乙酯、乙醯水楊酸，靛紅衍生物，諸如2，3-二氨基苯甲酸。
一個實施方案中，將漆酶與染料前體一起使用，直接將其氧化成有色化合物。染料前體可以單獨或與其他染料前體組合使用。
據信，當把二胺或氨基苯酚用作染料前體時，至少共聚合反應中的一種中間體一定是鄰或對二胺或氨基苯酚。這樣的例子可在下文找到，在US專利號3,251,742(Revlon)中也有描述，該專利的內容收入本文供參考。
本發明染色組合物(特別是染髮組合物)也任選地包括一種改性劑(偶聯劑)，通過它可獲得各種色澤。
通常改性劑用於染髮組合物中，因為沒有改性劑的染髮組合物得到的頭髮顏色常常不被大多數人所接受。
改性劑通常是間二胺、間氨基苯酚、或多酚。一旦任選添加改性劑(偶聯劑)，它就在例如漆酶的存在下與染料前體反應，將染料前體轉變為有色化合物。
改性劑(偶聯劑)的例子包括間苯二胺、2，4-二氨基苯甲醚、1-羥基萘(α-萘酚)、1，4-二羥基苯(氫醌)、1，5-二羥基萘，1，2-二羥基苯(鄰苯二酚)、1，3-二羥基苯(間苯二酚)，1，3-二羥基-2-甲基苯，1，3-二羥基-4-氯苯(4-氯間苯二酚)、1，2，3-三羥基苯、1，2，4-三羥基苯、1，2，4-三羥基-5-甲基苯、1，2，4-三羥基甲苯。
當使用本發明的染色組合物時需要用較少量的酶(例如毫克酶蛋白/毫升染色組合物)就可獲得最大染色效果(見圖1和圖4)，與現有技術染色組合物如含有源於漆樹的漆酶的染色組合物相比，其被確定為最佳ΔE*值。
用於本發明組合物的染料前體和其他成份的量與通常的商業用量一致。
根據本發明，含有染色組合物的產品可以是一區室產品或二區室產品。在一區室產品中漆酶、染料前體和其他成分放在一起，在一種穩定的溶液中或保存在穩定的條件下(例如，染料前體不被漆酶氧化)。在二區室產品中漆酶、染料前體和其他成分保存在兩個分開的容器中。容器中的內含物在臨用前混和。應用本發明的第二方面涉及本發明的染色組合物應用於角蛋白纖維，特別是頭髮、皮毛、獸皮和羊毛的永久性染色。
用本發明的染色組合物得到的ΔE*值高於在相同條件下使用含有源於漆樹屬的漆酶的染色組合物(見圖1)所得到的值。方法本發明的第三方面涉及角蛋白纖維永久性染色的方法，包括將本發明的染色組合物與上述角蛋白纖維在合適的條件下接觸一段時間，這一段時間足以使染料前體氧化為有色化合物。
染色過程可以在室溫下進行，最好在酶的最適溫度附近，通常為10-60℃；pH範圍為3-10，最好是5-9，特別是6-8；時間為10-60分鐘，最好是15-50分鐘，特別是20-40分鐘。
當使用本發明的方法時，獲得的ΔE*值高於在同樣染色條件下使用源於漆樹屬的品系的漆酶的相應方法得到的ΔE*值，具有或缺乏至少一種改性劑，至少一種染料前體，一定的時間，以及條件足夠允許用於氧化染料的染料前體氧化。
該方法能用一種或多種染料前體，單獨或與一種或多種改性劑組合實施。材料與方法材料頭髮6″De Meo Virgin Natural White Hair(De Meo Brothers Inc.USA)酶WO 95/33836(PCT/US95/06815)中描述的嗜熱毀絲黴漆酶，來自Novo Nordisk Biotech，Inc.US專利申請60/003,142中描述的嗜熱毀絲黴T1變體漆酶，來自Novo Nordisk Biotech，Inc.WO 96/00290(PCT/US95/07536)中描述的Polyporus pinsitus漆酶，來自Novo Nordisk Biotech，Inc.漆樹漆酶(Yoshida，J.Chem.Soc.，472(1883)WO 95/07988中描述的立枯絲核菌漆酶，來自Novo NordiskBiotech，Inc.WO 95/33837(PCT/US95/06816)中描述的嗜熱小柱孢菌漆酶，來自Novo Nordisk Biotech，Inc.生物材料的保藏下列生物材料已經於1994年5月25日按布達佩斯條約的條款保藏在the Agricultural Research Service Patent Culture Collection，Northern Regional Research Center，1815 University Street，Peoria，Illinois，61604並獲取如下保藏號。保藏物 保藏號含pRaMB5的大腸桿菌JM101 NRRL B-21261染料前體0.1％w/w對苯二胺於0.1M磷酸鉀緩衝液，pH7.0(pPD)0.1％w/w對甲代苯二胺於0.1M磷酸鉀緩衝液，pH7.00.1％w/w氯對苯二胺於0.1M磷酸鉀緩衝液，pH7.00.1％w/w對氨基苯酚於0.1M磷酸鉀緩衝液，pH7.00.1％w/w鄰氨基苯酚於0.1M磷酸鉀緩衝液，pH7.00.1％w/w 3，4-二氨基甲苯於0.1M磷酸鉀緩衝液，pH7.0改性劑0.1％w/w間苯二胺於0.1M磷酸鉀緩衝液，pH7.00.1％w/w 2，4-二氨基苯甲醚於0.1M磷酸鉀緩衝液，pH7.00.1％w/w α-萘酚於0.1M磷酸鉀緩衝液，pH7.00.1％w/w氫醌於0.1M磷酸鉀緩衝液，pH7.00.1％w/w鄰苯二酚於0.1M磷酸鉀緩衝液，pH7.00.1％w/w間苯二酚於0.1M磷酸鉀緩衝液，pH7.00.1％w/w 4-氯間苯二酚於0.1M磷酸鉀緩衝液，pH7.0染料前體與上述改性劑之一組合起來，在染色溶液中的終濃度就前體而言是0.1％w/w，就改性劑而言是0.1％w/w。