可調式超靜增氧機在球蟲卵囊孢子化發育中的應用的製作方法

2023-05-28 01:01:16

專利名稱：：可調式超靜增氧機在球蟲卵囊孢子化發育中的應用的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種增氧設備
技術領域：
，更具體的是涉及一種增氧機在提高球蟲卵囊孢子化率上的應用。
背景技術：
：雞球蟲病廣泛分布於世界各地，是危害集約化養雞業最嚴重的疾病之一，其對雞的危害與一些烈性傳染病相當。迄今，雞球蟲病防制的主要手段是使用抗球蟲藥物進行化學防治。然而，隨著抗球蟲藥物的廣泛和連續使用，耐藥性與藥物殘留兩大問題日趨嚴重，從而導致出現使藥物防治雞球蟲病舉步維艱的局面，引起了國人的極大關注。尤其隨著禁止濫用藥物呼聲的持續升溫，面對人們對綠色環保迫切呼喚，面對人們對無藥殘留食品安全需求的不斷提高，這些迫使人們將目光轉向於免疫預防。為此，本設計人員經過長年累月的研究試驗，成功研發出藥物敏感的雞球蟲病四價活疫苗，雞球蟲卵囊活疫苗的生產工藝跟病毒、細菌病類疫苗的生產有很大的不同，這主要與雞球蟲特有的發育繁殖方式有關，孢子化球蟲卵囊感染雞隻後，在腸道黏膜上皮內經46天的發育，形成大量卵囊隨糞便排出體外，這時的卵囊稱為未孢子化的卵囊，不具有感染雞的能力。未孢子化卵囊需要適當的溫度、溼度以及充足氧氣三個條件控制下，在體外必須經過一個孢子化過程，形成子孢子，才重新具有感染性，三者缺一不可。培養球蟲卵囊所要求的合適溫度、溼度條件是容易創造的，充足氧氣是難以創造的，其容易受外界環境等多方面因素影響及制約。然而，球蟲卵囊孢子化對氧氣需求相當敏感，傳統上採取人工每間隔一定時間(一般1~2小時)用吸管往培養液中吹入空氣的做法，為球蟲卵囊孢子化發育提供氧氣，但這種方法勞動強度大且可控性差。其操作既費時又費力，而且容易出現由於吹氣不均勻，導致氧氣供應不足，卵囊孢子化率偏低等問題。因此，尋找一種更有效、更方便、更簡捷的增氧方法，更好地為球蟲卵囊孢子化發育提供充足氧氣，成為球蟲病疫苗製造者迫切需要解決的問題，並且極具前瞻性。
發明內容本發明的目的就是為了解決現有技術之不足而提供的一種不僅操作方便、簡捷、有效，實用性強，而且應用能大大地提高球蟲卵囊孢子化率的可調式超靜增氧機。本發明是採用如下技術解決方案來實現上述目的一種可調式超靜增氧機在球蟲卵囊孢子化發育中的應用，其特徵在於它是從增氧機引出氣管到球蟲卵囊培養容器底部，給卵囊孢子化發育培養輸送氧氣。作為上述方案的進一步說明，在所述給卵囊孢子化發育培養輸送氧氣前，還需要準備新鮮的卵囊，此過程包括取孢子化卵囊含量為100萬個/mL的堆型艾美耳球蟲生產蟲種，用純化水作10倍稀釋，以10萬個卵囊/羽的劑量經口感染40隻14日齡無球蟲感染健康雞，收集感染後第4天含卵囊的糞便，分離出一批新鮮的堆型艾美耳球蟲卵囊。在所述氧機引出氣管到球蟲卵囊培養容器底部過程中，首先將氣管一端連接到增氧機，將增氧機豎立並固定於一機架上，以氣管的另一端觸及培養容器底部；將氣管完全置於卵囊液培養液中，接通可調式超靜增氧機電源，釋放出均勻的氣泡，給球蟲卵囊輸送充足的氧氣，置於27士2。C培養箱中培養。所述培養液體積為150(T2000mL，卵囊培養液深度一般不超過容器高度的2/3，培養密度調至8萬個卵囊/mL，溼度50%以上。