抗齲齒口腔噴霧劑及其製備方法
2023-05-28 02:59:46
專利名稱：抗齲齒口腔噴霧劑及其製備方法
技術領域：
本發明涉及一種抗齲齒口腔噴霧劑及其製備方法。
背景技術：
目前，隨著人民生活水平的普遍提高及飲食中糖含量及其攝入量的增加，使得齲病得以流行，尤其是兒童乳牙患齲齒更為明顯，隨著人口壽命的延長，老年人根面齲亦在增長，這些都嚴重影響人們的口腔和身體健康，從而嚴重影響人們的生活質量。目前世界衛生組織(WHO)已經將齲齒列為是僅次於心血管疾病、癌症的第三大非傳染性疾病，並且作為身體健康與否的10項指標之一。
齲齒是一種常見病、多發病，其發病率高，分布廣，對人體危害大。經過科學家們不懈的努力，現在普遍認為細菌是齲齒發生的主要原因，其中變形鏈球菌是主要致病菌，其形成的菌斑粘附於牙齒表面，並在牙齒表面繁殖生長、產酸，腐蝕牙齒，最終形成齲齒。
目前市場上應用的防齲產品大致分為以下幾類一為含氟製劑，其防齲原理為促進牙齒鈣化，減少酸性腐蝕。此為間接作用，療效有限；二是抗菌藥物的應用，如含洗必汰、甲硝唑等的漱口水，因其有明顯的副作用，應用受到限制；三是由植物提取物製成的防齲產品，如中藥提取物製成的含漱液、口膠片等，其對齲齒防治有一定作用，但其均為藥物，需在醫生指導下使用，不宜長期使用；四是目前市場上被廣泛接受的利用代糖生產的用於防齲護齒類的產品，如木糖醇等，它卻沒有從根本上解決防齲護齒的實質性問題。中國專利公開號CN1307061A於2001年8月8日公開了一種名稱為「抗齲齒菌IgY的製備及防齲齒組合物」的專利。該專利抗齲齒菌IgY的製備分以下幾步製備抗原，製備抗體，配置藥物。其抗體的生產過程是將細菌的細胞直接進行裂解後作為抗原，導致製備出來的抗體主要是針對細菌內的抗原成份其作用，當面對完整的活性細菌時，由於抗體無法直接進入細菌體內起作用，而其與活體細菌表面的結合能力又弱，因此其滅菌的效果很差。故現有產品存在低效、製造和使用不方便、有毒副作用的缺點。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是克服現有技術的不足，提供一種抗齲齒口腔噴霧劑，該抗齲齒口腔噴霧劑效果好、製造和使用方便、無毒副作用。本發明所要解決的另一技術問題是提供一種抗齲齒口腔噴霧劑的製備方法，該抗齲齒口腔噴霧劑的製造方法針對引起齲齒的主要病原菌-變形鏈球菌進行深入分析研究而製成卵黃抗體，製備的卵黃抗體可直接識別細菌表面的抗原，對完整的、有活性的細菌有較強的殺滅作用。
本發明抗齲齒口腔噴霧劑所採用的技術方案是它是由下述重量配比的原料製成的藥劑木糖醇 0.1-5.0％甘油1.0-15.0％阿斯巴甜0.01-0.2％安賽蜜 0.01-0.2％山梨酸鉀0.01-0.05％抗齲齒卵黃抗體 0.04-1.0％去離子水97.52-59.05％丙二醇 1.0-15.0％香精0.2-1.5％聚山梨醇酯200.1-2.0％
色素0.01-1.0％上述各組分相加為百分之百。