其他溶液商品洗髮水裝置Minolta CR200 Chroma Meter漆酶活性(LACU)的確定漆酶活性是在有氧條件下從丁香醛連氮氧化而確定的。產生的紫色於530nm下光測量。分析條件是19mM的丁香醛連氮，23.2mM的乙酸鹽緩衝液，pH5.5，30℃，1分鐘反應時間。
1個漆酶單位(LACU)指在這些條件下每分鐘催化1.0微摩爾丁香醛連氮轉化的酶量。頭髮顏色的評價發束的顏色在Minolta CR200 Chroma Meter上通過應用參數L*(「0」＝黑色和「100」＝白色)、a*(「-」＝綠色和「+」＝紅色)與b*(「-」＝藍色和「+」＝黃色)定量。
ΔL*、Δa*和Δb*分別是與未處理頭髮的L*、a*和b*相比的L*、a*和b*的Δ值(例ΔL*＝L樣品*-L未處理頭髮*)ΔE*根據 ΔE*＝√(ΔL*2+Δa*2+Δb*2)計算出，表示顏色變化的總量。實施例實施例1染色效果不同漆酶的染色效果在相同的條件下用0.1％w/w鄰氨基苯酚(染料前體)和0.1％w/w間苯二胺(改性劑)檢測並進行比較。
被檢測的漆酶是一種Polyporus pinsitus 漆酶一種嗜熱毀絲黴漆酶一種嗜熱毀絲黴T1漆酶變體一種漆樹漆酶一種立枯絲核菌漆酶一種嗜熱小柱孢菌漆酶染髮使用了一克白色De Meo發束。
4毫升染料前體溶液(含有改性劑)與1毫升漆酶在一個Whirley混合器上混勻，塗於該發束上，在30℃保溫60分鐘。
然後用流水衝洗髮束，用洗髮水洗，用水衝洗、梳、並空氣乾燥。
a*、b*和L*在Chroma Meter上確定，然後計算出ΔE*。
未用酶處理的發束樣品作為參照。
實驗結果顯示於圖1。實施例2洗滌穩定性用白色De Meo發束(1克)檢驗用嗜熱毀絲黴T變體漆酶和Polyporus pinsitus漆酶染色的頭髮的洗滌穩定性。
根據實施例1進行氧化型染髮，所不同的是對苯二胺(pPD)用作染料前體而未用改性劑。洗髮把染過的發束弄溼，用50ml商品洗髮水洗15秒，用水衝洗1分鐘，空氣乾燥。該發束被洗了多達18次。
然後在Chroma Meter上測定a*、b*和L*，再計算出ΔE*值。
未用酶處理的發束樣品用作參照。
實驗結果顯示於圖2。實施例3染髮速度用白色De Meo發束(1克)檢測應用嗜熱毀絲黴T1變體漆酶和Polyporus pinsitus漆酶染髮的速度。
對苯二胺用作染料前體而未使用改性劑。
4毫升染料前體溶液與1毫升漆酶在Whirley混合器上混合，塗到發束上，在30℃分別保溫10、20、30、40、50和60分鐘。
然後用流水衝洗髮束，用洗髮水洗，用流水衝洗，梳，並空氣乾燥。
在Chroma Meter上測定每個保溫時間的a*、b*和L*，然後計算出ΔE*值。
不加酶處理60分鐘的發束樣品作為參照。
實驗結果顯示於圖3。實施例4嗜熱毀絲黴T1變體漆酶的染色效果分別用下列物質作為染料前體，將嗜熱毀絲黴T1變體漆酶的染色效果與Polyporus pinsitus漆酶作比較0.1％w/w對苯二胺、0.1％w/w對甲代苯二胺、0.1％w/w氯對苯二胺、0.1％w/w對氨基苯酚、0.1％鄰氨基苯酚和0.1％w/w 3，4-二氨基甲苯。
Polyporus pinsitus漆酶的使用濃度為10 LACU/ml，而嗜熱毀絲黴T1變體漆酶的使用濃度僅1 LACU/ml。
使用了1克白色De Meo發束。
4毫升染料前體溶液與1毫升漆酶在Whirley混合器上混合，塗到發束上，在30℃保溫60分鐘。
然後用流水衝洗髮束，用洗髮水洗，用流水衝洗，梳，並空氣乾燥。
在Chroma Meter上測定a*、b*和L*，然後計算出ΔE*值。
不加酶處理的發束樣品作為參照。
實驗結果列於表1表1
從表1可以看出，儘管Polyporus pinsitus漆酶的濃度高出十倍，含有嗜熱毀絲黴T1漆酶變體的組合物染髮的效果與Polyporus pin-situs漆酶一樣好。實施例5嗜熱毀絲黴漆酶染色效果的劑量響應嗜熱毀絲黴漆酶的染色效果在0.0001-0.5毫克酶蛋白/毫升漆酶染色組合物的濃度範圍內進行了檢測。0.1％w/w對甲代苯二胺(PTD)用作染料前體。
應用了實施例1中所描述的同樣的染色方法。
實驗結果顯示於圖4。