本發明採用上述技術解決方案所能達到的有益效果是本發明採用可調式超靜增氧機應用於球蟲卵囊孢子化發育培養中，可使球蟲卵囊孢子化率高達90%,且卵囊形態、活力未受影響，效果大大優於傳統的人工吹氣增氧法。圖1為本發明的不同培養方法的球蟲卵囊孢子化率對比圖。具體實施例方式本發明一種可調式超靜增氧機在球蟲卵囊孢子化發育中的應用，它是從含卵囊的雞糞便中分離出新鮮的球蟲卵囊後，將其懸浮於氯胺T培養液中。將卵囊培養液置於數顯生化培養箱中，溫度控制於27"C29r，溼度50%以上，卵囊密度不超過10萬個卵囊/mL。將塑料氣管一端連接到可調式超靜增氧機，將可調式超靜增氧機豎立並平穩地固定於架上，以塑料氣管的另一端觸及培養容器底部，接通可調式超靜增氧機電源，即釋放出均勻的氣泡，從而達到增氧的目的。其中，可調式超靜增氧機，它是由現有的增氧機及外殼構成，增氧機位於外殼內，在增氧機與外殼的支撐點之間設有彈性裝置，在外殼上設有氣管孔，將塑料氣管從氣管孔相應的孔端穿出。主要工作原理是通過增氧機的水泵作用，使球蟲卵囊培養液產生氣泡，而這些氣泡中的氧氣就會溶解於水中，從而直接增加水的溶氧量，從而提高球蟲卵囊培養液的含氧量，滿足球蟲卵囊孢子發育的需要。本發明在球蟲病疫苗生產工藝上採用可調式超靜增氧機替代人工吹氣給球蟲卵囊孢子化發育培養提供充足的氧氣這一工藝的改進與創新，到目前為止，在國內外尚屬首創，未見有同類研究報導。下面用實例進一步說明本發明的效果1、試驗目的測定使用可調式超靜增氧機對球蟲卵囊孢子化率的影響，確定其使用對提高球蟲卵囊孢子化率提供依據。2、材料與方法2.1儀器與器具數顯生化培養箱、顯微鏡、可調式超靜增氧機l臺、血球計數板、玻片、塑料氣管、玻璃吸管、2000mL燒杯l個、小磁碟2個。2.2新鮮卵囊的準備取孢子化卵囊含量為100萬個/mL的堆型艾美耳球蟲生產蟲種，用純化水作10倍稀釋(即孢子化卵囊含量為10萬個/mL)，以10萬個卵囊/羽的劑量經口感染40隻14日齡無球蟲感染健康雞，收集感染後第4天含卵囊的糞便，按球蟲疫苗製備的生產工藝分離出一批新鮮的堆型艾美耳球蟲卵囊。2.3試驗分組與處理將乾淨的堆型艾美耳球蟲卵囊平分為3份，加入適量1%氯胺T溶液，培養密度為8萬個卵囊/mL，置27士2。C培養箱中培養。第一組空白對照組，既不需要人工吹氣也不使用增氧機，選用小磁碟培養，培養液體積為1000mL，卵囊培養液深度一般不超過0.7cm，培養密度調至8萬個卵囊/mL，培養溼度50%以上，置於27土2。C培養箱中培養；第二組人工吹氣，選用小磁碟培養，培養液體積為1000mL，卵囊培養液深度一般不超過0.7cm，每隔三個小時用玻璃吸管吹勻一遍卵囊，培養密度調至8萬個卵囊/mL，培養溼度50%以上，置於27土2-C培養箱中培養；第三組使用增氧機，選用2000mL燒杯培養，培養液體積為1600mL，卵囊培養液深度一般不超過容器高度的2/3，培養密度調至8萬個卵囊/mL，培養溼度50%以上。首先將塑料氣管一端連接到可調式超靜增氧機，將可調式超靜增氧機豎立並平穩地固定於架上，以塑料氣管的另一端觸及培養容器底部為宜；將塑料氣管完全置於卵囊液培養液中，接通可調式超靜增氧機電源，即釋放出均勻的氣泡，給球蟲卵囊輸送充足的氧氣，置於27土2'C培養箱中培養；分別於培養後14h、17h、20h、22h、24h、26h和28h，觀察球蟲卵囊的孢子化率，根據孢子發育完成的判斷指標，用血球計數板計算每組已孢子化的球蟲卵囊數，計算出孢子化率。