本發明抗齲齒口腔噴霧劑的製備方法所採用的技術方法是它採用以下步驟進行一、抗齲齒卵黃抗體的製備；(1)、製備抗原取血清型為C型和D型的變形鏈球菌，分別以固體TYCSB瓊脂斜面傳代，在37℃厭氧條件下培養48小時，經PCR鑑定得到所述變形鏈球菌的純種後，在液體TYCSB培養基中擴大培養48~72小時收集菌體，所述菌體用0.5％福馬林25℃滅活24小時後，凍成乾粉後作為抗原；(2)、製備抗體①、佐劑的選用和產卵母雞的免疫及取卵初次免疫選用弗氏完全佐劑與所述抗原按照重量比1∶1混合乳化後作為初次免疫抗原，加強免疫均選用弗氏不完全佐劑與所述抗原按照重量比為1∶1混合乳化後作為加強免疫抗原；選用健康的白種來行母雞隔離飼養並進行雞肌肉多點注射所述初次免疫抗原，此為初次免疫；隔2周後開始加強免疫，對初次免疫的母雞隔離飼養並進行雞肌肉多點注射所述加強免疫抗原，以後每隔一周加強免疫一次，其初次免疫和加強免疫共三次，從初次免疫後算起，第三十天開始收集雞卵，4℃條件下儲存備用；②、卵黃抗體的提取；將雞卵中的卵黃抗體提取，冷凍乾燥，即得抗體；二、溶液的配製；(以下配比為重量比)A溶液木糖醇 0.1-5.0％
甘油1.0-15％阿斯巴甜0.01-0.2％安賽蜜 0.01-0.2％山梨酸鉀0.01-0.05％抗齲齒卵黃抗體 0.04-1.0％去離子水70.0-50.0％B溶液丙二醇 1.0-15.0％香精0.2-1.5％聚山梨醇酯200.1-2.0％C溶液色素0.01-1.0％D溶液去離子水27.52-9.05％三、先將所述A溶液充分混合溶解，然後將所述B溶液在攪拌機攪拌所述A溶液的情況下添加到所述A溶液中，得到的混合溶液通過0.22uM的濾膜進行過濾後，在無菌的條件下加入所述C溶液，然後再將所述D溶液加入到所述混合溶液，使上述各組分相加為百分之百，在無菌的條件下分裝到不同規格的噴霧器罐內，即可。
所述的卵黃抗體的提取採用水稀釋法從收集的免疫的雞卵中分離得到蛋黃，用所述去離子水稀釋，調節PH值在4.0-5.0範圍內，在4℃條件下攪拌4小時，用離心機加工後棄去沉澱，將上清濃縮、冷凍乾燥，即可。
所述的卵黃抗體的提取採用PEG沉澱法從收集的免疫的雞卵中分離得到蛋黃，加入體積為所述蛋黃3倍體積的濃度為4％的PEG進行稀釋，充分攪拌混勻後在溫度為4℃、離心機轉數為每分鐘1300轉條件下離心10分鐘，取上清，然後向所述上清內逐滴滴加1/6所述上清體積的濃度為40％的PEG，充分攪拌混勻後在溫度為4℃、離心機轉數為每分鐘1300轉條件下離心10分鐘，收集沉澱，冷凍乾燥，即可。
所述的卵黃抗體的提取採用膜過濾法從收集的免疫的雞卵中分離得到蛋黃，用所述去離子水稀釋，在溫度為4℃條件下靜置12小時後，用分子量為200KD和150KD的膜分別過濾，收集150KD-200KD的蛋白物質，冷凍乾燥，即可。