序列表(1)一般信息(i)申請人(A)名稱Novo Nordisk A/S(B)街道Novo Alle(C)城市Bagsvaerd(D)國家Denmark(E)郵政編碼(ZIP)DK-2880(F)電話+45 4444 8888(G)傳真+45 4449 3256(ii)發明名稱具有改進的染色性能的漆酶(iii)序列數目2(v)計算機可讀形式(A)介質類型軟盤(B)計算機IBM PC相容機(C)作業系統PC-DOS/MS-DOS(D)軟體PatentIn Release #1.0，Version #1.30(2)SEQ ID NO1的信息(i)序列特徵(A)長度3192鹼基對(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸結構線性(ii)分子類型DNA(基因組的)(ix)特徵(A)名稱/鍵CDS(B)位點連接(586..831，917..994，1079..1090，1193..1264，1337..2308，2456..2524，2618..3028)(xi)序列描述SEQ ID NO1TCTAGCTTCT TTGGTCACCG TCGTTTTCGC CCGCCCCCTC CCTCCTTCAA CCCCCTGAGT60AGTCGGCTAA GCGATCCTCA ATCTGGTCTT GTGAGGTCAC GTCCTCCAGC AGATGACAGT 120TCATCGAGCG AGTGATCTCC ACCACCCAGA AGGGAGGGGG GATGCGCGCA TGCTCCAACA 180TCCCTGGTGT CGCTAGAGAC GTCGCGGCAT CAGCCTTTTC ATCACACCGA GCACGTCCAC 240GGACCGGCTC CTTTCACCCC CGCGTCCTCC GGAGGATTGA GTCACGATAT TTCGGGATGT 300GGGAAGGGGG AGAGAAAGGA GGGGGGAGGG GCGGAAACAT GTTGGATACG AGCTGCGCCC 360CTTTTTCAAC ATCGAGAACA GGAAGTCGTT GGTGTCGGCC GTAATGTCTA TAAAACGAGG 420CTCCTTCTCG TCGTCGACTT GTCTCAGGTT CTCTCTCTCG TCCACACCAA GCCAGTCTTG 480CCTGAGCCAC CTGAGCCACC TTCAACTCAT CATCTTCAGT CAAGTCGTTC ATTGACATTG 540TGTCTCTCTT TCTATCGAGT CGGCTTCCCG GCCCTTCACC ACAAC ATG AAG TCC 594Met Lys Ser1TTC ATC AGC GCC GCG ACG CTT TTG GTG GGC ATT CTC ACC CCT AGC GTT 642Phe Ile Ser Ala Ala Thr Leu Leu Val Gly Ile Leu Thr Pro Ser Val5 10 15GCT GCT GCC CCT CCA TCC ACC CCT GAG CAG CGC GAC CTG CTC GTC CCG 690Ala Ala Ala Pro Pro Ser Thr Pro Glu Gln Arg Asp Leu Leu Val Pro20 25 30 35ATC ACG GAG AGG GAG GAG GCA GCC GTG AAG GCT CGC CAG CAG AGC TGC 738Ile Thr Glu Arg Glu Glu Ala Ala Val Lys Ala Arg Gln Gln Ser Cys40 45 50AAC ACC CCC AGC AAC CGG GCG TGC TGG ACT GAC GGA TAC GAC ATC AAC 786Asn Thr Pro Ser Asn Arg Ala Cys Trp Thr Asp Gly Tyr Asp Ile Asn55 60 65ACC GAC TAC GAA GTG GAC AGC CCG GAC ACG GGT GTT GTT CGG CCG 831Thr Asp Tyr Glu Val Asp Ser Pro Asp Thr Gly Val Val Arg Pro70 75 80GTGAGTGCTC TCGTTAATTA CGCTTCGGCG AGTTGCGCAG ATATATTAAA TACTGCAAAC 891CTAAGCAGGA GCTGACATGC GACAG TAC ACT CTG ACT CTC ACC GAA GTC GAC 943Tyr Thr Leu Thr Leu Thr Glu Val Asp85 90AAC TGG ACC GGA CCT GAT GGC GTC GTC AAG GAG AAG GTC ATG CTG GTT 991Asn Trp Thr Gly Pro Asp Gly Val Val Lys Glu Lys Val Met Leu Val95 