孢子發育完成的判斷指標第一，卵囊中孢子囊前端的斯氏體清晰可見；第二，孢子囊內子孢子上的折光體清晰可見。若卵囊同時符合這兩個指標，表明已孢子發育完成，否則表明卵囊還沒有孢子發育完成。2.4孢子化率的計算取卵囊培養液充滿血球計數板，分別數計數板上16個小方格的卵囊總數及開始孢子化的卵囊數量，計算孢子化率以及孢子化完成率，每個組取兩個樣品，取其平均數。孢子化率=(開始孢子化的卵囊數量/卵囊總數)X100%2.5評定標準其孢子化率數值大於或等於80%，表明其卵囊孢子發育已完成，可以收穫，否則不能收穫。3、結果與結論3.1球蟲卵囊孢子化情況結果見表1。從表1與圖1可以看出，在培養22小時堆型艾美耳球蟲卵囊孢子化率可以看出，第三組使用可調式超靜增氧機，堆型艾美耳球蟲卵囊已有82%完全孢子化；第二組人工吹卵囊只有77%完全孢子化，前者高於後者。可見，使用可調式超靜增氧機應用於球蟲卵囊孢子化發育，可顯著提高球蟲卵囊的孢子化率，其球蟲卵囊孢子化效果優於常規的人工吹氣增氧法。表1可調式超靜增氧機對球蟲卵囊孢子化率的影響試驗tableseeoriginaldocumentpage83.2最短的孢子化時間從表1中孢子化培養時間對比可以看出第二組人工吹氣在培養26小時，孢子化率才達到80%;第三組使用增氧機，在培養在22小時，孢子化率達到82%，孢子化已完成，後者的孢子化時間明顯地比前者縮短。權利要求1、一種可調式超靜增氧機在球蟲卵囊孢子化發育中的應用，其特徵在於它是從增氧機引出氣管到球蟲卵囊培養容器底部，給卵囊孢子化發育培養輸送氧氣。2、根據權利要求1所述的可調式超靜增氧機在球蟲卵囊孢子化發育中的應用，其特徵在於在所述給卵囊孢子化發育培養輸送氧氣前，還需要準備新鮮的卵囊，此過程包括取孢子化卵囊含量為100萬個/mL的堆型艾美耳球蟲生產蟲種，用純化水作10倍稀釋，以10萬個卵囊/羽的劑量經口感染40隻14日齡無球蟲感染健康雞，收集感染後第4天含卵囊的糞便，分離出一批新鮮的堆型艾美耳球蟲卵囊。3、根據權利要求1所述的可調式超靜增氧機在球蟲卵囊孢子化發育中的應用，其特徵在於在所述增氧機引出氣管到球蟲卵囊培養容器底部過程中，首先將氣管一端連接到增氧機，將增氧機豎立並固定於一機架上,以氣管的另一端觸及培養容器底部；將氣管完全置於卵囊液培養液中，接通可調式超靜增氧機電源，釋放出均勻的氣泡，給球蟲卵囊輸送充足的氧氣，置於27±2°。培養箱中培養。4、根據權利要求1或3所述的可調式超靜增氧機在球蟲卵囊孢子化發育中的應用，其特徵在於所述培養液體積為15002000mL，卵囊培養液深度一般不超過容器高度的2/3，培養密度調至8萬個卵囊/mL，溼度50%以上。全文摘要本發明公開了一種可調式超靜增氧機在球蟲卵囊孢子化發育中的應用，其特徵在於它是從增氧機引出氣管到球蟲卵囊培養容器底部，給卵囊孢子化發育培養輸送氧氣，從而提高球蟲卵囊培養液的含氧量，滿足球蟲卵囊孢子發育的需要。本發明使用可調式超靜增氧機應用於球蟲卵囊孢子化發育培養中，可使球蟲卵囊孢子化率高達90％，且卵囊形態、活力未受影響，效果大大優於傳統的人工吹氣增氧法。文檔編號C12N3/00GK101659935SQ20091004234公開日2010年3月3日申請日期2009年9月1日優先權日2009年9月1日發明者翁亞彪,譚志堅申請人:佛山市正典生物技術有限公司