所述的卵黃抗體的提取採用硫酸銨沉澱法從收集的免疫的雞卵中分離得到蛋黃，重複提取3次第一次，取所述蛋黃等體積的生理鹽水稀釋並混合均勻後，緩慢滴加2倍蛋黃體積且濃度為50％的飽和硫酸銨，在溫度為4℃條件下作用3小時，並在溫度為4℃、離心機轉數為每分鐘1300轉條件下離心10分鐘，棄上清，留沉澱；第二次，用所述生理鹽水溶解沉澱，然後加入2/3所述生理鹽水體積且濃度為40％的飽和硫酸銨，在溫度為4℃條件下作用3小時，並在溫度為4℃、離心機轉數為每分鐘1300轉條件下離心10分鐘，棄上清，留沉澱；第三次，用所述生理鹽水溶解沉澱，然後加入1/2所述生理鹽水體積且濃度為33％的飽和硫酸銨，在溫度為4℃條件作用3小時，將沉澱直接冷凍乾燥，即可。
本發明的有益效果是由於本發明針對引起齲齒的主要病原菌-變形鏈球菌進行深入分析研究而製成卵黃抗體，其抗體的生產過程不是將細菌的細胞直接進行裂解後作為抗原，製備出來的抗體主要是針對細菌表面的抗原成份起作用，當面對完整的活性細菌時，其與活體細菌表面的結合能力較強，所以抗體可直接進入細菌體內起作用，因此其對細菌有較強的殺滅作用，故該抗齲齒口腔噴霧劑效果好、製造和使用方便、無毒副作用；又由於本發明抗齲齒口腔噴霧劑的製備方法中卵黃抗體的提取採用水稀釋法、PEG沉澱法、膜過濾法、硫酸銨沉澱法等方法，故採用本發明卵黃抗體來配製口腔噴霧劑的方法是衛生、環保、方便、低成本的。
具體實施例方式
實施例一本發明所採用的技術機理是首先製備一種抗齲齒的卵黃抗體，它按照非變性聚丙烯凝膠電泳進行檢測，經過考馬斯亮藍R250染色後，圖譜檢測可以在分子量170～190KD處呈現單一條帶，Western Bloting檢測可以在分子量170～190KD處發現一條單一的特異性條帶；或按照變性聚丙烯凝膠電泳進行檢測，經過考馬斯亮藍R250染色後，圖譜呈現兩條條帶，Western Bloting檢測可以在分子量約65KD和25KD處發現兩條特異性條帶，採用紫外分光光度法測定蛋白質濃度為0.1～20mg/ml；經過酶聯免疫吸附實驗測定其效價為1∶50-1∶100000。
本發明抗齲齒口腔噴霧劑，它是由下述重量配比的原料製成的藥劑木糖醇0.1％甘油 1.0％阿斯巴甜 0.01％安賽蜜0.01％山梨酸鉀 0.01％抗齲齒卵黃抗體0.04％去離子水 97.52％丙二醇1.0％香精 0.2％聚山梨醇酯0.1％色素 0.01％上述各組分相加為百分之百。
本發明抗齲齒口腔噴霧劑的製備方法採用以下步驟進行一、抗齲齒卵黃抗體的製備
(1)、製備抗原經過科學家們不懈的努力，現在普遍認為細菌是齲齒發生的主要原因，其中變形鏈球菌是主要致病菌。取血清型為C型和D型的變形鏈球菌，分別以固體TYCSB瓊脂斜面傳代，37℃在厭氧條件下培養48小時，經PCR鑑定得到所述變形鏈球菌的純種後，在液體TYCSB培養基中擴大培養48-72小時收集菌體，所述菌體用0.5％福馬林25℃滅活24小時後，凍成乾粉後作為抗原。
(2)、製備抗體①、佐劑的選用和產卵母雞的免疫及取卵初次免疫選用弗氏完全佐劑與所述抗原按照重量比1∶1混合乳化後作為初次免疫抗原，加強免疫均選用弗氏不完全佐劑與所述抗原按照重量比為1∶1混合乳化後作為加強免疫抗原；選用健康的白種來行母雞隔離飼養並進行雞肌肉多點注射所述初次免疫抗原，此為初次免疫；隔2周後開始加強免疫，對初次免疫的母雞隔離飼養並進行雞肌肉多點注射所述加強免疫抗原，以後每隔一周加強免疫一次，其初次免疫和加強免疫共三次，從初次免疫後算起，第三十天開始收集雞卵，4℃條件下儲存備用；②、卵黃抗體的提取卵黃抗體的提取可採用以下四種方法之一a、所述的卵黃抗體的提取採用水稀釋法從收集的免疫的雞卵中分離得到蛋黃，用所述去離子水稀釋，調節PH值在4.0-5.0範圍內，在4℃條件下攪拌4小時，用離心機加工後棄去沉澱，將上清濃縮、冷凍乾燥，即可。
