一種評價乳製品檢測中三聚氰胺試紙條有效性的方法
2023-05-28 13:33:01
專利名稱：一種評價乳製品檢測中三聚氰胺試紙條有效性的方法
技術領域：
本發明涉及一種評價乳製品檢測中三聚氰胺試紙條有效性的方法。
背景技術：
不法商販向乳製品中添加三聚氰胺，以冒充蛋白質含量，以次充好，會對嬰幼兒造成腎結石及尿路結石等嚴重後果。因此，乳製品中三聚氰胺殘留一直是令人關注的焦點，各種檢測乳製品中三聚氰胺殘留的方法隨之出現，其中試紙條法由於檢測時間短、成本低、對實驗人員水平要求低，被廣泛使用。製作生產檢測乳製品三聚氰胺試紙條的廠家越來越多， 產品的水平參差不齊，但是一直沒有一種可以評價試紙條檢測有效性的方法。
發明內容
本發明的目的是提供一種評價乳製品檢測中三聚氰胺試紙條有效性的方法，幫助乳製品檢測選擇合適的三聚氰胺試紙條。本發明提供了一種評價乳製品檢測中三聚氰胺試紙條有效性的方法，包括
a.在經過檢測不含有三聚氰胺的原料乳中添加不同量的三聚氰胺，得到不同三聚氰胺濃度的待測乳，使用三聚氰胺試紙條檢測各待測乳，根據三聚氰胺試紙條的顯色反應得到待測乳中三聚氰胺的最低濃度檢測限值；
b.取多份原料乳，分別向原料乳中添加三聚氰胺，製備得到三聚氰胺濃度為最低濃度檢測限值的多份限度乳，向各限度乳中分別添加幹擾物質，使用三聚氰胺試紙條檢測各添加幹擾物質後的限度乳，根據三聚氰胺試紙條的顯色反應得到限度乳中各幹擾物質對三聚氰胺濃度檢測結果的影響；
c.取多份原料乳，向各原料乳中分別添加幹擾物質，使用三聚氰胺試紙條檢測各添加幹擾物質後的原料乳，根據三聚氰胺試紙條的顯色反應得到原料乳中各幹擾物質對三聚氰胺濃度檢測結果的影響；
d.取同一廠商的同一生產批次的不同三聚氰胺試紙條檢測限度乳，觀測同一廠商同一生產批次的各三聚氰胺試紙條的檢測結果；
e.取同一廠商的同一生產批次的不同三聚氰胺試紙條檢測各待測乳，觀測同一廠商同一生產批次的各三聚氰胺試紙條的檢測結果；
f.取同一廠商的不同生產批次的不同三聚氰胺試紙條檢測限度乳，觀察同一廠商不同生產批次的各三聚氰胺試紙條的測試結果；
g.取同一廠商的不同生產批次的不同三聚氰胺試紙條檢測各待測乳，觀察同一廠商不同生產批次的各三聚氰胺試紙條的測試結果。在一種評價乳製品檢測中三聚氰胺試紙條有效性的方法的再一種示意性的實施方式中，a步驟中，待測乳中三聚氰胺的濃度分別為0、150、300、600、1500和3000ug/kg。在一種評價乳製品檢測中三聚氰胺試紙條有效性的方法的另一種示意性的實施方式中，b和c步驟中，幹擾物質為三聚氰胺、過氧化氫、抗生素、L一輕脯氨酸、尿素、解抗劑和硫氰酸鈉。在一種評價乳製品檢測中三聚氰胺試紙條有效性的方法的又一種示意性的實施方式中，d和f步驟中，用三聚氰胺試紙條檢測限度乳進行10次重複測試。在一種評價乳製品檢測中三聚氰胺試紙條有效性的方法的又一種示意性的實施方式中，f和g步驟中，生產批次分別為生產日期當天的批次，1/2保質期的批次和保質期日期當天的批次。一種評價乳製品檢測中三聚氰胺試紙條有效性的方法具有以下特點 1.構思嚴謹。2.檢測時間短，含樣品處理時間，共計20分鐘。3.檢測無需額外儀器設備，檢測方法簡單。4.結果判斷容易。
具體實施例方式一種評價乳製品檢測中三聚氰胺試紙條有效性的方法，包括
a.在經過檢測不含有三聚氰胺的原料乳中添加不同量的三聚氰胺，得到不同三聚氰胺濃度的待測乳，使用三聚氰胺試紙條檢測各待測乳，根據三聚氰胺試紙條的顯色反應得到待測乳中三聚氰胺的最低濃度檢測限值；