100 105AAC GTACGGCACC CCTTTTCTTG TCCTAGGATC TGGGTGATGT GCGTCGTTGC 1044AsnCCCTGAGAGA GACTGACCGA GCCTTTGGCT GCAG AAT AGT ATA ATC GTAATTAATT 1100Asn Ser Ile Ile110ATACCGCCCT GCCTCCAGCA GCCCCAGCAG CTCGAGAAGG GTATCTGAAG TTAGTCAGGC 1160CTGCTGACCT GACCGGGGCC AACCCACCAT AG GGA CCA ACA ATC TTT GCG GAC1213Gly Pro Thr Ile Phe Ala Asp115TGG GGC GAC ACG ATC CAG GTA ACG GTC ATC AAC AAC CTC GAG ACC AAC1261Trp Gly Asp Thr Ile Gln Val Thr Val Ile Asn Asn Leu Glu Thr Asn120 125 130 135GGC GTATGTCTGC TGCTTGCTCT CTTGCTCTCC TCGTCCGCGA CTAATAATAA 1314GlyTATCAACTCG TGTGGAAAAC AG ACG TCG ATC CAC TGG CAC GGA CTG CAC CAG1366Thr Ser Ile His Trp His Gly Leu His Gln140 145AAG GGC ACC AAC CTG CAC GAC GGC GCC AAC GGT ATC ACC GAG TGC CCG 1414Lys Gly Thr Asn Leu His Asp Gly Ala Asn Gly Ile Thr Glu Cys Pro150 155 160ATC CCG CCC AAG GGA GGG AGG AAG GTG TAC CGG TTC AAG GCT CAG CAG 1462Ile Pro Pro Lys Gly Gly Arg Lys Val Tyr Arg Phe Lys Ala Gln Gln165 170 175TAC GGG ACG AGC TGG TAC CAC TCG CAC TTC TCG GCC CAG TAC GGC AAC 1510Tyr Gly Thr Ser Trp Tyr His Ser His Phe Ser Ala Gln Tyr Gly Asn180 185 190GGC GTG GTC GGG GCC ATT CAG ATC AAC GGG CCG GCC TCG CTG CCG TAC 1558Gly Val Val Gly Ala Ile Gln Ile Asn Gly Pro Ala Ser Leu Pro Tyr195 200 205 210GAC ACC GAC CTG GGC GTG TTC CCC ATC AGC GAC TAC TAC TAC AGC TCG 1606Asp Thr Asp Leu Gly Val Phe Pro Ile Ser Asp Tyr Tyr Tyr Ser Ser215 220 225GCC GAC GAG CTG GTG GAA CTC ACC AAG AAC TCG GGC GCG CCC TTC AGC 1654Ala Asp Glu Leu Val Glu Leu Thr Lys Asn Ser Gly Ala Pro Phe Ser230 235 240GAC AAC GTC CTG TTC AAC GGC ACG GCC AAG CAC CCG GAG ACG GGC GAG 1702Asp Asn Val Leu Phe Asn Gly Thr Ala Lys His Pro Glu Thr Gly Glu245 250 255GGC GAG TAC GCC AAC GTG ACG CTC ACC CCG GGC CGG CGG CAC CGC CTG 1750Gly Glu Tyr Ala Asn Val Thr Leu Thr Pro Gly Arg Arg His Arg Leu260 265 270CGC CTG ATC AAC ACG TCG GTC GAG AAC CAC TTC CAG GTC TCG CTC GTC 1798Arg Leu Ile Asn Thr Ser Val Glu Asn His Phe Gln Val Ser Leu Val275 280 285 290AAC CAC ACC ATG ACC ATC ATC GCC GCC GAC ATG GTG CCC GTC AAC GCC 1846Asn His Thr Met Thr Ile Ile Ala Ala Asp Met Val Pro Val Asn Ala295 300 305ATG ACG