b、所述的卵黃抗體的提取採用PEG沉澱法從收集的免疫的雞卵中分離得到蛋黃，加入體積為所述蛋黃3倍體積的濃度為4％的PEG進行稀釋，充分攪拌混勻後在溫度為4℃、離心機轉數為每分鐘1300轉條件下離心10分鐘，取上清，然後向所述上清內逐滴滴加1/6所述上清體積的濃度為40％的PEG，充分攪拌混勻後在溫度為4℃、離心機轉數為每分鐘1300轉條件下離心10分鐘，收集沉澱，冷凍乾燥，即可。
c、所述的卵黃抗體的提取採用膜過濾法從收集的免疫的雞卵中分離得到蛋黃，用所述去離子水稀釋，在溫度為4℃條件下靜置12小時後，用分子量為200KD和150KD的膜分別過濾，收集150KD-200KD的蛋白物質，冷凍乾燥，即可。
d、所述的卵黃抗體的提取採用硫酸銨沉澱法從收集的免疫的雞卵中分離得到蛋黃，重複提取3次第一次，取所述蛋黃等體積的生理鹽水稀釋並混合均勻後，緩慢滴加2倍蛋黃體積且濃度為50％的飽和硫酸銨，在溫度為4℃條件下作用3小時，並在溫度為4℃、離心機轉數為每分鐘1300轉條件下離心10分鐘，棄上清，留沉澱；第二次，用所述生理鹽水溶解沉澱，然後加入2/3所述生理鹽水體積且濃度為40％的飽和硫酸銨，在溫度為4℃條件下作用3小時，並在溫度為4℃、離心機轉數為每分鐘1300轉條件下離心10分鐘，棄上清，留沉澱；第三次，用所述生理鹽水溶解沉澱，然後加入1/2所述生理鹽水體積且濃度為33％的飽和硫酸銨，在溫度為4℃條件作用3小時，將沉澱直接冷凍乾燥，即可。
二、溶液的配製A溶液木糖醇 0.1％
甘油 1.0％阿斯巴甜 0.01％安賽蜜 0.01％山梨酸鉀 0.01％抗齲齒卵黃抗體 0.04％去離子水 70.0％B溶液丙二醇 1.0％香精 0.2％聚山梨醇酯 0.1％C溶液色素 0.01％D溶液去離子水 27.52％三、先將所述A溶液充分混合溶解，然後將所述B溶液在攪拌機攪拌的情況下添加到所述A溶液中，得到的混合溶液通過0.22uM的濾膜進行過濾後，在無菌的條件下加入所述C溶液，然後再將所述D溶液加入到所述混合溶液，使上述各組分相加為百分之百，在無菌的條件下分裝到不同規格的噴霧器罐內，本發明選用100毫升的包裝瓶。
本發明所述的抗齲齒的口腔噴霧劑還可以與預防口腔疾病的藥物製劑及蛀牙預防劑配合使用，協同增加抗齲齒的功效。
實施例二本發明抗齲齒口腔噴霧劑，它是由下述重量配比的原料製成的藥劑木糖醇5.0％甘油 15.0％阿斯巴甜 0.2％
安賽蜜 0.2％山梨酸鉀 0.05％抗齲齒卵黃抗體 1.0％去離子水 59.05％丙二醇 15.0％香精 1.5％聚山梨醇酯 2.0％色素 1.0％上述各組分相加為百分之百。