b.取多份原料乳，分別向原料乳中添加三聚氰胺，製備得到三聚氰胺濃度為最低濃度檢測限值的多份限度乳，向各限度乳中分別添加幹擾物質，使用三聚氰胺試紙條檢測各添加幹擾物質後的限度乳，根據三聚氰胺試紙條的顯色反應得到限度乳中各幹擾物質對三聚氰胺濃度檢測結果的影響；
c.取多份原料乳，向各原料乳中分別添加幹擾物質，使用三聚氰胺試紙條檢測各添加幹擾物質後的原料乳，根據三聚氰胺試紙條的顯色反應得到原料乳中各幹擾物質對三聚氰胺濃度檢測結果的影響；
d.取同一廠商的同一生產批次的不同三聚氰胺試紙條檢測限度乳，觀測同一廠商同一生產批次的各三聚氰胺試紙條的檢測結果；
e.取同一廠商的同一生產批次的不同三聚氰胺試紙條檢測各待測乳，觀測同一廠商同一生產批次的各三聚氰胺試紙條的檢測結果；
f.取同一廠商的不同生產批次的不同三聚氰胺試紙條檢測限度乳，觀察同一廠商不同生產批次的各三聚氰胺試紙條的測試結果；
g.取同一廠商的不同生產批次的不同三聚氰胺試紙條檢測各待測乳，觀察同一廠商不同生產批次的各三聚氰胺試紙條的測試結果。
步驟a靈敏度(檢測限度)測試
通過酶聯免疫法檢測篩選出不含有三聚氰胺的原料乳。根據中國農業部第235號公告《動物性食品中獸藥最高殘留限量》中對於奶製品中三聚氰胺的最高含量要求一300ug/ kg,向原料乳中添加不同量的三聚氰胺，得到三聚氰胺濃度分別為0、150、300、600、1500和 3000ug/kg的待測乳。檢測步驟
41.吸取Iml待測乳於2ml離心管中，2000G離心10分鐘，去除上層脂肪，得到處理乳；
2.吸取處理乳IOOul於2ml離心管中，再加入IOOul樣品稀釋液(PBS緩衝液，具體配方如下磷酸二氫鉀(KH2P04) 0. 24克，磷酸氫二鈉(Na2HP04) 3. 63克，氯化鈉(NaCl) 8克， 氯化鉀(KCl) 0. 2克，加水定容到1L)於離心管中，混勻得到稀釋乳；
3.吸取IOOul稀釋乳加入試紙條加樣孔中，5-10分鐘判讀結果。結果判斷
讀取結果時，不可以從試紙條側面或倒置試紙條進行結果觀察。檢測結果分為 陰性τ線(檢測線，靠近滴入樣品溶液的一端)比C線(對照線)深或一樣深，判斷為陰性，表示樣品中三聚氰胺藥物濃度低於試紙最低檢測限。陽性Τ線比C線淺，或T線無顯色，判斷為陽性，表示樣品中三聚氰胺濃度高於試紙最低檢測限；
無效c線未顯色，表明不正確的操作過程或檢測條已失效。在此情況下，應用新的檢測條重新測試。檢測結果
分別對由三聚氰胺濃度分別為0、150、300、600、1500和3000ug/kg的待測乳製得的稀釋乳測試，發現對應於三聚氰胺在待測乳中的含量為300ug/kg時(即在稀釋乳中的含量為 150ug/kg)為轉折點，即為三聚氰胺的最低濃度檢測限值，大於此濃度時，三聚氰胺試紙條上的T線均比C線淺或無色，由此得到待測乳中三聚氰胺的最低濃度檢測限值為300ug/kg， 滿足中國農業部第235號公告《動物性食品中獸藥最高殘留限量》對三聚氰胺含量測試靈敏度的要求。如果三聚氰胺試紙條在三聚氰胺含量為300ug/kg仍然現實為陰性，說明此種類型的三聚氰胺試紙條靈敏度不足。如下的步驟b和步驟c涉及三聚氰胺試紙條有效性中的特異性測試。步驟b
取原料乳，向原料乳中添加三聚氰胺，製備得到三聚氰胺濃度為300ug/kg的多份限度乳，向多份限度乳中分別添加幹擾物質，這些幹擾物質是三聚氰胺、過氧化氫、抗生素、L-羥脯氨酸、尿素、解抗劑和硫氰酸鈉，其中，各限度乳中這些幹擾物質的濃度分別為 過氧化氫30mg/kg ；
抗生素青黴素如g/kg+四環素100ug/kg+磺胺二甲基嘧啶100ug/kg +卡那黴素 150ug/kg+氯黴素0. 3ug/kg+鏈黴素200ug/kg (以上抗生素含量均達到或超過國家標準規定的限量)；