GTC GAC AGC CTC TTC CTC GGC GTC GGC CAG CGC TAC GAT GTC 1894Met Thr Val Asp Ser Leu Phe Leu Gly Val Gly Gln Arg Tyr Asp Val310 315 320GTC ATC GAA GCC AGC CGA ACG CCC GGG AAC TAC TGG TTT AAC GTC ACA 1942Val Ile Glu Ala Ser Arg Thr Pro Gly Asn Tyr Trp Phe Asn Val Thr325 330 335TTT GGC GGC GGC CTG CTC TGC GGC GGC TCC AGG AAT CCC TAC CCG GCC 1990Phe Gly Gly Gly Leu Leu Cys Gly Gly Ser Arg Asn Pro Tyr Pro Ala340 345 350GCC ATC TTC CAC TAC GCC GGC GCC CCC GGC GGC CCG CCC ACG GAC GAG 2038Ala Ile Phe His Tyr Ala Gly Ala Pro Gly Gly Pro Pro Thr Asp Glu355 360 365 370GGC AAG GCC CCG GTC GAC CAC AAC TGC CTG GAC CTC CCC AAC CTC AAG 2086Gly Lys Ala Pro Val Asp His Asn Cys Leu Asp Leu Pro Asn Leu Lys375 380 385CCC GTC GTG GCC CGC GAC GTG CCC CTG AGC GGC TTC GCC AAG CGG CCC 2134Pro Val Val Ala Arg Asp Val Pro Leu Ser Gly Phe Ala Lys Arg Pro390 395 400GAC AAC ACG CTC GAC GTC ACC CTC GAC ACC ACG GGC ACG CCC CTG TTC 2182Asp Asn Thr Leu Asp Val Thr Leu Asp Thr Thr Gly Thr Pro Leu Phe405 410 415GTC TGG AAG GTC AAC GGC AGC GCC ATC AAC ATC GAC TGG GGC AGG CCC 2230Val Trp Lys Val Asn Gly Ser Ala Ile Asn Ile Asp Trp Gly Arg Pro420 425 430GTC GTC GAC TAC GTC CTC ACG CAG AAC ACC AGC TTC CCA CCC GGG TAC 2278Val Val Asp Tyr Val Leu Thr Gln Asn Thr Ser Phe Pro Pro Gly Tyr435 440 445 450AAC ATT GTC GAG GTG AAC GGA GCT GAT CAG GTAAGAAAAA GGGGACCGCA 2328Asn Ile Val Glu Val Asn Gly Ala Asp Gln455 460GGGGTGCTGC TGCAAGTACA CCTTGCTCGC CCTCCTGTTC TTCCTTAATA ACTACCTCCC 2388AACCCTCCCC CCTAATTAAT TCACTTTAAA GGCCGATCAA GACTGACCGA GCCCCCTCTC 2448TTTGCAG TGG TCG TAC TGG TTG ATC GAG AAC GAT CCC GGC GCA CCT TTC 2497Trp Ser Tyr Trp Leu Ile Glu Asn Asp Pro Gly Ala Pro Phe465 470ACC CTA CCG CAT CCG ATG CAC CTG CAC GTAAGTTGGA TACATATATA 2544Thr Leu Pro His Pro Met His Leu His475 480TATATATATA TACATTGCTT TCCTGGCTCG CTCCCTTAAA TAAAATTAAA TAACCAAAAA 2604TAACAAAAAA AAG GGC CAC GAC TTT TAC GTG CTG GGC CGC TCG CCC GAC2653Gly His Asp Phe Tyr Val Leu Gly Arg Ser Pro Asp485 490 495GAG TCG CCG GCA TCC AAC GAG CGG CAC GTG TTC GAT CCG GCG CGG GAC 2701Glu Ser Pro Ala Ser Asn Glu Arg His Val Phe Asp Pro Ala Arg