溶液的配製A溶液木糖醇 5.0％甘油 15.0％阿斯巴甜 0.2％安賽蜜 0.2％山梨酸鉀 0.05％抗齲齒卵黃抗體 1.0％去離子水 30.0％B溶液丙二醇 15.0％香精 1.5％聚山梨醇酯 2.0％C溶液色素 1.0％D溶液去離子水 29.05％
其餘部分同實施例一。
實施例三本發明抗齲齒口腔噴霧劑，它是由下述重量配比的原料製成的藥劑木糖醇 3.0％甘油 8.0％阿斯巴甜 0.1％安賽蜜 0.1％山梨酸鉀 0.03％抗齲齒卵黃抗體 0.5％去離子水 78.77％丙二醇 8.0％香精 1.0％聚山梨醇酯 1.0％色素 0.5％上述各組分相加為百分之百。
溶液的配製A溶液木糖醇 3.0％甘油8.0％阿斯巴甜0.1％安賽蜜 0.1％山梨酸鉀0.03％抗齲齒卵黃抗體 0.5％去離子水50.0％B溶液丙二醇 8.0％
香精 1.0％聚山梨醇酯1.0％C溶液色素 0.5％D溶液去離子水 28.77％其餘部分同實施例一。
權利要求
1.一種抗齲齒口腔噴霧劑，其特徵在於，它是由下述重量配比的原料製成的藥劑木糖醇 0.1-5.0％甘油 1.0-15.0％阿斯巴甜 0.01-0.2％安賽蜜 0.01-0.2％山梨酸鉀 0.01-0.05％抗齲齒卵黃抗體 0.04-1.0％去離子水 97.52-59.05％丙二醇 1.0-15.0％香精 0.2-1.5％聚山梨醇酯 0.1-2.0％色素 0.01-1.0％上述各組分相加為百分之百。
2.一種根據權利要求1所述的抗齲齒口腔噴霧劑的製備方法，其特徵在於，它包括以下步驟一、抗齲齒卵黃抗體的製備(1)製備抗原取血清型為C型和D型的變形鏈球菌，分別以固體TYCSB瓊脂斜面傳代，在37℃厭氧條件下培養48小時，經PCR鑑定得到所述變形鏈球菌的純種後，在液體TYCSB培養基中擴大培養48～72小時收集菌體，所述菌體用0.5％福馬林25℃滅活24小時後，凍成乾粉後作為抗原；(2)製備抗體①、佐劑的選用和產卵母雞的免疫及取卵初次免疫選用弗氏完全佐劑與所述抗原按照重量比1∶1混合乳化後作為初次免疫抗原，加強免疫均選用弗氏不完全佐劑與所述抗原按照重量比為1∶1混合乳化後作為加強免疫抗原；選用健康的白種來行母雞隔離飼養並進行雞肌肉多點注射所述初次免疫抗原，此為初次免疫；隔2周後開始加強免疫，對初次免疫的母雞隔離飼養並進行雞肌肉多點注射所述加強免疫抗原，以後每隔一周加強免疫一次，其初次免疫和加強免疫共三次，從初次免疫後算起，第三十天開始收集雞卵，4℃條件下儲存備用；②、卵黃抗體的提取將雞卵中的卵黃抗體提取，冷凍乾燥，即得抗體；二、溶液的配製A溶液木糖醇 0.1-5.0％甘油1.0-15.0％阿斯巴甜0.01-0.2％安賽蜜 0.01-0.2％山梨酸鉀0.01-0.05％抗齲齒卵黃抗體 0.04-1.0％去離子水70.0-50.0％B溶液丙二醇 1.0-15.0％香精0.2-1.5％聚山梨醇酯200.1-2.0％C溶液色素0.01-1.0％D溶液去離子水27.52-9.05％上述各組分均為重量百分比；三、先將所述A溶液充分混合溶解，然後將所述B溶液在攪拌機攪拌所述A溶液的情況下添加到所述A溶液中，得到的混合溶液通過0.22uM的濾膜進行過濾後，在無菌的條件下加入所述C溶液，然後再將所述D溶液加入到所述混合溶液，使上述各組分相加為百分之百，在無菌的條件下分裝到不同規格的噴霧器罐內，即可。