L-羥脯氨酸10 mg/kg ； 尿素500 mg/kg ； 解抗劑4U/ml ； 硫氰酸鈉0. 5 mg/kg。以上幹擾物質濃度的選取都參考了相關國家標準對與這些幹擾物質在乳製品中濃度含量限值的規定。結果判斷同上述步驟a中的結果判斷過程。檢測結果
分別含有過氧化氫、抗生素、L-羥脯氨酸、尿素、解抗劑和硫氰酸鈉的限度乳中，三聚氰
5胺試紙條的顯示結果均為陽性，說明限度乳中幹擾物質並未與三聚氰胺試紙條發生幹涉反應而改變測試結果，此種三聚氰胺試紙條可靠；如果三聚氰胺試紙條的現實結果出現陰性， 說明幹擾乳中幹擾物質並與三聚氰胺試紙條發生幹涉反應而改變測試結果，此種三聚氰胺試紙條不可靠。步驟c
取多份原料乳，向各份原料乳中分別添加幹擾物質，這些幹擾物質是過氧化氫、抗生素、L-羥脯氨酸、尿素、解抗劑和硫氰酸鈉(這些幹擾物質是目前乳製品中最常見的添加物質)，製備得到幹擾乳(每個幹擾乳中只含有一種幹擾物質)，其中，各幹擾乳中上述幹擾物質的濃度為
過氧化氫30mg/kg ；
抗生素青黴素如g/kg+四環素100ug/kg+磺胺二甲基嘧啶100ug/kg +卡那黴素 150ug/kg+氯黴素0. 3ug/kg+鏈黴素200ug/kg (以上抗生素含量均達到或超過國家標準規定的限量)；
L-羥脯氨酸10 mg/kg ； 尿素500 mg/kg ； 解抗劑4U/ml ； 硫氰酸鈉0. 5 mg/kg。以上幹擾物質濃度的選取都參考了相關國家標準對與這些幹擾物質在乳製品中濃度含量限值的規定。結果判斷同上述步驟a中的結果判斷過程。檢測結果
分別含有過氧化氫、抗生素、L-羥脯氨酸、尿素、解抗劑和硫氰酸鈉的幹擾乳中，三聚氰胺試紙條的顯示結果均為陽性，說明幹擾乳中幹擾物質並未與三聚氰胺試紙條發生幹涉反應而改變測試結果，此種三聚氰胺試紙條可靠；如果三聚氰胺試紙條的現實結果出現陰性， 說明幹擾乳中幹擾物質並與三聚氰胺試紙條發生幹涉反應而改變測試結果，此種三聚氰胺試紙條不可靠。如下的步驟d、e、f和g涉及三聚氰胺試紙條有效性中的穩定性測試。其中步驟d 和e確定批內穩定性；步驟f和g確定批間穩定性。步驟d使用同一廠商生產的同一批次的三聚氰胺試紙條，對同一三聚氰胺濃度為 300ug/kg的限度乳反覆進行10次實驗，即取10張同一廠商生產的同一批次的三聚氰胺試紙條，分別檢測同一三聚氰胺濃度為300ug/kg的限度乳並觀察試紙條的顏色。步驟e使用同一廠家生產的同一批次的三聚氰胺試紙條，對步驟a中的各三聚氰胺濃度待測乳做平行實驗，即對同一濃度水平的待測乳使用不同的試紙條多次檢測並觀察其的顏色。結果判斷同上述步驟a中的結果判斷過程。檢測結果
如果步驟d的10次檢測對限度乳的測試結果均為陽性，且步驟e中對於不同三聚氰胺濃度的待測乳在同一濃度水平上的測試結果一致，則三聚氰胺試紙條的同一生產批次內的
一致性合格。
步驟f使用同一廠家生產的不同批次的三聚氰胺試紙條，例如生產日期當天的批次，1/2保質期的批次和保質期日期當天的批次對同一三聚氰胺濃度為300ug/kg的限度乳反覆進行10次實驗，即取10張同一廠商生產的不同批次的三聚氰胺試紙條，分別檢測同一三聚氰胺濃度為300ug/kg的限度乳並觀察試紙條的顏色。步驟g使用同一廠家生產的不同批次的三聚氰胺試紙條，例如生產日期當天的批次，1/2保質期的批次和保質期日期當天的批次，對步驟a中的各三聚氰胺濃度待測乳做平行測試實驗，即使用不同批次的試紙條對同一濃度水平的待測乳分別多次檢測並觀察試紙條的顏色。結果判斷同上述步驟a中的結果判斷過程。檢測結果