Asp500 505 510GCG GGC CTG CTG AGC GGG GCC AAC CCT GTG CGG CGG GAC GTG ACG ATG 2749Ala Gly Leu Leu Ser Gly Ala Asn Pro Val Arg Arg Asp Val Thr Met515 520 525CTG CCG GCG TTC GGG TGG GTG GTG CTG GCC TTC CGG GCC GAC AAC CCG 2797Leu Pro Ala Phe Gly Trp Val Val Leu Ala Phe Arg Ala Asp Asn Pro530 535 540GGC GCC TGG CTG TTC CAC TGC CAC ATC GCC TGG CAC GTC TCG GGC GGC 2845Gly Ala Trp Leu Phe His Cys His Ile Ala Trp His Val Ser Gly Gly545 550 555CTG GGC GTC GTC TAC CTC GAG CGC GCC GAC GAC CTG CGC GGG GCC GTC 2893Leu Gly Val Val Tyr Leu Glu Arg Ala Asp Asp Leu Arg Gly Ala Val560 565 570 575TCG GAC GCC GAC GCC GAC GAC CTC GAC CGC CTC TGC GCC GAC TGG CGC 2941Ser Asp Ala Asp Ala Asp Asp Leu Asp Arg Leu Cys Ala Asp Trp Arg580 885 590CGC TAC TGG CCT ACC AAC CCC TAC CCC AAG TCC GAC TCG GGC CTC AAG 2989Arg Tyr Trp Pro Thr Asn Pro Tyr Pro Lys Ser Asp Ser Gly Leu Lys595 600 605CAC CGC TGG GTC GAG GAG GGC GAG TGG CTG GTC AAG GCG TGAGCGAAGG3038His Arg Trp Val Glu Glu Gly Glu Trp Leu Val Lys Ala610 615 620AGGAAAAAGG AAACAAAGAG GGGGGGGGGG GCTAGTTCCT ATTTTTGCTT TTTTTTTTTG 3098TTCTTGTCCT TGTGCTGGCG GTTACCCTGG TAAAGGAGAA GGGGGCCCCA AGTTCGAGTG 3158GGTGTGTGAT CGGGTAAATA TTATCAAGAG ATCT 3192(2)SEQ ID NO2的信息(i)序列性質(A)長度620個胺基酸(B)類型胺基酸(C)拓樸結構線性(ii)分子類型蛋白質(xi)序列描述SEQ ID NO2Met Lys Ser Phe Ile Ser Ala Ala Thr Leu Leu Val Gly Ile Leu Thr1 5 10 15Pro Ser Val Ala Ala Ala Pro Pro Ser Thr Pro Glu Gln Arg Asp Leu20 25 30Leu Val Pro Ile Thr Glu Arg Glu Glu Ala Ala Val Lys Ala Arg Gln35 40 45Gln Ser Cys Asn Thr Pro Ser Asn Arg Ala Cys Trp Thr Asp Gly Tyr50 55 60Asp Ile Asn Thr Asp Tyr Glu Val Asp Ser Pro Asp Thr Gly Val Val65 70 75 80Arg Pro Tyr Thr Leu Thr Leu Thr Glu Val Asp Asn Trp Thr Gly Pro85 90 95Asp Gly Val Val Lys Glu Lys Val Met Leu Val Asn Asn Ser Ile Ile100 105 110Gly Pro Thr Ile Phe Ala Asp Trp Gly Asp Thr Ile Gln Val Thr Val115 120 125Ile Asn Asn Leu Glu Thr Asn Gly Thr Ser Ile His Trp His Gly Leu130 135 140His Gln Lys Gly Thr Asn Leu His Asp Gly Ala Asn Gly Ile Thr Glu145 150 155 160Cys Pro Ile Pro Pro Lys Gly Gly Arg Lys Val Tyr Arg Phe Lys Ala165 170 175Gln Gln Tyr Gly Thr Ser Trp