3.根據權利要求2所述的抗齲齒口腔噴霧劑的製備方法，其特徵在於，所述的卵黃抗體的提取採用水稀釋法從收集的免疫的雞卵中分離得到蛋黃，用所述去離子水稀釋，調節PH值在4.0-5.0範圍內，在4℃條件下攪拌4小時，用離心機加工後棄去沉澱，將上清濃縮、冷凍乾燥，即可。
4.根據權利要求2所述的抗齲齒口腔噴霧劑的製備方法，其特徵在於，所述的卵黃抗體的提取採用PEG沉澱法從收集的免疫的雞卵中分離得到蛋黃，加入體積為所述蛋黃3倍體積的濃度為4％的PEG進行稀釋，充分攪拌混勻後在溫度為4℃、離心機轉數為每分鐘1300轉條件下離心10分鐘，取上清，然後向所述上清內逐滴滴加1/6所述上清體積的濃度為40％的PEG，充分攪拌混勻後在溫度為4℃、離心機轉數為每分鐘1300轉條件下離心10分鐘，收集沉澱，冷凍乾燥，即可。
5.根據權利要求2所述的抗齲齒口腔噴霧劑的製備方法，其特徵在於，所述的卵黃抗體的提取採用膜過濾法從收集的免疫的雞卵中分離得到蛋黃，用所述去離子水稀釋，在溫度為4℃條件下靜置12小時後，用分子量為200KD和150KD的膜分別過濾，收集150KD-200KD的蛋白物質，冷凍乾燥，即可。
6.根據權利要求2所述的抗齲齒口腔噴霧劑的製備方法，其特徵在於，所述的卵黃抗體的提取採用硫酸銨沉澱法從收集的免疫的雞卵中分離得到蛋黃，重複提取3次第一次，取所述蛋黃等體積的生理鹽水稀釋並混合均勻後，緩慢滴加2倍蛋黃體積且濃度為50％的飽和硫酸銨，在溫度為4℃條件下作用3小時，並在溫度為4℃、離心機轉數為每分鐘1300轉條件下離心10分鐘，棄上清，留沉澱；第二次，用所述生理鹽水溶解沉澱，然後加入2/3所述生理鹽水體積且濃度為40％的飽和硫酸銨，在溫度為4℃條件下作用3小時，並在溫度為4℃、離心機轉數為每分鐘1300轉條件下離心10分鐘，棄上清，留沉澱；第三次，用所述生理鹽水溶解沉澱，然後加入1/2所述生理鹽水體積且濃度為33％的飽和硫酸銨，在溫度為4℃條件作用3小時，將沉澱直接冷凍乾燥，即可。
全文摘要
本發明公開了一種抗齲齒口腔噴霧劑及其製備方法，旨在提供一種效果好、製造和使用方便、無毒副作用的抗齲齒口腔噴霧劑及其製備方法。該抗齲齒口腔噴霧劑針對引起齲齒的主要病原菌－變形鏈球菌進行深入分析研究而製成卵黃抗體(IgY)，製備的所述卵黃抗體可直接識別細菌表面的抗原，對完整的、有活性的細菌有較強的殺滅作用，卵黃抗體的提取採用水稀釋法或PEG沉澱法或膜過濾法或硫酸銨沉澱法，然後再配製成口腔噴霧劑，該噴霧劑由卵黃抗體(IgY)、醇、潤溼劑、表面活性劑、香精、防腐劑、色素和去離子水組合而成。本發明可用於口腔抗齲、治齲領域。
文檔編號A61P1/00GK1562368SQ200410026638
公開日2005年1月12日 申請日期2004年3月26日 優先權日2004年3月26日
發明者葉志海, 王文, 丁波, 夏魯全 申請人:珠海百奧生物技術有限公司