如果步驟f的測試結果均為陽性，且步驟g中對於不同三聚氰胺濃度的待測乳在同一濃度水平上的測試結果一致，則三聚氰胺試紙條的生產批次間的一致性合格。—種評價乳製品檢測中三聚氰胺試紙條有效性的方法具有以下特點 1.構思嚴謹。2.檢測時間短，含樣品處理時間，共計20分鐘。3.檢測無需額外儀器設備，檢測方法簡單。4.結果判斷容易。因此，該三聚氰胺快速檢測試紙條符合乳製品企業檢測三聚氰胺需要，可以進行使用。上文所列出的一系列的詳細說明僅僅是針對本發明的可行性實施例的具體說明， 它們並非用以限制本發明的保護範圍，凡未脫離本發明技藝精神所作的等效實施例或變更均應包含在本發明的保護範圍之內。
權利要求
1.一種評價乳製品檢測中三聚氰胺試紙條有效性的方法，包括a.在經過檢測不含有三聚氰胺的原料乳中添加不同量的三聚氰胺，得到不同三聚氰胺濃度的待測乳，使用三聚氰胺試紙條檢測各所述待測乳，根據所述三聚氰胺試紙條的顯色反應得到所述待測乳中三聚氰胺的最低濃度檢測限值；b.取多份所述原料乳，分別向所述原料乳中添加三聚氰胺，製備得到三聚氰胺濃度為所述最低濃度檢測限值的多份限度乳，向各所述限度乳中分別添加幹擾物質，使用所述三聚氰胺試紙條檢測各添加所述幹擾物質後的所述限度乳，根據所述三聚氰胺試紙條的顯色反應得到所述限度乳中各所述幹擾物質對三聚氰胺濃度檢測結果的影響；c.取多份所述原料乳，向各所述原料乳中分別添加幹擾物質，使用所述三聚氰胺試紙條檢測各添加所述幹擾物質後的所述原料乳，根據所述三聚氰胺試紙條的顯色反應得到所述原料乳中各所述幹擾物質對三聚氰胺濃度檢測結果的影響；d.取同一廠商的同一生產批次的不同所述三聚氰胺試紙條檢測所述限度乳，觀測同一廠商同一生產批次的各所述三聚氰胺試紙條的檢測結果；e.取同一廠商的同一生產批次的不同所述三聚氰胺試紙條檢測各所述待測乳，觀測同一廠商同一生產批次的各所述三聚氰胺試紙條的檢測結果；f.取同一廠商的不同生產批次的不同所述三聚氰胺試紙條檢測所述限度乳，觀察同一廠商不同生產批次的各所述三聚氰胺試紙條的測試結果；g.取同一廠商的不同生產批次的不同所述三聚氰胺試紙條檢測各所述待測乳，觀察同一廠商不同生產批次的各所述三聚氰胺試紙條的測試結果。
2.如權利要求1所述的方法，其中所述步驟a中，所述待測乳中三聚氰胺的濃度分別為 0、150、300、600、1500 和 3000ug/kg。
3.如權利要求1所述的方法，其中b和c步驟中，所述幹擾物質為雙氧水、抗生素、 L一輕脯氨酸、尿素、解抗劑和硫氰酸鈉。
4.如權利要求1所示的方法，其中d和f步驟中，用所述三聚氰胺試紙條檢測所述限度乳進行10次重複測試。
5.如權利要求1所示的方法，其中f和g步驟中，所述生產批次分別為生產日期當天的批次，1/2保質期的批次和保質期日期當天的批次。
全文摘要
一種評價乳製品檢測中三聚氰胺試紙條有效性的方法，包括a.根據三聚氰胺試紙條的顯色反應得到待測乳中三聚氰胺的最低濃度檢測限值；b.根據述三聚氰胺試紙條的顯色反應得到限度乳中各幹擾物質對三聚氰胺濃度檢測結果的影響；c.根據三聚氰胺試紙條的顯色反應得到原料乳中各幹擾物質對三聚氰胺濃度檢測結果的影響；d.觀測同一廠商同一生產批次的各所述三聚氰胺試紙條的檢測結果；e.觀測同一廠商同一生產批次的各所述三聚氰胺試紙條的檢測結果；f.觀察同一廠商不同生產批次的各所述三聚氰胺試紙條的測試結果；g.觀察同一廠商不同生產批次的各所述三聚氰胺試紙條的測試結果。
文檔編號G01N33/558GK102478524SQ201010562848
公開日2012年5月30日 申請日期2010年11月29日 優先權日2010年11月29日
發明者烏尼爾, 劉衛星, 喻東威, 崔濤, 李梅, 杜麗, 薛志清, 趙源 申請人:內蒙古蒙牛乳業(集團)股份有限公司