Tyr His Ser His Phe Ser Ala Gin Tyr180 185 190Gly Asn Gly Val Val Gly Ala Ile Gln Ile Asn Gly Pro Ala Ser Leu195 200 205Pro Tyr Asp Thr Asp Leu Gly Val Phe Pro Ile Ser Asp Tyr Tyr Tyr210 215 220Ser Ser Ala Asp Glu Leu Val Glu Leu Thr Lys Asn Ser Gly Ala Pro225 230 235 240Phe Ser Asp Asn Val Leu Phe Asn Gly Thr Ala Lys His Pro Glu Thr245 250 255Gly Glu Gly Glu Tyr Ala Asn Val Thr Leu Thr Pro Gly Arg Arg His260 265 270Arg Leu Arg Leu Ile Asn Thr Ser Val Glu Asn His Phe Gln Val Ser275 280 285Leu Val Asn His Thr Met Thr Ile Ile Ala Ala Asp Met Val Pro Val290 295 300Asn Ala Met Thr Val Asp Ser Leu Phe Leu Gly Val Gly Gln Arg Tyr305 310 315 320Asp Val Val Ile Glu Ala Ser Arg Thr Pro Gly Asn Tyr Trp Phe Asn325 330 335Val Thr Phe Gly Gly Gly Leu Leu Cys Gly Gly Ser Arg Asn Pro Tyr340 345 350Pro Ala Ala Ile Phe His Tyr Ala Gly Ala Pro Gly Gly Pro Pro Thr355 360 365Asp Glu Gly Lys Ala Pro Val Asp His Asn Cys Leu Asp Leu Pro Asn370 375 380Leu Lys Pro Val Val Ala Arg Asp Val Pro Leu Ser Gly Phe Ala Lys385 390 395 400Arg Pro Asp Asn Thr Leu Asp Val Thr Leu Asp Thr Thr Gly Thr Pro405 410 415Leu Phe Val Trp Lys Val Asn Gly Ser Ala Ile Asn Ile Asp Trp Gly420 425 430Arg Pro Val Val Asp Tyr Val Leu Thr Gln Asn Thr Ser Phe Pro Pro435 440 445Gly Tyr Asn Ile Val Glu Val Asn Gly Ala Asp Gln Trp Ser Tyr Trp450 455 460Leu Ile Glu Asn Asp Pro Gly Ala Pro Phe Thr Leu Pro His Pro Met465 470 475 480His Leu His Gly His Asp Phe Tyr Val Leu Gly Arg Ser Pro Asp Glu485 490 495Ser Pro Ala Ser Asn Glu Arg His Val Phe Asp Pro Ala Arg Asp Ala500 505 510Gly Leu Leu Ser Gly Ala Asn Pro Val Arg Arg Asp Val Thr Met Leu515 520 525Pro Ala Phe Gly Trp Val Val Leu Ala Phe Arg Ala Asp Asn Pro Gly530 535 540Ala Trp Leu Phe His Cys His Ile Ala Trp His Val Ser Gly Gly Leu545 550 555 560Gly Val Val Tyr Leu Glu Arg Ala Asp Asp Leu Arg Gly Ala Val Ser565 570 575Asp Ala Asp Ala Asp Asp Leu Asp Arg Leu Cys Ala Asp Trp Arg Arg580 585 590Tyr Trp Pro Thr Asn Pro Tyr Pro Lys Ser Asp Ser Gly Leu Lys His595 600 605Arg Trp Val Glu Glu Gly Glu Trp Leu Val Lys Ala610 615 620INDICATIONS RELATING TO A DEPOSITED MICROORGANISM(PCT Rule 13 bis
Form PCT/RO/134(july 1992)
權利要求
1.一種染色組合物，它包含a)每毫升微生物漆酶的染色組合物中0以上-1毫克酶蛋白，b)一種或多種染料前體，以及c)任選的一種或多種染料改性劑。
2.根據權利要求1的染色組合物，其中漆酶存在的濃度為0.0001-1mg/ml，優選0.001-0.8mg/ml，更優選0.002-0.5mg/ml，甚至更優選0.003-0.2mg/ml，特別是0.004-0.1mg酶蛋白/毫升染色組合物。
3.根據權利要求1和2的染色組合物，其中所說的微生物漆酶是絲狀真菌來源的。
4.根據權利要求1和2的染色組合物，其中的漆酶來源於毀絲黴屬的一個菌株，特別是嗜熱毀絲黴種的一個菌株，諸如嗜熱毀絲黴NRRL B 21261或其變種如T1變種。
5.根據權利要求4的染色組合物，其中漆酶由SEQ ID NO1所示的序列編碼。
6.根據權利要求4和5的染色組合物，其中漆酶存在的濃度為0以上-1mg/ml，優選0.0001-0.1mg/ml，更優選0.0005-0.05mg/ml，特別是0.001-0.01mg酶蛋白/毫升染色組合物。
7.根據權利要求1到6中任一項的染色組合物，包含選自下組的一種染料前體對苯二胺(pPD)、對甲代苯二胺(pTD)、氯對苯二胺、對氨基苯酚、鄰氨基苯酚、3，4-二氨基甲苯、2-甲基-1，4-二氨基苯、4-甲基-鄰苯二胺、2-甲氧基-對苯二胺、2-氯-1，4-二氨基苯，4-氨基二苯胺、1-氨基-4-β-甲氧基乙基氨基苯、1-氨基-4-雙-(β-羥乙基)-氨基苯、1，3-二氨基苯、2-甲基-1，3-二氨基苯、2，4-二氨基甲苯、2，6-二氨基吡啶、1-羥基-2-氨基苯、1-羥基-3-氨基苯、1-甲基-2-羥基-4-氨基苯、1-甲基-2-羥基-4-β-羥乙基氨基苯、1-羥基-4-氨基苯、1-羥基-4-甲基氨基苯、1-甲氧基-2，4-二氨基苯、1-乙氧基-2，3-二氨基苯、1-β-羥基乙氧基-2，4-二氨基苯、吩嗪、諸如4，7-吩嗪二羧酸、2，7-吩嗪二羧酸、2-吩嗪羧酸、2，7-二氨基吩嗪、2，8-二氨基吩嗪、2，7-二氨基-3，8-二甲氧基吩嗪、2，7-二氨基-3-甲氧基吩嗪、2，7-二氨基-3-甲氧基吩嗪、3-二甲基2，8-吩嗪二胺、2，2′-[(8-氨基-7-甲基-2-吩嗪基)亞氨基]雙-乙醇、2，2′-[(8-氨基-7-甲氧基-2-吩嗪基)亞氨基]雙-乙醇、2，2′-[(8-氨基-7-氯-2-吩嗪基)亞氨基]雙-乙醇、2-[(8-氨基-7-甲基-2-吩嗪基)氨基]-乙醇、2，2′-[(8-氨基-2-吩嗪基)亞氨基]-雙-乙醇、3-氨基-7-(二甲基氨基)-2，8-二甲基-5-苯基氯、9-(二乙基氨基)-苯並[a]吩嗪-1，5-二醇、N-[8-(二乙基氨基)-2-吩嗪基]-甲烷磺醯胺、N-(8-甲氧基-2-吩嗪基)-甲烷磺醯胺、N，N，N′，N′-四甲基-2，7-吩嗪二胺，3，7-二甲基-2-吩嗪胺，對氨基苯甲酸類，諸如對氨基苯甲酸乙酯、對氨基苯甲酸甘油酯、對氨基苯甲酸異丁酯、對二甲基氨基苯甲酸戊酯、對二甲基氨基苯甲酸辛酯、對二乙氧基氨基苯甲酸戊酯、對二丙氧基氨基苯甲酸乙酯、乙醯水楊酸，靛紅衍生物，諸如2，3-二氨基苯甲酸。
8.根據權利要求1到7中任一項的染色組合物，包括選自下組的一種染料改性劑間苯二胺、2，4-二氨基苯甲醚、1-羥基萘(α-萘酚)、1，4-二羥基苯(氫醌)、1，5-二羥基萘、1，2-二羥基苯(鄰苯二酚)、1，3-二羥基苯(間苯二酚)、1，3-二羥基-2-甲基苯，1，3-二羥基-4-氯苯(4-氯間苯二酚)、1，2，3-三羥基苯、1，2，4-三羥基苯、1，2，4-三羥基-5-甲基苯、1，2，4-三羥基甲苯。
9.根據權利要求1到8的組合物在對角蛋白纖維，例如頭髮、皮毛、獸皮或羊毛進行永久性染色中的應用。
10.對角蛋白纖維進行染色的一種方法，包括將根據權利要求1到8的一種染色組合物在合適的條件下與角蛋白纖維接觸一段時間，這段時間足以允許染料前體氧化為有色化合物。
11.根據權利要求10的方法，其中染色過程在pH3-10，優選5-9，特別是6-8的範圍內進行。
12.根據權利要求10和11的方法，其中該過程進行的時間為10-60分鐘，優選15-50分鐘，特別是20-40分鐘。
全文摘要
本發明涉及一種永久性的染色組合物,其包括:a)每毫升微生物漆酶的染色組合物中0以上－1毫克酶蛋白,b)一種或多種染料前體,以及c)任選的一種或多種染料分子改性劑,應用該染色組合物進行角蛋白纖維,例如頭髮、皮毛、獸皮和羊毛染色,及對角蛋白纖維進行永久性染色的一種方法。
文檔編號A61K8/66GK1203615SQ96198697
公開日1998年12月30日 申請日期1996年11月29日 優先權日1995年11月30日
發明者D·阿斯林格, N·H·所蘭森, K·羅巴克 申請人:諾沃挪第克公司